灯盏花素通过调控TGF-β1介导的Smad和ERK通路干预肾纤维化大鼠的作用机制研究

目的 基于转化生长因子(TGF)-β1介导的Smad和ERK通路探讨灯盏花素对肾纤维化大鼠的干预作用及机制。方法 将60只雄性SD大鼠随机为正常组、模型组、秋水仙碱组(0.45 mg·kg^(-1))及灯盏花素低(5.5 mg·kg^(-1))、中(11 mg·kg^(-1))、高(22 mg·kg^(-1))剂量组,每组10只。采用灌胃腺嘌呤的方式建立肾纤维化模型,连续30 d。第31天开始给药干预,每日1次,连续30 d。采用分光光度法检测血清肌酐(Cr)、尿素氮(BUN)水平及BUN/Cr值;测定肾脏系数;采用HE染色法观察肾脏病理组织形态;采用免疫组化法检测肾脏组织中TGF-β1、Smad2、Smad3、ERK1和ERK2蛋白水平;采用RT-PCR法检测肾脏组织中TGF-β1、Smad2、Smad3、ERK1和ERK2 mRNA水平。结果 与正常组比较,模型组大鼠肾脏系数及血清Cr、BUN水平明显升高(P<0.05),BUN/Cr值明显减小(P<0.05);肾脏出现纤维化病变;肾脏组织中TGF-β1、Smad2、Smad3、ERK1和ERK2蛋白及mRNA水平明显升高(P<0.05)。与模型组比较,灯盏花素低、中、高剂量能明显降低大鼠肾脏系数及血清Cr、BUN水平(P<0.05),增加BUN/Cr值(P<0.05);改善肾脏纤维化病变;降低肾脏组织中TGF-β1、Smad2、Smad3、ERK1和ERK2的蛋白及mRNA水平(P<0.05)。结论 灯盏花素通过抑制TGF-β1介导的Smad和ERK通路来实现对肾纤维化大鼠的保护作用。

复方丹参片通过LKB1-AMPK通路干预高脂血症大鼠的作用机制研究

目的基于LKB1-AMPK通路探讨复方丹参片对高脂血症大鼠的保护作用及相关机制。方法采用腹腔注射75%蛋黄乳液+连续饲喂高脂饲料4周的方式制备高脂血症大鼠模型。将大鼠随机分为正常组、模型组、辛伐他汀组(0.02 g·kg^(-1))和复方丹参低、中、高剂量组(复方丹参片,1.5、3、6 g·kg^(-1)),每组10只。各组大鼠每日1次给予相应剂量药物灌胃,连续干预4周。采用ELISA法检测血清甘油三酯(TG)、总胆固醇(T-CHO)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)水平;测定大鼠肝脏系数;采用HE染色法观察肝脏组织病理形态;采用免疫组织化学法检测肝脏组织中AMPK、p-AMPK、LKB1、HMGCR蛋白水平;采用Real-time PCR法检测肝脏组织中AMPK、LKB1、HMGCR mRNA表达水平。结果与正常组比较,模型组大鼠的肝脏系数及血清TG、T-CHO、LDL-C、ALT、AST水平明显升高(P<0.05),HDL-C水平明显降低(P<0.05);肝脏出现脂肪性病变;肝脏组织中AMPK、p-AMPK、LKB1蛋白及mRNA表达水平明显降低(P<0.05),HMGCR蛋白及mRNA表达水平明显升高(P<0.05)。与模型组比较,复方丹参片低、中、高剂量能明显降低高脂血症模型大鼠的肝脏系数及血清TG、T-CHO、LDL-C、ALT、AST水平(P<0.05),升高HDL-C水平(P<0.05);改善肝脏脂肪性病变;升高肝脏组织中AMPK、p-AMPK、LKB1蛋白及mRNA表达水平(P<0.05),降低HMGCR蛋白及mRNA表达水平(P<0.05)。结论复方丹参片可能通过激活LKB1-AMPK通路及抑制HMGCR表达水平来实现对高脂血症大鼠的保护作用。

灯盏花素通过调控LKB1/AMPK和Notch1/Jagged1通路改善高脂血症大鼠血脂水平及肝肾功能的作用机制研究

目的 基于LKB1/AMPK和Notch1/Jagged1通路探讨灯盏花素改善高脂血症大鼠血脂水平及肝肾功能的作用机制。方法 60只雄性SD大鼠随机为正常组、模型组、辛伐他汀组(20 mg·kg^(-1))和灯盏花素低、中、高剂量组(6、12、24 mg·kg^(-1)),每组10只。采用先腹腔注射75%蛋黄乳液后饲喂高脂饲料的方式建立高脂血症模型,同时给药干预,1次/天,连续28d。采用ELISA法检测大鼠血清中T-CHO、TG、LDL-C、HDLC、AST、ALT、Cr、BUN水平;测定大鼠肝脏、肾脏系数;采用HE染色法观察肝肾组织病理学变化;采用免疫组化法检测肝组织p-AMPK、LKB1、HMGCR水平及肾组织Notch1、Jagged1、Hes1水平;采用RT-PCR法检测肝组织p-AMPK、LKB1、HMGCR水平mRNA水平及肾组织Notch1、Jagged1、Hes1 mRNA水平。结果 与正常组比较,模型组大鼠血清TG、T-CHO、LDL-C、ALT、AST、Cr、BUN水平明显升高(P<0.05),HDL-C水平明显降低(P<0.05);肝脏、肾脏系数明显增加(P<0.05)且出现病理变化;肝组织中p-AMPK、LKB1水平明显降低(P<0.05),HMGCR水平明显升高(P<0.05);肾组织Notch1、Jagged1、Hes1水平明显升高(P<0.05)。与模型组比较,辛伐他汀组和灯盏花素低、中、高剂量组大鼠血清TG、T-CHO、LDL-C、ALT、AST、Cr、BUN水平明显降低(P<0.05),HDL-C水平明显升高(P<0.05);肝脏、肾脏系数明显减小(P<0.05)且病变程度减轻;肝组织中p-AMPK、LKB1水平明显升高(P<0.05),HMGCR水平明显降低(P<0.05);肾组织Notch1、Jagged1、Hes1水平明显降低(P<0.05)。结论 灯盏花素能够改善高脂血症大鼠血脂水平及肝肾功能,其机制与激活LKB1/AMPK通路及抑制Notch/Jagged1通路和HMGCR水平有关。

金匮肾气丸对肾纤维化模型大鼠的干预作用及机制

目的基于转化生长因子β_(1)/Smads(TGF-β_(1)/Smads)和TGF-β_(1)/细胞外信号调节激酶(TGF-β_(1)/ERK)信号通路探讨金匮肾气丸对肾纤维化模型大鼠的干预作用及机制。方法将雄性SD大鼠灌胃腺嘌呤混悬液(250 mg/kg)以复制肾纤维化模型,造模成功后,按体质量随机分为模型组、秋水仙碱片组(阳性对照,0.45 mg/kg)和金匮肾气丸低、中、高剂量组(0.5、1、2 g/kg),每组10只;另取10只健康大鼠作为正常组。各药物组大鼠灌胃相应药液,正常组和模型组大鼠均灌胃羧甲基纤维素钠溶液,每天1次,连续30 d。末次给药后,检测大鼠血清中肌酐(Cr)、尿素氮(BUN)水平以及肾脏质量和体质量,并计算BUN/Cr比值及肾脏系数;观察大鼠肾脏组织的病理形态;检测大鼠肾脏组织中TGF-β_(1)、Smad2、Smad3、ERK1、ERK2蛋白和mRNA的表达水平。结果与正常组比较,模型组大鼠血清中Cr、BUN水平和肾脏系数均显著升高(P<0.05),BUN/Cr比值显著降低(P<0.05);肾脏体积明显增大,表面颗粒化严重,可见系膜增生,肾小管扩张或萎缩,并伴有大面积胶原蛋白沉积等;肾脏组织中TGF-β_(1)、Smad2、Smad3、ERK1、ERK2蛋白和mRNA的表达水平均显著升高(P<0.05)。与模型组比较,金匮肾气丸各剂量组大鼠上述指标水平均显著逆转(P<0.05);肾小管扩张或萎缩减轻,胶原蛋白沉积不同程度地减少。结论金匮肾气丸可改善肾纤维化模型大鼠的肾脏功能,其作用机制可能与抑制TGF-β_(1)/Smads和TGF-β_(1)/ERK这2条信号通路有关。

金匮肾气丸对多囊卵巢综合征模型大鼠的改善作用及机制研究

目的 探讨金匮肾气丸对多囊卵巢综合征(PCOS)模型大鼠的改善作用及机制。方法 将40只大鼠灌胃来曲唑混悬液(1 mg/kg,每天1次,连续21 d)复制PCOS模型。将造模成功的大鼠分为模型组、炔雌醇环丙孕酮片(简称“达英-35”)+二甲双胍组(达英-35 0.2 mg/kg+二甲双胍230 mg/kg,阳性对照)和金匮肾气丸低、中、高剂量组(0.5、1.0、2.0 g/kg),每组10只。另取10只未造模大鼠作为正常组。各组大鼠灌胃相应药物,每天1次,连续30 d。末次灌胃24 h后,检测大鼠血清中血糖、胰岛素、雌二醇(E_(2))、睾酮(T)、促性腺激素释放激素(GnRH)、促卵泡素(FSH)和促黄体生成素(LH)水平,并计算胰岛素抵抗指数;计算大鼠卵巢系数;观察大鼠卵巢组织的病理形态学变化;检测大鼠卵巢组织中肝激酶B1(LKB1)、腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)蛋白和mRNA的表达水平。结果 与正常组比较,模型组大鼠血糖、胰岛素水平,胰岛素抵抗指数,血清中T、GnRH、LH水平,卵巢系数均显著升高(P<0.05),血清中E_(2)、FSH水平及卵巢组织中LKB1、AMPK蛋白和mRNA表达水平均显著降低(P<0.05);卵巢皮质胶原化,闭锁卵泡和无卵丘的囊性卵泡数量增多,可见卵泡囊性病变。与模型组比较,金匮肾气丸各剂量组大鼠上述大部分指标水平均显著逆转(P<0.05);金匮肾气丸中、高剂量组大鼠卵巢组织内各级卵泡数量增多,未见卵泡囊性病变。结论 金匮肾气丸对PCOS模型大鼠性激素水平异常、胰岛素抵抗及卵巢囊性改变均有较好的改善作用,其作用机制可能与上调LKB1/AMPK信号通路活性有关。

萆薢分清丸通过调控尿酸盐转运蛋白表达水平干预高尿酸血症大鼠的作用机制

目的通过观察萆薢分清丸对高尿酸血症(HUA)模型大鼠肾脏尿酸盐转运蛋白及mRNA水平的影响,探讨该方对HUA大鼠的干预作用机制。方法60只雄性SD大鼠随机为正常组、模型组、别嘌醇组(0.03 g·kg^(-1))和萆薢分清丸低、中、高剂量组(0.8、1.6、3.2 g·kg^(-1))。除正常组外,其余各组大鼠每天灌胃氧嗪酸钾1.5 g·kg^(-1)和腺嘌呤0.1 g·kg^(-1)以建立HUA模型,连续28 d,以血尿酸(SUA)水平升高为标准。造模成功后依据组别给予相应药物干预,1次/d,连续28 d。末次给药24 h后,采集大鼠尿液和血液,采用酶比色法测定尿尿酸(UUA)、SUA、尿素氮(BUN)、血肌酐(SCr)水平;取大鼠双侧肾脏,称重,计算肾脏系数;苏木素-伊红(HE)染色法观察肾脏病理变化;免疫组化(IHC)检测肾脏组织中尿酸转运体1(URAT1)、葡萄糖转运体9(GLUT9)、有机阴离子转运体1(OAT1)、有机阴离子转运体3(OAT3)、ATP结合盒转运蛋白G2(ABCG2)蛋白表达水平;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测URAT1、GLUT9、OAT1、OAT3、ABCG2 mRNA水平。结果与正常组比较,模型组大鼠肾脏系数明显增加(P<0.05);SUA、BUN和SCr水平明显升高(P<0.05),UUA水平明显降低(P<0.05);肾小管代偿性扩张,管内可见尿酸盐结晶和蛋白管型;肾脏组织中URAT1、GLUT9蛋白表达水平及mRNA水平明显升高(P<0.05),OAT1、OAT3和ABCG2蛋白表达水平及mRNA水平明显降低(P<0.05)。与模型组比较,各给药干预组大鼠肾脏系数明显减小(P<0.05);SUA、BUN和SCr水平明显降低(P<0.05),UUA水平明显升高(P<0.05);肾脏组织病变明显减轻,URAT1、GLUT9蛋白表达水平及mRNA水平明显降低(P<0.05),OAT1、OAT3和ABCG2蛋白表达水平及mRNA水平明显升高(P<0.05)。结论萆薢分清丸可通过调节尿酸盐转运蛋白表达水平来实现其对HUA的干预作用。