血清胆碱酯酶与血脂的关系

通过对749例40～60岁工人SChE和血脂水平的分析,结果显示SChE与TC、TG、LDL-C和VLDL-C呈正相关,与HDL-C呈负相关,相关系数分别为0.21,0.23,0.12,0.11和-0.08。高脂血症患者的SChE活性(2271.8±650.7u/L)高于血脂正常者(1968.6±607.0u/L),但冠心病患者的SChE活性(2242.8±499.4u/L)与高脂血症组无差异。在各型高脂血症中,只有高甘油三酯血症(2241.5±623.9u/L)和混合性高脂血症患者(2561.5±704.8u/L)的SChE活性增高,而高胆固醇血症患者的SChE活性(2034.8±640.0u/L)与血脂正常者无差异(p>0.1)。提示SChE与血脂之间存在一定的联系,本文对此关系进行了讨论。

遗传性代谢性疾病的产前诊断

遗传性代谢性疾病的产前诊断４３００３０同济医科大学生化教研室何善述随着诊断技术及分子生物学的进展，人类遗传性疾病的种类（包括Ⅱ型）已报道近达６０００种，其中极大多数仍属于单基因遗传病。在这些单基因遗传病中，已被单基因遗传病。在这些单基因遗传病中，已被...

褪黑素对荷瘤小鼠腹腔巨噬细胞分泌的细胞因子的影响

目的 观察褪黑素 (melatonin ,MLT)对小鼠移植性肝癌生长的抑制作用及对小鼠腹腔巨噬细胞分泌的细胞因子的影响。方法 建立肝癌小鼠模型 ,连续 2周每日皮下注射MLT ,绘制肿瘤生长曲线并采用放射免疫法测定小鼠腹腔巨噬细胞分泌的IL 1β和TNF α的水平。结果 注射MLT的小鼠肿瘤生长速度明显 <阴性对照组 (P <0 .0 5 ) ,腹腔巨噬细胞IL 1β的诱生水平明显提高 (P <0 .0 5 ) ,但TNF α的水平却明显下降。结论 MLT能显著抑制小鼠移植性肝癌的生长 ,它对荷瘤小鼠的巨噬细胞功能具有选择性调节作用。

缺血再灌注引起神经元凋亡及褪黑素抗凋亡的机制

目的探讨模拟缺血再灌注引起神经元凋亡的途径和褪黑素(melatonin,MT)抗凋亡的作用机制。方法用原代培养的SD乳鼠小脑颗粒细胞建立以缺氧缺糖模拟缺血再灌注模型,并加不同浓度的MT(10-5、10-7、10-9mol/L)孵育。采用荧光比色法检测其线粒体跨膜电位及细胞内的活性氧;用Westernblot及ELISA分别检测线粒体和胞质中的细胞色素C;比色法检测胞质中Caspase3的活性。结果在模拟缺血再灌注小脑颗粒细胞模型中,细胞内的活性氧在缺氧缺糖后明显增加;线粒体跨膜电位降低并随再灌注时间延长而加重;线粒体释放入胞质的细胞色素C增加,胞质的Caspase3活性增加;MT可显著减少活性氧和抑制线粒体释放细胞色素C,抑制线粒体跨膜电位的降低,并呈一定剂量依赖性。结论①缺血再灌注引起的神经元凋亡部分是通过线粒体凋亡途径;②MT可通过抗氧化作用和阻止线粒体凋亡而抑制模拟缺血再灌注诱导的小脑颗粒细胞凋亡。

褪黑素对模拟缺血再灌注的原代培养小脑颗粒细胞的保护作用

目的 探讨褪黑素(melatonin, MT) 对模拟中枢缺血再灌注原代培养神经细胞的保护作用。方法 分离SD乳鼠的小脑颗粒细胞进行原代培养, 建立以缺氧缺糖(oxygen glucose deprivation, OGD) 模拟的体外缺血再灌注模型(简称OGD)。通过MTT比色和锥虫蓝染色, 吖啶橙染色(AO) 和DNA琼脂糖凝胶电泳的检测方法, 观察OGD再灌注对小脑颗粒细胞的损伤, 以及OGD中用不同浓度的MT孵育不同时间, MT对神经元损伤的抑制作用。结果 在OGD的细胞模型中, 与OGD组比较1 nmol/L和10 nmol/L的MT孵育48 h后的细胞存活率明显提高(P<0. 05); 100 nmol/L MT孵育24 h后细胞的存活率明显提高(P<0. 05); 药理剂量的MT (1、10、100μmol/L)孵育12 h后细胞的存活率就明显提高(P<0 .05); 各剂量组细胞的存活率都随着孵育时间的延长而增强。而且, 当MT浓度介于1 nmol/L和10μmol/L之间时, 细胞的存活率随着剂量的增大而提高。经OGD处理的细胞, 吖啶橙染色(AO) 和DNA琼脂糖凝胶电泳显示细胞损伤呈现凋亡和坏死两种方式, MT能够抑制OGD所诱导的细胞凋亡。结论 MT可防治脑中枢缺血再灌注引发的继发性损伤。

HPLC测定脑组织和脑脊液中4种氨基酸类神经递质含量的方法改良研究

谷氨酸（Ｇｌｕ）和γ－氨基丁酸（ＧＡＢＡ）等神经递质的代谢异常是诱发多种神经系统疾病的因素之一。由于神经递质在脑内的含量很低，改良建立了一种用ＨＰＬＣ荧光检测Ｇｌｕ、ＧＡＢＡ等４种神经递质的方法，以高丝氨酸为内标，流动相为磷酸缓冲液和甲醇，梯度洗脱２０ｍｉｎ，荧光检测。分离效果及线性关系良好，Ｇｌｕ、ＧＡＢＡ的相关系数分别为０．９９６９、０．９９９６；精密度ＣＶ批内３．４％，批间５．６％；其最小检测限分别为３．３ｐｍｏｌ、１．

前列腺特异性抗原在诊断前列腺疾病中的研究进展

前列腺特异性抗原(PSA)检查是早期发现前列腺癌的常规实验,但由于该标志物缺乏特异性和敏感性,使其早期发现前列腺癌受到限制。近年来,新的前列腺疾病检测标志物及PSA衍生物,如年龄特异性PSA、PSA密度、PSA速度、人体舒血管素2、前列腺特异性膜抗原等在临床的应用,以及总的和游离PSA比率概念等相继提出,为提高前列腺癌检出的阳性率,使患者能够尽早得到治疗提供了可靠的诊断信息。

线粒体在缺血再灌注继发的神经元细胞凋亡中的作用

目的观察线粒体功能失调在缺血再灌后神经元凋亡中的作用。方法(1)采用体外培养神经母细胞瘤细胞株N2a细胞,体外模拟缺血再灌注(缺氧90min,然后再灌不同时间);(2)采用琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡情况;(3)MTT法、细胞色素C释放和跨膜压的改变判断线粒体的功能;(4)caspase-3活性测定采用水解其可见光底物。结果(1)N2a细胞缺血再灌12h即出现明显DNA片段化,24h更明显;(2)线粒体酶活性降低,跨膜电位在缺氧再灌1h先短暂下降再升高然后又明显降低,细胞色素C缺氧再灌3h开始下降,6h达到高峰,持续到24h(3)caspase-3活性在缺氧再灌10h升高,24h达到高峰,线粒体通透性转换孔形成抑制剂CsA只能抑制部分caspase-3的活性和DNA片段化改变;而caspase-8抑制剂虽不能完全抑制caspase-3的活性但能完全抑制DNA的片段化。结论N2a凋亡尚存在有caspase-3依赖性和非依赖性两条途径线粒体功能失调在缺氧再灌引起的N2a细胞凋亡过程中可能起到凋亡早期的启动和随后的信号放大作用。

颗粒溶素的研究进展

颗粒溶素(GRA)是NK细胞和CTL细胞胞浆颗粒中的一种蛋白质分子,具有广泛的杀菌、杀病毒、杀伤肿瘤细胞的活性。通过对GRA的结构、功能及与临床关系的研究,探究其对靶细胞的杀伤机制、在微生物免疫中的作用及其与感染性疾病、肿瘤及其他疾病的相关性,均表明其具有广泛潜在的临床应用价值。

pBLacZ真核表达载体的构建及其在体内外的表达

构建了一种编码β－半乳糖苷酶的真核基因表达载体ｐＢＬａｃＺ。用它对体外培养的ＮＩＨ／３Ｔ３、ＣＯＳ－１、ＣＨＯ细胞株、原代培养的小鼠皮肤成纤维细胞，以及小鼠活体皮下和大鼠活体骨骼肌中进行了基因转移。经Ｘ－ｇａｌ组织化学染色后的结果证实：此基因载体可在这些组织细胞中有效地表达产生β－半乳糖苷酶活性。ｐＢＬａｃＺ作为一种新的标志基因载体，可能具有一定的应用价值。

叶酸、维生素C与5-氟尿嘧啶合并用药对孕鼠和胚胎的毒性

本文观察了5-FU对孕鼠、胚胎的毒性,发现随剂量的增加毒性增强,孕鼠、胚胎体重减轻、生长迟缓,胚胎吸收率增加。若同时给维生素C、叶酸,不仅不能使5-FU的毒性减轻,反而使其毒性增加,胚胎吸收率及血清球蛋白升高,胚胎存活率、胚胎正常发育率、血清白蛋白及白/球比值均降低。结果表明维生素C、叶酸与5-FU合并用药可明显增强5-FU的毒性。

用紫外与可见光分光分析仪测定PASMC增殖的MTT比色法

为使 MTT比色法得到更广泛的应用 ,对紫外与可见光分光分析仪测定细胞增殖 MTT比色法的实验条件进行了探索。结果发现 :以 5 mg/ m l MTT在 0 .1× 10 4～ 2 .4× 10 4细胞范围内进行检测 ,可获得较好的线性检测结果 (γ=0 .9872 )。与酶标仪直接测定比较 ,具有灵敏度高、数据准确、检测范围广 ,值得推广应用。

褪黑素抗H22细胞增殖的机制研究

目的 采用体内和体外实验观察褪黑素 (melatonin ,MLT)对小鼠肝癌H2 2细胞株的生长抑制作用 ,并探讨其机理。方法 MTT法分析MLT对培养H2 2细胞的抑制作用 ,流式细胞技术 (flowcytometry ,FCM)检测细胞周期分布 ,采用免疫组化方法进行体内和体外P5 3、cyclinE的检测 ,通过RT PCR方法进一步检测 p5 3mRNA水平。结果 1.MTT显示MLT对H2 2细胞具有极显著抑制作用 (P <0 0 1) ;2 .FCM显示 :MLT可引起H2 2细胞G0 /G1期比例升高 ;3.免疫组化分析显示MLT使体内和体外P5 3蛋白水平显著增高 (P <0 0 1) ,cyclinE水平下降 (P <0 0 1) ,RT PCR方法证明p5 3mRNA水平增高。结论 MLT可引起细胞周期阻滞在G1期 ,其机理可能是通过P5 3抑制cyclinE的表达 ,从而阻止细胞进入S期的结果。

荧光微量检测细胞内DNA与蛋白质含量

应用荧光试剂（３３２５８Ｈｏｅｃｈｓｔ）微量测定细胞内ＤＮＡ含量，应用荧光胺（Ｆｌｕｏｒｅｓｃａｍｉｎｅ）微量测定细胞内蛋白质含量。结果：荧光试剂与ＤＮＡ的Ａ－Ｔ碱基形成复合物后，其激发波长（ＥＸ）由３２０ｎｍ移至３５０ｎｍ，发射波长（ＥＭ）由４８０ｎｍ移至４６０ｎｍ，且荧光强度大为增强。荧光胺与蛋白质反应生成强荧光化合物，在ＥＸ３９０ｎｍ，ＥＭ４７５ｎｍ条件下最低检测限为０．５μｇ／μｌ。该法操作简便，微量快速，重复性好。可用于荧光微量测定ＤＮＡ与蛋白质含量，还可用于观察细胞的增殖。

癫痫发作与脑脊液中氨基酸类神经递质含量变化的关系

采用高效液相色谱仪荧光法测定癫痫全面性大发作及复杂部分性发作患者脑脊液中谷氨酸（Glu）、甘氨酸（Gly）、γ－氨基丁酸（GABA）的含量。全面性大发作患者的Glu、Gly含量显著高于对照组（P＜0．05），而GABA较对照组无显著差异；复杂部分性发作患者的Glu、Gly、GABA含量较对照组显著增加（P＜0．05）。从而说明Glu是诱发癫痫发作的主要兴奋性神经递质，而GABA有阻仰中枢神经元异常放电的作用，减缓癫痫的发作。

DDPH抑制HECCM促PASMC增殖时第二信使变化的研究

采用 MTT比色、荧光技术和放免技术观察了猪肺动脉低氧内皮细胞条件培养液 (HECCM)和 1- (2 ,6 -二甲基苯氧基 ) - 2 - (3,4-二甲氧基苯乙胺基 )丙烷盐酸盐 (DDPH)对猪肺动脉平滑肌细胞 (PASMCs)增殖、第二信使 ([Ca2 +]i 和 c AMP)的影响。结果显示 :1HECCM促进 PASMC增殖 ,而 DDPH可抑制之 ,抑制率为 77.46 %。 2HECCM升高 PASMCs内 [Ca2 +]i,而 DDPH可对抗此作用。 3HECCM组 PASMCs内 c AMP含量明显低于对照组(NECCM组 ) ,而 HECCM+DDPH组 PASMCs内 c AMP与

褪黑素对小鼠肝癌H22细胞抗增殖和促凋亡的p53依赖性机制研究

背景与目的本室已经证明了褪黑素(melatonin,MLT)对小鼠肝癌H22细胞的生长具有抑制作用,本研究旨在探讨其机理。方法(1)建立荷瘤小鼠模型并给予褪黑素处理,取肿瘤组织进行p53、cyclinE水平的免疫组化分析;(2)不同浓度褪黑素体外培养小鼠肝癌H22细胞,采用流式细胞技术(flowcytometry,FCM)检测细胞周期分布和凋亡率;免疫组化法分析培养细胞的p53和cyclinE的蛋白水平;采用RT-PCR方法检测FasmRNA的水平。结果(1)FCM显示褪黑素可引起H22细胞G0/G1期比例升高,从75.24%上升至85.46%,同时细胞凋亡增多,从5.07%升至12.77%;(2)褪黑素作用后p53水平较对照组增高42.5%(培养细胞)和19.5%(肿瘤组织),而cyclinE的水平则降低31.7%(培养细胞)和39.9%(肿瘤组织);(3)RT-PCR结果显示FasmRNA水平增高44.2%。结论MLT通过阻滞细胞周期和诱导细胞凋亡抑制H22细胞增殖。其机理可能是通过p53抑制下游的cyclinE的表达,阻止细胞进入S期;同时又通过p53上调Fas表达,从而诱导细胞凋亡。

急性癫痫大鼠脑脊液中四种氨基酸含量的变化

本文用神经递质HPLC荧光法测定了急性致病大鼠脑脊液中四种氨基酸的含且及应用NMDA受体阻断剂MK—801后对上述指标的影响。结果：急性致痫组动物脑脊液中GIU明显增高（P＜0．05）。其它三种氨基酸变化不明显。使用MK—801后，脑脊液中Gin合且有所下降。提示：马迈内酯致痴与脑内GIu升高有关。

谷氨酸脱羧酶放射测量法的改良及应用

用NaOH代替苯乙胺作为14 CO2 的吸附剂 ,改进谷氨酸脱羧酶 (GAD)活性的放射测定方法 ,结果发现NaOH为吸附剂组内变异系数为 9 6 % ,以苯乙胺为吸附剂组内变异系数为 31 9% ;以NaOH为吸附剂 72h后测量其放射活性仍稳定不变 ,以苯乙胺为吸附剂者 1h后放射性活性即下降 47% ,6h后已降低至本底水平 ;14 CO2 重吸收实验亦证明以苯乙胺为吸附剂吸附的14 CO2 6h内已有 80 %以上重新被NaOH吸附 ;以NaOH作为吸附剂测定GAD的活性 ,在 0 39～ 17 8mg脑组织样品范围内GAD量与14 CO2 生成量之间有线性关系 .NaOH代替苯乙胺作为14 CO2 的吸附剂测定GAD的活性其灵敏度提高 1 6 6倍 .用此方法测定组织和细胞内GAD活性证明其具有良好的重复性和稳定性 ,值得推广应用 .