C型逆转录病毒与人类白血病关系的探讨

我们以间接免疫荧光法和免疫电镜技术测定C型逆转录病毒。共检测102例,其中淋巴细胞白血病28例、急性非淋巴细胞白血病21例,T细胞白血病3例,正常人50例。结果正常人对照组逆转录病毒抗原全部阴性,病人组阳性率为19.23％。两组阳性率差异十分明显(P<0.01)。在10例病毒抗原阳性标本中,4例有病毒颗粒,此颗粒有囊膜、拟核居中,为球形,直径大于200nm,是C型病毒颗粒。

白血病患者RCIA及其血清抑制因子的探讨

八十年代初siecel等开辟了红细胞免疫研究的新领域。已知人红细细胞表面膜上具有C3b受体。此受体可识别C3b,通过抗原抗体补体兔疫复合物,粘附到红细胞表面膜上。该过程称为红细胞免疫吸附(RCIA)国内学者报道,白血病患者RCIA率降低。但目前未见血清抑制RCIA的报告,我们试验结果说阴,白血病患者红细胞免疫功能失常,与血清抑制作用有关。

C型逆转录病毒和自身免疫病的关系

我们以电子显微镜和免疫萤光技术测定C型逆转录病毒,共测试90例,包括正常对照50例,自身免疫疾病40例。结果正常人C型逆转录病毒抗原全部阴性,自身免疫病患者阳性率25％,两组有十分显著的差异(P<O.01),在电子显微镜下发现病毒抗原阳性标本中有C型病毒颗粒。病毒颗粒有囊膜,拟核居中,直径大于200nm。成熟和未成熟的病毒颗粒分布于细胞外,有时在细胞膜上显现病毒出芽现象。

C型逆转录病毒与人类神经性疾病

以免疫电子显微镜和免疫萤光技术测试Ｃ型逆转录酶病毒。测定了神经性疾患病人和正常人各４０例的病毒抗原。结果正常人全部阴性，而病人阳性率为２２．５０％，差异非常显著（Ｐ＜０．０１）；且在抗原阳性标本中见Ｃ型病毒颗粒。提示国内神经性疾病与Ｃ型逆转录病毒感染有关。另检测了５０例正常人和５４例神经性疾患病人血清病毒抗体，显示正常人全部阴性，病人阳性率为１．８５％，无显著差异（Ｐ＞０．０５）。但病人病毒抗原和抗体的阳性率相比，差异非常显著（Ｐ＜０．０１），说明测试抗原比抗体敏感。

恶性肿瘤病人红细胞免疫粘附功能测定的临床意义

采用红细胞C3b受体花环试验测定恶性肿瘤病人红细胞免疫粘附功能。患者150例,ALL 58例,ANLL 30例。其它恶性肿瘤30例,缓解期白血病32例;正常对照60例。结果红细胞C3b受体花环率分别为:ALL 10.13±2.13,ANLL 8.04±2.00,其它肿瘤8.72±3.01,与正常对照组17.51土5.80相比,各组红细胞C3b受体花环率差异均有显著意义(P<0.01);而缓解期白血病16.91±3.90与对照组比较无差异(P>0.05)。提示恶性肿瘤患者红细胞免疫粘附功能随病情变化而异,治疗前低下,治疗缓解后好转,本测试有助于疗效判断和估计病人预后。

淋巴细胞恶性疾病HTLV-Ⅰ抗原及抗体的测定分析

本文以间接免疫萤光法测定96例淋巴细胞恶性患者血清中抗人T细胞白血病病毒Ⅰ型(HTLV—1)抗体。其中,80例急性淋巴细胞白血病;12例非何杰金氏淋巴瘤;4例慢性淋巴细胞白血病。发现一例成人抗HTLV—1抗体阳性,抗体滴度1:80,阳性率1.04％。並在培养细胞中检出HTLV—1抗原阳性细胞,前后两次阳性率分别为1.7～1.5％(P>0.05)。确诊病人已感染本病毒,提示HTLV—1已传入江西。认为测定HTLV—1抗原比抗体更重要,可用于早期确诊及游行病学调查。

连翘苷对甲型流感病毒核蛋白基因表达的影响研究

目的探讨连翘苷对甲型流感病毒核蛋白(NP)基因转染后表达的影响。方法将甲型流感病毒NP基因转染Hela细胞,用甲型流感病毒胶体金法检测连翘苷对转染后细胞内和上清核蛋白表达情况,用实时定量反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测Hela细胞内NP基因的拷贝数。结果 NP重组质粒组甲型流感病毒核蛋白含量高。空质粒组、脂质体组、Hela细胞组基本不含甲型流感病毒核蛋白。连翘苷组上清无或可能含有微量核蛋白。连翘苷组胞内甲型流感病毒含量不高。RT-PCR校正曲线相关性为0.998,效率为97.4%。重复4次转染后48 h连翘苷组NP基因表达量为(2.1±0.3)×105拷贝数/μl,NP重组质粒组NP基因表达量为(61.5±15.0)×105拷贝数/μl,连翘苷组NP基因表达量低于NP重组质粒组,差异有统计学意义(t=7.672,P<0.05)。结论连翘苷可以抑制甲型流感病毒NP基因转染后表达。

黄芩总黄酮对甲型流感病毒核蛋白表达的影响

目的探讨黄芩总黄酮(Total flavonoids of Scutellaria baicalensis Georgi,TFSB)对甲型流感病毒核蛋白(NP)的干预作用。方法本实验设HeLa细胞组、pcDNA3.1(+)空载体组、pcDNA3.1(+)/NP组、TFSB组,其中pcDNA3.1(+)空载体组、pcDNA3.1(+)/NP组分别通过瞬时转染将重组质粒pcDNA3.1(+)、pcDNA3.1(+)/NP转染到HeLa细胞中;TFSB组在将重组质粒pcDNA3.1(+)/NP转染到HeLa细胞的同时使用TFSB进行药物干预。转染48 h后,采用胶体金免疫层析试纸法测维持液中NP的表达,荧光定量RT-PCR测NP基因起始核酸量。结果胶体金免疫层析试纸法测NP表达示:pcDNA3.1(+)/NP组、TFSB组为阳性;荧光定量RT-PCR示:pcDNA3.1(+)/NP组和TFSB组NP基因起始拷贝数分别为(8.90±2.53)×106copies/μl、(6.15±1.49)×106copies/μl,采用t检验进行统计学分析:差异无统计学意义(P>0.05)。结论黄芩总黄酮对甲型流感病毒NP基因和NP的表达没有影响。

人嗜T淋巴细胞Ⅰ型病毒(HTLV-Ⅰ)与神经系统疾病关系的初步研究

1980年,美国的Poiesy和日本的Miyoshi等先后发现人类第一个C型逆转录病毒,后国际上统一命名为人嗜T淋巴细胞Ⅰ型病毒(HTLV-1)。这类病毒以人T_4细胞亚群为靶细胞,并与成人T细胞白血病有病原学关系。1985年,Gessain等报告在热痉挛性瘫痪病人(Tropical Spastic Paraparesis,TSP)血清和脑脊液中查出HTLV-Ⅰ抗体,1986年又在Colombia、Jamaica、Trinidad、Tobago和Ivory Coast等一些国家和地区,也发现某些慢性脊髓神经病变患者(症状相似于TSP病人)的血清和脑脊液中有HTLV-Ⅰ抗体存在。

鱼腥草对甲1型流感病毒核蛋白基因作用的实验研究

目的探讨鱼腥草对甲1型流感病毒核蛋白基因的作用。方法在甲1型流感病毒核蛋白基因保守区设计引物,对其进行筛选,同时对荧光定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)条件和反应体系进行优化。设病毒对照组、药物对照组、细胞对照组和实验组,采用荧光定量RT-PCR法测定鱼腥草对甲1型流感病毒基因的效应。结果病毒对照组细胞出现细胞病变(CPE),血凝滴度为阳性,其他组无CPE,血凝滴度均为阴性。以荧光定量RT-PCR法重复5次取平均值,实验组RNA测定结果为(2.6±0.8)×106拷贝数/μgRNA,对照组为(2.9±1.2)×109拷贝数/μg RNA,两组比较差异有统计学意义(P<0.01)。结论鱼腥草可抑制甲1型流感病毒核蛋白基因的表达。

三种板蓝根制剂对流感病毒核蛋白表达的影响

目的探讨不同板蓝根制剂对甲型流感病毒核蛋白(NP)的作用,寻找抗流感病毒中药的有效成分。方法采用传统水煮浸法提取的板蓝根水煎液和有机溶剂浸泡法提取的板蓝根凝集素及购买的板蓝根注射液,用细胞病变效应(CPE)法测得三种制剂试验浓度分别为1.95、2.60、0.78 mg/ml。将培养的Hela细胞分为八组,质粒组转染pcDNA3.1(+)/NP,空质粒组转染pcDNA3.1(+);注射液、水煎液、凝集素实验组则将板蓝根注射液、水煎液、凝集素的试验浓度分别作用于转染重组质粒pcDNA3.1(+)/NP的Hela细胞,三种制剂对应的对照组不进行转染,仅将对应制剂作用于Hela细胞。用胶体金免疫层析法和间接免疫荧光法检测各组NP表达。结果质粒组、注射液及水煎液实验组胶体金试验阳性,免疫荧光法证实作用转染的Hela细胞仍发出较强绿色荧光,且表达的NP定位于细胞质中;而凝集素组及空质粒组中表达NP的细胞未出现较强的绿色荧光且胶体金试验阴性。结论板蓝根凝集素可抑制NP基因表达,此为研发抗流感病毒的药物提供了新思路。

中药治疗甲型流感作用机制的研究进展

甲型流感(甲流)严重危害人类健康,中草药作为祖国传统医学宝藏在抗流感方面具有疗效可靠、资源丰富、毒副作用小等优点,越来越受到世界关注。本文从甲型流感病毒结构与功能出发,阐述中药治疗甲流作用机制的研究进展。

双黄连抑制流感病毒诱导MDCK细胞程序化死亡的研究

研究显示,流感病毒在体内可诱导人体的呼吸道上皮细胞凋亡,在体外使宫颈癌细胞（Hela）和狗肾传代细胞（MDCK）凋亡。近来报道抗流感病毒药物可抑制流感病毒诱导感染细胞凋亡。但双黄连是否可抑制流感病毒诱导MDCK细胞凋亡少有报道。我们自2005年7月至2008年6月采用Annexin V及碘化丙啶（PI）双染并应用流式细胞仪检测双黄连对流感病毒诱导MKCK细胞凋亡的影响,报告如下。

用聚合酶链反应检测T细胞白血病／淋巴瘤中HTLV－I前病毒DNA

用聚合酶链反应检测Ｔ细胞白血病／淋巴瘤中ＨＴＬＶ－Ｉ前病毒ＤＮＡ陈国敏，何士勤，王柠，张永利，曾毅（中国预防医学科学院病毒学研究所北京１０００５２）关键词聚合酶链反应（ＰＣＲ），人Ｔ淋巴细胞病毒Ｉ型（ＨＴＬＶ－Ｉ），前病毒，基因整合目前，国内对人Ｔ淋...

双黄连抑制流感病毒甲_1型基因的研究

目的通过对实时荧光定量RT-PCR检测流感病毒甲1型多聚酶蛋白(PA)基因,了解双黄连作用病毒的效应。方法采用实时荧光定量RT-PCR法标准曲线测药物抑制甲1型PA病毒基因效应。结果以实时荧光RT-PCR法,重复测7次取平均值,对照组病毒基因为3.62×106±0.90拷贝数/ug,试验组病毒基因为4.57×105±1.23拷贝数/mg。发现病毒对照组基因明显高于试验组(P<0.001)。结论提示双黄连可抑制流感病毒甲1基因。

双黄连抑制流感病毒甲_1型基因的研究

目的建立实时荧光定量RT-PCR检测流感病毒甲1型多聚酶蛋白(PA)基因,了解双黄连作用病毒的效应。方法采用实时荧光定量RT-PCR法标准曲线测药物抑制甲1型PA病毒基因效应。结果以实时荧光RT-PCR法,重复测7次取平均值,对照组病毒基因为3.62×106±0.90拷贝数/mg,试验组病毒基因为4.57×105±1.23拷贝数/mg。发现病毒对照组基因明显高于试验组(P<0.001)。结论提示双黄连可抑制流感病毒甲1型基因。

甲型流感病毒核蛋白基因的真核质粒的构建及其表达

目的构建甲型流感病毒A/PR/8/34(H1N1)核蛋白(nucleoprotein,NP)基因的真核表达载体,转染Hela细胞,并用甲型流感病毒检测试剂盒(FluARapidTestKit)检测其表达情况。方法用特异引物从甲型流感病毒cDNA中采用PCR技术克隆出NP基因,将其插入到真核表达质粒pcDNA3.1(+)。酶切、PCR、测序鉴定后,构建好的pcDNA3.1(+)/NP用脂质体转染法转染到Hela细胞,通过甲型流感病毒检测试剂盒检测其蛋白表达。结果克隆出一个核苷酸长度为1432bp的基因,和A/PR/8/34(H1N1)(GenBank/NCB,GI:8486129)有98%的同源性,转染Hela细胞后用甲型流感病毒检测试剂盒检测到24h、48h、72h细胞内外的蛋白表达。结论成功构建甲型流感病毒A/PR/8/34(H1N1)核蛋白基因的真核表达质粒,为进一步研究理化因素对该基因的影响、基因的结构和功能打下良好的基础。

鱼腥草及三丫苦对甲型流感病毒NPAG表达的影响

目的探讨鱼腥草及三丫苦对甲型流感病毒(nucleo protein antigen,NPAG)表达的影响,了解鱼腥草及三丫苦抗甲型流感病毒的分子机制。方法以胶体金法测定NPAG的表达。瞬间转染,实验分为:Hela细胞组、空质粒组[PCDNA3.1(+)/empty]、重组质粒组[PCDNA3.1(+)/NP)]、脂质体组、三丫苦醇提物组和鱼腥草油组。药物实验加入重组质粒同时将药物加入培养细胞孔中进行干预。转染48h后,测定其上清液NPAG的表达。结果胶体金法测试显示:Hela细胞组、PCDNA3.1(+)/empty组、脂质体组、鱼腥草油组为阴性;PCDNA3.1(+)/NP组、三丫苦醇提物为阳性,NPAG浓度1:64。结论鱼腥草油组可抑制甲型流感病毒NPAG的表达,能抗甲型流感病毒。三丫苦醇提物组不影响NPAG的表达。

双密达莫抑制流感病毒A(H_1N_1)核蛋白基因作用的实验研究

目的探讨双密达莫抑制流感病毒A(H1N1)核蛋白基因(NPG)的作用。方法采用荧光定量RT-PCR法检测药物抑制流感病毒NPG效应。结果药物对MDCK细胞的毒性范围:1∶64稀释为无毒界限。病毒半数细胞感染量(TCID50)为6.5.25μL-1。直线相关性分析结果显示:阈值循环数与不同浓度的定量模板的对数呈负相关(r=-0.999,P<0.05)。病毒对照组RNA水平明显高于实验组[(5.50±1.82)×109拷贝数.μL-1 vs(8.59±2.17)×107拷贝数.μL-1,P<0.01)]。结论双密达莫能阻断流感病毒核蛋白的合成,为防治流感提供了分子实验依据。

抗流感病毒药物与细胞凋亡

综述流感病毒与细胞凋亡的关系 ,介绍抗流感病毒药物。抗流感病毒药物除金刚烷胺类药物外 ,还有流感病毒神经氨酸苷酶抑制药、流感病毒受体阻断药、抗流感病毒反义寡核苷酸和黑色素等 。