高硼暴露通过诱导细胞焦亡加剧鸡肝细胞损伤

旨在探索硼暴露诱导鸡肝细胞损伤的作用机制。试验选取30只AA肉鸡随机分为对照组(control group,CG)、低硼组(low boron group,LBG)和高硼组(high boron group,HBG),在基础日粮中分别添加不同剂量硼进行饲喂:基础日粮(硼0 mg·kg^(-1)),低硼日粮(硼120 mg·kg^(-1))、高硼日粮(硼240 mg·kg^(-1)),处理7及14 d后采集肝组织。使用ICP-MS测定肝组织中的硼含量,全自动血生化分析仪检测ASL及ALT水平,HE染色观察肝组织病理变化,透射电镜观察肝细胞超微结构变化,免疫组化和免疫荧光检测肝细胞焦亡相关蛋白NLRP3及IL-1β定位表达情况,RT-qPCR和Western blot检测NLRP3、Casapse-1、IL-1β、IL-18和GSDMD的mRNA和蛋白表达水平。结果显示,蓄积于肝组织中的硼含量随着硼暴露时间和剂量的增加而增加。此外,14 d-低硼组(14 d-LBG)和高硼组(14 d-HBG)的肝组织结构明显破坏,并且细胞焦亡水平随硼剂量的增加而加剧;与同时间的CG相比,14 d-LBG中NLRP3、Caspase-1、IL-18的mRNA表达水平显著上升(P<0.05),14 d-HBG的NLRP3、Caspase-1、IL-1β、IL-18及GSDMD的mRNA和蛋白表达水平显著上升(P<0.05)。高硼暴露可通过诱导细胞焦亡进而造成鸡肝细胞损伤。

以培养从业人员为导向的实验动物学课程改革与实践——以华南农业大学为例

为提高实验动物学教学质量,增加课程趣味性和实用性,本文以华南农业大学为例,结合农业院校的特点,系统分析了实验动物学课程改革的重要性,提出了以培养从业人员为导向的实验动物学课程改革方向,归纳了具体的改革内容、方式、评价手段及实施效果,以期培养具备理论知识和实操能力的学生,建立良好的教育环境,在为农业院校科研做好支撑的同时,为学生提供新的就业方向。

硫氧还蛋白对过氧化氢诱导的BRL-3A细胞损伤的保护作用

本试验利用不同浓度过氧化氢(H2O2)作用于BRL-3A大鼠肝细胞,用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测BRL-3A细胞存活数量以确定H2O2最适损伤浓度。试验随机分为正常对照组、H2O2处理组和硫氧还蛋白(2.5和5μmol/L)预处理组,用脂质过氧化物丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)试剂盒测定细胞的氧化应激变化。结果显示1000μmol/L H2O2对BRL-3A细胞增殖具有显著的抑制作用(P<0.05);2.5μmol/L硫氧还蛋白对H2O2损伤的BRL-3A细胞具有保护作用,能显著抑制H2O2诱导的BRL-3A细胞损伤产生MDA(P<0.05),并显著增加细胞SOD及CAT的活性(P<0.05),从而保护肝细胞。本试验结果表明,硫氧还蛋白对H2O2诱导BRL-3A细胞的氧化应激损伤具有保护作用。

伪狂犬病病毒Ra株对不同细胞增殖特性及致病性研究

本研究以伪狂犬病病毒(pseudorabies virus,PRV)Ra株体外感染不同的细胞系为模型,研究PRV Ra株最适细胞系。试验采用ST细胞、PK-15细胞、Vero细胞、F81细胞、DF1细胞、MDCK细胞和CEF细胞7种细胞作为该毒株的接种对象,观察毒株在这几种细胞上病变特点、细胞病变时间及病毒增殖规律等并进行比较。观察结果发现,受试的各种细胞在PRV感染期间均能表现明显的细胞病变,但不同细胞在病变时间上存在较大差异,其中PK-15和ST细胞在感染后24h内出现明显细胞病变,时间最早。TCID50测定病毒增殖力结果表明,ST细胞在病毒增殖传代中毒力保持最好,与原毒株毒力相当,为106.9 TCID50/0.1mL。本试验结果表明,ST细胞是较适合于PRV Ra株体外研究的细胞系。

肉鸡Trx1和Trx2蛋白的表达纯化及其抗氧化应激效果评价

试验旨在对肉鸡Trx1和Trx2蛋白进行表达和纯化,并评价其抗氧化特性。将原核表达载体GgTrx1-pET28a(+)和GgTrx2-nsp-pET28a(+)转入大肠埃希菌中进行蛋白表达;应用镍柱亲和层析的方法对该融合蛋白进行纯化;采用胰岛素还原法对重组肉鸡Trx1和Trx2蛋白(GgTrx1和GgTrx2)进行活性鉴定;通过细胞体外试验分析比较GgTrx1和GgTrx2对大鼠肝细胞BRL-3A氧化应激保护作用的影响。结果显示,试验成功获得两种重组蛋白:GgTrx1和GgTrx2,最适诱导条件分别为37℃、0.4mmol/L IPTG诱导4h和37℃、1.0mmol/L IPTG诱导4h;纯化的重组蛋白GgTrx1和GgTrx2纯度可达到90%,浓度分别达到4.0和5.0 mg/mL。重组蛋白GgTrx1和GgTrx2均具有较高的还原胰岛素二硫键的能力,并呈现出浓度效应。体外细胞试验发现,重组蛋白GgTrx1和GgTrx2均能显著降低过氧化氢诱导的BRL-3A膜脂过氧化,保护抗氧化酶SOD和CAT活性,且重组蛋白GgTrx2效果更明显。本试验结果表明,重组蛋白GgTrx1和GgTrx2均具有生物学活性和良好的抗氧化应激特性,且线粒体型Trx2为临床治疗氧化应激性疾病提供了更多可能。

一例犬股骨骨折的手术治疗

通过询问病史、术前检查、X线检查等方法对1只3月龄阿拉斯加幼犬股骨骨折进行诊断,并采用髓内针结合钢丝内固定手术进行治疗,术后经输液、抗感染等综合治疗调养,犬只病情得到明显改善,1个月后基本可以正常行走。

不同硒浓度日粮对小鼠肝脏和睾丸组织中部分硒蛋白mRNA水平的影响

选取80只7周龄雄性BALB/c小鼠,随机分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组,每组20只,使Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组基础日粮中硒含量达到0.045、0.1、0.4和0.8mg/kg。结果表明:①Ⅰ组能显著降低小鼠肝脏中硒的沉积量(P<0.05);②Ⅰ组谷胱甘肽过氧化物酶1(glutathione peroxidase 1,GPx1)的mRNA相对表达量明显低于Ⅱ、Ⅲ组(P<0.05),且Ⅱ、Ⅲ组在肝脏中差异显著(P<0.05),在睾丸中差异不显著(P>0.05);③Ⅰ、Ⅲ组肝脏中谷胱甘肽过氧化物酶4(glutathione peroxidase 4,GPx4)的mRNA相对表达量差异不显著(P>0.05),但均显著低于Ⅱ组(P<0.05),而各试验组间在睾丸中差异均不显著(P>0.05);④随着日粮中硒添加量的增加,肝脏和睾丸中硫氧还蛋白还原酶2(thioredoxin reductase 2,TrxR2)的mRNA相对表达量显著提高(P<0.05)。因此,在肝脏和睾丸组织中,饲喂低硒饲料能显著降低硒的沉积量和GPx1、GPx4、TrxR2的mRNA相对表达量(P<0.05);而饲喂高硒饲料能显著降低GPx1的mRNA相对表达量(P<0.05),同时显著增加TrxR2的mRNA相对表达量(P<0.05)。提示,硒对GPx1、GPx4和TrxR2mRNA相对表达量的调节存在组织差异性。

日粮硒对小鼠肾脏硒沉积及抗氧化酶基因表达的影响

本试验旨在研究日粮硒对小鼠肾脏硒沉积及抗氧化酶基因表达的影响。试验Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组分别以0.045、0.1、0.4和0.8mg/kg含硒量的试验日粮连续饲喂小鼠8周。结果显示,肾脏硒沉积水平随日粮中硒含量增加而升高,Ⅰ组显著低于其他组(P<0.05),饲喂到第56天,Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组组间差异均不显著(P>0.05);Ⅰ组的硫氧还蛋白还原酶2(TrxR2)mRNA表达量显著低于Ⅱ、Ⅲ组(P<0.05),Ⅱ组高于Ⅲ组,且差异显著(P<0.05);Ⅰ组的超氧化物歧化酶1(SOD1)和超氧化物歧化酶2(SOD2)mRNA表达量均显著低于Ⅱ、Ⅲ组(P<0.05),Ⅱ、Ⅲ组间SOD1表达量差异不显著(P>0.05),SOD2表达量差异显著(P<0.05),且Ⅱ组高于Ⅲ组;Ⅰ、Ⅱ组的过氧化氢酶(CAT)mRNA表达量显著高于Ⅲ组(P<0.05),但Ⅰ、Ⅱ组间差异不显著(P>0.05)。结果表明,补硒可提高肾脏组织硒沉积水平,且随着饲喂时间增加,肾脏硒沉积会在高硒添加组中趋于饱和;缺硒和补硒过量都会降低肾脏TrxR2、SOD1、SOD2和CAT mRNA的表达水平。

猪繁殖与呼吸综合征病毒N蛋白多克隆抗体的制备及其中和活性研究

为了制备猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)N蛋白鼠源多克隆抗体并验证其中和活性,试验采用RT-PCR方法扩增了PRRSV的ORF7基因,将其克隆至原核表达载体pET-32a中,并在大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中表达重组N蛋白,纯化重组N蛋白制成弗氏佐剂抗原,采用皮下多点注射法免疫Balb/c小鼠,经3次免疫后获得多克隆抗体,用间接ELISA法检测抗体效价,以血清中和试验和间接免疫荧光法验证其中和活性。结果表明:试验成功扩增了大小为390 bp的ORF7基因片段,经双酶切和序列测定,重组表达质粒pET-32a-N构建成功,重组N蛋白分子质量约为28.0 ku,制备的多克隆抗体效价较高,重组N蛋白多克隆抗体按照1∶2、1∶4和1∶8比例稀释时,荧光数量与不加多克隆抗体时比较无明显区别。说明在大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中成功表达了PRRSV重组N蛋白,制备的鼠源多克隆抗体能够与重组N蛋白发生特异性反应,但没有抗PRRSV中和活性。

动物离心机控制系统仿真设计

针对当前动物离心机的局限性,对动物离心机控制系统进行了设计,用于航空航天医学实验。对动物离心机设备主轴控制系统进行设计研究,利用空间矢量调制搭建出动物离心机主轴电机位置、速度、转矩控制的三闭环主轴控制系统,在MATLAB/Simulink环境下,建立对主轴控制系统的仿真模型。仿真结果表明采用交流伺服控制系统能够实现动物离心机主轴的良好控制,并通过运行调试验证了主轴控制系统设计的可行性,且具有一定应用价值。

利巴韦林对猫细小病毒感染诱导F81猫肾细胞中凋亡相关基因表达的影响

试验将F81猫肾细胞随机分为对照组、药物组(猫细小病毒(FPV)+利巴韦林)、病毒组(FPV感染),采用实时荧光定量PCR的方法,检测Bcl-2、Bcl-xl、Bax和Caspase 3等凋亡相关基因的相对表达量。结果显示,与对照组相比,病毒组细胞凋亡增加,抗凋亡基因Bcl-2mRNA表达受到抑制,Bax mRNA和Caspase 3mRNA的相对表达量均有不同程度的上调。药物组细胞的抗凋亡基因Bcl-2和Bcl-xl的表达水平显著高于病毒组(P<0.05),且总体呈上调状态,但72h时Bcl-xl表达量减少;而药物组的促凋亡基因Bax和Caspase 3的表达量显著低于病毒组(P<0.05),48h前,Bax的表达量呈递减状态,72h时检测结果显示药物组Bax表达量相比对照组显著上调(P<0.05),但仍显著低于病毒组(P<0.05);与对照组相比,病毒组和药物组Caspase 3的表达量在72h时显著上调(P<0.05)。综上所述,利巴韦林可在基因水平通过上调抗凋亡基因Bcl-2和Bcl-xl和下调促凋亡基因Bax和Caspase 3的表达来抑制FPV感染诱导的F81猫肾细胞凋亡发生。

利巴韦林对感染猫细小病毒细胞的治疗作用研究

为了研究利巴韦林对感染猫细小病毒(FPV)细胞的作用,试验采用F81猫肾细胞,在猫细小病毒感染后不同时间点收集细胞,应用MTT法检测细胞的增殖活性;利用利巴韦林毒性试验,摸索出药物对细胞的安全浓度;利用不同浓度利巴韦林处理已攻毒细胞,MTT法检测细胞的增殖活性,酶标法检测细胞氧化损伤情况。结果表明:利巴韦林能明显抑制FPV引起的细胞死亡率,病毒组过氧化氢(H2O2)含量和细胞培养液中乳酸脱氢酶(LDH)活性在各个采样时间点均显著高于对照组,显示细胞氧化损伤严重,致使LDH从细胞内渗出。病毒组细胞内超氧化物歧化酶(SOD)活性和还原型谷胱甘肽(GSH)含量均明显低于对照组,揭示病毒所引起的细胞氧化损伤进一步激发了细胞自体保护性ROS清除机制,最终导致了细胞内SOD活性和GSH含量的下降。利巴韦林药物组LDH活性和H2O2含量都呈现升高趋势,但其增长幅度明显低于病毒组;在各采样时间点,药物组细胞内SOD活性和GSH含量均明显(P<0.05)高于病毒组,低于对照组。说明利巴韦林对感染猫细小病毒细胞具有一定的修复治疗效果。

犬亚硝酸盐中毒模型的建立及诊疗

亚硝酸盐是一类无机化合物的总称,主要指亚硝酸钠。亚硝酸钠呈白色至淡黄色粉末或颗粒状,味微咸,易溶于水,在肉类制品中常作为发色剂使用。动物食入过量的亚硝酸盐后,容易造成组织缺氧,进而导致机体中毒,造成呼吸衰竭致死[2]。目前家畜的亚硝酸盐中毒报道多见于畜禽,尤其是猪最常见.

浅谈狂犬病的流行及现状

近年来随着人们生活水平的提高,许多人开始养起了犬猫等各类小动物作为宠物,在饲养过程中难免会发生抓咬的情况,因此,狂犬病在人们口中不再是专业名词,但是坊间流传的信息大多不太科学,很多时候会造成不必要的恐慌。将狂犬病的流行及现状向群众做一个普及是很有必要的事情。

广州地区犬细小病毒VP2基因的序列分析

犬细小病毒病是一种高度接触性传染病,临床上以急性出血性肠炎和心肌炎为特征。为研究广州地区犬细小病毒病的流行亚型,本试验采集2011—2012年间疑似病犬粪便,进行犬细小病毒(canine parvovirus,CPV)分离鉴定,提取病毒基因组进行VP2基因扩增和序列分析,与GenBank中登录的参考毒株进行比对,结果发现,分离的8株CPV中SCAU-5为CPV-2b亚型,其余为CPV-2a亚型。结果表明,2011—2012年间广州地区的流行毒株以CPV-2a亚型为主。

长期高铜暴露通过影响线粒体自噬和细胞焦亡诱导大鼠肝组织损伤

旨在探索高铜对大鼠肝组织损伤的作用机制。试验选取120只SD大鼠随机分为对照组、高铜I组、高铜Ⅱ组、高铜Ⅲ组和高铜Ⅳ组,分别连续每天按体重灌胃0、20、40、80、160 mg·kg^(-1)铜63 d,采集肝组织。使用ICP-MS测定肝组织铜含量,病理切片观察肝组织病理变化,透射电镜观察线粒体形态和线粒体自噬小体,RT-qPCR和Western blot检测肝组织NLRP3、Caspase-1、GSDMD、IL-1β、IL-18、Pink1、Parkin、LCB3、p62的mRNA和蛋白表达水平。结果显示,随着灌胃铜水平的增加,蓄积在肝组织中的铜含量呈剂量依赖性增加,且长期高水平铜暴露会造成明显的肝组织结构破坏;随着铜暴露水平的增加,线粒体自噬和细胞焦亡水平呈先上升后下降趋势;与对照组相比,高铜Ⅱ组、Ⅲ组中PINK1和LC3II/LC3I的mRNA和蛋白表达水平显著上升(P<0.05),高铜Ⅱ组中p62的mRNA和蛋白表达水平显著降低(P<0.05),高铜Ⅲ组NLRP3、Caspase-1、GSDMD、IL-1β的mRNA和蛋白表达水平显著上升(P<0.05),高铜Ⅳ组表现为下调。高铜长期暴露可通过影响线粒体自噬和细胞焦亡诱导大鼠肝组织损伤。

高铜诱导大鼠心肌细胞线粒体自噬

旨在探讨高铜对大鼠心肌细胞线粒体自噬的影响。将32只8月龄健康大鼠随机分为4组,每组8只,饲喂不同铜含量日粮(对照组:15 mg·kg-1;高铜Ⅰ组:30 mg·kg-1;高铜Ⅱ组:60 mg·kg-1;高铜Ⅲ组:120 mg·kg-1),连续饲喂6个月后采集心。检测心组织铜含量及其病理变化;荧光定量检测线粒体自噬相关基因LC3A、LC3B、Parkin、PINK1、p62的mRNA水平;蛋白印迹检测Parkin、PINK1、LC3B/LC3A的蛋白表达水平;免疫组化和免疫荧光检测LC3B的定位及表达。结果显示,高铜各组大鼠心组织内的铜含量均高于对照组。高铜各组出现心肌纤维排列疏松、无规则的现象。与对照组相比,高铜各组LC3A、LC3B mRNA表达量增加;高铜Ⅱ组、高铜Ⅲ组p62的mRNA表达量极显著降低;高铜各组PINK1 mRNA表达量显著升高,而Parkin mRNA的表达量有上升趋势但不显著。随着日粮中铜含量的增加,PINK1、Parkin、LC3B/LC3A的蛋白的表达量显著上调。LC3B定位于细胞质中,且高铜Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组LC3B表达量均显著增加。试验结果表明,高铜可诱导大鼠心肌细胞线粒体自噬的发生。

酪酸菌对小鼠有害气体排放的影响

目的探讨酪酸菌对小鼠有害气体排放的影响。方法 80只KM小鼠分4组,每组20只,雌雄各半,Ⅰ组为对照组,Ⅱ组、Ⅲ组、Ⅳ组分别连续21 d灌胃酪酸菌500 mg/kg、1 000 mg/kg、1 500 mg/kg,每日测定独立通气笼内氨(NH_3)和硫化氢(H_2S)浓度,试验21 d测定各组小鼠生长性能、小鼠粪便中脲酶活性。结果与对照组相比,Ⅲ组、Ⅳ组小鼠的平均日增重略有提高,但没有统计学差异;灌胃后7 d,Ⅲ组、Ⅳ组笼内NH3含量明显低于Ⅰ组和Ⅱ组(P<0.05),各组均未检测到H_2S。结论酪酸菌可能会影响小鼠的生长性能和氨的排放。

“两岸家庭”的“两岸咖啡”

优雅浪漫的钢琴声，温馨舒适的环境，铁板烧与日本怀石料理特有的。香味……，走进杭州西湖岸旁“两岸咖啡”店内，心情不自觉地就会放松下来，眼前的小桥流水，江南的庭园香榭，让人有种梦幻感觉。

MC38结肠癌小鼠肿瘤浸润免疫细胞的动态变化

目的观察荷瘤小鼠肿瘤浸润免疫细胞在肿瘤发展过程中的动态变化。方法将小鼠结肠癌MC38细胞移植到24只C57BL/6J小鼠皮下,荷瘤后每周一次记录小鼠体质量及肿瘤大小的变化,每周一次采用流式细胞术检测肿瘤浸润免疫细胞水平,包括CD45^(+)细胞、CD3^(+)T细胞、CD8^(+)T细胞、CD4^(+)T细胞、自然杀伤(natural killer,NK)细胞、树突状细胞、巨噬细胞、M1型巨噬细胞、M2型巨噬细胞、髓源抑制细胞(myeloid-derived suppressor cells,MDSC)、单核样髓源抑制细胞(monocytic-MDSC,M-MDSC)、粒样髓源抑制细胞(granulocytic-MDSC,M-MDSC),共检测4周。结果随着小鼠结肠癌肿瘤的增长,CD45^(+)细胞水平总体表现出下降趋势,CD8^(+)T细胞水平稳步下降至不可逆的水平,而CD4^(+)T细胞比例在荷瘤早期迅速增长,单位体积中浸润细胞数增长了近8倍,肿瘤浸润的T细胞几乎为CD4^(+)表型。以NK细胞为代表的非特异性免疫应答水平持续下降,而树突状细胞在肿瘤内持续累积,并通过激活精氨酸酶1(Arginase-1,ARG1)和诱导型一氧化氮合成酶(inducible nitric oxide synthetase,iNOS),进一步加深免疫抑制作用。巨噬细胞浸润水平整体无显著变化,但Ⅰ型巨噬细胞浸润细胞数的下滑速度显著高于Ⅱ型。单位体积肿瘤内MDSC数未出现下降趋势,在肿瘤内持续累积;其中G-MDSC浸润水平呈稳降趋势,M-MDSC浸润水平持续上升,且占比远高于G-MDSC。结论小鼠移植MC38结肠癌细胞后,肿瘤组织内免疫细胞浸润水平整体下降,促肿瘤免疫逐渐占据主导地位,从而促进结肠癌的发展。肿瘤内产生了Th1/Th2漂移现象,特异性和非特异性免疫应答水平均显著降低,浸润的单核细胞和粒细胞主要是Ly6C^(+)表型。肿瘤相关树突状细胞和巨噬细胞发挥了重要的免疫抑制作用,CD4^(+)T细胞和M-MDSC可能是发挥促肿瘤免疫效应的关键点。