皂角刺总黄酮对肝癌HepG2细胞增殖、凋亡和侵袭能力影响的实验研究

目的:研究皂角刺总黄酮对肝癌HepG2细胞增殖、凋亡和侵袭的影响,探讨其抗肿瘤作用机制.方法:通过体外培养人肝癌HepG2细胞,用不同浓度的皂角刺总黄酮处理后,采用WST-1法检测皂角刺总黄酮对人肝癌细胞HepG2增殖的抑制作用,琼脂糖凝胶电泳检测DNA片段化,流式细胞仪AnnexinV/PI双染法检测细胞的凋亡率,划痕实验和Transwell小室检测皂角刺总黄酮对HepG2细胞侵袭、转移的影响.结果:不同浓度的皂角刺总黄酮作用于细胞48 h后,能显著抑制HepG2细胞的增殖,随着药物浓度的增加,抑制作用增强,IC50为(190.62±0.89)mg/L;流式AnnexinV/PI双染法检测显示,不同浓度的皂角刺总黄酮均可诱导HepG2细胞凋亡;不同浓度的皂角刺总黄酮处理组发现凋亡细胞所特有的DNA ladder条带;皂角刺总黄酮可降低HepG2细胞的黏附能力,使Tr-answell小室膜上的肝癌细胞明显减少,并且呈剂量依赖性.结论:皂角刺总黄酮能明显抑制肝癌HepG2细胞的增殖、侵袭能力和诱导其凋亡.

大熊猫等八种野生珍稀动物蛔虫ITS-2基因的序列分析

为了探讨寄生在大熊猫、小熊猫、黑猩猩、白眉长臂猿和4种熊科动物(北极熊、棕熊西藏亚种、狗熊四川亚种和棕熊东北亚种)体内蛔虫的分类地位,测定了核糖体第二内转录间隔区(ITS-2)基因序列,并对这些序列进行同源性分析和采用UPGMA法构建分子系统树。结果表明:寄生在大熊猫、小熊猫和4种熊科动物体内的蛔虫均为贝蛔属蛔虫;寄生在黑猩猩和白眉长臂猿体内的蛔虫为蛔属蛔虫。分析结果提示蛔虫与宿主之间存在协同进化关系。

斑点免疫金渗滤法诊断猪蛔虫病

[目的]探讨斑点免疫金渗滤法诊断猪蛔虫病的可行性,为制备诊断猪蛔虫病试剂盒提供参考依据。[方法]采用猪蛔虫的重组蛋白AS16抗原和胶体金标记葡萄球菌蛋白A(SPA),根据免疫渗滤原理,建立抗猪蛔虫抗体的斑点金免疫渗滤检测法。[结果]斑点免疫金渗滤法检测1200份猪血清样本中猪蛔虫抗体,检出阳性率为25.00%,而琼脂扩散试验(AGP)阳性检出率为15.00%。[结论]斑点金免疫渗滤检测法具有操作简便,灵敏度高,特异性强的优点,可用于猪蛔虫病的快速检测。

金黄色葡萄球菌感染野兔的诊治

为了探讨野兔死亡原因,试验无菌采取病死野兔的心脏、肝脏、肺脏、脾脏及肾脏等组织病料进行细菌的分离培养、生化和PCR鉴定,并根据临床症状、剖检变化以及实验室检验进行诊断。结果表明:野兔发病为葡萄球菌感染所致。

应用间接ELISA检测猪旋毛虫抗体

以猪旋毛虫抗原基因Ts88的重组蛋白为包被抗原,建立了猪旋毛虫抗体间接ELISA检测方法。最佳抗原包被浓度为1μg/mL,待检血清的最佳稀释倍数为1:80。采用间接ELISA方法检测2000份猪血清,阳性检出率为1.5%,血清样本对应猪肉采用镜检法,阳性检出率为1.30%。试验结果显示,该方法操作简便、快速、特异性好,适用于猪旋毛虫的临床诊断和流行病学调查。

贵州山羊痘的病原学研究与血清学检测

2002年10月以来,贵州省8个养羊场相继发生一种以皮肤、呼吸道和消化道黏膜出现痘疹的传染病。通过电镜观察在痘疹材料中发现大量典型的痘病毒粒子;感染鸡胚后绒毛尿囊膜增厚、充血和出现痘斑;接种BHK21单层细胞引起明显的细胞病变效应,而且这种现象能够被山羊痘参考血清所抑制。血清学检测结果表明,患病羊痘疹材料中山羊痘抗原的阳性率为66 7%;血清样本中山羊痘抗体的阳性率为47 4%。根据对本次疫病的病原学研究和血清学检测,可以确诊贵州省山羊痘暴发流行。

应用间接血凝试验(IHA)诊断猪蛔虫病

以猪蛔虫抗原致敏绵羊红细胞制备检测猪蛔虫特异性抗体的间接血凝诊断试剂,与猪蛔虫抗体发生特异性凝集反应。结果表明,用间接血凝诊断试剂对3 000份猪血清进行现场检测,阳性率为30.00%;而琼脂扩散试验(AGP)的阳性率为13.00%,表明,间接血凝试验(IHA)比GAP敏感,间接血凝诊断试剂可用于猪蛔虫病的快速诊断。

竹叶青蛇毒L-氨基酸氧化酶(LAAO)基因的克隆及序列分析

为进一步研制新型的抗肿瘤药物打基础,试验以竹叶青蛇毒毒腺的RNA为模板,采用RT-PCR技术扩增L-氨基酸氧化酶(LAAO)基因,经克隆和测序并通过Blast分析。结果表明:LAAO基因与GenBank中公布序列编码的竹叶青蛇毒L-氨基酸氧化酶基因的序列(AY277739)同源性达98.23%。

肠侵袭性大肠杆菌感染野猪的诊断和药敏试验

无菌取病死野猪的心脏、肝脏、肺脏、脾脏及肾脏等组织病料,进行细菌的分离培养与PCR鉴定,分离出肠侵袭性大肠杆菌。结合临床症状、剖检病变和实验室诊断,从而确诊野猪病死于肠侵袭性大肠杆菌感染。并对分离菌株进行药敏试验,为野猪的肠侵袭性大肠杆菌感染疾病的诊断和防治提供参考。

竹叶青蛇毒L-氨基酸氧化酶的表达载体的构建及重组蛋白抗肿瘤的研究

将经BamHⅠ和HindⅢ酶切的pMD18-T-LAAO和Pet28a(+)质粒的纯化回收产物进行连接,将产物Pet28a(+)-LAAO表达载体转化BL21(DE3)进行诱导表达,表达产物经Western-blot分析表明,重组蛋白能被兔抗竹叶青蛇毒L-氨基酸氧化酶(LAAO)阳性血清所识别.将鼻咽癌CNE-2Z、人宫颈癌LYA01021和卵巢癌A2780MSC细胞悬液接种小鼠建立小鼠实体瘤模型,分别用不同浓度重组蛋白接种荷瘤小鼠,根据瘤重和小鼠存活时间计算抑瘤率和对荷瘤小鼠生命延长率.结果表明:重组蛋白对低、中和高剂量组荷瘤小鼠抑瘤率和生命延长率与阴性对照组均存在极显著差异(P<0.01).本研究为开发利用竹叶青蛇毒L-氨基酸氧化酶提供依据,为进一步研制新型的抗肿瘤药物打基础.

应用间接竞争ELISA检测山羊痘抗体方法的建立

[目的]为山羊痘疫苗接种山羊后产生的抗体效价检测和山羊痘的诊断奠定基础。[方法]采用Vero-E6传代细胞分离山羊痘病毒抗原,建立检测山羊痘抗体的间接竞争ELISA方法。[结果]检测山羊痘抗体的间接竞争ELISA的最佳工作条件:最佳抗原包被浓度为1μg/ml,兔抗高免血清最佳稀释度为1∶16 000,待检血清的工作浓度为1∶400,阳性血清的临界值为45.19%,阴性血清的临界值为38.89%。用该试验建立的ELISA方法检测3 000份接种山羊痘疫苗的山羊血清,阳性检出率为83.33%,琼脂扩散试验检出率为77.33%,竞争抑制ELISA方法较琼脂扩散试验方法敏感。[结论]该方法具有特异性高、快速、敏感等特点,适合检测山羊痘抗体。

贵州野生天麻抗真菌肽基因表达载体的构建

为了构建凤冈野生天麻的抗真菌肽基因(gaf)的表达载体,经BamHI和HindIII酶切的pMD18-T-gaf和pET32a(+)质粒的纯化回收产物并进行连接,连接产物pET32a(+)-gaf转化大肠杆菌感受态细胞DH5α后,采用菌落PCR、酶切鉴定和阳性质粒测序分析。结果表明:构建的凤冈野生天麻抗真菌肽基因表达载体通过菌落PCR、酶切鉴定和阳性质粒测序分析,目的片段成功插入载体,目的片段与预期的gaf基因大小(545 bp)相符。试验成功构建了贵州野生天麻抗真菌肽基因表达载体,pET32a(+)-gaf可以用来制备抗真菌蛋白。

凤冈野生天麻抗真菌肽基因(gaf)的克隆与序列分析

为了克隆凤冈野生天麻的抗真菌肽基因(gaf),以凤冈野生天麻的RNA为模板,采用RT-PCR技术扩增抗真菌肽基因(gaf),经克隆和测序结果显示:RT-PCR产物电泳扩增的目标条带长度为545 bp;经测序和序列分析,该基因与Genebank中公布的序列编码天麻抗真菌蛋白的基因序列(AY032588)同源性达97%。此研究成功地克隆了凤冈野生天麻抗真菌肽编码基因。

抗结核杆菌人源噬菌体单链抗体库的构建及筛选

目的:构建人源噬菌体展示单链抗体(ScFv)库,筛选抗结核杆菌特异性、高亲和力的ScFv.方法:从结核患者的外周血淋巴细胞中,提取RNA并通过RT-PCR扩增出VH和VL基因,并采用SOE-PCR构建ScFv基因,将其克隆入噬粒载pCANTAB5E中,转化于大肠杆菌TG1,通过辅助噬菌体M13K07援救构建噬菌体单链抗体库.结果:初级库库容量为3.5×106,在大肠杆菌TG1中重组后得到2.6×106的次级抗体库.结论:成功构建噬菌体展示ScFv库并获得人源抗结核杆菌特异性ScFv,为进一步研制抗抗结核杆菌的高特异性、高亲和力的基因工程抗体奠定了基础.

应用间接ELISA检测猪旋毛虫抗体

以猪旋毛虫抗原基因Ts88的重组蛋白为包被抗原,建立了猪旋毛虫抗体间接ELISA检测方法。最佳抗原包被浓度为1μg/mL,待检血清的最佳稀释倍数为1:80。采用间接ELISA方法检测2000份猪血清,阳性检出率为1.5%,血清样本对应猪肉采用镜检法,阳性检出率为1.30%。试验结果显示,该方法操作简便、快速、特异性好,适用于猪旋毛虫的临床诊断和流行病学调查。

胶体金免疫层析法快速诊断犬弓首蛔虫病

[目的]建立了一种能快速诊断犬弓首蛔虫病方法。[方法]以胶体金标SPA和犬弓首蛔虫(Toxocara canis)抗原蛋白制备免疫层析试纸条,并对其灵敏度和特异性进行评价。采用该试纸条和虫检法对200份犬血清样本进行检测,以评价该试纸条对现场材料的检测效果。[结果]组装的犬胶体金免疫层析试纸条的最低检测线为0.20μg/ml,灵敏度很好;与犬的其他寄生虫病的阳性血清进行反应,均成阴性;对200份犬血清样本的阳性检出率为10%,而虫检法的阳性检出率为2%。[结论]胶体金免疫层析法诊断犬弓首蛔虫病具有操作简便、灵敏度高、特异性强的优点,可用于犬弓首蛔虫病的快速检测。

重组AS16蛋白抗原检测猪蛔虫抗体间接ELISA方法的建立

[目的]建立检测猪蛔虫抗体的间接ELISA方法。[方法]用猪蛔虫重组AS16蛋白作为包被抗原,通过方阵滴定试验确定ELISA的最佳工作条件,包括抗原最佳包被浓度与血清最佳稀释度、最佳包被液、抗原封闭时间、血清反应时间、酶标二抗工作时间和间接ELISA判定标准,并通过交叉试验现场对1 200份猪血清样本采用该试验建立的ELISA和AGP同时进行蛔虫抗体的检测。[结果]ELISA的最佳工作条件是:抗原包被浓度为10μg/ml,37℃1 h,4℃过夜;血清稀释度为18∶0;酶标SPA稀释度为1∶10 000,37℃孵育45 min。该试验制备的ELISA酶标板的临界值为0.196。交叉试验检测表明,ELISA方法阳性检出率为45%,而AGP阳性检出率为30%。该方法具有特异高、快速、敏感等特点。[结论]研究结果证实重组AS16蛋白具有良好的反应原性,可以用来建立ELISA方法诊断猪蛔虫病。

《病原生物学及免疫学》实验教学改革的探讨

目的:为了提高本科生在《病原生物学及免疫学》课程的学习兴趣和提高科研能力,对其实验课程教学改革进行改革探讨。方法:提高学生学习《病原生物学及免疫学》课程的兴趣和创新思维,从深化实验课程教学改革,编写符合实际情况的实验教程,制定的实验室管理规章制度,坚持实验室开放,采取多媒体教学,改革实验考核模式,提高老师实验室工作水平,鼓励学生申报本学科的课题和培养科研思维等几方面对《病原生物学及免疫学》实验教学进行大胆的改革尝试。结果:通过《病原生物学及免疫学》实验教学进行大胆改革尝试,从而提高了学生的学习积极性和主动性,实现了教学与学习双方的良好互动。结论:《病原生物学及免疫学》实验课教学改革有利于培养大学生创新能力和综合素质。

皂角刺总黄酮对体内外人肝癌细胞株HepG2作用活性的研究

目的:探索皂角刺总黄酮对肝癌细胞体内外抑制作用。方法:采用不同剂量的皂角刺总黄酮对肝癌细胞的体外敏感性;对荷瘤小鼠进行体内实验,观察该提取物对肝癌细胞生长的抑制情况。结果:体外实验2.0-0.75mg/ml浓度下皂角刺总黄酮对其增殖有明显的抑制作用,体内实验50、100和150mg/kg剂量分别对荷瘤小鼠生命延长率分别为50.2%、67.2%和74.6%,抑瘤率分别达到55.3%、55.4%和60.3%。结论:皂刺总黄酮在体内外具有明显抑制肝癌细胞的作用。该实验结果为将来皂刺总黄酮应用于临床提供了理论依据。

几种不同方法检测抗蛔虫抗体的建立

目的为了更准确地对蛔虫感染进行检测。方法本研究以蛔虫虫卵蛋白为可溶性抗原,建立了间接血凝试验(IHA)、间接ELISA和琼脂扩散试验(AGP)方法,检测100份来自农村小学生的血清样本。结果间接ELISA阳性检出率为10.00%(10/100),IHA阳性检出率为7.0%(7/100),AGP阳性检出率为4.00%(4/100)。结论间接ELISA具有灵敏度高,特异性强的优点,可用于蛔虫病的诊断。