目的为了解青海省犬科动物流行的钩虫种类,为青藏高原地区钩虫的流行分布及种群进化研究提供依据。方法2014—2016年在青海省达日县和兴海县分别收集犬科动物粪便样本,洗脱获取粪便表面动物细胞,通过PCR扩增和测序对粪便标本溯源,以饱...目的为了解青海省犬科动物流行的钩虫种类,为青藏高原地区钩虫的流行分布及种群进化研究提供依据。方法2014—2016年在青海省达日县和兴海县分别收集犬科动物粪便样本,洗脱获取粪便表面动物细胞,通过PCR扩增和测序对粪便标本溯源,以饱和蔗糖水漂浮法进行粪便虫卵检查,收集虫卵提取DNA,以聚合酶链反应-限制性内切酶片段长度多态性(PCR-restriction fragment length polymorphism,PCR-RFLP)法进行虫种鉴定。结果通过动物粪便溯源试验,获得动物线粒体D-loop区域长度为372bp的基因片段,运用基本局部比对搜索工具(basic local alignment search tool,BLAST)分析显示达日县和兴海县动物粪便标本来源分别为家犬和红狐;虫卵内转录间隔区(internal transcribed spacer,ITS)的PCR扩增,获得长度约为544bp的特异性电泳条带,PCR产物经限制性内切酶RsaⅠ和HinfⅠ的酶切反应显示特异性的酶切、电泳条带,两个钩虫样本均被鉴定为锡兰钩虫。结论锡兰钩虫首次在青藏高原地区报道,并在野生红狐体内被发现,有一定的生物学意义。展开更多
目的克隆、表达青海省藏羊源细粒棘球蚴(Echinococcus granulosus)抗原B8/2(Eg Ag B8/2)基因,并进行免疫学鉴定。方法用RT-PCR扩增Eg Ag B8/2基因c DNA,构建原核表达载体pET-Eg Ag B8/2,转化至大肠埃希菌BL21(DE3)中诱导表达,十...目的克隆、表达青海省藏羊源细粒棘球蚴(Echinococcus granulosus)抗原B8/2(Eg Ag B8/2)基因,并进行免疫学鉴定。方法用RT-PCR扩增Eg Ag B8/2基因c DNA,构建原核表达载体pET-Eg Ag B8/2,转化至大肠埃希菌BL21(DE3)中诱导表达,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白质印迹(Western blotting)对诱导表达后的蛋白进行鉴定。结果克隆的Eg Ag B8/2基因长335 bp,序列分析表明与已报道的Eg Ag B8/2 c DNA序列的同源性为98%~100%,原核表达载体pET-Eg Ag B8/2构建正确。诱导表达后,通过SDS-PAGE检测,上清中有大量目的蛋白表达。纯化的蛋白经Western blotting鉴定为目的蛋白。结论成功克隆了青海省藏羊源Eg Ag B8/2基因,构建了原核表达载体,诱导表达后的蛋白为目的蛋白。展开更多
文摘目的为了解青海省犬科动物流行的钩虫种类,为青藏高原地区钩虫的流行分布及种群进化研究提供依据。方法2014—2016年在青海省达日县和兴海县分别收集犬科动物粪便样本,洗脱获取粪便表面动物细胞,通过PCR扩增和测序对粪便标本溯源,以饱和蔗糖水漂浮法进行粪便虫卵检查,收集虫卵提取DNA,以聚合酶链反应-限制性内切酶片段长度多态性(PCR-restriction fragment length polymorphism,PCR-RFLP)法进行虫种鉴定。结果通过动物粪便溯源试验,获得动物线粒体D-loop区域长度为372bp的基因片段,运用基本局部比对搜索工具(basic local alignment search tool,BLAST)分析显示达日县和兴海县动物粪便标本来源分别为家犬和红狐;虫卵内转录间隔区(internal transcribed spacer,ITS)的PCR扩增,获得长度约为544bp的特异性电泳条带,PCR产物经限制性内切酶RsaⅠ和HinfⅠ的酶切反应显示特异性的酶切、电泳条带,两个钩虫样本均被鉴定为锡兰钩虫。结论锡兰钩虫首次在青藏高原地区报道,并在野生红狐体内被发现,有一定的生物学意义。
文摘目的克隆、表达青海省藏羊源细粒棘球蚴(Echinococcus granulosus)抗原B8/2(Eg Ag B8/2)基因,并进行免疫学鉴定。方法用RT-PCR扩增Eg Ag B8/2基因c DNA,构建原核表达载体pET-Eg Ag B8/2,转化至大肠埃希菌BL21(DE3)中诱导表达,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白质印迹(Western blotting)对诱导表达后的蛋白进行鉴定。结果克隆的Eg Ag B8/2基因长335 bp,序列分析表明与已报道的Eg Ag B8/2 c DNA序列的同源性为98%~100%,原核表达载体pET-Eg Ag B8/2构建正确。诱导表达后,通过SDS-PAGE检测,上清中有大量目的蛋白表达。纯化的蛋白经Western blotting鉴定为目的蛋白。结论成功克隆了青海省藏羊源Eg Ag B8/2基因,构建了原核表达载体,诱导表达后的蛋白为目的蛋白。