中华眼镜蛇毒活性组分体外抑制三维血管生成的实验研究

目的研究中华眼镜蛇毒活性组分的抗血管生成作用。方法采用拟血管生成三维培养法,观察活性组分对体外血管生成的抑制效应。结果活性组分可抑制内皮细胞在培养基质中生成血管网状三维结构的反应,0.6、1.2、2.4μg·ml-1的不同浓度组分抑制程度不同。在0.6μg·ml-1浓度组,培养基质Matrigel中的内皮细胞团只形成局部的、不完整的空间网状结构;在1.2μg·ml-1浓度组,悬浮于凝胶中的细胞团所形成的管芽不能相互连接而形成空间网状结构;在2.4μg·ml-1浓度组,细胞散在悬浮于胶层中大部分不能粘聚,且随培养时间的延长无明显的结构变化。结论中华眼镜蛇毒活性组分具有体外抑制血管生成的生物活性。

精制抗金环蛇毒血清治疗金环蛇咬伤61例

采用国产精制抗金环蛇毒血清静脉滴注治疗金环蛇咬伤６１例（轻型５２例，重型９例）。结果：轻型患者经０．５～１．５天治疗，平均住院０．８２±０．６９天痊愈；重型患者平均住院２．６５±１．５４天（最长住院＜７天），痊愈出院。及早使用抗毒血清既能减轻病情，又可缩短住院时间。说明精制抗金环蛇毒血清是治疗金环蛇咬伤的高效、速效和安全的急救首选药。

眼镜蛇毒M组份对实验性血栓形成的影响

眼镜蛇毒M组份对家兔实验性血栓形成有剂量(或浓度)依赖性的抑制作用,静脉注射0.05～0.2mg/kg使家兔颈动——静脉旁路血栓湿重减轻,维持时间在1小时以上,静脉注射0.3mg/kg时,抑制率为59.19％,M组份亦可使Chandler管中血栓湿重、干重减轻。

中华眼镜蛇毒F组分对血管平滑肌细胞增殖的影响

目的 :研究中华眼镜蛇毒F组分对血管平滑肌细胞增殖的影响。方法 :用体外培养的血管平滑肌细胞 ,观察F组分对 2 0 %小牛血清引起的细胞对氚标胸腺嘧啶核苷酸 (H3 TdR)掺入的影响 ,用蛋白质免疫印迹法 (Westernblotting)测定F组分对 2 0 %小牛血清引起的细胞内原癌基因、核增殖抗原 (Pro liferationcellnuclearantigen ,PCNA)表达的影响。结果 :F组分呈浓度依赖性抑制 2 0 %小牛血清引起的细胞对H3 TdR掺入率和细胞内C myc、PCNA的表达 ,其中 30、10 0mg·L-1给药组与对照组比较有显著差异 (P <0 .0 5 )。结论 :中华眼镜蛇毒F组分通过影响细胞内原癌基因C myc、PCNA的表达 。

抗眼镜蛇毒及抗银环蛇毒血清的蛇伤急救技术

抗蛇毒血清作为蛇伤中毒急救的特效药,在国外应用已超百年。我国大陆的抗蛇毒血清的研制和生产,始于七十年代,至今仍得到国内外的一致公认。抗银环蛇毒血清和抗眼镜蛇毒血清是广州医学院、卫生部上海生物制品研究所等兄弟单位协作取得的科研成果。

青蒿琥酯诱导瘢痕成纤维细胞凋亡的实验研究

目的探讨青蒿琥酯（artesunate，Art）诱导皮肤瘢痕成纤维细胞凋亡的作用及机制。方法取自愿捐献的人耳垂增生性瘢痕，采用组织块贴壁法进行细胞培养。经免疫组织化学染色鉴定后，取第3～5代成纤维细胞，采用含60、120和240mg／LArt培养液各5ml培养作为实验组，仅加入等量的培养液作为对照组。于倒置显微镜及透射电镜观察，采用流式细胞仪观察细胞凋亡及细胞周期。另取第3～5代成纤维细胞，实验组采用30、60和120mg／LArt培养液，对照组仅加入等量的培养液，观察细胞内钙离子的变化。结果原代成纤维细胞呈典型的梭形贴壁生长，免疫组织化学鉴定细胞波形蛋白呈阳性表达；倒置显微镜下观察Art在60～240mg／L浓度范围内抑制成纤维细胞生长且呈剂量及时间依赖性，细胞出现凋亡征象；透射电镜观察，各实验组出现染色质浓缩，沿着核膜排列，甚至核碎裂现象。细胞周期分析显示各实验组与对照组比较，凋亡细胞比例、处于G0～G1、S、G2～M期细胞数差异均有统计学意义（P〈0．05），实验组均出现典型的凋亡峰，且随药物浓度增加，峰值越大。Art在30～120mg／L作用成纤维细胞24h可引起细胞内钙离子浓度持续增加，与对照组比较，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论Art通过作用于成纤维细胞周期诱导细胞凋亡，细胞内钙离子浓度升高可能是其诱导成纤维细胞凋亡的机制之一。

眼镜蛇毒直接溶解因子对人肝癌细胞株H_(7402)产生NO和LPO的影响

目的：研究眼镜蛇毒直接溶解因子（ＤＬＦ）对人肝癌细胞株Ｈ７４０２产生一氧化氮（ＮＯ）和脂质过氧化物（ＬＰＯ）的影响。结果：ＤＬＦ对体外培养的Ｈ７４０２细胞有杀伤作用，ＩＣ５０为２４７ｍｇ·Ｌ－１，ＤＬＦ与Ｈ７４０２细胞的生长抑制率呈量效关系。ＤＬＦ可介导Ｈ７４０２细胞产生大量ＮＯ２，ＮＯ２量与ＤＬＦ的剂量呈量效关系。在一定剂量范围内ＮＯ２量与Ｈ７４０２的生长抑制率呈显著正相关。用５７０型粘附式细胞仪测定单个细胞内ＬＰＯ，发现ＤＬＦ可使Ｈ７４０２细胞内ＬＰＯ产生增加。结论：ＤＬＦ可杀伤Ｈ７４０２细胞，其部分机制可能是通过诱导肿瘤细胞产生ＮＯ和ＬＰＯ。

中华眼镜蛇毒活性组分选择性抑制内皮细胞增殖

目的观察中华眼镜蛇毒活性组分(Ch ina cobra venomactive factor,CCVAF)对内皮细胞增殖的选择性抑制作用。方法实验分对照组和不同浓度的CCVAF组,应用MTT法分析CCVAF对牛肺主动脉内皮细胞(bovine arteria pu lmona-lis vascu lar endothelial cells,BAVEC)、SD大鼠主动脉血管平滑肌细胞(smooth musc le cells,SMC)、人胚肺成纤维细胞HLF以及人支气管上皮细胞HBE生长增殖的影响;并运用直线回归分析统计对比CCVAF在不同时间点对BAVEC的IC50及上述各细胞的24 h IC50。结果CCVAF呈剂量及时间依赖性抑制内皮细胞的增殖:6、12、24、48、72 h其IC50分别为4.955、4.932、2.443、3.048、3.133 mg.L-1,24 h抑制作用最强;观察此时浓度与抑制作用的关系,0.625、1.25、2.5、5、10、20 mg.L-1,抑制率分别是4.41%、30.94%、61.81%、86.17%、96.05%、98.68%,10 mg.L-1抑制率即达高峰,且各浓度组抑制作用与对照组相比差异有显著性(P<0.05)。CCVAF抑制内皮细胞增殖具有一定的选择性,作用24 h后,抑制BAVEC生长的作用明显高于其它3种细胞,对BAVEC、HLF、HBE、SMC的24 h IC50分别为2.443、22.233、35.318、32.810 mg.L-1。结论CCVAF能够选择性抑制内皮细胞增殖,这在抗血管生成及其靶向治疗研究中可能具有重要意义。

中华眼镜蛇毒对荷人鼻咽癌裸鼠血浆MDA和SOD的影响

目的：为了探讨中华眼镜蛇毒（ＮＮＡＶ）对荷人鼻咽癌（ＮＰＣ）裸鼠血浆丙二醛（ＭＤＡ）和超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）活性的影响。方法：采用比色法检测经腹腔注射低、中或高浓度ＮＮＡＶ（１μｇ／ｍｌ、５μｇ／ｍｌ、１０μｇ／ｍｌ）的荷人ＮＰＣ裸鼠血浆ＭＤＡ和ＳＯＤ活性。结果：荷瘤鼠血浆ＭＤＡ（８４２ｎｍｏｌ／ｍｌ）比正常裸鼠（３９２ｎｍｏｌ／ｍｌ）明显升高，而荷瘤鼠血浆总ＳＯＤ（Ｔ－ＳＯＤ）、锰ＳＯＤ（Ｍｎ－ＳＯＤ）和铜锌ＳＯＤ（ＣｕＺｎ－ＳＯＤ）活性（５２１９Ｎｕ／ｍｌ，２０３１Ｎｕ／ｍｌ，３１８８Ｎｕ／ｍｌ）比正常裸鼠（１２５６４Ｎｕ／ｍｌ，７５．１１Ｎｕ／ｍｌ，５０．５３Ｎｕ／ｍｌ）低；低、中和高浓度ＮＮＡＶ均可使荷瘤鼠血浆ＭＤＡ降低或至正常范围（５６２ｎｍｏｌ／ｍｌ，５．１７ｎｍｏｌ／ｍｌ，４．５８ｎｍｏｌ／ｍｌ），并可使荷瘤鼠Ｔ－ＳＯＤ、Ｍｎ－ＳＯＤ和ＣｕＺｎ－ＳＯＤ有不同程度的升高，其中以高浓度组为佳（１０８８８Ｎｕ／ｍｌ，７２２７Ｎｕ／ｍｌ，３６６１Ｎｕ／ｍｌ，）。结论：结果提示ＮＮＡＶ的抑瘤作用可能与其降低荷瘤鼠自由基水平和提高ＳＯＤ活性有关。

小剂量茶碱对支气管哮喘患者外周淋巴细胞PAF受体mRNA表达的影响

目的了解茶碱对支气管哮喘患者血小板活化因子（ＰＡＦ）受体ｍＲＮＡ表达的影响。方法采用逆转录多聚酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）技术检测了支气管哮喘患者及健康成人外周淋巴细胞ＰＡＦ受体ｍＲＮＡ的表达水平，探讨了小剂量茶碱对哮喘患者外周淋巴细胞ＰＡＦ受体ｍＲＮＡ表达的影响。结果（１）被检测的２０例健康成人中只有８例其外周淋巴细胞ＰＡＦ受体的ｃＤＮＡ可被扩增出来，而被检测的２１例哮喘患者均可获得ｃＤＮＡ片断；（２）服用小剂量茶碱１ｗｋ后，哮喘患者ＰＡＦ受体ｍＲＮＡ表达量（以“闪烁计数ｍｉｎ－１”表示，下同）与给药前的表达量相比无明显变化（Ｐ＞０．０５），服用２ｗｋ后，哮喘患者ＰＡＦ受体ｍＲＮＡ表达量由给药前的８６４０８±７４６２减少至６８９２７±５８８６（Ｐ＜０．０５），服用３ｗｋ后减少至５６７２０±４８６６（与给药前比较，Ｐ＜０．０１），接近健康人的表达量４９６８８±５４３８。结论连续服用小剂量茶碱可抑制外周淋巴细胞ＰＡＦ受体ｍＲＮＡ的表达。

卵黄抗体用于蛇毒抗原检测的初步研究

目的在常规ELISA检测中,以卵黄抗体取代哺乳动物来源的IgG类抗体,以探讨卵黄抗体应用于蛇毒检测的可行性.方法以甲醛减毒的眼镜王蛇毒抗原免疫莱航母鸡,制备抗眼镜王蛇毒抗体;采用过碘酸钠法对特异卵黄抗体进行酶标;将卵黄抗体及相应酶标抗体应用于常规ELISA中,对国内常见蛇毒样品抗原(包括眼镜王蛇毒、眼镜蛇毒、金环蛇毒、银环蛇毒、五步蛇毒及广东园斑蝰蛇毒)进行检测,并进行灵敏度、精确度、特异性及交叉反应等分析.结果检测的灵敏度可达32 μg·L-1,并且眼镜王蛇毒抗原浓度在32～750 μg·L-1的范围内,线性关系较好(r=0.963);初步应用表明卵黄抗体对眼镜王蛇毒具有较高的特异性,与蝰蛇科的五步蛇毒、园斑蝰蛇毒无交叉反应,与眼镜蛇科的金环及银环蛇毒仅在高剂量(剂量大于500 μg·L-1)时存在轻度交叉反应,不干扰实验检测,但与眼镜蛇毒之间交叉反应明显,干扰实验检测;应用本方法对低(100 μg·L-1)、中(300 μg·L-1)、高(1 000 μg·L-1)不同浓度的眼镜王蛇毒样品检测,结果平均板内变异系数均在1%～3%之内,板间变异系数在8%以内.结论 特异的卵黄抗体应用于微量蛇毒检测研究是可行的,具有灵敏度高、特异性较强等优点.该研究将为蛇伤诊断试剂盒的研制提供相应的理论依据.

氟喹诺酮类抗菌药

氟喹诺酮类药是近十多年来发展起来的新的含有4-喹诺酮母核的、在其 C-6位引入氟的第三代喹诺酮类药物,它可人工合成,与第一、二代喹诺酮比较,该类药物有着广谱的抗菌谱、与其它的抗生素之间无交耐药性,且具有杀菌力强、作用迅速、组织分布广、半衰期长、副作用少的特点、博得了国内外医药学界的广泛关注,是一类很有发展前途的抗菌新药。它虽为内服药物,

抗眼镜王蛇毒鸡卵黄抗体的制备

目的 研制抗眼镜王蛇毒鸡卵黄抗体 ,并研究该抗体在鸡卵黄中表达过程。方法 以甲醛减毒处理的眼镜王蛇粗毒免疫莱航母鸡 ,母鸡免疫应答后 ,在卵黄中产生抗眼镜王蛇毒抗体 ,应用嗜硫色谱柱HiTrapIgYPurificationHP从鸡卵黄中提取抗眼镜王蛇毒抗体 ;以间接ELISA法及双向免疫抗散法测定抗体的效价、特异性及免疫活性 ;采用福林酚法测定蛋白含量 ;采用SDS PAGE法测定分子量及鉴定抗体纯度 ;抗体的特异性及交叉反应采用酶联免疫吸附法进行进行验证。结果 母鸡初次免疫第 9天即有抗体产生 ,初次免疫 6 0天后抗体效价超过 10 5;卵黄抗体经嗜硫色谱柱纯化后 ,经SDS PAGE检测为电泳纯 ,纯化后抗体效价较纯化前提高 4倍 ,每枚蛋中平均可获得较纯抗体 97 5mg ;所获取的抗体具有高度特异性 ,与蝰蛇科属的其它蛇毒无交叉反应 ,与眼镜蛇科蛇毒存在不同程度交叉反应 (蛇毒浓度大于5 0 0 μg·L-1时明显 )。结论 本研究首次研制并鉴定了抗眼镜王蛇毒鸡卵黄抗体 ,开拓了我国蛇伤治疗的新领域 ,并分析抗体在产蛋期卵黄液中表达的进度 ,为今后该抗体的持续、高质量诱导奠定基础 ,同时也促进其它抗蛇毒鸡卵黄抗体的研究开发及蛇毒单克隆抗体的研制。

奥卡西平的药代动力学及其立体选择性

奥卡西平是一种治疗癫痫部分发作和全身强直阵挛性癫痫发作的新药。与传统抗癫痫药物相比,奥卡西平有不良反应少、自身诱导及对肝药酶的诱导作用小等优点。本文系统地介绍了奥卡西平在人体内吸收、分布、代谢和排泄的药代动力学特征,对年龄、性别、肝肾功能损伤等影响因素进行了描述,同时综述了奥卡西平及其活性代谢产物10-羟基卡马西平在动物及人体内药代动力学的立体选择性。

倍他司汀治疗眩晕的研究进展

目的：分析倍他司汀作用机理及临床应用的研究进展。方法：在对其作用机制全面分析的基础上，对国外临床研究进行综述。结果与结论：从近２０年的研究成果来看，倍他司汀作为一个组胺Ｈ１受体的弱激动剂，Ｈ３受体的强拮抗剂，对各种程度及发作频率的眩晕、头晕、不平衡的症状均能有效控制，并能显著改善局部脑血流量。其毒副作用也较其他抗眩晕药低，并有长期用药作用不减退的特点。倍他司汀是梅尼埃病和其他前庭性眩晕维持治疗有效的药物，并可用于治疗头晕。

^(131)IBAC_5和CT-BAC_5联合应用对鼻咽癌CNE-2细胞微球的作用

目的 观察中华眼镜蛇膜毒素 (CT)和131I与抗鼻咽癌 (NPC)单克隆抗体BAC5的偶联物 ,对NPCCNE 2细胞微球的抑制或破坏作用。方法 采用氯胺 T法制备131I BAC5,并用异型双功能交联剂 (SPDP)偶联CT BAC5,分别或联合应用于NPCCNE 2细胞微球 ,观察微球生长的体积变化率和评价其受抑制或受破坏的情况。结果 CT和BAC5的偶联率为 32 .4% ,与对照组比较 ,CT对微球的生长无明显抑制作用 (P >0 .0 5 ) ,CT BAC5有明显的的抑制作用 (P <0 .0 5 ) ,131I BAC5、131I BAC5+CT BAC5有非常明显的破坏作用 (P <0 .0 1)。结论 肿瘤多细胞微球是一种用于体外研究肿瘤治疗效果的理想模型之一。CT BAC5和131I BAC5联合免疫导向治疗NPC比单项治疗效果更好。

中华眼镜蛇毒活性组分诱导内皮细胞凋亡

目的观察中华眼镜蛇毒活性组分(China cobra venom active factor,CCVAF)诱导内皮细胞凋亡的作用。方法采用荧光显微镜、流式细胞仪等方法检测CCVAF对牛肺主动脉内皮细胞(bovine arteria pulm onalis vascular endothelialcells,BAVEC)凋亡形态学、DNA、细胞周期以及凋亡指数的影响。结果经AO染色、流式细胞仪分析均证实CCVAF能够诱导内皮细胞出现凋亡。荧光显微镜下观察到CCVAF各浓度(0.15625、0.3125、0.625、1.25μmol.L-1)组处理的内皮细胞,核染色质固缩或断裂成片段状,染色不均匀,出现凋亡小体,凋亡细胞的比例随浓度升高而增加,0.625μmol.L-1组视野内凋亡细胞最多;流式细胞仪分析结果表明CCVAF在浓度低于0.625μmol.L-1,细胞生长被阻滞在S期,1.25μmol.L-1时则被阻滞在G0/G1期,且细胞凋亡率随浓度升高而逐渐增加。结论CCVAF能够诱导内皮细胞出现凋亡,通过此途径抑制内皮细胞的生长增殖,这可能是其对抗血管生成的机制。

中华眼镜蛇毒组分抑制肺癌细胞H1299的血管生长因子VEGF和Bfgf

目的:了解中华眼镜蛇毒活性组分(CCVAF)对人非小细胞肺癌细胞株H1299VEGF、bFGF表达的抑制作用。方法:采用RTPCR方法检测H1299细胞中VEGF、bFGFmRNA表达的变化;利用ELISA检测培养上清中VEGF、bFGF蛋白的含量。结果:不同浓度的(2.0、4.0μg·ml-1)CCVAF对H1299bFGFmRNA水平有降低作用,其中4.0μg·ml-1CCVAF作用7h后bFGFmRNA的表达明显降低,但对VEGFmRNA的表达无明显影响。CCVAF作用H1299细胞24h后,其细胞上清中VEGF、bFGF的含量较对照组明显减少(P<0.05),且呈剂量依赖性。结论:CCVAF可抑制H1299细胞bFGFmRNA和蛋白的表达及VEGF蛋白的表达。

抗眼镜王蛇毒卵黄抗体的免疫活性及其对眼镜王蛇毒的中和作用

目的:探讨抗眼镜王蛇毒卵黄抗体的免疫活性及其在体内外对眼镜王蛇毒的中和作用。方法:采用嗜硫色谱法一步分离纯化抗眼镜王蛇毒卵黄抗体,通过间接ELISA法对制备的抗眼镜王蛇毒卵黄抗体进行免疫活性检测,采用小鼠体内外保护实验评估抗眼镜王蛇毒卵黄抗体对眼镜王蛇毒的中和作用。结果:嗜硫色谱法制备的卵黄抗体具有良好的免疫活性,并且对眼镜王蛇毒素显示较好的中和效应,在体外6mg/kg抗眼镜王蛇毒卵黄抗体可有效地中和约4LD50(约1.6mg/kg)的眼镜王蛇毒素,而在体内可有效地中和约3LD50(约1.2mg/kg)的眼镜王蛇毒素。结论:抗眼镜王蛇毒卵黄抗体对眼镜王蛇毒具有良好的中和作用,本项目为抗眼镜王蛇毒卵黄抗体的进一步研究开发提供实验依据。

中华眼镜蛇毒组分抗白血病作用的实验及初步临床应用研究

目的：研究眼镜蛇组分对白血病细胞的直接作用及临床疗效。方法：应用ＭＴＴ法检测眼镜蛇毒组分对ＨＬ６０等９株白血病细胞系的毒性作用及量效关系；初步观察静脉滴注眼镜蛇毒组分治疗８例恶性血液病患者的效果。结果：眼镜蛇毒组分对９株人白血病细胞系均有明显的抑制作用，ＩＣ５０为０．００６～４４０μｇ／ｍｌ，且呈较好的量效关系（ｒ为０．６６～０．９９；Ｐ＜０．２－０．００１）。初步的临床观察结果显示，一疗程后８例病人中有效６例。其中４例原来应用化疗无效，于原方案第二疗程加用眼镜蛇毒，结果产生了一定的效果。静滴眼镜蛇毒组分未见过敏反应；无凝血因子，血小板功能异常加重的实验指标出现；单用眼镜蛇毒组分时骨髓抑制不明显。主要的不良反应是水样腹泻，尤其是应用Ｍ组分时非常严重，改用Ｃ组分时腹泻明显减轻。结论：眼镜蛇毒组分对多种白血病细胞株具有较强的抑制作用；此种作用与剂量呈正相关。初步的临床观察说明眼镜蛇毒组似有加强化疗药物效果的作用；眼镜蛇组分静注无明显近期毒副反应。