面向新医科的临床微生物学检验课程改革与实践

采用跨学院合作培养模式,将《疾病学基础·医学微生物学》《临床微生物学检验》教材中的病原体相关检测技术部分教案进行整合,引入校企联合教学模式,开发与时俱进的系统性临床微生物学检验课程,结合“全健康”理念,发挥学科特色组织社会实践活动,将立德树人的目标贯穿于教育全过程中,培养面向新医科和时代需要的医学技术创新人才。

医学检验技术专业本科生班导师工作机制的实践探索

目的班导师工作机制是以全面提升学生综合素质为核心,建立健全全员育人、全过程育人和全方位育人的长效机制。方法采用问卷调查的方式对本科生最近一学年的情况展开调查,调查问卷题目包括被调查者对班导师和班导师制度的了解情况,被调查者对班导师制度的满意度,对班导师师德、专业素质和科研水平、指导方法和形式的满意度,对班导师的指导方法和形式的满意度,班导师应该具备哪些品质,希望班导师提供哪些方面的帮助等。统计实施班导师制度近6年本科生在大创项目立项、SCI论文发表及科创大赛获奖情况。结果在校本科生对班导师制度的整体了解程度结果显示,15.69%的学生完全了解,51.00%的学生比较了解,23.54%的学生了解一点,9.77%的学生完全不了解。在校本科生对班导师制度的整体满意度结果显示,44.81%的学生很满意,40.91%的学生满意,14.29%的学生基本满意,未收到表示不满意的问卷。对班导师师德、专业素质和科研水平、指导方法和形式的比例分别为65.58%、59.74%、51.95%,满意的分别为28.57%、32.47%、37.01%,基本满意的分别为5.84%、7.79%、11.04%,均未收到表示不满意的问卷。在校本科生认为班导师应该具备沟通能力、工作能力、丰富的阅历的比例分别为92.8%、86.3%、84.2%。在校本科生希望班导师介绍专业情况、培养专业兴趣、指导实习的比例分别为84.2%、74.8%和70.5%。近6年来本校医学检验技术学院本科生在“国家级大学生创新创业训练计划”立项上获得国家级立项8项、上海市级立项21项、上海交大校级立项52项,立项数呈逐年上升趋势;本科生以第一作者发表SCI论文共10篇;应届毕业生获得上海市和上海交通大学优秀毕业生人数呈逐年上升趋势。结论本科生班导师工作机制在思想引领、专业导航、科研启发、创新激励等方面发挥积极的促进作用。不断完善班导师制度,将会在打造检验医学专业特色育人体系、培养卓越医学检验技术人才方面发挥重要作用。

校企联合培养模式在检验医学教学中的实践

在检验医学课程的开展中,以医学院教师的理论教学为依托,引入校企联合培养模式,在专业课程的开展中加入企业教师进课堂和专业学生入企业,结合免疫读书报告会、实验操作技能大赛、大学生创新计划和毕业论文课题等由企业技术教师参与作为技术指导、评审监督、奖学金支持的项目,追踪近5年各项目的实践成绩,评估校企联合培养模式对于培养新时代卓越临床检验工作者的价值。校企联合培养模式能使学生的专业水平、科学素养和就业竞争力全面提升,为培养卓越的医学创新技术人才做贡献。

肝脂酶启动子250 G/A多态性与血脂的关系

目的探讨各项血脂水平与肝脂酶(HL)启动子250 G/A基因多态性的关系。方法运用聚合酶链反应-限制性内切酶片段长度多态性技术(PCR-RFLP),对112例三酰甘油(TG)正常者和103例高TG者的HL启动子250 G/A基因多态性进行研究。结果发现HL启动子250 AA等位基因频率在高TG组为0.447 7明显高于正常TG组(0.263 4,P<0.05)。在总研究组发现AA型的TG、载脂蛋白B(ApoB)浓度明显高于GG型和GA型,而载脂蛋白A l(ApoA l)则明显降低(P<0.05)。按性别分层后发现AA型女性和男性的TG、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)的浓度明显高于非AA型同性(P<0.05),而高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、ApoA l浓度分别低于非AA型的同性(P<0.05)。经Logistic回归分析显示年龄、LDL-C、ApoB、AA型是危险因子,而HDL-C是保护因子。结论HL启动子250 G/A多态性与高TG血症的发生相关,并可影响血浆脂类的代谢,可能是高TG所致疾病的危险因素。

绿色荧光蛋白及其应用

源于水母 (Aequoreavietoria)等海洋无脊椎动物的绿色荧光蛋白 (greenfluorescentprotein ,GFP)是一种极具潜力的标记物。其内源荧光基团在受到紫外光或蓝光激发时可高效发射清晰可见的绿光 ,且荧光性质稳定 ,与现有的标记物相比 ,GFP具有无可比拟的优势。因而自GFP被发现以来 ,一直作为一个监测完整细胞和组织内基因表达及蛋白定位的理想标记。广泛应用于转基因动物的研究、融合标记、基因治疗、蛋白在活细胞内功能定位及迁移变化 ,病原菌侵入活细胞的分子过程等。

肝脂酶基因启动子多态性与连锁不平衡分析

目的:探讨肝脂酶(hepatic lipase,HL)基因启动子-250G/A、-514C/T、-710T/C和-763A/G4个位点单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphisms,SNPs)的分布特征及连锁不平衡关系。方法:应用聚合酶链反应-限制性内切酶片段长度多态性技术,对112名三酰甘油(triglyceride,TG)正常者、103例高三酰甘油血症(hypertriglyceri-demics,HTG)患者的HL基因型和等位基因的分布频率进行分析,运用群体数理遗传学方法分析HL启动子4个基因位点SNP的遗传平衡吻合度及相互间连锁不平衡关系。结果:在HTG组中,-250A和-514T的等位基因频率及基因型频率均显著大于TG正常组(P<0.05);-710T/C位点仅有基因型频率在两组中有显著性差异(P<0.05),而等位基因频率无显著性差异(P>0.05);-763A/G位点的基因型频率及等位基因频率在两组中则均无差异(P>0.05)。4个SNP相互间均呈强连锁不平衡。对启动子区3个SNP位点两两组合的单倍体型频率分析表明,在HTG和TG正常者中也存在显著差异(P<0.05)。在单倍体型分析中,HTG者增加最显著的是HL-250A/-514T/-710C单倍体型。结论:HL启动子的3个SNP及单倍体型与HTG间存在显著相关性,本研究提供了HL基因启动子多态性的群体遗传学资料。

聚合酶链反应检测沙眼衣原体和解脲脲原体

应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术对１５６例非淋病性尿道炎（ＮＧＵ）和１２８例淋病性尿道炎（ＧＵ）患者进行沙眼衣原体（Ｃｔ）和解脲脲原体（Ｕｕ）检测，其中ＮＧＵ中Ｃｔ、Ｕｕ的阳性率分别为２６．３％、１７．９％，Ｃｔ、Ｕｕ双阳性率为７．７％；ＧＵ患者Ｃｔ、Ｕｕ的阳性率分别为４３．８％、３３．６％，Ｃｔ、Ｕｕ双阳性率的为１６．４％。

血管内皮生长因子基因多态性与脑梗死的关系

目的:研究血管内皮生长因子(VEGF)基因rs1570360、rs3025039和rs699947与脑梗死是否存在相关性。方法:采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)技术,对147例急性脑梗死患者(脑梗死组)和131例非急性脑梗死对照者(对照组)VEGF基因rs1570360、rs3025039和rs699947的多态性进行分析。结果:脑梗死组的三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、血糖、血压(收缩压、舒张压)明显高于对照组,而高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)则明显降低(P均<0.05)。脑梗死组患者VEGF rs1570360、rs3025039和rs699947基因型频率和等位基因频率与对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。脑梗死危险因素的多元逐步Logistic回归分析显示,TG、血糖和收缩压是脑梗死的独立危险因素。然而,脑梗死组患者VEGF rs1570360、rs3025039和rs699947的单倍型ACC(5.85%)明显低于对照组(14.22%)。结论:rs1570360、rs3025039和rs699947的单倍型ACC与脑梗死的发病可能有一定的关系。

导数分光光度法测定血清总胆红素

本文介绍导数分光光度法消除Hb和胡萝卜素的干扰,直接测定血清总胆红素。本法的批间和批内的CV值分别是2.01%、0.867%。求导时选择了三种△λ(2nm、4nm、6nm),发现△λ=6nm所得结果最好。本法标准曲线的线性范围是0.4676～119.7μmol/L,r=0.9949。导数法和改良J-G法比较p>0.05,无显著性差异。

PCR快速检测沙眼衣原体

本文根据Ｖｏｇｅｌｓ等的序列建立了ＰＣＲ快速检测生殖泌尿系统标本ＣＴ，经４５例ＮＧＵ检测ＣＴ的阳性率为４６．７％，７２例ＧＵ的ＣＴ阳性率为３７．５％。本法快速、特异、敏感，为临床作为ＳＴＤ常规检测提供方便。

沙眼衣原体临床诊断技术的进展

沙眼衣原体临床诊断技术的进展上海第二医科大学瑞金医院检验系（２０００２５）倪培华，巫向前衣原体的家族目前发现有３个种：沙眼衣原体（ｃｈｌａｍｙｄｉａＴｒａｃｈｏｍａｔｉｓ，ＣＴ）鹦鹉热衣原体（ＣｈｌａｍｙｄｉａＰｓｉｔｔａｃｉ）和肺炎衣原体（Ｃｈｌａ...

变性梯度凝胶电泳和单链构象多态性分析检测肺癌p53基因8号外显子突变

目的：检测ｐ５３基因８号外显子突变。方法：分别采用变性梯度凝胶电泳（ＤＧＧＥ）和单链构象多态性分析（ＳＳＣＰ），对３５例肺癌病人手术切除组织的ｐ５３基因８号外显子（Ｅｘｏｎ８）进行突变检测。结果：采用ＤＧＧＥ检测的突变率为２０％，而ＳＳＣＰ检测的突变率为１１％。ｐ５３基因Ｅｘｏｎ８的总突变率为２３％。结论：ＤＧＧＥ检测ｐ５３基因突变的敏感性高于ＳＳＣＰ。

可疑肺癌患者纤支镜后痰液标本的p53基因突变检测

目的 探讨纤支镜后痰液标本的ｐ５３基因突变检测用于肺癌早期诊断的可行性。方法 采用聚合酶链反应－单链构象多态性分析（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）银染技术，对２９例怀疑为肺癌患者的痰液标本行ｐ５３基因５－８号外显子突变检测。结果８例患者有ｐ５３突变，突变率为２７．６％，其中以６号外显子突变率最高（１７．２％）。ｐ５３突变率明显高于相应细胞学阳性率（Ｐ＜０．０５）。结论 纤支镜后痰标本ｐ５３突变检测对肺癌的早期诊断具有一定价值，可作为肺癌早期诊断的辅助方法之一。

DRAM基因真核表达载体的构建及其表达对HepG_2细胞的作用

目的:构建DRAM全长cDNA的真核表达载体pEGFP-DRAM,观察DRAM在人肝细胞HepG2中的作用。方法:应用RT-PCR技术扩增获得DRAM全长cNDA,克隆扩增产物,经酶切、DNA测序鉴定正确后,构成pEGFP-DRAM的真核表达重组质粒。用脂质体将重组质粒转染入HepG2细胞,在激光共聚焦显微镜(LSCM)下观察DRAM的表达情况,用流式细胞仪检测细胞凋亡、细胞周期和死亡细胞,MTS法检测细胞增殖能力,Westernblot鉴定细胞表达蛋白质的水平,并在透射电子显微镜下观察自噬体。结果:构建完成的真核表达重组质粒pEGFP-DRAM,经DNA测序证实与GenBank中的人DRAM cDNA序列一致。LSCM下可观察到转染DRAM的细胞中有绿色荧光蛋白的表达。流式细胞分析仪检测显示,转染DRAM的HepG2死亡细胞明显增高(P<0.05);G1期细胞百分数则明显减少(P<0.05);MTS法检测结果显示转染DRAM的HepG2细胞增殖力明显增高(P<0.05);Western blot检测到DRAM蛋白表达明显增高;转染pEGFP-N1的HepG2细胞超微结构基本正常,转染DRAM的一些细胞中可见自噬体。结论:本研究成功构建了表达DRAM的真核质粒,并在HepG2细胞中表达,DRAM在肿瘤细胞存在双向效应,既可诱导HepG2细胞发生自噬性死亡,又可促进HepG2细胞增殖。

单链构象多态性分析检测脂蛋白脂酶基因变异

目的:建立聚合酶链反应-单链构象多态性（PCR-SSCP）技术检测脂蛋白脂酶（LPL）基因Hind Ⅲ多态性、Ser447Ter多态性及-93T/G基因突变的方法。方法:5μl Hind Ⅲ多态性或-93T/G基因突变的PCR产物和5μl甲酰胺变性液混匀变性,室温下用8％的聚丙烯酰胺凝胶电泳后银染。5μl Ser447Ter多态性的PCR产物和2μl甲酰胺变性液混匀变性,25℃左右用8％的聚丙烯酷胺凝胶电泳后银染。结果:PCR-SSCP成功检出LPL的Hind Ⅲ多态性、Ser447Ter多态性及-93T/G基因突变,并检出第9内含子50位一个G碱基缺失和启动子区域-85位一个C-T碱基置换即-85C/T。同时PCR-RFLP验证了200例标本的PCR-SSCP检测结果,两种方法检测已知基因变异时的结果完全一致。结论:PCR-SSCP法既能检测已知的LPL基因变异,也可检出未知的LPL基因变异,是临床实验室开展基因诊断的一种简便、有效的方法。

耐碳青霉烯类抗菌药物鲍曼不动杆菌膜蛋白机制研究

目的研究耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌膜蛋白机制并了解其流行型别。方法收集仁济医院、瑞金医院和上海市第六人民医院鲍曼不动杆菌共85株,其中亚胺培南和美罗培南耐药菌49株,敏感菌36株。用细菌基因组回文结构重复序列-聚合酶链反应(REP-PCR)分析其流行型别,PCR扩增检测碳青霉烯类水解酶及金属酶,对阳性扩增菌株进行DNA测序分析,同时用超声波和超速离心法提取细菌的膜孔蛋白并用十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)进行分析。结果49株耐亚胺培南和美罗培南鲍曼不动杆菌中,REP-PCR分析结果以A型为主,与敏感菌株存在很大差异;耐药菌株中oxa-51均为阳性,45株为oxa-23阳性;36株敏感菌株中检测到1株oxa-58阳性,29株为oxa-51阳性;金属酶(VIM和IMP-1/4型)均阴性;膜蛋白分析显示,在36株耐药株中38 000附近条带缺失,而在30株敏感株中有17株在相应位置处表达该条带。结论耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌主要以A型流行,产oxa-23水解酶和38 000附近膜孔蛋白条带缺失可能是其主要耐药机制。

抗粘附治疗与人抗体研究进展

粘附分子介导的细胞粘附是基本的生命现象 ,是许多重要生理病理过程的基础 ;抗粘附治疗是新兴的一种治疗方法 ,但单抗鼠源性限制其应用、人抗体研究的突破为抗粘附治疗的临床应用铺平了道路。