人颗粒溶素活性肽与小鼠白细胞介素-12共表达质粒的构建与真核表达

目的构建能分泌表达相对分子质量为9000的人颗粒溶素活性肽与小鼠白细胞介素-12(mIL-12)的真核共表达质粒,并检测其蛋白表达。方法以含有颗粒溶素cDNA序列的质粒为模板,通过PCR扩增获得相对分子质量为9000的颗粒溶素活性肽基因片段后,定向插入真核表达载体pBudCE4.1中,获得重组表达质粒pBudCE4.1-S9K,经双酶切及插入片段序列测定对质粒进行鉴定。同时,将小鼠IL-12亚克隆入pBudCE4.1另一多克隆位点,构建真核共表达质粒pBudCE4.1-S9K/mIL-12。采用RT-PCR、免疫细胞化学与Dot-ELISA法,检测颗粒溶素活性肽在RAW264.7细胞的瞬时表达与分泌。ELISA检测mIL-12的表达。结果酶切、PCR及测序鉴定证实,颗粒溶素活性肽基因插入片段正确;RT-PCR和免疫细胞化学检测表明其可以在细胞中瞬时表达;Dot-ELISA检测表明颗粒溶素可分泌到细胞外。ELISA检测细胞培养上清有mIL-12表达。结论已成功构建真核表达质粒pBudCE4.1-S9K/mIL-12,并能体外表达,为下一步利用颗粒溶素与mIL-12基因治疗肿瘤奠定了基础。

颗粒溶素活性肽与增强型绿色荧光蛋白融合基因真核表达质粒的构建及其在小鼠黑色素瘤细胞中的表达

目的构建人颗粒溶素(GLS)活性肽(9ku-GLS)与增强型绿色荧光蛋白(EGFP)融合基因的真核表达载体,并检测其在小鼠黑色素瘤细胞B16中的表达。方法经PCR扩增9ku-GLS基因,插入质粒pBudCE4.1中,经酶切及测序鉴定正确后,亚克隆至质粒pEGFP-C1中,将融合基因真核表达质粒pEGFP-C1/S9K转染B16细胞,采用荧光显微镜及RT-PCR法检测融合蛋白的表达。结果融合基因真核表达质粒pEGFP-C1/S9K经双酶切鉴定证明构建正确,转染B16细胞24h后,荧光显微镜下可观察到绿色荧光,且经RT-PCR可扩增出267bp的目的基因片段。结论已成功构建9ku-GLS与EGFP融合基因的真核表达质粒,且在B16细胞中表达了融合蛋白。

9 ku颗粒溶素真核表达质粒的构建与分泌表达

目的:构建能分泌表达人9 ku颗粒溶素(granu ly-sin)的真核质粒,为下一步利用颗粒溶素基因治疗肿瘤奠定基础.方法:以含有颗粒溶素cDNA序列的质粒为模板,通过聚合酶链反应(PCR)扩增获得含分泌肽编码基因的9 ku的颗粒溶素基因片段后,定向插入真核表达载体pBudCE4.1中,获得重组表达质粒pBudCE4.1-S9K,通过PCR,双酶切及插入片段序列测定对重组质粒进行鉴定;采用RT-PCR,免疫细胞化学与Dot-ELISA法检测pBudCE4.1-S9K在RAW264.7细胞的瞬时表达与分泌.结果:成功扩增出含分泌肽编码基因的9 ku的颗粒溶素基因片段;经酶切,PCR及测序鉴定证明得到读码框正确的重组质粒;转染细胞证实可分泌表达9ku颗粒溶素.结论:成功构建能分泌表达9 ku颗粒溶素真核表达质粒pBudCE4.1-S9K.

9ku颗粒溶素活性肽重组减毒沙门菌的构建与表达

目的构建人9ku颗粒溶素(granulysin)的重组减毒沙门菌,并在真核细胞中表达,为下一步利用颗粒溶素基因治疗肿瘤奠定基础。方法以含有颗粒溶素cDNA序列的质粒为模板,通过聚合酶链反应(PCR)扩增获得含分泌肽编码基因的9ku的颗粒溶素基因片段后,定向插入真核表达载体pBudCE4.1中,获得重组表达质粒pBudCE4.1-S9K,通过PCR、双酶切及插入片段序列测定对重组质粒进行鉴定;采用RT-PCR,免疫细胞化学与Dot-ELISA法检测pBudCE4.1-S9K在RAW264.7细胞的瞬时表达与分泌;重组质粒电转化减毒沙门菌后,将重组菌感染巨噬细胞,以RT-PCR检查颗粒溶素的表达。结果成功扩增出含分泌肽编码基因的9ku的颗粒溶素基因片段;经酶切,PCR及测序鉴定证明得到读码框正确的重组质粒;转染细胞证实可分泌表达9ku颗粒溶素;重组减毒沙门菌感染细胞后,检测到颗粒溶素的表达。结论成功构建含9ku颗粒溶素活性肽基因的重组减毒沙门菌,该菌能成功递呈携带基因在感染细胞内表达。

梗阻性黄疸高胆红素血症与急性肾功能衰竭关系探讨

急性肾功能衰竭（acute renal failure,ARF）是梗阻性黄疸（obstructive jaundice，OJ）术后常见并发症，且死亡率极高．因此对急性肾功能衰竭重点在于预防。导致术后急性肾功能损害的因素很多，本研究回顾性分析梗阻性黄疸患者的胆红素因素对急性肾功能损害的影响。为临床工作中预防和减少发生类似并发症提供参考依据。

小农户与现代农业的有机衔接是中国农业现代化道路的必然选择

农业现代化是现代化强国目标得以实现的基石,是"粮食安全"的温饱中国到"安全粮食"的健康中国的转换器,是广大农民增收和就业的主要依托,是乡村振兴战略的重要支柱,是国家治理体系和治理能力现代化的基础保障。中国特色的农业现代化道路是不同于发达国家的农业现代化道路的,而是必须走以小农经营为主的,满足小农生产与生活需要的发展道路,必须加大农业科技投入,完善市场体系,实现小农经济与现代市场的有机衔接。

门脉高压症断流术后门静脉系统血栓形成的诊治体会

目的探讨门静脉高压症断流术后门静脉系统血栓形成(portal vein thrombosis,PVT)的临床诊断及治疗。方法回顾性分析16例经彩色Doppler发现的门静脉高压症断流术后PVT的临床资料。结果 PVT好发于术后11～18天,临床表现为不明原因发热6例,顽固性腹水4例,上消化道再出血3例,另有3例无任何临床症状。有12例患者术后2周内血小板明显增高,9例患者D-二聚体检测阳性。经治疗后复查见门静脉血栓完全消失9例,部分消失3例,4例血栓无明显改善。结论门静脉高压症断流术后PVT临床表现无特异性。手术操作规范化、术后动态监测血小板数量、D-二聚体、早期彩色Doppler检查及早期行抗凝、溶栓疗法是防治术后门静脉系统血栓形成的有效方法。

青年教师如何上好留学生微生物学实验课的探索

经济全球化和综合国力的提高，使我国同其它国家间的文化交流日益普遍，大量的国外学生进入我国高校。作为高校教学主力军的青年教师，如何上好留学生教学课，是教师面临的一个崭新的研究课题。本文就青年教师在医学微生物学实验教学过程中，如何针对留学生的特点、选择合适教材、作好教学准备、保证教学实施和课后辅导与反馈进行思考，并就青年教师如何上好实验课进行初步探索。

应用ERCP治疗高龄胆总管结石的临床研究

目的:探讨应用ERCP治疗高龄胆总管结石的临床疗效。方法:2007年3月至2012年1月我院应用ERCP治疗75岁以上胆总管结石患者的临床资料70例,设为观察组,收集其病因、治疗效果及相关并发症发生情况,与同期行传统手术(对照组)治疗高龄患者的临床资料进行对比性分析。结果:观察者总体有效率为94.3%(66/70),对照组为95.7%(67/70);观察者较对照组手术时间明显缩短(P<0.05)、并发症率明显降低(P<0.05),住院时间明显缩短(P<0.05)。结论:应用ERCP治疗高龄胆总管结石效果确切,同时可降低并发症发生率、缩短住院时间,高龄不应作为ERCP治疗胆总管结石的禁忌。

网络在医学微生物学教学中的促进作用

网络的飞速发展使传统的教学模式发生了巨大的变化，目前已渗透到医学微生物教与学的各个环节，在教学中发挥着重要的促进作用。网络不但使教学管理高效快捷，使教师知识结构更新加速，而且促进学生自主学习，更突破时空限制，促进师生间的及时交流，促进微生物学的教学改革。

卡介苗的改造策略

卡介苗预防成人结核病的效果并不理想 ,其失效原因主要与缺乏结核杆菌重要抗原、不能有效刺激 CD8+ T细胞、环境分枝杆菌等多种因素的影响有关。改造应从重组卡介苗、促进 T细胞亚群的应答及卡介苗的营养缺陷株、突变株等多方面考虑来提高卡介苗的保护效力 ,更好地防止结核病的发生。

GLS／IL-12对黑色素瘤细胞B16的增殖及凋亡的影响

目的:体外检测人GLS活性肽和小鼠IL-12基因的共表达产物对黑色素瘤细胞B16的增殖及凋亡的影响。方法:用脂质体将含GLS活性肽和小鼠IL-12基因的共表达质粒转染黑色素瘤细胞B16并用RT-PCR检测其表达,再用MTT试验、Hoechst33258染色、AO/EB染色和AnnexinⅤ—FITC流式细胞分析检测基因表达产物对B16细胞的增殖抑制与促凋亡作用。结果:GLS活性肽和小鼠IL-12基因能在B16细胞中表达,MTT法观察到表达产物对B16有明显的细胞增殖抑制作用,经Hoechst33258染色、AO/EB染色和流式细胞分析观察到细胞核浓缩、深染、细胞膜改变等凋亡特征,凋亡指数明显高于对照组。结论:GLS活性肽和小鼠IL-12基因的共表达产物对黑色素瘤细胞B16具有明显的增殖抑制作用及促凋亡作用。

马铃薯大垄密植高产栽培技术

黑龙江省是马铃薯种植的大省．马铃薯比较容易栽培管理，是农民致富的一个有效途径。但对大多数农民来说，种植马铃薯的技术比较落后，致使马铃薯产量不高，质量不好，经济效益十分有限，根据多年经验总结出马铃薯增产增收关键技术。

留学生医学微生物学的教学体会

随着经济的全球化和国家综合国力的提高．我国与国外的文化教育交流也不断深入。大量的海外学子进入我国高等医学院校，使留学生教育成为高等院校的一项重要的教学任务，这给改革发展中的高校提出了更高的要求。医学微生物学是医学留学生的一门重要基础必修课．与多门临床课程的学习密切相关。如何上好这门课，为临床学习打下坚实基础，是微生物学教师面临的重要问题。

液氦温区分离型脉管制冷机性能影响因素

研制了一台高效率液氦温区分离型二级脉管制冷机,采用单压缩机和单旋转阀驱动该二级脉管制冷机.在实际输入功率为6.7 kW时,第二级最低温度达到了2.5 K,在4.2 K有590 mW制冷量;同时第一级在36.7 K有15 W制冷量.制冷机在4.2和40 K 2个温度上都能提供大制冷量,可以用于替代G-M制冷机冷却超导磁体、低温泵和电子器件等.通过实验,研究并分析了不同压缩机和旋转阀时序对分离型二级脉管制冷机性能的影响.

低于13K的单级脉管制冷机性能研究

回热器是脉管制冷机的关键部件之一,其效率对脉管制冷机性能有很大影响。铅丸是常见的蓄冷材料,通常用于回热器的低温端。本文测试和分析了不同品质的国产铅丸和进口铅丸对单级G-M型脉管制冷机性能的影响。采用额定功率为6．0 kW的压缩机驱动,使用进口铅丸脉管制冷机最低制冷温度达12．9 K,这是当前单级脉管制冷机达到的最低制冷温度;40 K时的最大制冷量为57．4 W。使用国产铅丸最低制冷温度为13．6 K,40 K时的最大制冷量为55．9 W。本文对低温制冷机蓄冷材料选择具有一定的参考价值。

多级脉管制冷机的最新研究进展

介绍了最近几年来多级脉管制冷机 ,特别是液氦温区脉管制冷机研究与应用的进展情况 ,讨论了目前限制多级脉管制冷机应用的主要问题 ,同时指出了多级脉管制冷机的主要发展方向。

不同方法建立C57BL/6J小鼠抑郁症模型的探讨

目的用不同方法建立C57BL/6J小鼠抑郁症模型,为探讨GalR蛋白对小鼠抑郁症的治疗作用打下基础。方法 C57BL/6J小鼠经体重、敞箱实验及反抗抓获实验初筛后,随机分为4组:Ⅰ.CUMS组,Ⅱ.CUMS+CORT组,Ⅲ.CORT组,Ⅳ.正常对照组。每天记录小鼠体重及摄食量。28d后进行液体消耗及强迫游泳实验测试。结果小鼠抑郁模型在第28d建立成功。Ⅱ组小鼠短期内体重迅速下降并死亡。与Ⅰ组小鼠相比,Ⅲ组小鼠液体消耗和强迫游泳实验指标改变更明显。结论成功建立C57BL/6J小鼠抑郁症模型。CUMS和CORT模型结合,小鼠不能耐受,短期内死亡。单独CORT模型造模效果要优于CUMS模型。在后续试验中,将用CORT法建立C57BL/6J小鼠抑郁症模型。