苯丙氨酸解氨酶合成L-2-氯苯丙氨酸的研究

L-2-氯苯丙氨酸要求旋光对映体过量(ee)≥98%,导致使用化学拆分法合成L-2-氯苯丙氨酸的收率不足50%。为提高收率,文章采用具有立体专一性的苯丙氨酸解氨酶(PAL),催化邻氯肉桂酸与氨合成L-2-氯苯丙氨酸,旋光对映体过量(ee)>99%。通过考察不同形态PAL酶的稳定性,研究得出全细胞冻融法制作的PAL酶稳定性较好,结合氮气保护,反应80 h依然能保留62%的酶活。同时,优化PAL酶催化反应的pH、温度、酶用量,确定最佳条件后,结合分段补料的方式进行酶催化反应,最终使L-2-氯苯丙氨酸的累积量达到了68.5 g/L,转化率达到了97.8%。该技术合成L-2-氯苯丙氨酸的产量和收率较高,有效降低了成本,提升了L-2-氯苯丙氨酸的市场价值。

大肠杆菌工程菌高密度发酵生产L-抗坏血酸-2-葡糖苷酶

为提高大肠杆菌基因工程菌E.coli-p ET21a高密度培养生产L-抗坏血酸-2-葡糖苷酶产量,采用摇瓶培养的方法,通过考察培养液菌体量和酶产量,筛选适用于E.coli-p ET21a液体深层发酵的培养基。50 L发酵罐采用适用于工业化大生产的搅拌、供氧、p H控制和过程补料方式,进行液体深层发酵放大培养,大幅度提高酶产量。通过优化发酵过程控制p H和诱导温度,发酵液酶活提高至88 U/m L,达到摇瓶培养的10.1倍。研究结果对大肠杆菌基因工程菌高密度培养,高效表达生物酶有重要的参考价值。

酵母菌中麦角固醇的提取和纯化工艺研究

目的研究酵母菌中麦角固醇的提取以及纯化方法,探索提取高纯度麦角固醇的工艺路线。方法首先将1.00 g酵母粉浸入20~30 ml乙醇中进行超声破壁,再取沉淀进行皂化反应:醇碱体积比为1∶2、物料皂化剂比(m∶V)为1∶10、30%NaOH、70%乙醇、2.5 h的皂化时间、85℃的皂化温度。待反应液冷却,加入乙酸乙酯进行萃取操作,取乙酸乙酯相并浓缩,经柱层析得粗品,最后经重结晶纯化得麦角固醇产品。结果麦角固醇的提取率为1.63%且纯度>98%。结论采用该法提取和纯化麦角固醇,条件温和,纯度和提取效率均提高,且易于工厂实现工艺放大,批量生产。