中药疣毒净对离体人乳头瘤病毒DNA的影响

为从分子水平探讨自行研制的由鸦胆子、紫草、莪术等组成的中药外用制剂疣毒净治疗尖锐湿疣的作用机理，本研究采用聚合酶链反应技术（ＰＣＲ）检测３例离体尖锐湿疣（ＣＡ）皮损中人乳头瘤病毒（ＨＰＶ）ＤＮＡ经疣毒净外用剂作用后的变化。结果显示当ＣＡ组织块匀浆液的含量在０．１０ｍｇ／Ｌ以下时，经０．５ｋｇ／Ｌ以上浓度疣毒净外用剂作用７ｄ后，ＰＣＲ＿ＨＰＶ＿ＤＮＡ检测为阴性，提示疣毒净外用剂对离体ＣＡ组织中的ＨＰＶ＿ＤＮＡ可能有某种破坏作用。

PICC置管化疗在肿瘤患者中的应用与护理

总结了146例采用经外周静脉置入中心静脉导管(Peripherally Inserted Central Catheter,PICC)对肿瘤患者进行置管给药及置管的临床效果。本组插管成功率为97.26%,留置时间15～126d,平均置管时间为76.5d。认为PICC为肿瘤患者提供了一条无痛性治疗途径,保证肿瘤患者化疗的顺利完成,减轻患者的痛苦。其中,正确选择血管是穿刺成功的关键,严格无菌操作及脉冲式封管是预防感染和导管阻塞的保证。能为肿瘤患者化疗期间建立良好的静脉通路,预防和减少化疗所致并发症。

Ox-LDL通过LOX-1双重调节血管内皮细胞炎性分子的表达

目的:探讨LOX-1/PPARγ信号途径对Ox-LDL诱导血管内皮细胞炎性分子表达的影响。方法:用聚肌苷酸[poly(I)]、卡拉胶(carrageenan)、15脱氧前列腺素J2(15d-PGJ2)以及Ox-LDL与脐静脉内皮细胞(HUVECs)作用,用realtime RT-PCR测定LOX-1和PPARγ、RT-PCR测定ICAM-1和E-selectin的mRNA的表达;用Western blotting测定PPARγ、ICAM-1和E-selectin蛋白的表达。结果:Ox-LDL可以显著上调PPARγmRNA和蛋白的表达(P<0.01),并呈明显的剂量效应关系,poly(I)和carrageenan可以显著抑制Ox-LDL对PPARγ的上调作用。在HUVECs中预先单独加入15 d-PGJ2或与polyinosonic acid一起预先作用,然后再加入Ox-LDL。15d-PGJ2可以降低Ox-LDL诱导的ICAM-1、E-selectin和LOX-1的表达;PPARγ的受体激动剂与LOX-1的受体阻断剂联合作用,其降低ICAM-1和E-selectin表达的作用比单独使用15d-PGJ2或polyinosonicacid要显著。结论:Ox-LDL一方面引起血管内皮细胞的炎性损伤,另一方面启动细胞抗炎作用,在炎性反应过程中呈现双重的调节作用。

氧化型低密度脂蛋白经血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1途径诱导血管内皮细胞损伤

探讨氧化型低密度脂蛋白致血管内皮细胞损伤的作用 ,并从血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体 1的途径探讨损伤作用的机制。用1 2 5I标记的氧化型低密度脂蛋白进行放射性配基结合实验及配基竞争性抑制实验检测培养的人脐静脉内皮细胞中存在的特异性氧化型低密度脂蛋白受体 ,2 ,4 二硝基笨肼法测定乳酸脱氢酶活性 ,台盼兰染色、相差显微镜下观察细胞的形态学变化并计数细胞的存活率。结果发现 ,人脐静脉内皮细胞膜上存在与氧化型低密度脂蛋白高亲和力的结合位点 ,Scatchard分析Kd为 38.4± 18.8mg L、Bmax为 181.5± 5 5 .5ng 10 6 cells。氧化型低密度脂蛋白与人脐静脉内皮细胞作用 2 4h ,随着氧化型低密度脂蛋白剂量的增加 ,不仅显著增加人脐静脉内皮细胞释放乳酸脱氢酶的量 ,而且使人脐静脉内皮细胞的存活率下降 ,血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体 1受体阻滞剂聚肌苷酸和爱兰苔胶可以阻断氧化型低密度脂蛋白的上述损伤作用。结果提示 ,血管内皮细胞表达氧化型低密度脂蛋白受体血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体 1,氧化型低密度脂蛋白诱导对血管内皮细胞的损伤作用可能是通过血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体 1的受体途径。

乙肝标志物模式与HBV-DNA定量的比较分析

目的 :探讨乙型肝炎标志物模式与 HBV-DNA复制水平之间的关系。方法 :采用 EL ISA法检测乙型肝炎病毒标志物 ,采用荧光定量探针 PCR法 ( fluorogenic quantitative PCR,F Q-PCR)检测 HBV-DNA。结果 :310例血清标本中 ,H Bs Ag,HBe Ag,H Bc Ab( +)组的平均拷贝数为 10 7.32± 1 .2 8,阳性率为 10 0 % ;H Bs Ag,HBe Ab,HBc Ab( +)组的平均拷贝数为10 4 .6 9± 1 .4 0 ,阳性率为 47% ;H Bs Ag,H Bc( +)组的平均拷贝数为 10 5.0 4± 1 .4 3,阳性率为 5 0 % ;HBe Ab,HBc( +)组的平均拷贝数为 10 4 .94± 2 .72 ,阳性率为 11.8% ;HBs Ab ( +)组的平均拷贝数为 10 4 .71± 1 .56 ,阳性率为 14 .3% ;阴性组的平均拷贝数为10 4 .38± 1 .2 8,阳性率为 12 .5 %。HBs Ag,HBe Ag,HBc Ab( +)组的平均拷贝数显著高于其它各组。结论 :FQ-PCR可以更为清楚地反映乙肝患者的病程变化情况及更为真实地反映 HBV的感染和复制情况 ,对临床诊断、治疗及判断预后具有重要的指导意义。

花青素对小鼠巨噬泡沫细胞胆固醇外流的影响

目的研究植物化学物质花青素对小鼠巨噬泡沫细胞胆固醇外流的影响,探讨花青素促进巨噬泡沫细胞胆固醇外流的分子机制。方法制备乙酰化低密度脂蛋白(AcLDL),以其负载小鼠腹腔巨噬细胞形成巨噬泡沫细胞,观察不同浓度花青素Cy-3-G和Pn-3-G对巨噬泡沫细胞胆固醇外流的影响以及调节胆固醇外流有关的基因过氧化物酶体增殖物激活受体-γ(PPAR-γ)表达的情况。结果AcLDL可促进胆固醇在巨噬细胞中大量蓄积,造成泡沫细胞的形成。花青素Cy-3-G和Pn-3-G能引起巨噬泡沫细胞内胆固醇的大量外流,并且增加PPAR-γ基因的表达。结论花青素Cy-3-G和Pn-3-G促进胆固醇外流的作用与其增加PPAR-γ基因的表达有关。

EB 病毒特异性 DNA 酶基因在大肠杆菌中的高效表达

含ＥＢ病毒特异性ＤＮＡ酶全基因片段的大肠杆菌受变温诱导后，其上清液在十二烷基磺酸钠－聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）时出现一条浓集带，分子质量大小约为５２ｋｕ，符合ＥＢ病毒ＤＮＡ酶全基因编码蛋白质大小。凝胶中蛋白质的定量扫描结果显示该蛋白质占宿主菌总蛋白质的２０％～２３％，实现了ＤＮＡ酶全基因在原核体系的高效表达。未见包涵体形成；迅速或缓慢升温所诱导目的蛋白质表达量基本相同。

512例健康中老年人群载脂蛋白E基因多态性分布的研究

目的 了解ＡｐｏＥ基因多态性在中老年人群中的分布。方法 采用多聚酶链反应限制性片段长度多态性技术（ＰＣＲ－ＲＦＬＰ），检测广州市荔湾区５１２ 名年龄５５ 岁及以上的健康志愿者的ＡｐｏＥ基因型，特异性扩增ＡｐｏＥ基因第四外显子区含编码１１２ 位至１５８ 位氨基酸的基因序列，产物片段２４４ ｂｐ，用限制性内切酶ＨｈａＩ酶解ＰＣＲ产物，应用聚丙烯酰胺凝胶电泳进行酶解产物的基因分型。结果 广州市荔湾区健康中老年人群中，ＡｐｏＥ等位基因频率分别为ε２∶９．２％ ，ε３∶８４．２％ ，ε４∶６．６％ ，ε２ 频率随年龄增加有上升趋势，其中６５～７４ 岁年龄组与５５～６４ 岁年龄组比较，差异有显著性意义（Ｐ＜ ０．０５），ε４ 频率则随年龄增加而明显下降（Ｐ＜ ０．０５）。ＡｐｏＥ等位基因频率分布与男女性别无关。结论 广州市荔湾区健康中老年人群中的ＡｐｏＥ等位基因频率的分布与国内其他多数健康人群大体相同，与国外同类研究相比则有差异。

半定量RT-PCR检测少量兔血管内皮细胞中特异mRNA的表达

目的 :半定量检测体外培养的少量兔血管内皮细胞中特异mRNA的表达。方法 :用PharmaciaBiotech公司的快速微量mRNA提纯试剂盒从兔内皮细胞中直接提取出mRNA ,并以此为模板 ,用半定量RT -PCR技术检测培养的兔血管内皮细胞中内皮素 (ET - 1)mRNA的相对含量。结果 ;从 10 5个兔血管内皮细胞中提取出未降解的mRNA ,A2 6 0 /A2 80 >1.8;用半定量RT -PCR技术 ,测定出ET - 1mRNA的表达。结论 :本实验建立了一种从少量细胞中快速、简便、安全而可靠地检测特异mRNA表达的方法。

ERK1/2和P38信号通路在瘦素诱导巨噬细胞TNF-α表达中的作用

【目的】研究瘦素(leptin)诱导小鼠腹腔巨噬细胞(PM)分泌肿瘤坏死因子α(TNF-α)的影响,以及丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路在这一过程中的作用。【方法】体外培养小鼠PMs,按瘦素不同浓度和/或MAPK特异性抑制剂PD98059、U0126、SB203580、SP600125进行分组。分别收集培养细胞和上清液,用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定培养上清中TNF-α水平,用蛋白印迹(Westernblot)方法测定细胞内p-ERK1/2、p-p38,以及p-JNK的表达水平,用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)测定TNF-αmRNA的表达。【结果】瘦素能够剂量依赖性的诱导小鼠PM产生TNF-α,在瘦素质量浓度为75ng/mL时TNF-α表达至峰值,是对照组的6.6倍。瘦素可以活化ERK1/2和p38MAPK信号转导通路,瘦素处理组的p-ERK1、p-ERK2、p-p38表达水平分别是对照组的2.3、2.4和2.6倍。ERK1/2的特异性抑制剂PD98059、U0126和p38的特异抑制剂SB203580能够分别抑制瘦素引起的ERK1/2、p38蛋白磷酸化以及TNF-αmRNA增加,两者的联合作用可以强烈抑制TNF-αmRNA的表达,而JNK信号转导途径与瘦素诱导PM表达TNF-α无关。【结论】瘦素在小鼠PM中通过同时活化ERK1/2、p38MAPK信号转导通路而诱导细胞产生TNF-α。

不同脂肪酸负荷膳食对小鼠胆固醇代谢的影响

目的 为研究脂肪酸对胆固醇代谢可能的分子机制。方法 C5 7小鼠 75只 ,随机分为 5组 ,各组饲以相应配方饲料 6周。结果 与胆固醇膳食 (Chol)相比 ,胆固醇 +多不饱和脂肪酸膳食 (Chol+PUFA)可增加血清总胆固醇、机体总胆汁酸 (P <0 0 5 ) ,降低肝脏胆固醇 (P <0 0 5 ) ;胆固醇 +单不饱和脂肪酸膳食 (Chol+MUFA)动物血清总胆固醇不变 ,机体总胆汁酸明显增加 (P <0 0 5 ) ,肝脏胆固醇降低 (P <0 0 5 ) ;胆固醇 +饱和脂肪酸 (Chol+SFA)膳食可明显增加 (P <0 0 5 )血清总胆固醇和肝脏胆固醇 ,降低 (P <0 0 5 )机体总胆汁酸。此外 ,PUFA、MUFA和SFA均明显降低肝脏胆固醇 7α -羟化酶 (CYP7a1)mRNA和蛋白的表达。结论 膳食脂肪酸可通过CYP7a1调节机体胆固醇内稳态 ,多不饱和脂肪酸和单不饱和脂肪酸可诱导胆固醇转化为胆汁酸进而维持机体胆固醇在较低水平 ,而此过程中产生的大量胆汁酸又可反馈抑制CYP7a1的表达 ;相反 ,饱和脂肪酸可能通过直接抑制或不改变CYP7a1的表达 。

EB病毒3种全基因的扩增、克隆及表达

目的：扩增克隆及表达ＥＢ病毒（ＥＢＶ）３种（ＤＮＡ酶、胸苷激酶及ＢＨＲＦ１）全基因片段。方法：以Ｂ９５－８细胞株ＤＮＡ为模板，ＰＣＲ扩增３种目的基因。酶切鉴定后分别与高效表达载体ｐＢＶ２２１连接，用大肠杆菌ＪＭ１０３或ＨＢ１０１作为转化的宿主菌。抗氨苄青霉素培养形成单菌落后放大培养，根据重组质粒的电泳行为粗筛，再双酶切鉴定。结果：各种阳性菌经３０℃→４２℃变温诱导培养，超声破碎后其上清液经十二烷基磺酸钠－聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＳＤＳＰＡＧＥ），分别新出现一条分子大小为５２ｋｕ，６７ｋｕ及１７ｋｕ蛋白区带，符合ＥＢＶ该３种全基因所编码蛋白质大小。凝胶中蛋白质定量扫描结果显示目的蛋白质分别占宿主菌总蛋白质的２３％，６７％和２５％。结论：实现了ＥＢＶ３种全基因的扩增、克隆及在原核体系的表达。

巢式PCR法构建人细胞色素P4501A1基因cDNA全长T载体

目的构建含限制性内切酶位点KpnI,XhoI的人细胞色素氧化酶(CYP1A1)基因cDNA全长的pGEM -T载体。方法从培养的MCF-7细胞中抽提总RNA并根据人细胞色素P4501A1(CYP1A1,GeneBank NM- 000499)开放阅读框设计两对引物,采用巢式-PCR方法扩增CYP1A1 mRNA全长,凝胶分离并回收扩增的DNA片断,与T载体连接后转化大肠埃希菌DH5α,挑选3个阳性克隆,扩增培养后抽提重组质粒并进行PCR及酶切鉴定, 再行测序分析。结果重组质粒PCR扩增得到1568 bp的片段,KpnI,XhoI限制性内切酶消化质粒证实目的片断成功插入至载体,测序分析也进一步证明了目的片段与GeneBank中CYP1A1 mRNA的序列同源性为99.9%。结论该实验成功地构建了含CYP1A1基因cDNA全长区域的T载体克隆,巢式-PCR是一种简便、特异、灵敏的方法, 可用于基因的检测和载体的构建。

地方立法公众参与的若干问题及其应对

地方立法公众参与的理论基础是人民主权原则和协商民主理论,表现为公民平等地参与民主意志的形成过程。公众参与的现实意义在于能够更好地促进人民当家作主的实现,保障公众对地方立法机关的监督,最终提高地方立法内容的科学性和有效性。在社会转型过程中,面对利益多元化、复杂化的局面,地方立法公众参与的实践还存在诸多不足。对我国地方立法公众参与存在的主要问题进行反思,并从参与意识、参与程序和反馈机制三个方面寻求改善地方立法公众参与效果的方法,以实现地方立法的科学化与民主化,增强地方立法的社会效果。

花青素对人脐静脉内皮细胞基质金属蛋白酶影响

目的研究花青素对人脐静脉内皮细胞基质金属蛋白酶(MMP)1,2和9蛋白表达和活性的影响。方法分离人脐静脉内皮细胞,先用5mg/L人重组CD40配体(rCD40L)处理细胞24h,再分别用1,10,100μmol/L的花青素标准品矢车菊定3葡萄糖苷(C3G)和芍药定3葡萄糖苷(P3G)处理细胞24h。用WesternBlotting分别检测MMP1,MMP2,MMP9的蛋白表达量,用酶谱分析法检测MMP1,MMP2,MMP9的活性水平。结果花青素C3G和P3G组的MMP1,MMP2,MMP9的活力明显下降,且蛋白表达量也明显下降。结论花青素C3G和P3G能够降低rCD40L诱导的人脐静脉内皮细胞MMP1,MMP2,MMP9的蛋白表达和活性水平,对于增加动脉粥样斑块的稳定性有重要意义。

重组EB病毒DNA酶的生物学特性及其应用的初步研究

经温度诱导含正向目的基因工程菌粗提液的ＤＮＡ酶活性比宿主菌本身的ＤＮＡ酶活性高７倍以上，且比等蛋白含量激发的Ｒａｊｉ细胞粗提液ＤＮＡ酶活性高２倍以上；阳性血清对重组ＥＢ病毒（ＥＢＶ）ＤＮＡ酶的中和率高达８３．５％；用重组酶粗提液和Ｒａｊｉ细胞ＤＮＡ酶检测的１０６例鼻咽癌（ＮＰＣ）病人血清抗ＥＢＶＤＮＡ酶抗体（ＥＤＡｂ）水平，结果无显著性差异，检出鼻咽癌的效率亦无显著性差异；表明重组酶经进一步提纯并标准化定量后可用于临床常规检测及大规模普查。

论人大代表候选人资格

人大代表候选人资格是指在人大代表换届选举中,一位公民被确定成为一名正式代表候选人所需要具备的基本条件,其内在价值为保障公民参与行使国家权力的权利空间,促进国家权力机关职能的有效发挥。对我国人大代表候选人资格的完善,有赖于对候选人的居住期限、教育程度和个人信用等要素进行研究,以期实现人大代表基本素质与履职能力的提升。这有利于我国各级人民代表大会职能的切实履行和人民代表大会制度优越性的充分发挥,有利于我国依法治国和国家治理现代化的全面深入推进。

行政法治发展过程中的参照规章

《行政诉讼法》规定法院审理行政案件参照规章,实质上是赋予了法院对规章一定的司法审查权。随着行政诉讼实践的发展,参照规章也经历了标准逐步明确、范围不断扩大以及过程和结果趋于公开的发展脉络。本文认为,参照规章的做法局限了法院审查规章的空间和效能,在适时顺应行政法治发展趋势的前提下,或可期待参照规章转变为规章附带审查甚至探索实现规章直接审查。这一发展趋势,既有利于实现行政诉讼法强化监督行政权力的立法目的和功能价值,也有利于促进我国行政法治的良健发展。

行政审判中参照规章的新发展——以最高人民法院第5号指导案例为分析对象

《行政诉讼法》规定人民法院在审理行政案件时参照规章。司法实践中,人民法院对规章的参照适用经历了发展演变的过程。最高人民法院发布的第5号指导案例对违反上位法规定的规章"不予适用",适当、充分地行使了法律赋予人民法院对规章的选择适用权。人民法院在行政审判中参照规章时,对合法有效的规章有权作为裁判依据,予以适用;对违反上位法规定的规章有权拒绝作为裁判依据,不予适用。

广州75岁以上老年人群LRP、α2-MG基因多态性与Alzheimer病的关系

目的了解高龄老年人群A lzheim er病(AD)患者低密度脂蛋白受体相关蛋白(LRP)和α2巨球蛋白(α2-MG)基因型的分布,探讨这两种基因多态性和AD的相关关系。方法采用系统整群抽样方法调查广州市荔湾区75岁以上的老年居民3 825例,按DSM-Ⅲ-R和NINCDS/ADRDA的诊断标准,从中筛选出无血缘关系的散发性AD患者190例(其中有部分患者接受抽血检查),并以该人群中的健康老年人作为对照。采用PCR-RFLP技术,检测以上两组老年人LRP和α2-G基因型。结果AD组LRP的C、T基因频率分别为93.8%、6.2%,对照组LRP的C、T基因频率分别为93.0%、7.0%;AD组α2-MG的A2M-1、A2M-2基因频率分别为95.7%、4.3%,对照组α2-MG的A2M-1、A2M-2基因频率分别为98.3%、1.7%。AD组与对照组在LRP或α2-MG的基因型频率及等位基因频率分布上的差异均无显著性(P>0.05)。结论广州市荔湾区75岁以上老年人群LRP和α2-MG基因可能均不是AD发病的遗传危险因素。