基于线上线下混合式教学的“三全”评价体系在组织学与胚胎学教学中的探索

目的:研究全过程、全覆盖和全方位的“三全”评价体系在组织学与胚胎学教学中的应用效果。方法:选取2018级和2019级临床医学专业学生为研究对象,从问卷调查、翻转课堂等方面了解“三全”评价体系的实施效果。结果:“三全”评价体系提高学生自主学习能力、批判性思维能力等。结论:“三全”评价体系有助于提高组织学与胚胎学的教学质量。

达明饮所含主要有效成分对糖尿病视网膜病变治疗的作用机制

糖尿病视网膜病变(DR)是糖尿病最严重并发症之一,严重损害患者视网膜微血管状态及视力情况。达明饮为治疗DR的经验方,在前期临床及实验研究方面具有充分的研究支持,但在其所含主要有效成分方面,尚缺乏对其作用机制的具体阐述。依据前期网络药理学研究,围绕达明饮中有效中药成分:槲皮素、山柰酚、黄芩素、木犀草素、薯蓣皂素、β-谷甾醇,论证达明饮中主要中药单体是通过降低机体血糖、抗凋亡、抗氧化、抗炎、保护视神经、减少新生血管形成、改善眼底供氧等作用机制,起到改善DR非增殖性及增殖性病理变化的作用。深度阐明达明饮中有效成分治疗DR的作用机制,填补理论研究空白,为临床用药及药物制备提供理论指导,有可能通过提高方中有效成分的利用率,以提升全方的疗效,具有十分重要的应用意义。

玉女煎治疗糖尿病肾病的网络药理学研究及实验验证

目的 利用网络药理学技术结合动物实验验证,探讨玉女煎治疗糖尿病肾病可能的作用靶点与作用机制。方法 从基因表达综合数据库(GEO)中获得人糖尿病肾病的差异基因;通过TCMSP、HERB和TCMID数据库搜集玉女煎活性成分及其对应的作用靶点。将获得的差异基因与玉女煎的作用靶点进行交集分析获得共同靶点,并对共同靶点进行蛋白互作(PPI),获取玉女煎作用的核心靶点。构建“玉女煎活性成分-共同靶点”网络,获取玉女煎的关键活性成分。通过KEGG富集分析,获取玉女煎作用的核心基因。将玉女煎中关键的活性成分和核心靶点及核心基因进行分子对接。以自发性2型糖尿病大鼠(GK大鼠)肾脏为研究对象,蛋白印迹检测网络药理学及分子对接预测的信号通路相关蛋白的表达情况。结果 通过GEO基因芯片差异分析,获得了1 434个糖尿病肾病的差异基因。从数据库中筛选了37个玉女煎活性成分,共对应419个靶点。通过交集分析共获得47个共同靶点。PPI互作网络拓扑分析可得核心靶点血管细胞黏附分子1(VCAM1),通过网络分析玉女煎关键活性成分20个。KEGG结果可知玉女煎作用的核心基因为上皮生长因子(EGF)、血管内皮生长因子(VEGFA)和磷脂酰肌醇-4,5-二磷酸肌醇-3-激酶(PI3KCA),为PI3K/Akt/mTOR信号通路上的靶点。分子对接显示玉女煎的关键活性成分薯蓣皂苷元-VEGFA、山柰酚-VCAM1有比较强的结合活性。动物实验结果显示,玉女煎可以上调GK大鼠肾脏组织中PI3KCA和VEGFA蛋白表达(P<0.05,P<0.01),下调EGF蛋白以及自噬相关基因ATG5和Beclin 1蛋白表达(P<0.05,P<0.01)。结论 玉女煎治疗糖尿病肾病的作用机制可能与PI3K/Akt/mTOR信号通路有关。

含人自噬基因hAPG12穿梭载体构建及其在酵母自噬中的作用

目的该研究旨在构建大肠杆菌-酿酒酵母穿梭载体pESC-URA-EGFP-hAPG12,将构建好的载体转化到酵母菌内,以此研究hAPG12在酵母自噬过程中的作用。方法从pEGFP-C2-hAPG12中扩增出EGFP-hAPG12融合基因,鉴定正确后定向亚克隆到大肠杆菌-酿酒酵母穿梭载体pESC-URA中,构建载体pESC-URA-EGFP-hAPG12并将其转化到酵母,荧光显微镜下观察,用自噬诱导剂诱导酵母自噬以观察hAPG12在酵母内的表达定位。结果证实EGFP-hAPG12基因已完全正确亚克隆到pESC-URA中,荧光显微镜观察结果证明EGFP-hAPG12融合蛋白在酵母中成功表达,以诱导培养24h的荧光最强,EGFP-hAPG12定位于酵母的自噬体中。结论成功构建了具有报告基因的重组真核表达载体pESC-URA-EGFP-hAPG12;EGFP-hAPG12融合蛋白在酵母中得到表达,hAPG12在酵母自噬体形成过程中起作用。

hAPG12-EGFP融合基因真核表达载体的构建及其在酵母中的表达

目的本研究旨在构建大肠杆菌-酿酒酵母真核表达载体pESC-URA-EGFP-hAPG12,并将构建好的载体转化到酵母。方法从pEGFP-C2中扩增出增强绿色荧光蛋白EGFP基因,定向亚克隆到真核表达载体pESC-URA;hAPG12插入到EGFP基因氨基末端;构建的载体转化到酵母。结果EGFP和hAPG12基因正确亚克隆到pESC-URA中,EGFP-hAPG12融合蛋白在酵母中表达。结论构建了具有报告基因及hAPG12的重组真核表达载体pESC-URA-EGFP-hAPG12。

人自噬基因hAPG_(12)的克隆及其重组真核表达载体的构建

目的:探讨克隆人自噬基因h APG12 ,构建重组真核表达载体p EGFP- C2 -h APG12 ,为进一步研究h APG12 的功能奠定基础。方法:从正常人外周血单个核细胞中提取总RNA,采用两步法RT- PCR,首先把RNA逆转录为c DNA,而后通过一对h APG12 的特异性引物扩增出目的基因,PCR产物与测序载体p UC18连接后转化到大肠杆菌DH5 α,而后对单菌落进行菌落PCR、酶切和测序鉴定。将测序正确的h APG12 亚克隆入真核表达载体p EGFP-C2 ,该重组载体转化到大肠杆菌DH5 α后进行菌落PCR和酶切鉴定。结果:测序结果表明从正常人外周血单个核细胞中所获得的h APG12 c DNAs含有2 2 5个碱基,与Genbank( BC0 1 1 0 33)序列完全一致。构建的重组真核表达载体经鉴定证实h APG12 基因已完全正确亚克隆到p EGFP- C2 。结论:成功克隆了人自噬基因h APG12 并构建了具有报告基因-增强绿色荧光蛋白( EGFP)基因的重组真核表达载体p EGFP- C2 - h APG12 ,为以后研究h APG12

玉女煎对GK大鼠胰腺及肾脏自噬基因LC3表达的影响

目的观察玉女煎治疗自发性2型糖尿病大鼠(GK大鼠)后,胰腺及肾脏自噬基因LC3表达的变化。方法 GK大鼠分为模型对照组和玉女煎组,同品系的Wistar大鼠为正常对照组,玉女煎组用玉女煎灌胃,2个对照组用生理盐水灌胃,每日1次,连续4周。取胰腺和肾脏,用免疫组化方法检测胰腺及肾脏自噬基因LC3的表达。结果玉女煎组胰岛及肾脏自噬基因LC3的表达与GK对照组相比显著降低,与Wistar对照组比较没有显著差异。结论自噬参与了2型糖尿病的病理生理过程,玉女煎可降低胰岛及肾脏自噬基因LC3的表达。

《组织学与胚胎学》教学内容与教学方法探讨

目的:探讨适合于36学时《组织学与胚胎学》教与学的教学内容与教学方法。方法:采用启发式、情景式、问题式和自学式教学方法相结合,全部使用多媒体;在教学内容上做到重点突出,并结合学科进展;学生在学完后对实验课和理论课课堂教学进行评估,结果:大多数学生对教学是满意的;学生期末总评成绩符合正态分布,不及格率比上一年显著减少。结论:对教学内容和教学方法的改进可使组织学与胚胎学教学达到预期的结果。

玉女煎对GK大鼠胰岛自噬基因Beclin表达的影响

目的探讨滋阴清热的玉女煎治疗自发性2型糖尿病GK大鼠胰岛自噬基因Beclin表达的变化。方法 GK大鼠分为模型对照组和观察组,同品系的Wistar大鼠作正常对照组;观察组用玉女煎灌胃,另2个对照组用生理盐水灌胃,每天1次,连续4周。取胰腺,用免疫组化方法检测胰岛自噬基因Beclin的表达;电子显微镜观察胰岛β细胞自噬的形态学变化。结果玉女煎组胰岛自噬基因Beclin的表达和GK对照组相比显著降低,而和Wistar大鼠正常对照组之间没有显著差异;电镜下可见对照组GK大鼠胰岛β细胞内有较多的自噬体。结论自噬参与了2型糖尿病的病理生理过程,玉女煎可降低胰岛β细胞自噬基因Beclin的表达。

甘露糖及其相关分子对小鼠精子与透明带结合的影响

为探讨甘露糖及其受体在小鼠精子 -透明带结合中的作用 ,小鼠附睾尾精子经 M1 6工作液获能培养 2 h后 ,分别用 DMA(甘露糖基化的牛血清白蛋白 )、D-甘露糖处理1 5 min,然后与未作处理的带透明带卵子共培养 3 0 min;另 2组卵子分别用甘露糖苷酶、Con A(植物凝集素 )处理 1 5 min后分别与未作处理的获能精子共培养 3 0 min。卵子固定 ,在相差显微镜下计数各组卵子的精子结合数。结果表明 :DMA、D-甘露糖、甘露糖苷酶、Con A对精子和透明带结合有抑制作用。

自噬在大鼠坐骨神经横切后施万细胞去分化中的作用

目的探讨坐骨神经横切后施万细胞去分化的机制。方法建立大鼠坐骨神经损伤模型,实验组隔天腹腔注射自噬抑制剂Ly294002,对照组注射Ly294002的溶剂,于横切后4、7、10 d取坐骨神经近侧端,用免疫组化方法检测施万细胞特异蛋白S100的表达,在电子显微镜下观察施万细胞的形态学变化。结果横切后4 d实验组S100的表达与对照组相比较有显著性差异;S100在幼稚的施万细胞表达很少,随着施万细胞的进一步成熟表达逐渐增多;电子显微镜下观察到施万细胞内有显著的自噬现象。结论自噬在施万细胞清除髓鞘碎片、受损的细胞器和胞质,从而使细胞在重返幼稚状态(去分化)中起重要作用。

受体介导内吞和自噬同凋亡的关系

目的观察刀豆素A(ConA)与小鼠腹腔巨噬细胞表面ConA受体结合、内吞、转运及巨噬细胞自噬、凋亡的形态学变化,以探讨受体介导内吞与自噬体形成和细胞凋亡之间的关系。方法用辣根过氧化物酶(HRP)标记ConA(ConA-HRP)与小鼠腹腔巨噬细胞共孵育,不同时间取出部分巨噬细胞,制备电镜标本,观察。结果透射电镜观察表明:ConA的内吞属于受体介导内吞;形成的内吞体有泡状、管状及双层膜的线状等形式;双层膜的线状结构包裹部分胞质和细胞器,形成自噬体;自噬体与溶酶体融合,而后巨噬细胞凋亡。结论受体介导内吞和自噬同凋亡之间存在一定的关系。

人自噬基因hATG12转染对酿酒酵母自噬过程的作用

目的探讨人自噬基因ATG12(hATG12)在酵母自噬过程中的作用。方法转化重组质粒pESC-URA-EGFP-hATG12(实验组)或pESC-URA-EGFP(对照组)的酵母用不同方法诱导自噬后,以荧光显微镜观察绿色荧光蛋白(EGFP)和含hAtg12的融合蛋白(EGFP-hATG12)在酵母中的表达与定位;以透射电镜观察前自噬体结构、自噬体和自噬小体的分布及结构特点。结果2组酵母细胞质内均见荧光,液泡内未见荧光,实验组荧光呈小点状分布;电镜下见自噬体由双层膜囊结构延伸而来,该双层膜囊结构靠近细胞膜。液泡内自噬小体由单层膜包裹。结论hATG12参与酵母自噬体最初的形成过程,定位于自噬体外膜上,在自噬体形成后脱离自噬体。自噬体膜最初可能来源于细胞膜。

人自噬基因hATG12对酵母增殖、存活和自噬的影响

目的:探讨hATG12对酵母增殖、存活和自噬的影响。方法:测定3组酵母YPH500(分别转化pESC-URA、pESC-URA-EGFP和pESC-URA-EGFP-hATG12)的D600以检测其增殖情况;用Phloxine B染色,检测酵母存活率;测定碱性磷酸酶的活性以检测酵母自噬活性。结果:转化pESC-URA-EGFP和pESC-URA-EGFP-hATG12的酵母生长较慢,而转化空载体pESC-URA的酵母生长较快;转化pESC-URA-EGFP-hATG12酵母存活率与其他两组相比显著提高,并且碱性磷酸酶活性也显著性提高。结论:hATG12提高酵母自噬活性从而在营养缺乏时提高酵母的存活率,但对酵母的增殖没有影响。

甘露糖受体在小鼠精子中的表达及其在受精中的作用

为研究小鼠精子甘露糖受体的表达及其对受精的影响,采用FITC-DMA作为探针,对精子甘露糖受体(MR)进行定位,获能精子分别用DMA、D-甘露糖处理后和卵子共培养;或卵子分别用甘露糖苷酶、ConA处理后与获能精子共培养,在相差显微镜下计数各组卵子的精子结合数。结果显示小鼠精子头部呈现2种荧光标记:①整个精子头部有荧光标记;②赤道后区有荧光标记。DMA、D-甘露糖、甘露糖苷酶、ConA对精子-透明带结合有显著抑制作用,而对精子-卵膜结合没有影响。说明甘露糖受体在精子-透明带相互作用中具有调节作用。

类似人类老年糖尿病大鼠模型胰腺形态学变化

目的采用D-半乳糖加高脂高糖乳剂及链脲佐菌素(STZ)构建类似老年人糖尿病的大鼠动物模型,观察其胰腺形态学变化。方法选用健康Wistar雌性大鼠,20只灌胃生理盐水为正常对照组;20只采用腹腔注射D-半乳糖40d为衰老模型组;另25只则采用腹腔注射D-半乳糖40d并灌胃高脂高糖乳剂30d后腹腔注射STZ(体重≤200g按30mg/kg,体重>200g者按体表面积进行计算),制备衰老糖尿病模型大鼠,筛选空腹血糖≥11.1mmol/L者为成模鼠,上述各组大鼠再继续灌胃生理盐水10d后,各组随机取10个样本以免疫组化、光镜和电镜分别观察大鼠胰岛诱导型一氧化氮合酶(iNOS)表达、胰腺细胞凋亡、胰岛形态及胰岛细胞和腺泡细胞超微结构变化。结果衰老模型组大鼠胰岛iNOS表达量和胰腺细胞凋亡数较正常对照组增加,衰老糖尿病模型组胰岛iNOS表达量和胰腺细胞凋亡数剧增达3倍以上。HE染色显示,衰老模型组胰岛数量、面积仅为正常的50%～70%,衰老糖尿病模型组胰岛数量、面积仅为正常的20%～30%,且岛内中心部细胞(β细胞)消失尤为显著。电镜观察显示,衰老糖尿病模型组大鼠胰腺细胞明显脱颗粒,呈现膜性结构皱缩,核染色质固缩、碎裂等细胞凋亡征象。结论采用腹腔注射D-半乳糖加高脂高糖乳剂及腹腔注射STZ,胰腺形态组织学证实大鼠在衰老模型基础上胰岛β、D细胞数量进一步下降可引发糖尿病。

夏天无对坐骨神经损伤小鼠损伤区微环境的影响

目的研究夏天无Corydalis decumbens(Thunb.)Pers.对坐骨神经损伤小鼠损伤区微环境的影响。方法 30只小鼠随机均分为模型组、夏天无组、假手术组,Masson染色检测损伤区胶原纤维、炎性细胞、神经纤维分布,免疫荧光染色检测层黏连蛋白(LN)、施万细胞标记物S-100、小G蛋白Rac1表达及轴突再生情况,HE染色检测神经功能恢复情况。结果与模型组比较,夏天无组胶原纤维、炎性细胞减少,神经纤维有序,LN、Rac1、S-100表达,再生轴突数量,腓肠肌纤维横截面积和腓肠肌质量显著增加(P<0.05)。结论夏天无可通过减少胶原纤维生成和炎症细胞浸润,增加LN、Rac1、S-100表达,改善坐骨神经损伤小鼠损伤区微环境来促进轴突再生和神经功能恢复。

石斛合剂等降糖中药方对衰老糖尿病大鼠胰腺PCNA、NF-κBp65的影响

目的：比较石斛合剂等降糖中药方对衰老糖尿病模型大鼠胰岛细胞增殖凋亡相关因子PCNA、NF-κBp65的影响,以遴选出保护胰岛细胞功能、防治老年糖尿病的方药。方法：采用Wistar雌性大鼠制备衰老DM模型大鼠,随机分为：衰老对照组、衰老DM模型组、衰老DM石斛合剂组、衰老DM生脉散组,并给予药物治疗4周后,检测血清FBG、GSP等浓度;免疫组化法检测胰腺组织中PCNA和NF-κBp65的表达。结果：与衰老DM模型组相比：石斛合剂组大鼠FBG与GSP显著降低（P〈0.05~0.01）,生脉散组亦降低;且治疗组之间差异有统计学意义（P〈0.01）;石斛合剂组胰腺PCNA表达非常显著（P〈0.01）,生脉散组表达亦增加（P〈0.05）,2个治疗组之间比较差异有统计学意义（P〈0.01）;但治疗组该2项指标均未达到衰老对照组水平。各组胰岛内NF-κBp65表达由多到少顺序依次如下：石斛合剂组〉衰老DM模型组〉生脉散组〉衰老对照组。结论：与生脉散相比,石斛合剂能够更明显地改善衰老DM大鼠血糖;二者均能促使DM大鼠胰腺组织PCNA表达,提示其可促使胰腺细胞增殖,改善被破坏的内环境稳态,呈现石斛合剂〉生脉散的趋势。各组胰岛内NF-κBp65表达由多到少顺序依次如下：石斛合剂组〉衰老DM模型组〉生脉散组〉衰老对照组。推测：患DM后,机体产生应激反应,石斛合剂可以促使NF-κB参与应激反应,调动了机体潜力;生脉散则减弱NF-κB参与应激反应。在防治老年糖尿病方面,石斛合剂较生脉散更具优势。

人发角蛋白丝束修复大鼠坐骨神经损伤的实验研究

目的: 观察人发角蛋白(HHK)丝束桥接体诱导坐骨神经再生过程中形态学变化。方法: 制备坐骨神经损伤SD大鼠动物模型,分别植入HHK或HHK+胶原屏障膜,术后2d、2、3、6、9、12周行组织学观察。结果: 术后2d到2周,断端的施万细胞去分化,沿着HHK束表面纵向分裂增殖。术后3周HHK开始降解,施万细胞大量增生。HHK周围有很多巨噬细胞和多核巨细胞,并出现轴突和大量微血管。术后6周,HHK丝周围可见大量新生的神经纤维。术后9周,HHK降解显著,有明显的神经外膜和束膜。术后12周,HHK完全降解,其部位被新的神经纤维取代。HHK丝束+胶原膜屏障膜组与HHK丝束组没有明显区别。结论: HHK具有良好的桥接作用,坐骨神经沿着HHK再生时在其外周就能由微血管和结缔组织形成一屏障膜,无需外加屏障膜。