肝细胞生长因子诱导小鼠胚胎干细胞分化的实验研究

目的探讨肝细胞生长因子(HGF)诱导小鼠胚胎干细胞(ESC)体外定向分化为肝细胞的能力.方法对ESC体外悬浮培养5～7天形成的拟胚体,观察ESC自主分化、HGF诱导分化的情况.观察和检测经诱导4周的细胞的HE染色,糖原染色,尿素氮及甘油三酯合成,心肌MHC、白蛋白、AFP、CK18的表达,以及吲哚氰绿(ICG)染色情况.结果 ESC自主分化难以控制.HGF可促进ESC向内胚层进一步分化,但更可能诱导其向心肌分化.表达白蛋白、AFP、CK18、ICG和FDA染色阳性.结论 HGF可诱导ESC分化出肝细胞,但HGF的单一作用能力有限,提示肝细胞的诱导分化可能需要多种因素共同作用.

Leflunomide对结肠癌细胞增殖及凋亡的影响

目的:检测Leflunomide对结肠癌细胞增殖和诱导凋亡作用。方法:实验采用结肠癌细胞株SW260,与不同浓度的Leflunomide药物(0、5、10、20、40、80μg/ml)共同培养,以MTT方法和流式细胞仪技术检测细胞的增殖状态,用TUNEL染色和流式细胞仪技术检测细胞的凋亡。结果:Leflunomide在对结肠癌细胞增殖具有双重影响,即在低浓度下(5μg/ml和10μg/ml)有轻度的促进结肠癌细胞SW620增殖的作用,而提高浓度后(>40μg/ml)则表现为明显的抑制细胞的增殖作用,并随着剂量增加和作用时间延长,抑制作用更为明显,即存在着时相性和量-效依赖性。结论:Leflunomide可抑制结肠癌细胞增殖和诱导凋亡。可能对结肠癌病人有潜在的治疗作用。

肾绞痛导致心电图变化的病例分析

目的探讨肾绞痛导致心电图异常变化。方法对464例肾与输尿管绞痛病例,行发作时、症状缓解及治疗后心电图检查进行回顾性分析。结果 464例中有典型心电图变化者90例(19.33%)。结论当肾绞痛时机体处于一种应激状态,产生多种复杂、综合因素,引起心脏、大血管循环系统、神经-体液调节系统、脑部多种中枢系统的变化,是导致心电图变化的直接而关键的原因。

PCR技术克隆SD大鼠全长长细胞内段形式瘦素受体基因0BRBcDNA

目的 探讨瘦素作用机制、了解瘦素及瘦素受体对代谢的影响，为下一步实验，表达重组体的构建提供了方便。方法 以逆转录多聚酶链扩增(RT-PCR)克隆长细胞内段形式瘦素受体(OBRb)基因cDNA。结果 成功克隆长细胞内段形式瘦素受体(OBRb)基因cDNA。为进一步研究瘦素与瘦素的生理作用和作用机制的系列研究打下实验基础。

小鼠慢性肝损伤对尿苷二磷酸葡萄糖苷酰转移酶1A1 mRNA表达的影响

目的探讨慢性肝损伤对小鼠尿苷二磷酸葡萄糖苷酰转移酶(UGT)1A1mRNA表达的影响。方法通过四氯化碳(CCl4)灌胃建立小鼠慢性肝损伤模型,采用33只雄性昆明鼠,随机分为三组:A组(正常对照),B组(实验组,以10%CCl4花生油溶液0.1ml/10g灌胃/每3天,持续30天),C组(实验组,以10%CCl4花生油溶液0.1ml/10g灌胃,每3天,持续60天)。观察肝功能改变,肝脏形态变化,并以逆转录—聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测各组肝脏UGT1A1mRNA表达的差异。结果各组间UGT1A1mRNA表达有显著差异(P<0.05),实验组UGT1A1mRNA表达比正常组降低,且肝损伤程度越严重表达越低。结论CCl4所致慢性肝损伤中能降低肝脏UGT1A1mRNA的表达。

骨髓间充质干细胞诱导分化为心肌细胞及其内向整流钾电流特征

【目的】体外诱导大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)分化为心肌细胞并探讨其内向整流钾电流(IK1)特征。【方法】采用密度梯度离心法和贴壁培养法分离、纯化大鼠骨髓MSCs,在第3代细胞以5-氮杂胞苷进行诱导,用免疫细胞化学染色和RT-PCR方法鉴定诱导细胞,并采用全细胞膜片钳技术检测IK1表达。【结果】诱导后细胞体积较诱导前增大,呈长梭形。14d后细胞之间出现连接,排列方向渐趋一致。免疫细胞化学染色显示Desmin、α-sarcomericactin和心肌特异性cTnI呈阳性反应,RT-PCR结果表明诱导细胞有心肌β肌球蛋白重链表达。诱导细胞IK1表达呈明显的不均一性,部分细胞IK1与正常心室肌细胞相似,但IK1电流密度总体上低于正常心室肌细胞。【结论】5-氮杂胞苷能在体外诱导MSCs向心肌细胞分化;诱导细胞IK1表达不均一性提示可能有致心律失常潜能。

骨髓间质干细胞体外诱导分化为心肌样细胞的实验研究

目的:体外培养并诱导大鼠骨髓间质干细胞(MSCs)分化为心肌细胞。方法:采用密度梯度离心法和贴壁培养法分离、纯化大鼠骨髓MSCs,在第3代细胞以5-氮杂胞苷进行诱导,用免疫细胞化学和RT-PCR方法对诱导细胞进行鉴定。结果:诱导后细胞体积较诱导前增大,而且更加细长,呈长梭形。14d后细胞之间出现连接,排列方向渐趋一致。免疫细胞化学染色显示诱导后部分细胞结蛋白(desmin)、横纹肌肌动蛋白(α-sarcomericactin)和心肌特异性肌钙蛋白(troponinI)呈阳性反应。RT-PCR结果表明诱导细胞有心肌β肌球蛋白重链表达。结论:5-氮杂胞苷能在体外诱导MSCs向心肌细胞分化。

阳离子脂质体Lipofectamine2000对人胰腺癌Capan-2细胞的毒性作用

目的探讨阳离子脂质体Lipofectamine2000(Lipo)在一定浓度下对细胞毒性的作用机制。方法应用一定毒性浓度的Lipo作用于胰腺癌Capan-2细胞,利用细胞直接记数法和流式细胞术检测其对Capan-2细胞生长、细胞凋亡和周期的影响。结果Lipo与siRNA的浓度均影响转染率的高低。在2ml转染体积中,Lipo在5μl的浓度下,使Capan-2细胞生长明显减慢,以第3天后更加明显(P<0.001)。随着转染细胞按常规培养的时间延长,早期凋亡细胞明显增多(P<0.05),活性细胞明显减少(P<0.01),而损伤细胞和死亡细胞明显增多(P<0.001),以48h后更明显;G0～G1期细胞明显增多(P<0.05),G2-M期细胞明显减少(P<0.01),S期细胞明显减少(P<0.01),晚期凋亡细胞减少(P<0.05)。结论在一定浓度下,Lipo可影响细胞的生长、早期凋亡和细胞周期分布,因此,利用Lipo在不同的细胞系进行基因转染过程中Lipo应进行浓度梯度筛选。

大鼠骨髓间充质干细胞生长特性和表面标志与培养基中胎牛血清浓度的关系

目的:讨两种浓度胎牛血清培养的不同传代次数的骨髓间充质干细胞探在生长特性及表面标志方面的差异性。方法:实验于2004年在中山大学附属第二医院林百欣医学研究中心进行。取健康Wistar大鼠5只,采用密度梯度离心法分离大鼠骨髓间充质干细胞,然后分别以体积分数为0.1和0.15的胎牛血清的L-DMEM培养基进行贴壁培养,观察原代和传代细胞的形态特征、生长曲线及表面标志CD45,CD11b,CD29和CD44的表达(骨髓间充质干细胞表达CD29和CD44,造血前体细胞表达CD45和CD11b)。结果:①两种浓度胎牛血清培养细胞均能获得贴壁梭形骨髓间充质干细胞,但体积分数为0.15的胎牛血清原代培养的细胞分裂增殖较快,集落融合较早,传代时间较短(平均10d)。②体积分数为0.1的胎牛血清传代培养第1,2代细胞均质性相对较差,CD45阳性率分别为23.4%,15.4%,CD11b阳性率分别为16.6%,10.3%,高于体积分数为0.15的胎牛血清培养组(P<0.05),至第3代后两组已无差异,CD45和CD11b阳性率均小于5%,而CD29和CD44阳性率均大于95%。③两组的骨髓间充质干细胞生长曲线相似,但体积分数为0.15的胎牛血清培养的骨髓间充质干细胞对数生长期峰值出现较早,为第6天,而体积分数为0.1的胎牛血清培养组为第7天。结论:体积分数为0.1和0.15的胎牛血清培养的骨髓间充质干细胞在生长特性和表面标志方面存在差异。使用体积分数为0.1的胎牛血清已可满足骨髓间充质干细胞的分离纯化和培养扩增,但要在短期内获得较纯的骨髓间充质干细胞,使用体积分数为0.15胎牛血清优于体积分数为0.1胎牛血清。

成人腹股沟区腹横筋膜胶原含量变化与腹股沟疝发病及复发的关系

探讨腹股沟区腹横筋膜胶原含量变化与成人腹股沟疝发病及复发的关系,为临床工作提供理论参考。方法:以15例非疝成人作为对照组,成人腹股沟疝40例,斜疝组16例,直疝组13例,复发疝组11例。以氯胺鄄T法测定其腹股沟区腹横筋膜的胶原含量。分别探讨后者的改变与年龄的关系,比较疝组与对照组之间,以及各疝组之间的胶原含量,结果:正常成人腹磺筋膜的胶原含量与年龄呈负相关关系;疝病人中含量明显低于非疝病人;在疝病人中,胶原含量大小顺序为斜疝>直疝>复发疝。结论:成人疝病人多为中、老年人,原因之一为随着年龄的增长,腹横筋膜中的胶原含量减少,抗张力强度降低。

甘精胰岛素和人胰岛素对人乳腺癌MDA-MB-231细胞的增殖作用

目的探讨甘精胰岛素(insulin glargine)和人胰岛素(human insulin)对人乳腺癌细胞株MDA-MB-231增殖的影响及细胞外信号调节激酶(ERK)的调节作用。方法使用不同浓度的甘精胰岛素和人胰岛素刺激人乳腺癌MDA-MB-231细胞株,检测不同时间段的细胞增殖作用,探讨抑制ERK1/2激活对细胞增殖的影响。使用cell counting kit-8(CCK-8)试剂检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞周期分布。结果甘精胰岛素和人胰岛素在1、10、100IU.L-1刺激MDA-MB-231细胞96h后均可轻度促进MDA-MB-231细胞增殖,相同条件下甘精胰岛素和人胰岛素的促增殖效应无差异。甘精胰岛素与人胰岛素以10IU.L-1分别刺激48、72、96h后两药均诱导细胞增殖,比较两种药物间增殖效应的差异无统计学意义。甘精胰岛素和人胰岛素均使S+G2/M期细胞比例增加,但两处理组间差异无显著性。ERK1/2抑制剂PD98059可抑制MDA-MB-231细胞增殖;但PD98059不影响甘精胰岛素和人胰岛素对MDA-MB-231细胞增殖的促进作用。结论甘精胰岛素和人胰岛素对人乳腺癌细胞株MDA-MB-231增殖有类似的轻度促进作用,该作用不依赖于ERK的激活。

肝病患者凝血象和红细胞参数检测的临床意义

目的了解肝病患者凝血象和红细胞参数的变化,并探讨其临床意义。方法对85例肝病患者进行凝血酶原时间(PT)、活化部分凝血酶原时间(APTT)、凝血酶时间(TT)、纤维蛋白原(FIB)四项凝血指标测定,并同时进行平均红细胞体积(MCV)、红细胞体积分布宽度(RDW)和血小板计数(PLT)的检测。结果85例肝病患者测定结果表明,PT、TT、APTT均较对照组明显延长(P＜0．05),除肝癌外,FIB均较对照组明显减低(P＜0．05)。除急黄肝MCV与对照组差异无显著性外,其他各项差异均有显著性(P＜0．05)。结论肝病患者血液患者血液处于明显的低凝状态,提示及时对肝病患者进行凝血因子的检测,有利于预防继发性出血,指导临床治疗,避免并发症的发生。

骨髓间充质干细胞体外诱导分化为心肌细胞的初步实验观察

目的体外培养并诱导大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)分化为心肌细胞。方法采用密度梯度离心法和贴壁培养法分离、纯化大鼠骨髓MSCs,在第3代细胞以5-氮杂胞苷进行诱导,用免疫细胞化学的方法鉴定肌细胞及心肌细胞特异蛋白的表达。结果诱导后细胞体积较诱导前增大,而且更加细长,呈长梭形。14d细胞之间出现连接,排列方向渐趋一致。免疫细胞化学染色显示Desmin,α-SarcomericActin和心肌特异性cTnI呈阳性反应。结论MSCs可能具有表达心肌细胞的特异性启动或分化调控基因,5-氮杂胞苷能在体外诱导MSCs向心肌细胞分化。

Sysmex XE-2100全自动血细胞分析仪对血液病血小板计数的检测价值

目的:探讨Sysmex XE-2100全自动血细胞分析仪计数血液病血小板的临床应用价值。方法:选用2份低值血小板标本用仪器第4模式检测10次,观察批内精密度。将115例血液病病人血标本用Sysmex XE-2100第3模式电阻法(PLT-I)和第4模式激光法(PLT-O)测定的血小板结果与显微镜计数结果进行相关性分析。结果:2份低值血小板标本用仪器第4模式检测,其批内精密度分别为1.85%和2.03%。Sysmex XE-2100测定115份血液病血小板计数结果与显微镜计数结果相关性良好,激光法相关系数(r)为0.9973,P<0.01;而电阻抗法r为0.9689,P<0.01。结论:Sysmex XE-2100血细胞分析仪激光法(PLT-O)分析血液病血小板计数的性能良好,具有准确度高、重复性好和简便快捷等优点,是常规实验室测定血液病血小板计数较理想的仪器。

Sysmex XE-2100全自动血细胞分析仪分析网织红细胞性能评价

目的:探讨SysmexXE-2100全自动血细胞分析仪分析网织红细胞的性能并作评价。方法:对XE-2100分析仪分析网织红细胞的精密度、稳定性、线性范围、敏感性和携带污染率进行测定,再将50例住院病人血标本用SysmexXE-2100分析仪测定网织红细胞结果与显微镜计数结果进行相关性分析。结果:XE-2100全自动血细胞分析仪分析网织红细胞的精密度、稳定性、线性范围、敏感性和携带污染率均在允许范围内;SysmexXE-2100分析网织红细胞结果与显微镜计数结果相关性良好,r=0.9987。结论:SysmexXE-2100血细胞分析仪分析网织红细胞的性能良好,具有准确度高、重复性好、检测速度快和简便快捷等优点,标本免除预处理,是常规实验室测定网织红细胞的较理想仪器。

中药复方脑还丹对Aβ诱导的大脑皮质和海马神经元损害的保护作用研究

目的 :探讨中药复方脑还丹对Aβ诱导的大脑皮质和海马神经元损害的作用。方法 :采用MTT法及NSE免疫组化方法观察脑还丹药物血清对经Aβ2 5 35处理的原代培养的新生大鼠大脑皮质和海马神经元的影响。结果 :体外培养的新生大鼠大脑皮质和海马神经元经Aβ 2 5 35处理后 ,活细胞数减少 ,而脑还丹含药血清能够促进神经元的存活率以及促进神经元的生长发育 ,与对照组相比有显著性差异 (P <0 0 5 )。结论 :中药复方脑还丹能够减轻Aβ对大脑皮质和海马神经元的毒性作用。

Sysmex XE-2100全自动血液分析仪分析有核红细胞的临床应用评价(英文)

目的探讨SysmexXE-2100全自动血液分析仪有核红细胞计数的准确性并作评价。方法准确性测定:分别用仪器法和显微镜目测法计数38例抗凝静脉血的有核红细胞数(NRBC%),并将两者的结果进行比较。精密度测定:选择3份有核红细胞数值不同的抗凝静脉血分别用仪器法和目测法测定,每份标本重复计数10次,各自计算出CV值进行比较。结果38份抗凝静脉血仪器法计数的有核红细胞结果与显微镜目测法计数结果之间无显著性差异,经t检验,P>0.05,相关系数r为0.9893,P<0.01。仪器法和显微镜目测法对3份有核红细胞数值不同的标本重复计数的平均CV值分别为7.9%和15.1%,显示出仪器法的精密度明显高于目测法。结论SysmexXE-2100全自动血液分析仪计数有核红细胞是一种较准确、快速、精密的方法,可满足临床诊断、治疗及疗效观察的需要。

原发性慢性肾小球肾炎与尿白蛋白片段的关系

【目的】分析肾活检诊断明确的原发性慢性肾小球肾炎患者尿中修饰型白蛋白可能的病理生理和临床意义。【方法】46例经肾活检诊断明确,并除外狼疮性肾炎、糖尿病肾病、原发性高血压、心脑血管损害的原发性慢性肾小球肾炎患者尿标本,用免疫印记法检测尿白蛋白片断(uAF)的阳性率。【结果】病理损害I级患者uAF阳性率25%,Ⅱ级29%,Ⅲ级60%,Ⅳ级88%(P<0.01);具有肾病综合征的患者,uAF阳性率100%;无肾病综合征的患者阳性率42%,差异有显著性(P<0.01)。【结论】尿中修饰型白蛋白与原发性慢性肾小球肾炎的发展及预后密切相关,uAF可以作为判断肾脏损害程度及疾病预后的参考标准。

静脉血放置时间对SysmexXE-2100血液分析仪白细胞分类结果的影响(英文)

目的探讨静脉血样品放置时间对SysmexXE-2100全自动血液分析仪白细胞分类结果的影响。方法室温下对SysmexXE-2100白细胞分类的精密度进行测定,然后对42例静脉血标本分别于0、2、4、8、24和48h用SysmexXE-2100进行测定,并将白细胞分类测定结果进行统计比较,再将SysmexXE-2100在0h的分类结果与手工分类结果进行比较。结果SysmexXE-2100白细胞分类的精密度在允许范围内,SysmexXE-2100白细胞分类结果与手工分类比较,中性粒细胞、淋巴细胞、单核细胞、嗜酸性粒细胞和嗜碱性粒细胞相关系数(r)分别为0.9859,0.9775,0.8053,0.8695,0.5243。大部分参数在8h内没有显著性改变,48hMONO(%),EOS(%)有极明显变化,BASO(%)改变明显,而MONO(%)在8h内已明显增高。结论室温下,静脉血标本白细胞分类计数应于8h内用SysmexXE-2100测定完成。

肿瘤坏死因子-α对原代大鼠肾近端小管上皮细胞Toll样受体2表达的调控及机制

目的探讨肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α,TNF-α）对原代大鼠肾近端小管上皮细胞Toll样受体2（tolllike receptor2,TLR2）表达的调控以及核因子-κB（nuclearfactor-κB,NF-κB）在其中的作用。方法体外分离与培养原代大鼠肾近端小管上皮细胞,以TNF-α按不同时间给予刺激,Western blot检测TLR2,I-κBα,磷酸化I-κBα（pI-κBα）,GAPDH蛋白水平。分别以TNF-α、NF-κB特异性抑制剂Bay11-7082处理25h、Bay11-7082预处理1h后加入TNF-α刺激24h,检测TLR2表达的变化。结果TNF-α刺激6~24h,TLR2高于基线水平;Bay11-7082处理组和Bay11-7082＋TNF-α处理组的TLR2蛋白表达水平高于对照组。Bay11-7082＋TNF-α处理组与单独TNF-α处理组TLR2蛋白表达水平无差异。TNF-α刺激后5~120min,pI-κBα蛋白水平升高。结论TNF-α促进原代大鼠肾近端小管上皮细胞TLR2蛋白表达,NF-κB对TLR2的表达可能起负调节作用。