支气管肺发育不良小鼠肺组织FOXP3^(+)调节性T细胞(Treg)数量减少且向RORγt^(+)FOXP3^(+)Treg转换

目的 探讨调节性T淋巴细胞(Treg)表型转换在支气管肺发育不良(BPD)小鼠肺组织中的作用。方法 C57BL/6新生小鼠随机分成空气组及高氧组,每组10只,高氧组建立新生小鼠高氧暴露的BPD动物模型。在小鼠生后7 d和14 d,每组各处死5只小鼠,取出新鲜肺组织。HE染色观察肺组织病理变化,Western blot法检测肺表面活性蛋白C(SP-C)表达水平;流式细胞术检测肺组织中叉头盒P3(FOXP3)^(+)Treg及维甲酸相关孤核受体γt(RORγt)^(+)FOXP3^(+)Treg占CD4^(+)淋巴细胞百分比,ELISA检测肺组织中白细胞介素17A(IL-17A)、 IL-6的含量。采用Spearman相关分析法分析FOXP3^(+)Treg与SP-C相对表达量的相关性以及RORγt^(+)FOXP3^(+)Treg与IL-17A、 IL-6含量的相关性。结果 与同时间点空气组相比,高氧组肺泡结构简单化,放射状肺泡计数与SP-C相对表达水平均明显下降,高氧组FOXP3^(+)Treg占比减少,RORγt^(+)FOXP3^(+)Treg占比增多,肺组织IL-17A、 IL-6含量明显升高。FOXP3^(+)Treg与SP-C相对表达水平呈正相关,RORγt^(+)FOXP3^(+)Treg与IL-17A、 IL-6含量呈正相关。结论 BPD小鼠肺组织FOXP3^(+)Treg数量减少并向RORγt^(+)FOXP3^(+)Treg转换,可能参与高氧所致肺损伤。

Foxp3在小鼠肺发育中的动态表达及意义

目的:通过分析叉头样转录因子3(forkhead box protein 3,Foxp3)在小鼠肺发育过程中的表达及其与肺发育相关标志物之间的关系,探讨Foxp3在肺发育中的可能作用。方法:根据小鼠肺发育的进程,选取胎鼠及新生鼠分为6组,分别于孕17.5 d及出生后1、4、7、14、21 d留取肺组织,HE染色观察肺组织形态,免疫组织化学染色检测CD31含量并观察肺微血管密度。qRT-PCR检测Foxp3及肺表面活性蛋白C(surfactant protein C,SP-C)、血管内皮生长因子A(vascular endothelial growth factor A,VEGF-A)、血管生成素-1(angiopoietin 1,Ang-1)mRNA表达,蛋白质印迹法检测Foxp3及SP-C、VEGF-A、Ang-1蛋白表达。结果:肺组织内Foxp3 mRNA在孕17.5 d小管期表达最高,后呈现不断减少趋势。SP-C mRNA在小鼠出生后1 d表达最高,随后逐渐减弱,直至肺泡化晚期。VEGF-A、Ang-1 mRNA在孕17.5 d表达最高,之后呈现不断减少趋势,最终趋于稳定。Foxp3蛋白在小管期已有表达,且在小管期及囊泡期表达最高,其后逐渐趋于平稳,VEGF-A及Ang-1在小管期及囊泡期表达亦最高,后逐渐减少;SP-C表达于出生后1 d达到最高,随后逐渐减少,并于肺泡化中晚期趋于平稳。相关性分析显示,Foxp3与SP-C、VEGF-A及Ang-1存在相关性(r分别为0.661、0.630和0.738)。结论:Foxp3在胎肺期及出生后早期呈现动态表达,Foxp3在小管期及囊泡早中期的高表达与SP-C、VEGF-A及Ang-1呈正相关,提示Foxp3可能促进肺泡上皮细胞及肺血管内皮细胞的增殖,参与肺发育过程。

IRF4通过调控FOXP3影响支气管肺发育不良模型小鼠肺血管内皮细胞增殖

目的:通过分析干扰素调节因子4(interferon regulatory factor 4,IRF4)和叉头框蛋白P3(forkhead box P3,FOXP3)的相互作用及其与肺血管内皮细胞(pulmonary vascular endothelial cells,PVECs)增殖的关系,探讨IRF4在支气管肺发育不良(bronchopulmonary dysplasia,BPD)模型小鼠肺发育中的作用。方法:利用85%高氧暴露建立C57BL/6小鼠BPD模型,以空气暴露为正常对照,将小鼠分为常氧7 d(normoxia for 7 d,N7)组、高氧7 d(hyperoxia for 7 d,H7)组、常氧14 d(normoxia for 14 d,N14)组和高氧14 d(hyperoxia for 14 d,H14)组,每组6只。分别在空气或高氧暴露7 d和14 d取肺组织,苏木素-伊红染色观察肺组织病理情况;免疫组化染色检测PVECs增殖标志物血小板内皮细胞黏附分子1(platelet endothelial cell adhesion molecule-1,PECAM-1/CD31)的表达;Western blot检测血管内皮生长因子A(vascular endothelial growth factor A,VEGFA)、血管生成素1(angiopoietin-1,Ang-1)、FOXP3和IRF4蛋白的表达水平;免疫共沉淀检测IRF4和FOXP3蛋白的相互作用。结果:与同时间点常氧组相比,高氧组小鼠肺组织CD31阳性细胞平均光密度和肺血管密度均显著降低(P<0.01);高氧组小鼠肺组织VEGFA、Ang-1和FOXP3蛋白表达水平均显著降低,IRF4蛋白表达水平显著升高(P<0.01);免疫共沉淀提示IRF4和FOXP3存在相互作用,且高氧组较常氧组相互作用显著增强(P<0.01);IRF4和FOXP3蛋白表达呈显著负相关(R=-0.932,P<0.01),FOXP3蛋白表达与CD31呈显著正相关(R=0.865,P<0.01)。结论:在高氧诱导的BPD模型小鼠中,IRF4可能通过抑制FOXP3蛋白表达影响PVECs的增殖和肺血管发育。

肺微血管内皮细胞与支气管肺发育不良的研究进展

支气管肺发育不良(BPD)是一种常见于早产儿的慢性肺部疾病,其主要疾病特点包括肺泡化障碍和肺微血管发育不良等。肺微血管内皮细胞(PMVECs)具有参与构成内皮屏障、促进血管生成、分泌等重要的生理功能,在肺微血管的发育过程中起重要作用。在肺发育进程中,肺微血管可积极促进肺泡生长,并有助于维持新生儿整个产后生命中的肺泡结构。重症BPD患者易伴发肺动脉高压等相关心血管疾病,主要由PMVECs发生内皮-间充质转化所致,这也是早产儿预后不良的重要原因。