应用30个常染色体STR位点研究中国6个民族群体的遗传关系

利用３０个荧光标记的人类常染色体ＳＴＲ位点的引物，对中国白族、纳西族、土族、撒拉族、山东汉族、畲族６个民族进行了多重ＰＣＲ扩增，产物在ＡＮＩ ３７７测序仪上进行变性聚丙烯酸胺凝胶电泳和基因扫描及分型，然后用Ｓｈｒｉｖｅｒ的Ｄｅｗ法计算遗传距离，用Ｗｅｉｇｈｂｏｒ－Ｊｏｉｎｉｎｇ法和ＵＰＧＭＡ法构建了系统发生树，结合有关资料分析了它们之间的遗传关系。结果揭示：撒拉族与土族的遗传距离较接近，为０．０３３，但与其余４个民族的距离则较远，均大于０．１２；土族 与纳西族和山东汉族的距离较近，分别为０．０３８、０．０６３；白族与山东汉族的距离最近，仅为０．００７，而与纳西族相近却有０．０７５的距离，与土族的距离也较远，为０．１１２；纳西族和山东汉族 之间存在着０．１００的遗传距离；畲族与其他５个民族群体的距离均超过了０．１２，关系较远。在 构建的系统发生树中，纳西族、撒拉族和土族聚成一簇，汉族、白族聚成一簇，畲族单独为一 枝。这一结果与它们的地理分布和民族历史基本上是一致的，并可为结合历史和考古资料综 合分析这６个民族的起源、迁移、形成和发展提供遗传学依据。

5个中国人群Y染色体上17个双等位基因位点的多态性分析

选取Y染色体非重组区上17个双等位基因位点,利用ASPCR和PCR的方法对云南的怒族、傈僳族、纳西族、青海的撒拉族和福建的畲族进行了检测分型,确定了每一个体由这17个位点所构成的单倍型,并与国内其它20个民族群体的结果一起进行了主成分分析.结果显示,YAP、M15、M89、M9、M119、M95、M88、M45、M122、M134、M17、M120等12个位点在5个民族群体中均有不同的频率分布,其余5个位点没有发现多态变异,其中M122(C)在怒族、傈僳族、纳西族、撒拉族和畲族中的频率分别是82.1%、31.6%、5.9%、20%、69.3%;YAP+只在撒拉族中有2.2%的频率;傈僳族的M95(T)的频率最高,达68.4%.5个群体中共发现了12种单倍型,单倍型频率主要集中分布在H5、H6、H8、H11和H12,各民族群体的单倍型有各自的分布特点.主成分分析的结果显示:傈僳族则与苗瑶、侗壮语族的民族群体聚到了A簇;畲族、怒族与汉族群体紧密,聚到了B簇;而撒拉族、纳西族则与藏缅语族和阿尔泰语系的民族群体聚为C簇.

中国3个民族群体Y染色体上17个双等位基因位点的遗传分析

目的研究中国不同民族群体Y染色体的遗传多样性。方法采用PCR和等位基因特定PCR穴ASPCR雪的方法,对山东汉族、白族和土族共计76份男性DNA样本进行Y染色体上17个双等位基因位点的基因分型,确定每一个体的单倍型,统计3个群体各单倍型的频率分布,与国内其他群体的结果进行对比分析,并进行这些群体的主成分分析。结果有6个位点在3个群体中没有发现多态变异,YAP+在土族、白族和山东汉族中的分布分别为23.8%、6.7%和4%;3个群体共发现11种单倍型,山东汉族7种,土族8种,白族9种,主要单倍型频率集中在H1、H3、H5、H6、H8和H11。主成分分析结果显示白族与北方汉族相近,山东汉族与南方汉族等南方群体聚在一起,土族与彝族、回族和满族相近。结论山东汉族可能与一些南方群体有过基因交流,白族基因池中融入汉族基因流。中亚人群的基因流可能对东亚人群的遗传结构有过影响。

IgY的制备与应用进展

随着对鸡卵黄免疫球蛋白（IgY）研究的逐步深入,发现它在生物学特性和制备方面具有一些独特优点,因此它已被广泛地用于抗哺乳动物蛋白的抗体制备、检验诊断和疾病防治中。本文将近年来这些方面的研究进展作一综述。

MICA基因微卫星多态在中国13个群体中的分布

通过对中国 1 3个群体 (云南汉族、广东汉族、山东汉族、白族、傣族、拉族、黎族、纳西族、撒拉族、畲族、土族、佤族和云南藏族 )共 5 77例无亲缘关系的研究对象的DNA样本进行MICA基因微卫星扫描分型 ,获得了该微卫星的不同等位基因在各群体中的遗传数据。结果表明 ,该微卫星在不同群体中的分布存在差异 ,并有较高的多态信息含量 (PIC) ,是一个有用的遗传标记 ,在人类进化研究、个体识别、亲子鉴定。

中国28个民族群体Y染色体DYS287位点的遗传多态性

目的研究我国9个省28个民族群体Y染色体DYS287位点的遗传多态性。方法应用Touchdown PCR技术扩增1006个DNA样品的Y染色体Alu序列多态性(YAP)+片断,琼脂糖凝胶电泳分离检测。结果藏族YAP+频率为36·7%,土族23·8%,彝族18·4%,普米族11·3%,塔吉克族7·4%,白族6·7%,基诺族5·1%,山东汉族4%,仫佬族2·7%,毛南族1·3%,甘肃汉族、云南汉族、壮族、傣族、黎族、怒族、傈僳族、纳西族、拉祜族、独龙族、哈尼族、畲族、维吾尔族、撒拉族、柯尔克孜族、东乡族、佤族及朝鲜族的YAP+频率均为0。结论YAP+频率在部分汉藏语系民族(藏、彝、普米、基诺、白族)中频率较高。在历史学、语言学上被认为来源于中亚的民族(土族、塔吉克族)中YAP+频率也较高。而起源于百越民族的少数民族(仫佬族、毛南族)YAP+频率值得进一步探讨。

云南人群系统性红斑狼疮与TNF微卫星基因座关系的研究

位于MHC内的肿瘤坏死因子 (tomornecrosisfactor,TNF)基因区域有 5个微卫星基因座a、b、c、d和e,本研究调查了中国云南汉族系统性红斑狼疮 (systemiclupuserythematosus,SLE)与这几个微卫星基因座多态性的关系。本文用荧光标记引物和半自动基因扫描方法对云南地区 97例SLE患者及 79例健康对照者的这 5个微卫星基因座进行了基因分型 ,结果发现 ,SLE患者的TNFa1(P =0 0 2 0 6 ) ,c2 (P =0 0 0 0 0 )等位基因频率较正常人显著增高 ,而TNFa2 (P =0 0 16 3) ,c3(P =0 0 0 6 5 ) ,c4(P =0 0 0 12 ) ,d6 (P =0 0 44 8)等位基因频率则是正常对照较SLE患者高。同时我们还发现在这 5个微卫星基因座中 ,与白种人比较中国人出现了尚未发现的新等位基因。

云南HPV-16型E6、E7基因的突变分析

人乳头瘤病毒(Human papillomavirus,HPV)16型(HPV-16)是引起宫颈癌的一种主要高危型病毒,其2个致癌基因E6和E7的核酸序列变异可能会影响其对宿主细胞的致癌性,已有研究表明其序列突变呈现地域差异性。因此,研究不同地域HPV-16这2个基因的变化情况是宫颈癌流行病学调研的主要内容,也可为研究E6和E7的致癌性积累数据。研究以NCBI登录号为NC_001526.2的HPV-16型病毒的序列为参照,采用Neighbor-joining方法对云南地区74例HPV-16样本的E6、E7的DNA序列构建进化树,结果显示:只有亚洲和欧洲变异亚型,而没有发现非洲1、非洲2、亚-美洲和北美洲这4种变异亚型。DNA序列分析显示:E6的碱基突变以T178G(D25E,59.46%)和T350G(L83V,8.11%)为主,E7的碱基突变主要以A647G(N29S,59.46%)和T846C(同义突变,60.81%)为主。发现E6的新突变有A95G(同义突变,1.35%)和A135G(K11R,1.35%);E7的新突变有C625T(L22F,1.35%)、C627T(同义突变,12.16%)、G689A(G43E,1.35%)、T748G(S63A,1.35%)。此外还发现有一个共突变现象:T178G(D25E,59.46%)-A647G(N29S,59.46%)-T843C(同义突变,21.62%)-T846C(同义突变,60.81%)。

残余牛血清蛋白ELISA检测方法的建立及其初步应用

建立检测疫苗中残余牛血清蛋白(CSP)含量的ELISA检测法。将混合的小牛血清分别免疫鸡和家兔,然后分别提取、纯化鸡卵黄免疫球蛋白(IgY)和兔抗小牛血清抗体IgG。IgY用作包被抗体,IgG用作酶标抗体,四甲基联苯胺(TMB)显色检测残余CSP含量。结果:包被用IgY的最适浓度为25—30μg/mL,用含0.4%明胶的0.01mol/LPBS(pH7.4)溶液作为包被缓冲液,HRPIgG的最适稀释度为1:20001:3000。该方法的检测灵敏度为2.5ng/mL,变异系数为6.3%—9.4%,回收率为90.4%—112.8%,与猪、猴、豚鼠血清皆无交叉反应。10批不含Al(OH)3的疫苗ELISA法与RPHA法(反相间接血凝法)检测结果无显著性差异(P>0.05);而10批含Al(OH)3的疫苗,两种方法检测结果相差很大(P<0.05)。建立的ELISA检测法不受Al(OH)3的影响,简便、特异和灵敏,更适用于检测生物制品中的残余CSP。

甲肝疫苗感染性滴度检测条件的优化

通过实验发现１ ％ ＮＰ４０ 、１ ％ Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ１００ 、１ ％Ｔｗｅｅｎ２０ 等非离子型去垢剂均可以裂解ＨＡＶ 带毒细胞，释放甲肝病毒，且不影响ＨＡＡｇ 的ＥＬＩＳＡ 检测，其中１ ％ ＴｒｉｔｏｎＸ１００ 的效果最好，与常规超声超离方法比较，无明显差异（Ｐ＞００５） ，可用于甲肝疫苗感染性滴度检测的实际工作中。同时经过正交分析，并结合工作实际，认为：采用４ 天龄细胞、不洗细胞面、病毒吸附１ 小时、培养２６ ～２８ 天、中途根据细胞状况换液１ 次、培养到期用１ ％ Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ１００

云南汉族人群CD80基因多态性与宫颈癌发生发展的相关性研究

目的探讨CD80基因多态性与云南汉族人群宫颈癌发生发展的相关性。方法本研究选取云南地区汉族人群癌前病变(CINⅢ期)患者126例,宫颈癌患者450例,健康体检人群500例,采用TaqMan探针基因分型方法对CD80基因中的4个SNP位点rs16829980(A>G)、rs16829984(G>C)、rs41271391(G>T)和rs41271393(C>T)进行基因分型,并研究其等位基因、基因型及所构建的单倍型在CINⅢ期患者、宫颈癌患者和健康对照人群中分布频率的差异。结果 rs16829984(G>C)等位基因C和G在CINⅢ期组和对照组、癌症组和对照组中分布频率的差异具有统计学意义(P=0.026和0.006)。rs16829980(A>G)中等位基因A和G在CINⅢ期组和癌症组中分布频率的差异具有统计学意义(P=0.038)。而rs41271391(G>T)和rs41271393(C>T)的等位基因和基因型在病例组(CINⅢ期组和癌症组)和对照组中的分布频率的差异无统计学意义(P>0.05)。单倍型分析结果显示AGGC单倍型可能是宫颈癌发生的危险因素(OR=1.449;95%CI:1.096-1.915)。结论位于CD80基因启动子区域的SNP位点rs16829984(G>C)等位基因C可能是云南汉族人群宫颈癌发生的保护性因素(OR=0.700;95%CI:0.510-0.960),rs16829980(A>G)等位基因A可能是云南汉族人群CINⅢ期向宫颈癌发展的保护性因素(OR=0.703;95%CI:0.503-0.982)。

顺铂处理后肺癌细胞剪接因子SRSF1 mRNA异构体的变化

目的:观察不同浓度顺铂处理后肺癌细胞中剪接因子(SRSF1)mRNA异构体的变化,并寻找其中发挥主要抗凋亡作用的异构体。方法:使用不同浓度的顺铂处理肺癌细胞系A549和H1299后提取总RNA,设计SRSF1基因不同的引物(F1∶R1、F1∶F2及F2∶R1)进行RT-PCR以检测其mRNA剪接异构体的变化。结果:在A549和H1299细胞中检测到了5种异构体(Isoform-a、Isoform-b、Isoform-d、Isoform-e、Isoform-f),且主要表现为随着顺铂浓度的升高,非编码蛋白的mRNA异构体的比例明显上升,主要是Isoform-d的上升;而编码蛋白的mRNA异构体所占比例明显下降,主要是Isoform-a下降;同时SRSF1的总mRNA水平也是逐渐降低的。结论:在顺铂处理下,肺癌A549和H1299细胞中的SRSF1的转录水平被下调,其mRNA选择性剪接向下调编码蛋白的mRNA异构体的方向转变,造成编码蛋白的mRNA异构体降低的主要原因为Isoform-a,该异构体可能是SRSF1基因发挥抗细胞凋亡作用的主要异构体。

顺铂处理癌细胞后CDC25 mRNA剪接异构体的变化

目的:探讨顺铂(CDDP)对肺癌、宫颈癌细胞和人胚肾细胞CDC25磷酸酶mRNA的选择性剪接的影响。方法:将培养的肺癌A549和H1299细胞,宫颈癌C33A、SiHa、CaSki细胞及人胚肾293FT细胞分为实验组和对照组,实验组细胞用CDDP处理,对照组细胞用DMSO处理,设计CDC25A、CDC25B、CDC25C引物,利用RTPCR检测CDC25 mRNA剪接异构体的表达变化。结果:与对照组细胞比较,随着CDDP浓度的增加,肺癌A549和H1299细胞,宫颈癌C33A、SiHa和CaSki细胞以及人胚肾293FT细胞中CDC25B、CDC25C mRNA剪接异构体比例有明显变化,而CDC25A mRNA剪接异构体变化不明显。结论:CDDP引起细胞DNA损伤时,可发生CDC25mRNA选择性剪接异构体的比例发生变化,这可能与肿瘤药物治疗时的抗性有关。

甲乙型肝炎联合疫苗小鼠的免疫原性

目的 观察甲乙型肝炎联合疫苗的免疫原性。方法 制备甲乙型肝炎联合疫苗,不同配比的甲乙型肝炎联合疫苗于第 0、4、24周 3次接种小鼠,连续测定甲型和乙型肝炎抗体水平;1次免疫后测定小鼠脾脏单个核细胞增殖情况及 CD 和 CD 细胞数量变化情况。结果 3次免疫后,各组甲、乙型肝炎抗体阳转率均达到 100%,且联 + + 4 8合疫苗组早于单价对照组阳转;所诱导的甲、乙型肝炎抗体水平在数值上超过了单价对照,但无显著差异。1次接种后,联合疫苗能有效诱导机体的细胞免疫应答,小鼠脾脏单个核细胞增殖,CD 和 CD 细胞数量增加。结论 所 + + 4 8制备的联合疫苗具有良好的免疫原性。

云南汉族人群CD80基因多态性位点与肺癌的相关性

目的：探讨云南汉族人群中CD80基因中的多态性位点（SNPs）rs16829980（A〉G）、rs16829984（G〉C）、rs41271391（G〉T）及rs41271393（C〉T）与肺癌的相关性。方法：选取云南地区汉族人群肺癌患者288例（病例组）,健康体检人群288例（对照组）,采用Taq Man探针基因分型方法对CD80基因中上述4个SNPs位点进行基因分型,研究其等位基因、基因型及所构建的单倍型在两组人群中的分布差异。结果：rs16829980（A〉G）等位基因A和G、rs41271391（G〉T）等位基因G和T、rs41271393（C〉T）等位基因C和T在病例组和对照组中的分布频率的差异具有统计学意义（P=0.018,0.015,0.015）,单倍型分析结果显示GGTT单倍型是云南汉族人群肺癌发生的保护性因素（OR=0.723;95%CI：0.555~0.941）。结论：CD80基因SNPs位点rs16829980（A〉G）中等位基因A、rs41271391（G〉T）中等位基因G以及rs41271393（C〉T）的等位基因C可能是云南汉族人群肺癌发生的危险因素,GGTT单倍型可能是云南汉族人群肺癌发生的保护性因素。

顺铂处理下肺癌细胞中剪接因子SRSF2 mRNA异构体的变化

目的:分析不同浓度顺铂(CDDP)处理后肺癌细胞中剪接因子2(SRSF2)mRNA异构体及蛋白水平的变化及机制。方法:分别使用8、16、24、32、40、48及56μmol/L的CDDP处理肺癌细胞系A549和12、24、36、48、60、72及84μmol/L的CDDP处理肺癌细胞系H1299为实验组,同时设立实验组最高浓度CDDP浓度组等体积的DMSO处理的两种细胞的对照组;提取处理后细胞的总RNA,设计SRSF2基因不同的引物(F1∶R1,F2∶F2,F2∶R1),RT-PCR检测mRNA剪接异构体的变化;采用Western-blot检测不同浓度CDDP处理后A549细胞中SRSF2蛋白的表达。结果:在A549和H1299细胞中检测到了6种异构体(a、b、c、d、e、f),且随着处理CDDP浓度的增加,非编码蛋白的mRNA异构体的比例明显上升,主要是Isoform-b和Isoform-e的上升;而编码蛋白的mRNA异构体所占比例明显下降,主要是Isoform-d的下降;同时处理后两种细胞SRSF2的总mRNA水平也逐渐降低,但SRSF2蛋白水平则逐渐升高。结论:在CDDP处理的肺癌细胞A549和H1299中,SRSF2蛋白水平被上调,这种上调可能被SRSF2通过向自身mRNA选择性剪接上调非编码蛋白和下调编码蛋白的mRNA异构体的转录水平来调节。

建立不同民族永生细胞株质量控制方法的探讨

目的以建立普米族、独龙族和怒族永生细胞为基础,探讨EB病毒转化细胞、细胞培养、冻存、复苏以及支原体检测等建立永生细胞株的技术要点及质量检测方法。方法采用EB病毒转化技术建立3个民族永生细胞株;培养法和PCR法对细胞株进行支原体污染检测;染色体G显带及核型分析细胞株的遗传稳定性。结果成功建立了3个民族B淋巴细胞永生细胞株,转化率分别为98%、86%和76%。对已建株保存的3个民族的永生细胞进行复苏培养,复苏成活率为100%。支原体污染检测均为阴性。染色体计数和G带分析显示,细胞株经早期传代培养后,仍然保持二倍体特征,未发现染色体结构畸变。结论本研究中传代培养、细胞冻存、细胞复苏和支原体污染防范等一整套技术过程是满足建库要求的。同时为大规模永生细胞库的建立和进行相应的质量监测提供了科学的依据。另外,本研究还对一些影响转化的因素和可能的机理进行了探讨。

中国海南黎族群体HLA-DRB1、DQA1、DQB1基因多态性研究

目的了解海南黎族群体HLA-DRB1、DQA1、DQB1基因的遗传多态性。方法应用PCR- SSP方法对随机抽取的94名海南黎族无血缘关系的健康个体进行HLA-DRB1、DQA1、DQB1基因分型。结果鉴定了海南黎族群体HLA-DRB1位点的16种等位基因,DQA1位点的10种等位基因,DQB1位点的19种等位基因,包括了DR、DQ位点目前已知的全部血清学特异性,3个位点的基因型分布均符合Hardy-Weinberg平衡(P>0．5)。结论提供了一套比较完整准确的海南黎族群体DRB1、DQA1、DQB1等位基因的基因频率和连锁不平衡参数。对群体遗传和疾病关联研究具有参考意义。

顺铂处理后几种癌细胞中Bim基因mRNA异构体的变化

目的:探讨不同浓度顺铂处理6种肿瘤细胞后,细胞中Bim基因mRNA选择性剪接异构体的表达及变化规律。方法:用梯度浓度的顺铂处理肺癌细胞(A549、H1299)、人胚肾细胞(293FT)、宫颈癌细胞(SiHa、CaSki、C33A),提取各细胞的总RNA,用半定量RT-PCR、琼脂糖凝胶电泳及凝胶图像分析软件检测分析Bim基因mRNA异构体的组成比例和相对水平的变化。结果:用顺铂处理后,在6种细胞中都检测到了BimEL、BimL、BimS、Bimα2、Bimα4和Bimβ7共6种mRNA异构体;随着顺铂处理浓度的增高,各细胞中BimL异构体所占比例和表达水平都有明显的增加。结论:顺铂可能通过转录和mRNA选择性剪接两种机制上调Bim基因的表达,从而促进细胞凋亡;且BimL是主要被上调的异构体。