一株新型鹅星状病毒HNxy2111株全基因组测序分析

为分析信阳地区鹅星状病毒(GAstV)的遗传变异情况,研究从信阳某鹅场痛风病鹅采集病料,进行病原分离鉴定和全基因组扩增测序,获得GAstV基因组,随后进行遗传进化和同源性分析。结果显示:分离一株GAstV,命名为HNxy2111,基因组全长7 175 bp;HNxy2111基因组及ORF2基因均与参考毒株G519亲缘关系最近,处于同一分支,属于GAstV-Ⅱ型;HNxy2111基因组、ORF1a、ORF1b编码氨基酸序列与GAstV-Ⅱ型中的G519同源性最高,均为99.2%。ORF1b编码的氨基酸序列与GD AHAU2同源性最高,为100%。与G519相比,HNxy2111 ORF1a、ORF1b和ORF2编码的蛋白质分别发生了8处、3处和5处突变。综上所述,HNxy2111属于GAstV-Ⅱ型,与国内经典鹅星状病毒有较近的遗传关系,ORF1a、ORF1b和ORF2编码的蛋白有一定的突变。

鸭甲型肝炎病毒3型信阳株的分离鉴定及遗传演化分析

为了解信阳地区鸭甲型肝炎病毒3型的遗传变异特性,对信阳市发生疑似肝炎的金定雏鸭进行9种常见病毒PCR/RT-PCR检测,同时采集病鸭肝脏组织无菌处理后,尿囊腔接种10日龄SPF鸭胚进行病毒分离,并对分离毒株进行全基因组和VP1基因序列分析。结果:成功分离到1株鸭甲型肝炎病毒3型(DHAV3),命名为HNXY23;接种病毒的鸭胚发育不良,死亡胚体全身呈出血水肿;序列比对和系统发育树表明,分离株HNXY23属于DHAV3 GⅠ基因型,与2022年分离株HB-1、HZ-1、HZ-2和HZ-3亲缘关系较近;利用DNAMAN软件比对31株DHAV3 VP1氨基酸位点变异情况,发现在184、187、195、206和209位这5个氨基酸位点有较为明显的变化差异。本研究结果丰富了信阳地区DHAV3的分子流行病学资料,为进一步研究DHAV3的致病机制奠定了基础。

鹅星状病毒RdRp蛋白对细胞因子转录水平的影响

为了解鹅星状病毒(GAstV)RdRp蛋白对细胞因子转录水平的影响,试验将构建的pCMV-RdRp真核质粒转染293细胞,并于转染后12、24、36 h收集细胞,提取核酸检测细胞内CCL2、CCL5、IL-1β、IFN-α、TNF-α、IFITM1和IFITM2的转录水平。结果发现,GAstV RdRp蛋白于12、24、36 h极显著抑制CCL2转录,12 h极显著促进CCL5表达,24、36 h极显著抑制CCL5表达(P<0.01);GAstV RdRp蛋白于24、36 h极显著促进IL-1β转录(P<0.01);GAstV RdRp蛋白于12 h极显著促进IFN-α的转录,于24、36 h极显著抑制IFN-α转录(P<0.01);GAstV RdRp蛋白于12、24、36 h显著或极显著抑制TNF-α转录(P<0.01);GAstV RdRp蛋白于24 h极显著抑制IFITM1转录(P<0.01),于36 h显著抑制IFITM1转录(P<0.05),于12、36 h极显著促进IFITM2转录(P<0.01),于24 h极显著抑制IFITM2的转录(P<0.01)。表明GAstV RdRp蛋白过表达能够诱导IL-1β的转录,抑制CCL2、TNF-α和IFITM1的转录;GAstV RdRp蛋白早期促进CCL5和IFN-α的转录,后期抑制CCL5和IFN-α的转录;GAstV RdRp蛋白早期和晚期促进IFITM2转录,中期抑制IFITM2转录。

鹅星状病毒capsid蛋白对细胞因子的影响

为了解鹅星状病毒(GAstV)capsid蛋白对细胞因子的影响,试验将构建的pCMV-capsid真核质粒转染293细胞,并于转染后12、24、36h收集细胞,提取核酸检测细胞内CCL2、CCL5、IL-1β、TNF-α、IFITM1和IFITM2的转录水平。结果显示,capsid蛋白于12、36h显著抑制CCL2转录,12h显著促进CCL5表达,24h显著抑制CCL5表达;capsid蛋白于24、36h显著促进IL-1β的转录;capsid蛋白于24、36h显著抑制IFN-α的转录;capsid蛋白于36h显著促进TNF-α的转录;capsid蛋白于24h显著抑制IFITM1的转录,于36h显著促进IFITM1和IFITM2的转录。结果表明,GAstVcapsid蛋白过表达能够诱导IL-1β、TNF-α和IFITM的转录,抑制CCL2和IFN-α的转录;对于CCL5,capsid蛋白早期促进CCL5的转录,后期抑制CCL5的转录;对于IFITM1,capsid蛋白早期抑制IFITM1转录,后期促进IFITM1转录。

鸡骨髓源造血干细胞的体外培养及分化诱导

为获取鸡骨髓源造血干细胞(HSC)和建立其体外培养方法,试验从鸡长骨中获取骨髓单个核细胞,流式细胞术分选出CD34^(+)HSC后,在体外进行培养和诱导分化,进一步观察CD34^(+)HSC的形态、生长状态、集落形成能力和分化能力。结果显示:IMDM培养基中添加50 ng/mL干细胞生长因子、30 ng/mL Flt-3配体、10μg/mL白细胞介素-3、50 ng/mL白细胞介素-6以及20%鸡血清可维持鸡CD34^(+)HSC的短期体外培养,最长可存活10 d。将上述培养体系加入到甲基纤维素半固体培养基中,可使鸡CD34^(+)HSC形成典型的干细胞克隆集落;在上述培养体系中加入50 ng/mL血小板生成素和80 ng/mL的粒细胞集落刺激因子,可诱导鸡CD34^(+)HSC向粒系细胞分化。瑞氏-姬姆萨染色结果显示,鸡CD34^(+)HSC的胞核较大,呈蓝紫色,核染色质细而分散,胞浆呈浅蓝色,均匀无颗粒。研究提示:在培养体系中添加鸡造血细胞生长因子,可实现鸡骨髓源CD34+HSC的体外扩增和定向诱导分化。

大蒜素对青脚麻鸡生长性能、免疫功能、血清生化指标的影响

试验旨在探讨在日粮中添加不同水平大蒜素对青脚麻鸡生长性能、免疫功能、血清生化指标的影响。选取400只1日龄健康青脚麻鸡,随机分为4组,每组5个重复,每个重复20只。对照组、试验Ⅰ组、Ⅱ组、Ⅲ组分别在基础日粮中添加0、50、100、150 mg/kg大蒜素。试验期28 d。结果显示,与对照组相比,试验Ⅰ组麻鸡的平均日增重显著提高(P<0.05),Ⅱ组和Ⅲ组麻鸡平均日增重极显著提高(P<0.01),Ⅱ组麻鸡的料重比显著降低(P<0.05)。与对照组相比,Ⅱ组麻鸡的屠宰率极显著提高(P<0.01),Ⅲ组麻鸡的屠宰率显著提高(P<0.05);Ⅱ组麻鸡的脾脏指数显著提高(P<0.05)。试验Ⅱ组和试验Ⅲ组麻鸡血清中的免疫球蛋白A和免疫球蛋白G水平显著高于对照组(P<0.05),所有大蒜素组麻鸡血清中免疫球蛋白M水平均高于对照组(P<0.05)。所有大蒜素组麻鸡血清中肿瘤坏死因子-α、干扰素-γ水平均低于对照组(P<0.05);试验Ⅱ组和试验Ⅲ组麻鸡血清中白细胞介素-1β水平显著低于对照组(P<0.05);试验Ⅱ组麻鸡血清中白细胞介素-4水平显著高于对照组(P<0.05)。与对照组相比,Ⅱ组麻鸡血清总蛋白(TP)和球蛋白(GLB)含量显著提高(P<0.05),Ⅲ组麻鸡血清的总胆固醇(TC)含量显著降低(P<0.05),高密度脂蛋白(HDL)含量显著升高(P<0.05)。试验Ⅱ组和试验Ⅲ组麻鸡血清尿素氮(BUN)含量显著低于对照组(P<0.05),试验Ⅱ组麻鸡血清碱性磷酸酶(ALP)活性高于对照组(P<0.05)。研究表明,日粮中添加100~150 mg/kg可提高麻鸡的屠宰率,促进脾脏发育,提高血清中TP、GLB以及HDL的含量,降低胆固醇含量。

新型鹅细小病毒信阳株的全基因组扩增及遗传进化分析

为了解信阳地区新型鹅细小病毒(NGPV)的遗传变异特性,对疑似NGPV感染麻鸭病例进行病原检测,采集肝脏和脾脏无菌处理后接种SPF鸭胚,成功分离到1株NGPV,命名为HNXY21株,并对其进行全基因组序列分析和VP1基因重组鉴定。序列比对和系统发育树表明,分离株HNXY21和其他9株NGPV同处于鹅细小病毒(GPV)组内的一个独立分支上,与山东分离株SD0316(GenBank登录号:MN415969)核苷酸同源性最高;VP1蛋白的氨基酸序列分析显示,与经典GPV和番鸭细小病毒(MDPV)相比,有8个氨基酸位点突变;通过Simplot软件对VP1基因进行重组分析表明,分离株HNXY21 VP1基因存在重组信号,其潜在的主要亲本为山东分离株SD0316和弱毒疫苗株SYG61v。本研究结果丰富了NGPV的分子生物学资料,为进一步研究NGPV的致病机制奠定了基础。

黑曲霉发酵茶叶对青脚麻鸡生长性能、养分表观代谢率及血清抗氧化指标的影响

试验旨在研究不同水平黑曲霉发酵茶叶对青脚麻鸡生长性能、养分表观代谢率及血清抗氧化的影响。将240只1日龄健康、体重相近的青脚麻鸡随机分为4组,每组3个重复,每个重复20只鸡。对照组鸡饲喂基础日粮,3个试验组在基础日粮中分别添加2%、4%、6%的黑曲霉发酵茶叶。试验期56 d。结果显示,采用黑曲霉发酵茶叶提高了茶叶的营养价值,降低了茶单宁含量。1~28日龄,试验Ⅰ组、试验Ⅱ组鸡平均日增重显著高于对照组(P<0.05),各试验组鸡的料重比均显著低于对照组(P<0.05)。1~56日龄,试验Ⅰ组鸡的平均日增重显著高于对照组(P<0.05),料重比显著低于对照组(P<0.05)。试验Ⅱ组鸡对粗脂肪(EE)的表观代谢率显著高于对照组(P<0.05)。各试验组鸡血清中总抗氧化能力(T-AOC)及总超氧化物歧化酶(T-SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性均显著高于对照组(P<0.05)。试验Ⅰ组和试验Ⅱ组鸡血清中甘油三酯(TG)和胆固醇(TC)含量显著低于对照组(P<0.05)。研究表明,在青脚麻鸡日粮中添加2%~4%黑曲霉发酵茶叶较为适宜。

两种固定液对鸭小肠肥大细胞染色效果的比较

为了探讨不同固定液对鸭小肠肥大细胞甲苯胺蓝染色效果的影响及鸭小肠内肥大细胞的数量和分布情况,试验选择5只100日龄的健康淮南麻鸭公鸭为研究对象,取鸭只十二指肠、空肠和回肠组织样品,均分为两份,分别置于10%中性福尔马林固定液和卡恩氏(Carnoy)固定液中固定,常规制作石蜡切片,切片经甲苯胺蓝染色后,观察小肠肥大细胞染色效果和肥大细胞形态、数量及分布,并进行统计分析。结果表明:Carnoy固定液对肥大细胞的染色效果优于10%中性福尔马林固定液,染色评分极显著高于10%中性福尔马林固定液(P<0.01);Carnoy固定液固定的十二指肠、空肠、回肠肥大细胞数量均极显著高于10%中性福尔马林固定液(P<0.01)。鸭十二指肠、空肠和回肠中肥大细胞形态和数目不同,在黏膜固有层血管、腺管周围的结缔组织中分布较多;空肠中肥大细胞数量最多,形态多样;十二指肠和回肠中肥大细胞数量递减,形态多为圆形。说明与10%中性福尔马林固定液相比,经Carnoy固定液固定的鸭小肠组织染色后,可清晰显示肥大细胞的形态分布。

海南万泉河入海河口微塑料赋存特征及风险评价

为探索海南万泉河入海河口区的微塑料赋存特征,采用现场调查和实验室分析相结合的方法研究微塑料分布和组成特征,解析其潜在来源,并结合聚合物风险指数法、污染负荷指数法和潜在生态风险指数法评估其生态风险。结果表明:万泉河入海河口微塑料丰度为0.32~0.74个/m^(3),平均丰度为(0.53±0.13)个/m^(3);微塑料成分主要为聚丙烯(PP,34.8%)、聚酯纤维(PES,23.7%)和聚乙烯(PE,20.0%);形状多为片状(58.4%),其次为纤维状(32.3%);颜色呈现出多样化,以半透明(41.6%)和白色(36.8%)为主;粒径以1.0~4.0 mm的微塑料为主,占比为42.2%。特征分析显示,微塑料主要来源于旅游活动、渔业生产和居民生产生活污水,且受风力、海流、径流和海水稀释的影响,微塑料丰度值呈区域分布不均匀现象。与国内外研究相比,万泉河入海河口的表层海水微塑料丰度处于较低污染水平。风险评价结果也表明,该区域微塑料整体污染水平较低,但对于高化学毒性的塑料制品的危害应不容忽视。

基于密度分离-氧化消解法前处理的土壤微塑料检测

目前,土壤中微塑料的研究尚处于起步阶段。为了更科学地开展土壤微塑料污染风险调查和污染防治,首先需要建立统一的检测方法。通过优化密度分离-氧化消解法实验过程中影响土壤微塑料检测的多个关键因素,包括干燥温度、取样量、浮选剂、搅拌时长、沉降和离心条件及消解时间。结果表明:干燥处理的温度选择在55℃时不会对微塑料形态结构及化学成分造成影响;土壤取样量在30~50 g更为适宜,能更好地反映土壤中微塑料分布情况;对于浮选剂的选择,碘化钠对大部分微塑料成分具有良好的浮选效果;通过手动或机械搅拌4~6 min,可有效地将附着在土壤中的微塑料分离出来;沉降放置24 h以上或6000~8000 r/min离心10 min可使土壤杂质与微塑料达到充分分离的效果;消解放置24 h可去除大多数有机杂质。全过程具有简单、可操作性强、分离效果好的特点,且不易对微塑料造成二次破碎,可为今后制定土壤微塑料监测技术方法及规范、评估土壤中微塑料丰度分布提供可靠的依据。

海南新村潟湖海草床区浮游动物粒径结构特征与环境因子相关性

【目的】研究海草床区浮游动物粒径结构特征及对环境因子响应机制,为海草床生态环境质量评价提供数据支撑。【方法】于2022年4月-2023年2月对海南新村潟湖海草床区、鱼排养殖区、虾塘养殖区、渔港码头区以及湾口外海区的浮游动物展开调查,分析其粒径结构、类群组成和受控因子。【结果与结论】新村潟湖共鉴定浮游动物37科43属69种,物种数以春季最高,夏、冬季次之,秋季最低。秋季以夜光虫(Noctiluca scientillans)占绝对优势,其余季节均以桡足类幼体和无节幼体为主,优势种粒径偏小型化。浮游动物物种数在湾口外、海草床区较高,且均以[600,1250)、[355,600)μm的种类为主。丰度值以秋季鱼排养殖区最高,以原生动物和浮游幼体的丰度居高,其余季节以虾塘养殖区、海草床区、渔港码头区的丰度值较高,且不同季节各区域均以[355,600)、[160,355)μm的小粒径浮游动物丰度值居高。此外,春季盐度、磷酸盐、硅酸盐及悬浮物是偏大粒径[1250,4000)μm浮游动物的影响因子,各呈显著相关性。秋季浮游动物丰度值与水深呈显著正相关性(P<0.05)。冬季水温为偏大粒径浮游动物的限制因子,溶解氧、叶绿素a则与小粒径浮游动物存在显著正相关性(P<0.05)。

海南乐东农用地土壤微塑料分布状况调查

为掌握海南农用地土壤微塑料赋存含量与分布特征,通过现场监测和实验室分析相结合的研究方法,经密度浮选法进行样品前处理,采用傅立叶变换显微红外光谱仪对土壤微塑料样品分析测定,探讨了农用地不同农业种植区土壤微塑料分布状况及存在的潜在生态影响。结果表明,表层土壤微塑料丰度为366.67~3366.67个/kg,平均丰度为(1147.29±639.95)个/kg。微塑料成分以聚乙烯-丙烯共聚物(PE-PP)、聚乙烯(PE)占主导。研究区域土壤整体以1.0~2.0 mm微塑料为主,粒径组成趋向于小型化。此外,覆膜地块以蓝色碎片、蓝色薄膜、黑色薄膜塑料居多,未覆膜地块则以半透明的纤维塑料占主导。总体而言,乐东农用地微塑料丰度存在明显空间分布差异,覆膜地块丰度值高于无覆膜地块,丰度水平与地块种植方式密切相关。与国内外农田区域相比,乐东农用地微塑料丰度整体处于偏高水平。

直接进样超高效液相色谱-三重四极杆质谱法快速测定环境水样中草甘膦、氨甲基膦酸、草铵膦及乙烯利残留

建立了一种简便、直接进样的超高效液相色谱-三重四极杆质谱法(UPLC-MS/MS)快速测定环境水样中草甘膦、氨甲基膦酸、草铵膦及乙烯利的残留。环境水样经0.22μm滤膜过滤或冷冻离心去除杂质后,滤液无需衍生化直接进行定量分析。4种农药通过Metrosep A Supp 5柱(150 mm×4.0 mm,5μm)分离,以碳酸氢铵-氨水溶液为流动相进行梯度洗脱,在负离子模式下以MRM方式进行检测。结果表明,4种农药在0.50~50.0μg/L范围内相关系数(r)均大于0.999,线性关系良好,方法检出限为0.05~0.09μg/L。实际水样在低、中、高3种加标浓度水平下,回收率分别为76.3%~108%、83.0%~107%和87.0%~105%,相对标准偏差分别为2.0%~12.3%、2.4%~5.6%和2.7%~6.8%。使用该方法对海南省34个水样进行测定,其中30个饮用水源地水样中均未检出4种农药,槟榔园附近3个水样均检出草甘膦和氨甲基膦酸,香蕉园附近的1个水样检出草铵膦和氨甲基膦酸。与传统的衍生化方法比较,该方法操作简便,重现性好,准确性高,不受基体干扰,适用于环境水样中草甘膦、氨甲基膦酸、草铵膦及乙烯利的残留检测。

三亚河表层沉积物中多环芳烃分布、来源解析及生态风险评价

为了解三亚河表层沉积物中多环芳烃分布特征及生态风险,应用加压流体萃取、高效液相色谱检测表层沉积物中16种优先控制PAHs的含量和组成.结果表明,研究区域内表层沉积物中PAHs含量为3.23—493 ng·g^(-1)之间,平均浓度为211 ng·g^(-1),调查区域表层沉积物中PAHs含量与其它区域河流、湖库和海域沉积物中PAHs的含量比较,PAHs含量属于低值水平.调查区域表层沉积物中PAHs含量以3—5环为主,其对总浓度的贡献率为76.6%—100%,平均为84.4%,采用同分异构体比值分析结果显示PAHs主要来源于木柴、煤炭等燃烧源.质量基准法和质量标准法分析表明三亚河表层沉积物中的PAHs含量水平对该区域的生态环境影响较小,但对长期生活在该区域的底栖生物将构成轻微的潜在威胁,应采取相应管控措施,控制多环芳烃排入三亚河.

自动顶空/气相色谱法测定土壤和沉积物中二硫代氨基甲酸酯(盐)类农药

本文通过优化前处理条件、样品保存条件、顶空条件、色谱条件等,建立了土壤和沉积物中4种二硫代氨基甲酸酯(盐)类农药的自动顶空-气相色谱分析方法.在80℃,顶空瓶内土壤或沉积物中的二硫代氨基甲酸酯(盐)类农药在含氯化亚锡的无机酸介质中反应生成二硫化碳,用顶空气相色谱(电子捕获检测器)对二硫化碳进行检测,根据二硫化碳的量计算二硫代氨基甲酸酯(盐)类农药的残留量.结果表明,4种组分的线性关系良好(R>0.999),方法检出限均为0.04 mg·kg^(-1),在低、中、高水平下,5种基质(砂土型土壤、壤土型土壤、黏土型土壤、湖库型沉积物和河流型沉积物)中4种组分的回收率分别为88%—116%、86%—115%、85%—114%,相对标准偏差分别为1.5%—10.2%、0.8%—12.3%、1.0%—5.2%,该方法灵敏度高、操作简单、易于推广应用,适用于土壤和沉积物中二硫代氨基甲酸酯(盐)类农药分析.

高效液相色谱法对环境样品中甲基托布津与甲霜灵残留的测定

建立了自动固相萃取／高效液相色谱法测定地表水和土壤中甲基托布津和甲霜灵残留的方法。地表水采用C18固相萃取小柱进行富集、净化及浓缩；土壤采用丙酮-二氯甲烷（体积比3：7）溶液振荡萃取，弗罗里硅土小柱净化和浓缩；以乙腈和水为流动相，于230nm波长处对样品进行高效液相色谱检测。甲基托布津和甲霜灵在水中的检出限分别为0．36、3．49μg/L，在土壤中的检出限分别为0．03、0．18mg／kg；在优化实验条件下，甲基托布津和甲霜灵在水样和土壤样品中的添加回收率为77％～105％，精密度为1．2％～8．5％。方法可用于环境样品中甲霜灵和甲基托布津残留量的测定。

吹扫捕集-气相色谱-质谱法测定水和土壤中的甲基叔丁基醚含量

提出了测定水和土壤中甲基叔丁基醚(MTBE)的吹扫捕集-气相色谱-质谱法。水和土壤样品按相关标准采集后于25℃保存,吹扫捕集参数选定如下:1吹扫时间为11min;2脱附时间和温度分别为190℃,2min。经气相色谱分离后采用电子轰击离子源和选择离子扫描模式进行质谱分析。在水和土壤样品中MTBE的质量浓度在一定范围内与其峰面积呈线性关系,MTBE在上述2种样品中的检出限(3S/N)分别为0.10μg·L^(-1),0.26μg·kg^(-1)。按标准加入法进行回收试验,测得回收率在87.6%~103%之间,测定值的相对标准偏差(n=5)在2.3%~7.2%之间。

全自动固相萃取-气相色谱测定环境水样中有机磷农药残留

[目的]建立一种便捷、准确、灵敏的方法测定环境水样中痕量的有机磷农药。[方法]采用全自动固相萃取进行样品净化及浓缩,对儋州松涛水库和海口南渡江河水中7种有机磷农药进行测定。[结果]在优化的试验条件下,7种目标化合物色谱峰分离良好,以地表水为基质,7种有机磷农药在加标质量浓度分别为0.20、0.24和0.48μμg/L时回收率为69.4%～106%,相对标准偏差为2.21%～8.65%(n=5),方法检出限分别为0.02～0.04μg/L,定量下限为0.08～0.16μg/L。[结论]该方法简便快速、重现性好、净化效果好且通用性强,可用于海南河库水环境中有机磷农药残留的分析。

全自动固相萃取-气相色谱-串联质谱法测定水质中N-亚硝胺类化合物

本文采用全自动固相萃取-气相色谱-串联质谱(GC-MS/MS)分析水质中9种N-亚硝胺类化合物.水样以10 mL·min^-1速度通过Cleanert NDMA-SPE(1000 mg/6 mL)进行富集,用20%的甲醇水溶液淋洗去除杂质和破坏柱填料表层的水膜,再用二氯甲烷溶剂洗脱,收集的固相萃取洗脱液浓缩后进行GC-MS/MS分析.采用Rtx-Wax色谱柱分离,MRM模式下进行检测,内标法定量.实验结果表明,9种目标物在1.00-100μg·L^-1范围内线性关系良好,相关系数大于0.999;方法检出限为0.1-0.5 ng·L^-1.在低、中、高的加标水平下,9种N-亚硝胺类化合物的回收率分别为71%-94%、74%-95%和75%-103%,相对偏差分别为6.7%-15.8%、5.1%-12.3%和4.5%-9.6%.