溶血素 E基因原核表达载体的构建与蛋白诱导表达

目的构建大肠杆菌(Escherichia Coli,E.coli)溶血素E(Hemolysin E)基因的重组质粒pCZN1-hlyE,诱导表达目的蛋白。方法通过NCBI数据库检索获取E.coli Hemolysin E基因序列(NC_000913.3),采用基于PAS(PCR-based Accurate Synthesis)的全基因合成法,设计全长拼接引物,合成目的基因,并成功构建重组质粒pCZN1-hlyE。将构建好的pCZN1-hlyE重组质粒转入大肠杆菌TOP10菌株中,并用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导Hemolysin E基因的表达,生成Hemolysin E毒力蛋白。结果经SDS-PAGE凝胶电泳,Western blot分析鉴定目的蛋白Hemolysin E分子量为28.72 kDa,与Hemolysin E基因核酸序列经DNAMAN软件分析所得蛋白分子量一致。结论被诱导表达的Hemolysin E蛋白存在于菌体裂解液上清中,并纯化制备重组蛋白。

1例脑膜恶性黑色素瘤的脑脊液细胞学检查

脑膜恶性黑色素瘤是中枢神经系统较为少见的肿瘤,其恶性程度高、预后差[1-2]。脑脊液(cerebro-spinal fluid,CSF)细胞学检查对于疾病的诊断具有重要的参考价值。宁夏医科大学总医院神经内科于2018年收治了1例脑膜恶性黑色素瘤患者,现报道该病例的CSF细胞学变化及黑色素瘤细胞的形态特征。

神经外科术后重度颅内感染患者脑脊液细胞学动态表现及用药分析

目的对神经外科术后重度颅内感染患者脑脊液细胞学动态表现及用药进行分析。方法回顾分析2014年1月-2017年11月宁夏医科大学总医院神经外科术后脑脊液细胞学白细胞计数≥1000×10~9个/L的47例重度颅内感染患者脑脊液病原微生物培养结果、细胞学动态表现及抗感染用药情况。结果 47例重度颅内感染患者的脑脊液培养阳性率31.91%,以凝固酶阴性葡萄球菌(40.00%)、金黄色葡萄球菌(26.67%)为主。患者脑脊液细胞学渗出期平均发生时间为术后(5.43±0.36)d,脑脊液白细胞平均计数(4058.26±566.27)×10~9个/L。渗出期进入修复期的平均治疗时间为(16.51±6.49)d,46.81%患者呈现脑脊液白细胞计数波动回升的特点。将47例患者分为白细胞计数波动组(n=22)与下降组(n=25),结果显示波动组较下降组进入修复期的平均治疗时间增加(P<0.05)。当白细胞计数≥1000×10~9个/L时,74.47%患者开始采用万古霉素或万古霉素联合其他抗菌素治疗,平均治疗时间(14.81±1.07)d。结论凝固酶阴性葡萄球菌、金黄色葡萄球菌是引起神经外科术后重度颅内感染的主要致病菌;脑脊液细胞学动态观察对判断神经外科术后重度颅内感染患者治疗效果具有重要临床价值;万古霉素是目前主要抗感染药物。

拉莫三嗪RP-HPLC分析方法的建立及应用

目的 建立适用于临床药物浓度监测的拉莫三嗪血药浓度的高效液相色谱分析法.方法 以替硝唑作内标,用氯仿作萃取剂,Symmetry-C 18反相色谱柱,乙腈-0.02mol·L-1,磷酸二氢钾（体积比为25：75）为流动相,流速为1 mL·min-1,柱温37℃,检测波长：210nm.结果 拉莫三嗪在0.5～ 8.0μg·mL-1范围内线性关系良好,日间、日内RSD均＜7.50％,提取回收率＞68.00％.结论 本方法简便、快速、灵敏、准确,能够满足拉莫三嗪临床药浓度监测及药代动力学研究的要求.

流行性乙型脑炎患者脑脊液细胞学及生化特点

目的 分析流行性乙型脑炎(以下简称“乙脑”)患者脑脊液(CSF)细胞学及生化特点。方法回顾性收集2018-07-2018-9期间宁夏医科大学总医院收治的乙脑患者58例,其中男31例、女27例,平均年龄(58.2±13.8)岁,分析患者CSF细胞学及生化检查的临床资料。结果所有患者CSF细胞学检查可见炎性反应,炎性反应程度以中度为主(50.0%),其次为重度(36.2%)和轻度(13.8%)。细胞学反应类型主要以淋巴细胞反应为主(53.4%),其次以中性粒细胞反应为主(27.6%)、淋巴细胞和中性粒细胞混合反应为主(15.5%)、淋巴细胞和单核细胞反应为主(3.4%)。9例(15.5%)患者CSF可见激活的淋巴细胞,11例(19.0%)可见激活的单核细胞,22例(37.9%)可见浆细胞。53例(91.4%)患者CSF蛋白升高,45例(77.6%)CSF葡萄糖水平正常,35例(60.3%)CSF氯化物水平正常。乙脑患者初期CSF细胞学反应类型以淋巴细胞反应为主(38.7%)和以中性粒细胞反应为主(38.7%),极期和恢复期主要以淋巴细胞反应为主(74.3%、95.2%)。结论CSF细胞学检查可为乙脑患者的诊断提供实验室参考依据。

1-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉的合成工艺改进

以苯乙胺为原料,经乙酰化反应得乙酰苯乙胺(3),在甲基磺酸的作用下环合得1-甲基-3,4-二氢异喹啉(4),经硼氢化钠还原得1-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉(1)。改进了合成工艺,总收率达80.8%。

中枢神经系统感染疾病脑脊液细胞形态特征分析

目的探讨中枢神经系统感染者脑脊液中细胞形态的特征改变,提高脑脊液细胞学分类的准确性,实现在中枢神经系统疾病的早期诊断。方法应用细胞玻片离心仪制片、瑞氏-姬姆萨(MGG)染色,细胞显微图像分析系统观察细胞形态。选择"抓图"以688×512像素摄取细胞图像,对三组病脑、化脑、结脑颅内感染疾病脑脊液的各类有核细胞进行细胞面积、直径等测量,分析不同疾病中细胞大小特征的变化。结果 391份临床送检标本中,根据形态特征分类,化脓性脑膜炎88份(化脑),以均匀一致的中性粒细胞反应为主,占白细胞分类(80.88±10.30)%以上。病毒性脑膜炎260份(病脑),脑脊液细胞学形态以淋巴细胞反应为主而中性粒细胞偶见,大小淋巴细胞占(75.65±15.88)%,激活淋巴细胞占(17.95±14.09)%。结核性脑膜炎43份(结脑),结脑以单核吞噬细胞、淋巴样细胞为主,伴中性粒细胞占(36.79±1.65)%。三种脑膜炎间白细胞数、未激活淋巴细胞、激活淋巴细胞、未激活单核细胞、激活单核细胞、嗜中性粒细胞、浆细胞差异均有统计学意义(P<0.05);嗜酸性粒细胞三者间差异无统计学意义(P=0.063)。中性粒细胞面积结脑大于化脑和病脑患者(P<0.01),病脑中性粒细胞面积大于化脑(P<0.05);结脑和病脑的中性粒细胞直径均大于化脑组(P<0.01);化脑淋巴细胞面积大于病脑(P<0.05);结脑淋巴细胞面积大于病脑(P<0.01);化脑和结脑的淋巴细胞直径均大于病脑(P<0.01),结脑淋巴细胞直径大于化脑(P<0.05);结脑和病脑的单核细胞面积与直径均大于化脑(P<0.01)。结论脑脊液细胞形态学特征的改变是诊断神经系统感染疾病的重要指标。

脑脊液常规与细胞学两种方法检测脑脊液白细胞计数结果的比较

目的比较脑脊液常规(以下简称"常规")和脑脊液细胞学(以下简称"细胞学")检测脑脊液白细胞计数的结果并探讨两者间存在差异的可能原因。方法回顾性分析287例于作者医院行脑脊液检查患者的临床资料,统计常规及细胞学两种方法计数脑脊液白细胞的结果 ,并结合临床进行比较。结果细胞学方法检测显示白细胞计数结果正常119例,结果异常168例(58.5%);常规白细胞计数结果正常178例,结果异常109例(38.0%);常规计数正常而细胞学计数异常62例,常规计数异常而细胞学计数正常3例;常规计数及细胞学计数均为异常结果的106例样本中,98例的细胞学计数明显高于常规。与临床诊断对比,细胞学计数结果与临床符合程度高于常规计数法(χ2=24.287,P=0.000)。结论细胞学在脑脊液白细胞计数中更为准确,临床符合程度高于常规计数法。

院内感染病原菌整合子结构的检测与耐药机制研究

目的研究整合酶I在院内感染病原菌中的分布及整合子结构介导的耐药分子机制。方法分离2016年重症监护室、烧伤科、神经外科、普胸外科院内感染病原菌29株,用VITEK2 COMPACT全自动微生物鉴定仪进行菌种鉴定及药敏检测。采用聚合酶链式反应检测整合酶I基因,分析阳性株携带的整合子结构介导的耐药分子机制。结果 29株院内感染病原菌整合酶I检出率为93.10%,整合酶I在革兰氏阳性菌中也普遍存在。携带整合子可变区的菌株占整合酶I阳性株的51.72%,可变区包含aac A4-cat B8-aad A1、dfr A17-aad A5、aac A7、dfr A12-aad A2、aac C1-aad A1、aad A5-dfr A1-orf C、aac C1-dfr A1、aac C4-cml A1、aac C4-orf C-aac A1、dfr A17-aad A5、aac C4-cat B8-aad A1基因盒,携带整合子可变区的院内感染病原菌中对氨基糖苷类药物产生耐药的病原菌比例明显高于未携带整合子可变区的病原菌(P<0.05)。结论整合酶I在院内感染病原菌中分布广泛,整合子结构主要介导氨基糖苷类抗菌药物耐药性,整合子在耐药基因传播中起重要作用。

蒺藜总黄酮提取条件的优化

以乙醇为提取剂,通过单因素及正交实验对蒺藜总黄酮的提取条件进行了优化。最佳提取条件为:乙醇浓度85%、料液比1:27.5、浸提温度85℃、浸提时间2h,在此条件下蒺藜总黄酮得率为0.7849%。

神经系统自身免疫病相关抗体检测及脑脊液检查的临床诊断价值

目的探讨神经系统自身免疫病相关抗体的检测以及脑脊液检查在临床诊断中的意义。方法收集24例患者的血清和脑脊液进行副瘤性抗体、抗AQP-4抗体和抗NMDA受体抗体等相关抗体的检测,并对患者的脑脊液进行细胞学检查,分析抗体阳性患者的脑脊液生化、IgG和细胞学的检查结果。结果共有7例患者的神经系统自身抗体为阳性,3例为抗NMDA受体抗体阳性,3例为抗AQP-4抗体阳性,1例为抗GABAB抗体阳性。3例抗体阳性患者的脑脊液蛋白高于正常值;7例葡萄糖含量均正常;2例氯化物浓度略低于正常值;6例脑脊液IgG含量升高;脑脊液中白细胞数为(15～82)×106/L或者正常,其中淋巴细胞占白细胞总数的88%～94%,浆细胞最高占白细胞总数的5%。结论神经系统自身抗体的检测及脑脊液检查具有重要的意义;7例抗体阳性患者的脑脊液蛋白浓度、IgG浓度和白细胞数升高或正常,葡萄糖和氯化物浓度正常或稍偏低,细胞学反应以淋巴细胞反应为主。

新生儿肺炎并发脑膜炎脑脊液的特点及临床意义

目的探讨新生儿脑脊液的特点及临床意义。方法回顾性分析63例新生儿肺炎并发脑膜炎的临床资料,比较不同性别、不同发病时间患儿的实验室检查特点。结果 98.41%新生儿肺炎并发脑膜炎,脑脊液细胞学分类单核细胞占(77.60±12.36)%。不同性别组实验室检查结果比较差异无统计学意义(P>0.05);早发性肺炎组并发脑膜炎患儿的脑脊液葡萄糖较晚发性肺炎组高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论新生儿肺炎并发脑膜炎的脑脊液细胞学以单核细胞反应为主,男孩比女孩更容易患新生儿肺炎并发脑膜炎,性别与发病时间对新生儿肺炎并发脑膜炎患儿的实验室检查指标无影响。

测定异烟肼血药浓度RP-HPLC的建立及其应用

目的为了探讨治疗结核性脑膜炎时异烟肼的剂量选择，建立一种快速、灵敏的测定血浆中异烟肼药物浓度的反相高效液相色谱法（RP—HPLC）。方法替硝唑作内标，经与香草醛衍生化反应后进样。用Symme．tryC18（4．6mm×250mm，5um）反相色谱柱进行分离，以甲醇-0．02mol·L-1磷酸二氢钾溶液（体积比为39：61）为流动相，流速1．0mL·min-1，柱温为30℃，检测波长为340nm，20ul进样。结果异烟肼血药浓度在0．1～16ug·mL-1（r=0．9999）范围内线性关系良好；日内、日间RSD均〈15％，提取回收率60．63—66．95％。结论本方法简便、准确、灵敏，满足异烟肼血药浓度测定，可应用于临床结核性脑膜炎患者血药浓度的检测及药代动力学分析。

癫痫患者拉莫三嗪血药浓度与疗效及剂量关系的研究

目的 分析癫痫患者拉莫三嗪（LTG）血药浓度与疗效及剂量的关系.方法 收集宁夏医科大学总院门诊及住院部60例单服LTG治疗癫痫的患者,采集空腹血5 mL,运用高效液相色谱法（HPLC）测得LTG血药浓度,依据LTG血药浓度将60例患者分为偏低浓度（＜1 μg·mL14例）、有效浓度（1～8μg·mL-149例）及偏高浓度（＞8 μg·mL-17例）3组进行分析.结果 检测结果显示49例患者LTG血药浓度在1～8 μg·mL-1,其中有43例LTG服用剂量50～200 mg,有87.8％的患者癫痫发作得到有效控制;LTG对癫痫各类型发作疗效显著,对全面性发作尤为明显,在血药浓度为1 ～8 μg·mL-1时,LTG对全面性发作与部分性发作有效率差异有统计学意义（P＜0.05）.结论 LTG治疗多种癫痫类型疗效明显,血药浓度在1～8 μg·mL-1时,对全面性发作疗效更好;临床上LTG给药剂量控制在50～200 mg,为相对安全有效的剂量范围.

浅析高中语文教学中如何运用微课程提高课堂的有效性

在网络环境下,微课已经被广泛应用到了课堂知识教学当中,并取得了优异的成绩。但是,现在很多高中语文教师在进行知识教学的时候,所采用的更多还是传统教学方法,缺乏对微课程的重视,微课程的应用频率还相对较低,极大影响了微课程的作用发挥,阻碍了学生的全面发展。同时,在课堂教学过程中,合理应用微课还能够将有效提升知识的趣味性,推动知识的形象化发展,降低知识理解难度,以此来调动学生的学习欲望,提高教学质量,增强学生的语文素养,进而为他们日后的成长发展打下更坚实的基础。所以,本文简单介绍了微课程的重要价值,然后提出了几点有效应用建议,希望可以为高中语文课堂教学有效性提升起到一定的参考借鉴作用。

酶法提取蒺藜黄酮的研究

通过单因素及正交实验研究了纤维素酶对蒺藜黄酮提取得率的影响。酶法提取的最佳工艺条件为:料液比1∶15、酶用量3.5%、酶处理时间2.5h、酶处理温度55℃及pH5.0,在此条件下得率为0.2023%。通过单因素及正交实验研究了纤维素酶对蒺藜黄酮提取得率的影响。酶法提取的最佳工艺条件为:料液比1∶15、酶用量3.5%、酶处理时间2.5h、酶处理温度55℃及pH5.0,在此条件下得率为0.2023%。

Nurr1对细菌脂多糖诱导的小胶质细胞凋亡、自噬和铁死亡的抑制作用

目的研究核受体相关蛋白1(Nurr1)对细菌脂多糖(LPS)诱导的BV2小胶质细胞活性即细胞凋亡、自噬及铁死亡的作用,从而探究Nurr1通过调节小胶质细胞活性发挥神经保护作用的机制。方法培养小鼠BV2小胶质细胞株,将细胞分为Ctrl组、LPS组、C-DIM12组(Nurr1特异性激动剂)、LPS+C-DIM12组。利用Western blot观察Toll样受体4(TLR4)和Caspase-3的表达变化,流式细胞术检测细胞凋亡情况。检测利用Nurr1的特异性激动剂C-DIM12激活Nurr1的表达活性后,自噬蛋白LC3Ⅱ和铁死亡标志物谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)的表达变化及脂质过氧化物产物丙二醛(MAD)的水平。结果LPS刺激BV2细胞后,TLR4和Caspase-3的表达升高(P均<0.05)。C-DIM12激活Nurr1后,TLR4和Caspase-3的表达下降。流式细胞实验结果也显示,Nurr1的激活抑制了细胞凋亡。C-DIM12激活Nurr1后,自噬蛋白LC3Ⅱ的表达相对于LPS组下降,铁死亡蛋白GPX4升高,而MDA显著下降(P均<0.05)。结论Nurr1可通过抑制LPS诱导的小胶质细胞的凋亡、自噬和铁死亡发挥神经保护作用。Nurr1可能是治疗中枢神经系统疾病的潜在靶点。