巢式MSP检测砷剂诱导人多发性骨髓瘤U266细胞系p16基因去甲基化及转录

本研究探讨用高灵敏度的DNA甲基化检测方法及DNA克隆测序分析法检测三氧化二砷(As2O3)的去甲基化作用,并对其可能的去甲基化作用机制进行分析。采用巢式甲基特异性PCR法(nested-methylation specificPCR,n-MSP)、DNA克隆测序分析法检测As2O3作用前后U266细胞株p16基因甲基化状态,应用RT-PCR检测p16、DNA甲基转移酶1(DNMT1)、DNMT3A、DNMT3B基因mRNA的表达,以生长曲线、MTT法、集落形成实验检测As2O3对骨髓瘤细胞生长和增殖的抑制作用。利用流式细胞仪DNA含量分析法探讨As2O3对多发性骨髓瘤细胞系U266周期的影响。结果表明:①未处理组U266细胞基因组DNA的胞嘧啶保持不变,而经As2O3作用的U266细胞基因组DNA的胞嘧啶均已变为胸腺嘧啶,这说明U266细胞存在p16基因甲基化,As2O3作用后p16基因异常甲基化的现象被逆转;②未处理组细胞p16基因不表达,As2O3作用72小时后p16基因表达增强,0.5μmol/L组、1.0μmol/组和2.0μmol/组p16基因表达阳性条带灰度值与β-肌动蛋白比值分别为(0.22±0.10)、(0.59±0.11)、(0.68±0.09),阳性对照灰度比值为(0.77±0.13),差异有非常显著的统计学意义(P<0.01);③与未处理组相比,As2O3作用72小时后甲基转移酶(DNMT)1、DNMT3A、DNMT3B的表达下降并呈浓度依赖性;④与对照组相比,3组不同浓度As2O3均能明显抑制骨髓瘤细胞生长,G0-G1期细胞增加。结论:As2O3可能通过抑制甲基转移酶(DNMT1)、DNMT3A、DNMT3B和(或)直接对p16基因去甲基化,使p16基因表达上调,恢复其活性,从而实现其对细胞周期的调控功能,将细胞阻滞于G0-G1期,抑制骨髓瘤细胞的增长。

XML及相关安全研究进展

在介绍了XML的基本知识的基础上,着重讨论了与之相关的安全技术,包括XML文档的加密、数字签字、访问控制以及XML密钥管理等。指出对XML安全领域的研究具有非常重要的意义。

藤本月季嫩枝扦插技术

为了满足绿化市场需求,提高藤本月季扦插育苗繁殖速度,结合近两年的生产实践,总结了藤本月季剪插条与插穗、插穗处理与扦插、罩网、喷水撤网及苗期管理等技术。

白蜡蚧在沈阳园林植物上的发生规律和防治技术

白蜡蚧一直是危害绿化工程的顽疾,以成虫、若虫在枝条上刺吸危害,造成树势衰弱,生长缓慢,甚至枝条枯死,降低了绿化植物的观赏效果。该虫在沈阳市发生点位很普遍,发生程度也很重。本文根据实践经验总结了其发生规律,并提出防治方法。

林业高职院校学生工匠精神的培养

工匠精神为高等职业教育人才培养指明了培养方向。工匠精神是从业者对产品的设计、制作和生产等整个过程中精雕细琢、精益求精的工作状态与理念。国家需要工匠精神,林业高职院校需要工匠精神,林业高职院校的学生更需要工匠精神,把工匠精神融入到专业人才培养方案设计、课程体系构建,课程教学实施、实践教学、校园文化建设、师资队伍建设等。

巢式MSP法检测急性白血病患者p16基因甲基化状态

为了研究p16基因甲基化和缺失与急性白血病发病的关系,探讨其在成人急性白血病发生发展中的生物学意义,应用巢式甲基化特异性聚合酶链反应(nested methylation specific polymerase chain reaction,n-MSP)分析了82例各种亚型的急性白血病患者在初诊或复发不同阶段p16基因的甲基化和缺失状态,并且在基因组硫化修饰PCR后克隆测序验证结果的准确性。结果表明:82例急性白血病(AL)患者p16基因甲基化的出现率为39.0%,其中急性髓系白血病(AML)患者为41.4%,24例急性淋巴细胞白血病(ALL)患者为33.3%;初治AL患者为36.6%,而复发患者则为54.5%。82例AL患者中有6例p16基因缺失,缺失率为7.3%,在AML、ALL患者中分别为1.7%和20.8%。16例健康自愿者或非恶性血液病患者p16基因则未发生甲基化或缺失。结论:在成人急性白血病的发生发展中,p16基因甲基化比p16基因纯合缺失更具有意义;p16基因表达异常与成人急性白血病的发生发展密切相关。

半巢式甲基化特异性聚合酶链反应对肿瘤细胞株p15基因甲基化或缺失状态的检测

本研究分析多种恶性肿瘤细胞株的p15基因甲基化或缺失状态,阐明p15基因甲基化或缺失在肿瘤发生发展中的作用。运用半巢式甲基化特异性聚合酶链反应(hemi-nested methylation specific polymerase chain reaction,hn-MSP)分析20种恶性肿瘤细胞株和正常人单个核细胞或细胞株的p15基因甲基化及缺失状态,并评价该方法的敏感性和特异性。结果表明:在所有的细胞中,Molt-4、Raji、KG1、CA46、SW480、NCE、SMMC-7221、NCI-H446细胞为部分甲基化,hn-MSP检测p15基因甲基化敏感性可达到1×10-5。正常人单个核细胞、HL-60、HeLa、HepG2、293、SGC7901、U266、CEM细胞则为p15非甲基化,而K562、NB4、GMC、Jurkat似乎显现p15基因缺失或突变。结论:p15基因甲基化或缺失在多种肿瘤,特别在恶性血液病中有较高的发生率,且对疾病的进展及预后有密切的关系,hn-MSP具有较高的敏感性和特异性,值得在临床推广应用。

表没食子儿茶素没食子酸酯对人急性单核细胞白血病细胞株U937的作用及机制研究

本研究探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对人急性单核细胞白血病细胞株U937的作用。采用磺酰罗丹明B(SRB)法检测EGCG对U937细胞增殖的影响;采用流式细胞术检测EGCG对U937细胞周期的影响;采用RT-PCR、Westren blot法分别检测p16mRNA、蛋白的表达;采用nMSP法检测U937细胞p16甲基化状态变化;采用RT-PCR法检测DNA甲基转移酶1(DNMT1)、DNMT3A、DNMT3B基因mRNA的表达。结果表明:EGCG可以剂量依赖性和时间依赖性地抑制U937细胞增殖(r=0.71),且呈剂量依赖性诱导G0/G1期细胞阻滞;EGCG可以呈剂量依赖性上调U937细胞p16mRNA、蛋白的表达;EGCG可以呈剂量依赖性减弱U937细胞p16甲基化程度;EGCG可以剂量依赖性地下调U937细胞DNMT3A、DNMT3B mRNA表达,而对DNMT1mRNA的表达无影响。结论:EGCG在体外通过抑制DNMT3A、DNMT3B和(或)直接使异常高甲基化的p16启动子CpG岛DNA去甲基化,恢复p16mRNA水平和蛋白水平的表达,调控U937细胞阻滞于G0/G1期,抑制U937细胞的增长。

恶性血液病细胞系分泌型卷曲相关蛋白基因启动子CpG岛甲基化状态的检测及意义

为了研究分泌型卷曲相关蛋白(secreted frizzled-related protein,SFRP)家族基因启动子CpG岛的甲基化状态,探讨SFRP基因启动子区CpG岛的异常甲基化状态与恶性血液病发病机制的可能联系,采用甲基化特异性PCR(Methylation-specific PCR,MSP)的方法检测了9种恶性血液病细胞系及正常人外周血单个核细胞中SFRP基因启动子区的甲基化状态。结果显示:9种恶性血液病细胞系中SFRP1、2基因启动子区均呈高甲基化状态,CA46、HL60和U937细胞中的SFRP4基因以及U266细胞中的SFRP5基因启动子区呈部分甲基化状态,其他细胞系SFRP4、5基因启动子均呈完全甲基化状态。正常人外周血单个核细胞中SFRP1、2、4、5基因启动子区均呈非甲基化状态。结论:SFRP基因启动子区异常甲基化模式与恶性血液病的发生密切相关。SFRP基因启动子区的甲基化状态有可能成为恶性血液病新的分子诊断标记物。

比利时红枝馒头柳高接快繁技术

比利时红枝馒头柳,枝条粗壮,树冠呈馒头形,枝条表皮鲜红,冬季与白雪、常绿树映衬,格外美丽。以旱柳为砧木,在2～2.5m处,用劈接、插皮接、嵌芽接、T芽接方法进行高接,2年时间即可长成较大的树冠。

原发性不孕患者早期妊娠合并卵巢囊肿蒂扭转的术后护理

总结10例原发性不孕患者早期妊娠合并卵巢囊肿蒂扭转的术后护理。护理重点为做好心理护理、体位与活动指导,加强病情观察,预防并发症及流产,做好疼痛护理、用药护理及出院指导,以确保患者身体康复及胚胎的发育。10例患者术后恢复良好,6例已足月顺利分娩,4例还在妊娠期,无明显不适感。

MicroRNA-193b在初治白血病患者的表达及意义

本研究旨在检测白血病患者microRNA-193b(miR-193b)的表达水平并探讨其意义。采用实时荧光定量PCR方法检测初治白血病患者miR-193b的相对表达水平,分析其在不同类型白血病中的表达差异及其与部分实验室指标和化疗反应的关系。结果表明:慢性髓系白血病(CML)和急性早幼粒细胞白血病(APL)患者与正常对照组miR-193b的表达相比,其差异均无统计学意义(P>0.05);AML(除外APL)、ALL患者miR-193b的表达均低于正常对照组,其差异有统计学意义(P<0.05)。在AML(除外APL)患者中,miR-193b表达水平与患者外周血白细胞计数及细胞CD34表达无明显相关,但是与患者的治疗反应呈负相关(P<0.05)。结论:AML(除外APL)患者中miR-193b表达水平可能与AML细胞的化疗敏感性相关。miR-193b可能是AML(除外APL)治疗的一个新靶点。

山丁子高接寒富苹果技术

东北、内蒙古山区分布有近千万株野生山丁子大树,如能高接果个大、品质好、耐贮藏的寒富苹果,可在短时间内获取较高的经济效益。选择连片的山丁子树,按2.5-3.0 m×3-4 m株行距留株,按主干疏层形、纺锤形整形留枝,去除多余枝,用劈接、插皮接法进行硬枝嫁接,接后对接穗保湿,应及时进行抹砧萌、解绑,并防治害虫。

旅游景区公示语翻译规范化研究

旅游景区公示语翻译在旅游翻译中起着举足轻重的作用。本文指出我国公示语英译的研究现状,介绍了目的论以及旅游景区公示语的功能分类,从目的论的角度探讨了公示语的英译问题,并提出相应的翻译策略,有助于旅游景区翻译的规范化。

功能翻译理论视野下的旅游外宣文本研究

中国即将成为世界上最大的旅游目的地国。旅游外宣文本在提供信息,吸引潜在游客,促进中国旅游业的发展和文化的传播等方面发挥着重要作用。本文通过对旅游外宣文本的类型和功能的分析,认为功能翻译理论在一定程度上对旅游翻译实践具有积极的指导意义。

绍兴市人口生育率现状及对策研究

生育率是反映妇女生育强度的重要指标,它是影响人口增长速度的核心因素,同时也是制定人口计划和进行人口预测的重要指标。从绍兴人口发展形势较为严峻的实际出发,旨在厘清当前绍兴市人口出生数及自然增长率持续降低、总和生育率下降明显、生育二孩及三孩比例不高等主要原因,并分析持续低生育率带来的对城市后续发展支撑不足、产业结构优化调整不利、养老负担日益突出等不利影响,针对性地提出倡导新型婚育观、转变年轻一代“不想生育”观念,切实降低婚育成本、消除育龄家庭“不敢生育”顾虑,打造宜居宜业环境、提高年轻人留绍归属感等对策建议,为提升绍兴人口生育率,发挥人口对绍兴经济社会发展的动能作用贡献力量。

交际教学法在商务英语教学中的运用

商务英语是一种专门用途英语,它有其自身的特点,有别于普通英语教学。本文通过简要介绍交际法的理论核心及其特征,分析商务英语教学的目标,内容,教学对象和教学特征,并结合笔者在商务英语教学中的体验,谈谈交际法在商务英语教学中的运用。