8种抗菌药物体外抗解脲支原体与人型支原体的活性研究

目的指导临床合理用药。方法采用肉汤稀释方法，测定８种抗菌药物对２０株解脲支原体（ＵＵ）、２０株人型支原体（ＭＨ）体外抗菌作用效果。结果交沙霉素有较强的抗ＵＵ与ＭＨ作用。其ＭＩＣ５０与ＭＩＣ９０为０．２５～２ｍｇ／Ｌ和０．１２５～０．５ｍｇ／Ｌ。强力霉素抗ＵＵ的ＭＩＣ５０与ＭＩＣ９０为４ｍｇ／Ｌ与３２ｍｇ／Ｌ，抗ＭＨ为２ｍｇ／Ｌ和４ｍｇ／Ｌ。氧氟沙星抗ＵＵ的ＭＩＣ５０与ＭＩＣ９０为８ｍｇ／Ｌ与１６ｍｇ／Ｌ，抗ＭＨ为２ｍｇ／Ｌ和４ｍｇ／Ｌ。ＭＨ对罗红霉素与阿奇红霉素有高度抵抗作用，ＭＩＣ５０与ＭＩＣ９０为６４ｍｇ／Ｌ与１２８ｍｇ／Ｌ。５株ＵＵ、４株ＭＨ对四环素高度耐药，其ＭＩＣ５０与ＭＩＣ９０为６４ｍｇ／Ｌ与１２８ｍｇ／Ｌ和３２ｍｇ／Ｌ与６４ｍｇ／Ｌ，对强力霉素与美满霉素也呈高度抵抗，ＭＩＣ９０为１６～３２ｍｇ／Ｌ，但对氧氟沙星较为敏感，ＭＩＣ９０为４ｍｇ／Ｌ。结论本研究提示ＭＨ的耐药性检测，对指导临床治疗具有重要意义。

衡阳地区不孕不育者支原体感染现状

目的 了解湖南省衡阳地区不孕不育者解脲脲原体 (Uu)、人型支原体 (Mh)感染现状。 方法 设计Uu、Mh特异性引物 ,用PCR扩增 13 7例不孕不育者标本 ,统计分析Uu、Mh感染情况。 结果 在 13 7例不孕不育者中 ,Uu阳性 5 1例 ( 3 7.2 % ) ,Mh阳性 3 6例 ( 2 6.3 % )。 结论 不孕不育者的Uu与Mh感染率明显高于正常生育者 ( χ2 =8.70 ,P <0 .0 5 )。

hDaxx融合蛋白高表达降低活化巨噬细胞分泌IL-1β

目的 研究GFP -hDaxx融合蛋白 (GFP -hDaxx)即时高表达对激活巨噬细胞分泌IL - 1 β的影响。方法 将GFP -hDaxx真核细胞表达载体pEGFP/hDaxx转染巨噬细胞 ,利用Westernblotting检测表达产物。通过hDaxx在巨噬细胞内的即时高表达 ,测定LPS刺激巨噬细胞后 0 .5h、4h、1 2h时 ,活化巨噬细胞分泌细胞因子IL - 1 β的含量。结果 pEGFP/hDaxx在巨噬细胞内成功表达GFP -hDaxx融合蛋白。GFP -hDaxx在巨噬细胞内的高表达 ,使LPS诱导活化的巨噬细胞分泌IL - 1 β量明显降低 (在4h及 1 2h时与对照组差异有显著性 ,P <0 .0 0 1 )。结论 hDaxx即时高表达降低活化的巨噬细胞分泌IL - 1 β。

人型支原体药物敏感性与耐药性基因检测研究

目的 了解人型支原体 (Mh)耐四环素株耐药性状 ,指导临床用药。方法 对临床感染标本中分离的 51株Mh分别进行了药物敏感试验和tetM基因检测。结果 51株Mh有 31株 (6 0 .78% )带有tetM基因 ,其中 2 5株 (四环素MIC≥ 32mg/L)对美满霉素 (XG16 .4 5mg/L)、环丙沙星 (XG8mg/L)、强力霉素 (XG5.58mg/L)和氧氟沙星 (XG4 .35mg/L)交叉耐药。51株Mh对罗红霉素与阿奇霉素呈高度抵抗 ,其MIC90 均为12 8mg/L ,但对交沙霉素敏感 (MIC90 0 .2 5mg/L)。结论 提示耐四环素的Mh株对美满霉素、环丙沙星、强力霉素和氧氟沙星呈现交叉耐药 。

过氧化氢－戊二醛消毒液直接灭活解脲脲原体的结果观察

过氧化氢－戊二醛消毒液直接灭活解脲脲原体的结果观察余敏君，陈敏时，吴移谋（衡阳医学院微生物教研室衡阳，４２１００１）解脲脲原体（Ｕｒｅａｐｌａｓｍａｕｒｅａｌｙｔｉｃｕｍ，Ｕｕ）是人类泌尿生殖道的常见病原体，与许多泌尿生殖道感染症、围产期感染症、某些...

介绍一种支原体菌落的制片法

支原体是一类无细胞壁结构,极小的微生物,其大小相当于较大的病毒。过去由于找不到适当的培养基不能培养,一直认为是长病毒的一种。于1962年由Chanock等在无细胞的培养物中,培养出胸膜肺炎微生物。1967年正式命名为支原体。支原体在自然界中分布很广,不仅能从人、猩猩、牛、猪、羊、狗、鸡。

人型枝原体对喹诺酮类药物的耐药性机理研究

为了解人型枝原体 (Mh)对喹诺酮类药物的耐药机理 ,指导临床合理用药 ,采用肉汤稀释法测定了临床标本中 10 0株 Mh对 9种喹诺酮类药物的敏感性。用 PCR对交叉耐药 Mh菌株旋转酶 A亚单位(gyr A)的基因进行扩增 ,将扩增的 DNA片段测序。结果 ,Y98- 37、Y98- 2 3、Y98- 31 、Y98- 32 显示出强大的抗 Mh作用 ,其 MIC5 0 为 0 .0 6 2 5 mg/L,MIC90 为 0 .12 5～ 0 .5 mg/L;其次为 SPL X和 L VL X,MIC5 0 为 0 .2 5、1mg/L,MIC90 为0 .2 5、2 mg/L,OFL X与 CPL X呈现耐药 ,MIC5 0 为 4mg/L,MIC90 为 8mg/L。NAL高度耐药 ,其 MIC5 0 与 MIC90为 12 8mg/L。选出 3株对 9种喹诺酮类药物呈交叉耐药 Mh株 ,PCR扩增 gyr A后得到一大小为 35 0 bp的目的 DNA,测序后将结果与标准敏感株 Mh PG2 1的 gyr A核苷酸序列进行比较 ,3株耐药株中均有 113位碱基C→ T的改变 ,使其编码的 83位氨基酸由丝氨酸变为亮氨酸。提示 Mh gyr A的 113位 C→ T突变 。

研究型教学模式下医学微生物学实验教学改革

为推进高校研究型医学微生物学实验教学的发展,对高校医学微生物学实验教学中存在的问题进行了分析,提出了一系列研究型医学微生物学实验教学改革措施。实践证明,研究型医学微生物学实验教学可极大提高学生的学习兴趣,激发学生主动探索的热情,培养学生的创新意识、创新思维和创新能力,为培养高素质的应用型医学人才打下基础。

淋球菌nspA和大肠杆菌ltB融合基因的构建、表达及鉴定

通过基因工程的方法构建奈瑟氏淋球菌表面蛋白A(Neisseria gonorrhoeae surface protein A,nspA)和大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位(B subunit of Escherichia coli heat-labile enterotoxin,ltB)融合基因的原核表达载体,对其进行表达与鉴定,为后续融合蛋白LTB-NspA的生物活性分析及其作为淋球菌粘膜免疫疫苗的研究奠定基础。用PCR法从标准菌株分别扩增出nspA、ltB基因,用重组PCR法通过接头将ltB与nspA融合,将其插入pEG30a中,转入BL21中表达。经测序、SDS-PAGE和Western blot分析,证实成功构建了ltB-nspA融合基因的原核表达载体,并在BL21中表达。ltB-nspA融合基因的成功表达,为进一步研究其生物活性及淋球菌粘膜免疫疫苗的研究奠定了一定基础。

NLRP3炎症小体及其下游分子在幽门螺杆菌感染小鼠的表达

目的研究NLRP3炎症小体信号通路相关分子在幽门螺杆菌(H.pylori)感染C57BL/6小鼠胃组织和血清中的表达情况,初步探讨NLRP3炎症小体信号通路在H.pylori致病中的作用。方法将C57BL/6小鼠分为H.pylori感染组和PBS对照组,于感染后不同时间点处死小鼠,RT-PCR检测小鼠胃组织中NLRP3炎症小体和下游信号通路分子mRNA表达,Western blot法检测小鼠胃组织中caspase-1蛋白表达,ELISA测定小鼠血清中IL-1β、IL-18和IL-33含量。结果与对照组相比,H.pylori感染组小鼠胃黏膜均呈慢性炎症改变,且随时间延长,炎症程度逐渐加重。NLRP3炎症小体信号通路相关分子mRNA及caspase-1蛋白表达水平显著升高,血清中IL-1β、IL-18、IL-33的含量均显著增高。结论 H.pyori感染可以激活NLRP3炎症小体信号通路。

梅毒螺旋体外膜蛋白Gpd基因的克隆、表达及其免疫活性研究

利用PCR技术从Tp Nichols株基因组模板中扩增梅毒螺旋体(Treponema pallidum,Tp)外膜蛋白Gpd基因,定向克隆构建真核表达重组体pcDNA3.1(+)-Gpd,免疫印迹和免疫组化技术检测pcDNA3.1(+)-Gpd在HeLa细胞中的表达;同时将真核表达重组体pcDNA3.1(+)-Gpd免疫新西兰兔,检测其在兔体内的免疫应答效果。免疫印迹和免疫组化鉴定均显示重组体在HeLa细胞中能有效表达一个41kD的Gpd融合蛋白。新西兰兔接种核酸疫苗后,能产生特异性抗体,第3次免疫后2周抗体最高滴度可达1∶1024,免疫后兔脾细胞受Gpd蛋白刺激有明显增殖反应。所诱导的抗体水平和脾淋巴细胞增殖情况均显著高于空质粒对照组和空白对照组(p<0.05)。Tp真核表达重组体pcDNA3.1(+)-Gpd的成功构建及能刺激新西兰兔产生较强特异的免疫应答,为Gpd蛋白生物学功能及梅毒DNA疫苗的深入研究奠定了一定的实验基础。

溶脲脲原体对大环内酯类药物的敏感性分析

目的:检测溶脲脲原体(Uu)对14环(红霉素和罗红霉素)、15环(阿奇霉素)和16环(交沙霉素和吉他霉素)大环内酯类药物的敏感性,为临床合理用药提供参考依据。方法:采用微量肉汤稀释法检测了5种大环内酯类药物对203株Uu的最低抑菌浓度(MIC)。结果:203株Uu对红霉素、罗红霉素、阿奇霉素、交沙霉素和吉他霉素的耐药率分别为:11.8％、7.4％、6.9％、3.9％和3.5％。在5种药物中,交沙霉素和吉他霉素抗Uu活性最强,MIC_(50)分别为0.125mg/L和0.5 mg/L,MIC_(90)分别为0.5mg/L和1mg/L,其次为阿奇霉素,MIC_(50)和MIC_(90)分别为2mg/L和4mg/L,红霉素和罗红霉素抗Uu活性较弱,MIC_(50)均为4mg/L,MIC_(90)均为8mg/L。结论:对Uu对大环内酯类药物存在不同程度的耐药;16环大环内酯类药物交沙霉素和吉他霉素抗Uu活性强于14环和15环大环内酯类药物。

肺炎嗜衣原体CPAF重组蛋白致小鼠肺组织炎症及对炎症细胞因子的影响

目的：研究肺炎嗜衣原体（Chlamydophila pneumoniae,Cpn）蛋白酶样活性因子（CPAF）的181400aa基因（CPAFm）的重组蛋白在BALB/c小鼠体内引起的肺部炎症改变及对炎症细胞因子TNF-α和IL-6的水平的影响,为进一步探索CPAF在Cpn感染中的致病作用提供实验依据。方法：将纯化的CPAFm重组蛋白于鼻内或尾静脉注射BALB/c小鼠,HE染色观察肺组织病理形态学改变,计小鼠外周血与支气管肺泡灌洗液（Bronchoalveolar lavage fluids,BALF）中白细胞总数,ELISA方法检测血清和BALF中的TNFα-和IL-6的水平。结果：实验组BALB/c小鼠的肺组织出现中性粒细胞、淋巴细胞等炎症细胞浸润,对照组与正常组BALB/c小鼠肺组织未见明显病理改变。鼻内滴入重组蛋白实验组BALB/c小鼠BALF中白细胞总数明显高于GST对照组（P〈0.05）、PBS对照组（P〈0.05）和正常组（P〈0.01）;鼻内滴入和尾静脉注射重组蛋白实验组BALF中炎症因子IL-6、TNF-α的水平明显高于GST、PBS对照组与正常组（均P〈0.01）;鼻内滴入重组蛋白实验组外周血中炎症因子IL-6和TNF-α水平显著高于GST、PBS对照组和正常组（P〈0.05）;尾静脉注射重组蛋白实验组外周血中炎症因子IL-6的水平明显高于相应的对照组（均P〈0.01）。结论：CPAFm重组蛋白有致病性,能引起BALB/c小鼠肺组织的炎症损伤和炎症因子TNF-α、IL-6的水平的升高,肺损伤与BALB/c小鼠体内炎症细胞增多和炎症因子TNF-α、IL-6的水平的升高相关。

解脲脲原体脂质相关膜蛋白通过激活核因子κB调控诱导性一氧化氮合酶在小鼠巨噬细胞中的表达

为探讨解脲脲原体(Uu)的脂质相关膜蛋白(LAMPs)诱导小鼠巨噬细胞表达诱导性一氧化氮合酶(iNOS)的分子机制,从解脲脲原体提取的脂质相关膜蛋白,刺激小鼠巨噬细胞,以RT_PCR、Western blot等方法分析iNOS的表达及NO的产生;用细胞免疫化学、间接免疫荧光及Western blot等方法检测核因子κB(NF_κB)的激活,另外检测了NF_κB的特异性抑制剂二硫代氨基甲酸吡咯烷(PDTC)和蛋白酶抑制剂放线菌酮(CHX)对iNOS的表达及NF_κB激活的影响。结果表明,解脲脲原体的LAMPs通过激活NF_κB诱导小鼠巨噬细胞表达iNOS的mRNA和蛋白,且能以时间和剂量依赖方式刺激小鼠巨噬细胞产生NO,NF_κB的抑制剂PDTC或蛋白酶抑制剂放线菌酮(CHX),可抑制NF_κB的激活及iNOS的表达。由于解脲脲原体的脂质相关膜蛋白通过激活NF_κB诱导小鼠巨噬细胞表达iNOS和产生NO,因而可能是一个重要的致病因素。

幽门螺杆菌VacA N端片段通过线粒体途径诱导GES-1细胞凋亡

目的:本研究初步探讨幽门螺杆菌(H.pylori)空泡毒素单一毒力决定簇对GES-1胃黏膜上皮细胞凋亡的影响,为进一步研究H.pylori的致病机制奠定基础。方法:将本课题组已构建的pDsRed-Monomer-C1/VacA N端真核表达载体转染至GES-1细胞中,Western blot鉴定VacA蛋白在细胞中的表达;电子显微镜和中性红摄取试验检测GES-1细胞的空泡样变;Hoechst33342染色、Annexin V-FITC凋亡检测试剂盒以及电镜观察细胞凋亡情况,同时采用分光光度法检测细胞Caspase-9、Caspase-3的活化程度,Rho123检测细胞跨膜电位的变化,ELISA法检测细胞色素C的释放。结果:重组质粒pDsRed-Monomer-C1/VacA转染GES-1细胞24小时后,电镜下可明显观察到空泡样变及核固缩、染色质边聚等凋亡特征,重组质粒组部分细胞发生空泡样变;Hoechst 33342染色后镜下可见明显的核染色质浓缩,Annexin V-FITC凋亡检测试剂盒检测发现重组质粒组细胞凋亡率明显高于对照组(P<0.05);Caspase-9和Caspase-3活化程度呈时间依赖性增加,分别在12小时和24小时达到峰值;Rho123染色发现线粒体跨膜电位明显降低;重组质粒转染组释放细胞色素C的浓度呈时间依赖性正相关,与空质粒组及对照组相比差异显著(P<0.05)。结论:VacA N端片段可诱导GES-1细胞凋亡及空泡样变,VacA蛋白可激活Caspase-9和Caspase-3,且可能主要通过线粒体途径诱导GES-1细胞凋亡。

肺炎支原体荚膜多糖与DC-SIGN结合并促进IL-10的分泌

目的研究肺炎支原体(Mp)荚膜多糖(CPS)与树突状细胞(DC)特异性细胞间黏附分子-3-结合非整合素分子(DC-SIGN,CD209)的相互作用及其对未成熟DC(iDC)分泌IL-10和IL-12的影响。方法提取并纯化Mp的CPS和脂质相关膜蛋白(LAMPs),用间接免疫荧光检测CPS与DC-SIGN受体的作用;ELISA法检测CPS和LAMPs作用后iDC所分泌的IL-10,IL-12水平。结果间接免疫荧光可见Mp CPS可结合到DC表面,且DC-SIGN的特异性封闭抗体可阻断CPS与DC的结合;ELISA检测发现CPS与LAMPs共孵育可促进DC分泌IL-10(P<0.05),而IL-12的表达水平刺激前后无统计学的差异。结论 Mp的CPS可识别并结合DC的DC-SIGN受体,并促进未成熟DC分泌IL-10。

以学科优势促进实验教学示范中心建设

论述了如何从科研、人才、成果转化及仪器设备条件等方面发掘和利用学科优势,探讨了将学科发展优势与示范实验室建设有机地结合起来,全方位地促进实验教学示范中心建设的可能性。

不同培养时间与培养基pH值对体外实验中喹诺酮类抗解脲脲支原体药物敏感性的影响

目的研究不同培养时间及培养基pH值对左氧氟沙星、司帕沙星及加替沙星在体外抗解脲脲支原体（Uu）MIC的影响。方法用微量液体倍比稀释法,测定了35株临床Uu对3种药物在pH值6.0、6.5、7.0的培养基中,分别培养24、36、48、60 h时的MIC并统计分析。结果60 h的MIC与48 h相同,pH值〉6.5时,Uu对加替沙星100.0%敏感;司帕沙星耐药率较高;在不同pH值时,培养时间由24 h延长到36 h及48 h,左氧氟沙星、司帕沙星及加替沙星的MIC分别可增加1-32、1-8及1-16倍（各组P〈0.05）,耐药率也逐渐升高;pH值由6.0升高到6.5及7.0时,在不同培养时间,司帕沙星及加替沙星的MIC均可降低1-8倍（各组P〈0.05）,耐药率均逐渐降低;而左氧氟沙星的MIC50、MIC90及耐药率均升高。结论体外实验中,司帕沙星及加替沙星的MIC随培养时间延长而升高,随培养基pH值升高而降低;左氧氟沙星的MIC随培养时间延长及pH值升高而升高;加替沙星有良好的抗Uu活性;培养48 h可以作为测定MIC的终点时间。

尿素支原体所致生殖泌尿道疾病的实验研究

本文从447例NGU(中段尿)、慢性前列腺炎(前列腺液)和男性不育者(精液)中分离UU,其中NGU199例,68例为阳性(34.67%)、慢性前列腺炎159例,33例为阳性(20.7%),男性不育夫妇89例,54例为阳性(60.6%)。在光镜下,UU菌落呈“油煎蛋”状。扫描电镜下,菌体呈卵圆形或球形,直径0.3～0.5μm。临床治疗观察到,大多数阳性患者经四环素、红霉素或强力霉素7～14天治疗后,症状消失,培养转阴、作者认为UU感染可能是NGU,慢性前列膜炎、男性不育的原因之一,应列为常规实验室检查。

解脲支原体药敏与tetM基因检测及生物群的研究

目的 了解泌尿生殖道支原体的耐药性机理 ,指导临床治疗。方法 采用微量肉汤稀释法测定 2 81株UU对 5种抗菌药物的最低抑菌浓度 (MIC) ,用PCR法扩增tetM基因并酶切 ,用UUMB抗原基因引物对tetM基因阳性UU株进行生物群的研究。结果 2 81株UU中 82株对四环素MIC为 16～ 2 5 6μg/ml ,3 9株为 8μg/ml ,7株为 4μg/ml,15 3 株MIC <4μg/ml;12 1株MIC≥ 8μg/ml及 2株MIC =4μg/ml者均出现 3 77bptetM基因阳性带 ;阳性检测率为 43 .77%。15 8株UUMIC≤ 4μg/ml未见类似扩增带。扩增产物用HpaⅡ酶切和电泳分析 ,均产生 2 79bp和 98bp两个特异性片段。2 81株UU用群特异性PCR分析 ,生物群 1有 166株 ,生物群 2有 115株 ;12 3株tetM阳性UU株 ,属生物群 1、2者分别有 5 4株和 69株 ,分别占 3 2 .5 3 % ( 5 4/166)和 60 .0 % ( 69/115 ) ( χ2 =7.94,P <0 .0 5 )。结论 ①PCR技术检测泌尿生殖道感染患者UU耐药性tetM基因具有特异、敏感、快速等优点 ;②载有tetM基因的UU株可能成为四环素耐药株 ,应进行监测及随访 ;③我国衡阳地区UU四环素耐药株以生物群 2占优势。