亚甲基四氢叶酸还原酶基因多态性与妊娠高血压综合征关系的研究

目的研究亚甲基四氢叶酸还原酶(methylenetetrahy-drofolatereductase,MTHFR)基因C677T多态性与妊娠高血压综合征发病的相关性。方法应用聚合酶链反应、限制性片段长度多态性分析方法对正常妊娠妇女与妊高征患者MTHFR基因的C677T位点遗传多态性进行分析。结果妊高征组MTHFR基因C677T位点变异体(T677/T677、C677/T677)频率明显高于正常妊娠组(χ2=11.11,P<0.005),两组间T677等位基因频率比较,也存在显著性差异(χ2=11.25,P<0.001)。结论MTHFR基因的位点突变与妊高征的发病有关,T677等位基因可能是妊高征的易感基因。

恶性胸膜间皮瘤靶向治疗的研究进展

恶性胸膜间皮瘤(malignant pleural mesothelioma, MPM)是侵袭性极强的罕见胸膜表面恶性肿瘤,危险因素包括吸入石棉、遗传因素、基因突变等。现有的化疗、抗血管生成治疗、免疫治疗的效果均不佳,患者的生存期极短。亟需寻找治疗MPM的潜在靶点,目前发现有基因突变靶点如BRCA1相关蛋白1(BRCA associated protein1, BAP1)和细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂2A(cyclin-dependent kinase 2A, CDKN2A)等;表观遗传靶点如组蛋白赖氨酸去甲基酶4A[lysine (K)-specific demethylase 4A, KDM4A]和赖氨酸特异性去甲基酶1(lysine-specific demethylase1, LSD1)等;信号蛋白靶点如葡萄糖调节蛋白78(glucose-regulated protein 78, GRP78)及信号转导和转录激活因子3(signal transducer and activator of transcription 3, STAT3)等。迄今为止,可查询的临床试验有组蛋白甲基转移酶抑制剂Tazemetostat、多聚ADP-核糖聚合酶[poly (ADP-ribose) polymerase, PARP]抑制剂Rucaparib和细胞周期蛋白依赖性激酶4/6(cyclin-dependent kinases 4 and 6, CDK4/6)抑制剂Abemaciclib的II期临床试验,以及靶向间皮素的嵌合抗原受体T细胞免疫疗法(chimeric antigen receptor T-cell immunotherapy, CAR-T)细胞胸腔注射、TEA结构域家族成员(TEA domain family member, TEAD)抑制剂VT3989和IK-930的I期临床试验,显示出一定的临床疗效。

卵巢癌微卫星不稳定性的初步研究

目的 探讨卵巢癌是否存在微卫星DNA不稳定性及与其发生的关系。方法 应用PCR 聚丙烯酰胺凝胶电泳 硝酸银染色技术 ,检测 5 1例卵巢癌 3个位点的微卫星不稳定性。结果 3个位点微卫星DNA不稳定性发生率分别为 3 5 .3 % ,41.2 % ,41.2 %。结论 微卫星DNA的不稳定性可能与卵巢癌的发生有关。

细菌性阴道病患者宫颈及阴道菌群多样性的比较与分析

目的比较与分析细菌性阴道病(bacterial vaginosis,BV)患者宫颈及阴道菌群多样性的差异,探讨BV的病因及BV对不同解剖部位微生态的影响。方法采集BV患者阴道及宫颈分泌物标本,进行革兰染色及Nugent评分;并提取细菌总DNA,用通用引物对细菌16S r DNA的V3区进行扩增,将PCR产物进行变性梯度凝胶电泳(denatured gradient gel electrophoresis,DGGE)。对DNA指纹图谱特征条带切胶回收并进行克隆测序,用Gen Bank中的BLAST与已知序列比对,鉴定细菌菌种,对比分析不同生理状态下阴道及宫颈菌群的多样性。结果健康女性宫颈及阴道菌群多样性基本一致,其中乳杆菌属为优势菌,常见菌种为Lactobacillus crispatus、L.iners和L.gasseri。BV女性下生殖道菌群多样性较健康女性明显复杂,优势菌为Sneathia spp.、Atopobium vaginae及Gardnerella vaginalis等厌氧菌。BV女性宫颈菌群与阴道菌群有明显的差异,阴道菌群多样性较宫颈菌群丰富。结论健康女性下生殖道常见优势菌种为乳杆菌属;BV女性常见优势菌种则为Sneathia spp.、Atopobium vaginae及Gardnerella vaginalis等厌氧菌。女性下生殖道不同解剖部位的菌群存在差异,宫颈菌群多样性可随着阴道感染而发生改变。阴道微生态紊乱导致BV,有害菌可上行迁移而影响宫颈微生态。

EGFR、蛋白激酶B在宫颈癌中表达及EGFR胞外区基因突变的研究

目的:探讨宫颈癌中表皮生长因子受体(EGFR)、蛋白激酶B(PKB/Akt)的表达及EGFR胞外区基因突变的规律和临床意义,为宫颈癌的发生发展机制和靶向个性化治疗提供实验依据。方法:采用免疫组化SP法检测EGFR、Akt蛋白在16例正常宫颈组织、40例宫颈上皮内瘤变(CIN)组织和60例宫颈癌组织中的表达,并分析其与宫颈癌临床病理的关系。采用酚氯仿法抽提60例宫颈癌组织中DNA,PCR+DNA双向测序法检测EGFR胞外IV亚区基因突变。结果:正常宫颈组、CIN组及宫颈癌组中EGFR蛋白的阳性表达率分别为13.33%、43.33%及76.67%,Akt蛋白的阳性表达率分别为6.25%、35.00%及68.33%,差异有统计学意义(P<0.05)。宫颈癌组织中,EGFR表达水平与病理类型、细胞分化程度和临床分期有关(P<0.05),但与患者年龄和淋巴结转移无关(P>0.05);Akt表达水平与细胞分化程度和临床分期有关(P<0.05),但与患者年龄、病理类型和淋巴结转移无关(P>0.05)。60例宫颈癌中EGFR基因外显子15突变率为3.33%(2/60),突变类型G→A,未发现外显子14突变。宫颈癌组织中EGFR、Akt表达呈正相关性(r=0.556,P<0.05)。结论:EGFR、Akt可作为检测宫颈癌及癌前病变的重要参考指标,也为宫颈癌的多靶点联合治疗提供新思路;宫颈癌中EGFR胞外区可有基因突变,但突变率很低,关于其突变的规律和意义有待进一步研究。

凝血酶原基因G20210A变异与妊娠期高血压的相关性研究

目的探讨凝血系统相关基因凝血酶原(FⅡ)基因G20210A突变与妊娠期高血压疾病(HDCP)的关系。方法采用4引物扩增受阻突变体系聚合酶链反应(ARMS-PCR)检测66例HDCP患者胎盘组织(包括妊娠期高血压组12例和子痫前期组54例)与69例正常妊娠胎盘组织FⅡ基因G20210A突变情况。结果与对照组比较HD-CP组和子痫前期组的FⅡ基因型频率和等位基因频率差异均有统计学意义(P均<0.05);相对于GG基因型,HD-CP组的GA基因型和AA基因人群的比数比(OR)值分别为2.26、3.63,子痫前期组分别为2.41、4.52,子痫前期组A等位基因相对G等位基因的OR值为2.15。结论HDCP患者胎盘组织中凝血系统相关基因FⅡ基因G20210A突变与HDCP可能有关。

纳米材料对胎盘屏障功能毒性作用的研究进展

纳米材料因其粒径小和比表面积大等独特理化性质而被广泛应用于物理、化学、生物和医学等各个领域,其对人体及环境可能造成的潜在危害也愈发受到人们的重视,其中纳米材料孕期暴露对后代发育的影响更是备受关注。近年来,数种常见纳米氧化物、碳纳米材料、量子点及金属纳米材料对胎盘屏障毒性作用的相关研究发现,多数纳米材料能够穿过胎盘屏障并破坏胎盘正常结构,甚至影响子代的生长发育及性成熟,其毒性程度常与纳米材料尺寸、包被材料、剂量和暴露方式相关。纳米材料的胎盘屏障毒性作用机制研究也取得进展,期望能有更为科学完善的体系以对纳米材料毒性进行全面评价。

SPME-GC-MS联用分析紫苏挥发性成分(英文)

目的采用SPME-GC-MS联用的方法检测紫苏中挥发性成分。方法先采用固相微萃取器萃取紫苏挥发油,再用气质联用仪检测挥发油中的有效成分。结果从紫苏中分离出56种成分,主要成分为2-己酰基呋喃,单萜,倍半单萜,脂肪酸等,其中2-己酰基呋喃占69.88%,这可能是造成紫苏强烈气味的主要原因。结论 SPME-GC-MS方法能简便、敏感、快捷的检测紫苏中挥发性成分。

人宫颈癌中EGFR基因突变的检测

目的:分析人宫颈癌组织中表皮生长因子受体基因(epidermal growth factor receptor,EGFR)突变的发生和突变类型,为临床针对EGFR的靶向治疗宫颈癌提供实验依据。方法:选取86例宫颈癌患者的病理组织石蜡标样,采用酚氯仿法抽提基因组DNA,分别采用聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)技术及聚合酶链反应-限制性片段长度多态分析(restriction fragment length polymorphism-polymerase chain reaction,PCR-RLFP)检测人宫颈癌组织EGFR基因是否存在第19外显子的缺失突变及第21外显子的点突变。结果:在86例人宫颈癌组织标本中,PCR未检测到EGFR基因第19外显子的缺失突变,PCR-RLFP未检测到EGFR基因第21外显子的点突变。结论:人宫颈癌组织EGFR基因中未检测到第19外显子缺失突变和第21外显子的点突变。

Dysadherin、E-cadherin在宫颈癌中的表达及意义

目的:探讨宫颈癌中dysadherin、E-cadherin的表达及意义。方法:免疫组化及RT-PCR法检测宫颈癌组织中两者蛋白和mRNA表达水平。结果:宫颈癌组dysadherin蛋白表达高于正常组,E-cad表达低于正常组(P<0.05)。dysadherin蛋白高表达及E-cad蛋白低表达与宫颈癌病理分级、临床分期及淋巴结转移相关(P<0.05),而与年龄无关(P>0.05)。宫颈癌组dysadherin mRNA表达(1.05±0.14)高于正常组(0.91±0.09),E-cad mRNA表达(0.64±0.07)低于正常组(0.89±0.11)。dysadherin与E-cad表达呈负相关。结论:联合dysadherin、E-cad检测可作为宫颈癌诊断的辅助指标。

子宫内膜癌中EGFR蛋白的表达及EGFR基因突变

目的:研究表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)在子宫内膜癌组织中的表达及其基因突变情况。方法:取江西省肿瘤医院及南昌大学第二附属医院2007年1月至2011年4月期间的子宫内膜石蜡包埋组织104例,其中子宫内膜癌组织56例、非典型增生子宫内膜组织18例、正常子宫内膜组织30例,利用免疫组化检测上述各组织中EGFR蛋白的表达,PCR法扩增子宫内膜癌或正常子宫内膜组织中EGFR基因外显子19、21序列并测序检测其突变情况。结果:子宫内膜癌组织中EGFR的阳性表达率高于正常子宫内膜[73.2%(41/56)vs 30.0%(9/30),P<0.01]及非典型增生子宫内膜[73.2%(41/56)vs 44.4%(8/18),P<0.05]。进一步分析表明:G3级子宫内膜癌中EGFR的阳性表达率明显高于G1级[81.8%(9/11)vs 66.7%(12/18),P<0.01]及G2级[81.8%(9/11)vs 74.1%(20/27),P<0.05],在肌层浸润>1/2组中的阳性表达率也明显高于肌层浸润≤1/2组[86.8%(33/38)vs 44.4%(8/18),P<0.01]。但EGFR的表达与子宫内膜癌的FIGO分期、有无淋巴结转移无明显相关性。发现1例子宫内膜癌组织中,EGFR基因外显子19有G2281A突变,而外显子21无突变。结论:EGFR的阳性表达率与子宫内膜癌的组织学分级及肌层浸润深度有关,子宫内膜癌组中存在EGFR外显子19的G2281A点突变。

量子点成像技术在宫颈癌及卵巢癌诊断和治疗中的应用

宫颈癌及卵巢癌都是目前严重威协女性健康的妇科恶性肿瘤，发病呈日益年轻化且发病率有逐年上升趋势。有数据统计，全世界每年约有宫颈癌新发病例50万，约有2313万妇女死于该病，其中80％的新发病例是发生在发展中国家，而我国每年宫颈癌新发病例约占全世界发病人数的1／3。

子宫内膜癌表皮生长因子受体及其靶向治疗的研究进展

子宫内膜癌是女性生殖系统最常见的恶性肿瘤之一，目前尽管针对子宫内膜癌的治疗方法和技术不断发展，但对晚期和复发的子宫内膜癌治疗仍为棘手。表皮生长因子受体（epidermalgrowthfactorreceptor，EGFR）是一种跨膜受体型酪氨酸激酶，其介导的信号转导通路参与多种肿瘤的发生发展．研究表明，其在子宫内膜癌中有过表达．并且与子宫内膜癌的发生、发展、侵袭等密切相关，是目前研究较多的肿瘤靶向治疗分子。现就国内外对EGFR及其靶向治疗在子宫内膜癌中的研究进展做简要综述。

上皮性卵巢癌组织中EGFR、KRAS的表达变化及意义

目的观察表皮生长因子受体(EGFR)、鼠Kirsten肉瘤病毒致癌基因(KRAS)蛋白在上皮性卵巢癌(下称卵巢癌)组织中的表达变化,并探讨其临床意义。方法采用免疫组化SP法检测45例卵巢癌组织中的EGFR、KRAS蛋白,另选18例卵巢良性肿瘤组织和30例正常卵巢组织为对照。结果卵巢癌组织中EGFR、KRAS蛋白表达明显高于卵巢良性肿瘤和正常卵巢组织(P均<0.05)。EGFR阳性表达率与卵巢癌临床分期有关(P<0.05),KRAS蛋白阳性表达率与卵巢癌临床分期、分化程度有关(P<0.05);卵巢癌组织中EGFR与KRAS蛋白表达呈正相关(r=0.613,P<0.05)。结论卵巢癌组织中EGFR、KRAS蛋白表达明显上调,且两者呈正相关关系,在卵巢癌的发生、发展中起重要作用;KRAS蛋白可能为卵巢癌发生发展的始动因素,可作为卵巢癌的早期诊断指标之一。

血管紧张素系统相关基因多态性与妊娠期高血压疾病的相关性研究

目的探讨胎儿血管紧张素原(AGT)基因T174M、血管紧张素转换酶(ACE)基因插入/缺失(I/D)、血管紧张素Ⅱ-1型受体(AT1R)基因A1166C多态性与妊娠期高血压疾病(HDCP)的相关性。方法采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态(PCR-RFLP)技术分别检测67例妊娠期高血压疾病孕妇(HDCP组,其中妊娠期高血压组12例和子痫前期组55例)与70例正常孕妇(对照组)的胎盘的T174M、A1166C突变位点和ACEI/D多态性的基因型。结果(1)HDCP组、妊娠期高血压组和子痫前期组分别和对照组比较,AGT基因型频率和等位基因频率差异均无统计学意义(P均>0.05)。(2)相对于AA基因型,HDCP组和子痫前期组AT1RAC基因型人群的OR值分别为3.241和3.667,子痫前期组C等位基因相对A等位基因的OR值为3.400。(3)相对于Ⅱ基因型,HDCP组和子痫前期组ACEDD基因型人群的OR值分别为2.899和3.429;D等位基因相对于I等位基因的OR值分别为1.76和1.90。(4)2组ACE和AT1R联合基因分析:相对于Ⅱ-AA联合基因型,同时携带AC-DD和AC-DI联合基因型OR值为7.5。结论胎儿AGT基因T174M多态性可能与HDCP的发生无关联;胎儿AT1R基因A1166C和ACEI/D多态性均与HDCP的发生可能有关,胎儿ACE基因缺失及AT1R基因A1166C多态性可能共同对HDCP的发生发展起作用。

EGFR介导的信号转导通路相关基因突变与卵巢癌发病的关系及其靶向治疗研究进展

目前认为卵巢癌的发生发展是多基因、多因素的共同作用。研究发现,表皮生长因子（EGFR）及其介导的信号转导在卵巢癌的发生发展中发挥重要作用,尤其与信号通路中主要基因的状态有关。目前针对EGFR的肿瘤生物治疗是继传统手术、放疗、化疗之后的新靶向性治疗方法之一。

生物素-链霉亲和素介导受体靶向卵巢癌SKOV3细胞量子点体外成像的研究

目的:研制一种生物素-亲和素系统(BAS)介导叶酸受体(FR)靶向量子点(QD)荧光探针,初步验证其靶向性及信号放大效应。方法:采用活泼酯法,将链霉亲和素(SA)与QD共价偶联制备QD-SA并对其物理特性进行验证;采用活泼酯法以牛血清蛋白为载体合成生物素化叶酸(FA)。通过生物素化FA与QD-SA结合制备BAS介导叶酸受体(FR)靶向QD探针,比较该探针对卵巢癌SKOV3细胞及FR表达阴性的肺癌A549细胞的识别情况,并验证其靶向特异性;对比该探针在生物素化FA孵育1、4 h时成像的效果;比较该探针与未经BAS介导的QD-FA探针在不同孵育时间对卵巢癌SKOV3细胞成像的差异。结果:BAS介导FR靶向QD探针可特异性识别FR表达阳性的卵巢癌SKOV3细胞,且孵育4 h较1 h荧光信号明显增强,同等条件下其产生的荧光强度较未经BAS介导的QD-FA探针明显增强。结论:制备了一种特异性好、灵敏度高的BAS介导FR靶向QD探针,该探针在卵巢癌早期诊断方面具有潜在应用价值。

子宫内膜癌预后相关差异表达基因筛选及其生物信息学分析

目的筛选子宫内膜癌(EC)预后相关的差异表达基因(DEGs),并对其进行生物信息学分析。方法从癌症基因组图谱(TCGA)收集临床病理学参数及生存资料完整的EC患者140例,与基因表达综合(GEO)数据库联合筛选DEGs。以各基因表达水平的中位数作为高低表达的截断值,通过COX回归和Kaplan-Meier曲线筛选预后相关DEGs,并比较不同临床病理参数EC患者预后相关DEGs表达水平。使用基因本体论(GO)及基因组百科全书(KEGG)对预后相关DEGs进行功能通路富集分析。结果TCGA联合GEO数据库共筛选出5个DEGs,即ASPA、MYBL2、TROAP、CCNB2和CDC25C(P均<0.05);5个DEGs中,仅MYBL2基因高低表达EC患者总生存期和无病生存期差异有统计学意义(P均<0.05),且组织低分化、Ⅱ型EC患者MYBL2基因高表达比例分别高于高分化、Ⅰ型患者(P均<0.05)。GO功能富集分析结果显示,MYBL2基因在生物学过程层面主要参与细胞代谢、生物调节等过程,在细胞组成层面主要参与细胞膜、细胞核、大分子复合物等的形成,在分子功能层面主要参与蛋白结合、核酸结合、核苷酸结合等。KEGG通路分析结果显示,MYBL2基因与癌症途径、癌症的蛋白聚糖、细胞周期、细胞凋亡和人类T淋巴病毒感染通路有关(P均<0.05)。结论成功筛选出EC预后相关DEGs为MYBL2,该基因通过多种途径参与EC的发生发展过程,可作为EC治疗的分子靶标和诊断生物标志物。

妊娠期高血压疾病患者胎盘组织中ApoE、LPL ser447stop基因多态性检测及意义

目的检测妊娠期高血压疾病(HDP)患者胎盘组织中载脂蛋白E(ApoE)及脂蛋白脂酶(LPL)第9外显子(ser447stop)基因多态性,并探讨其临床意义。方法采用multi-ARMS PCR及PCR-RFLP方法,分别检测36例妊娠期高血压患者(A组)、94例子痫前期患者(B组)及130例正常妊娠妇女(C组)胎盘组织中的ApoE及LPLser447stop基因多态性。结果 A组ApoE2/3、E2/4、E3/3、E3/4及E4/4基因表型频率分别为25.00%、0、50.00%、22.22%、0,B组分别为19.15、0、56.38、24.47%、1.06%,C组分别为14.61%、3.08%、76.92%、5.38%、0.77%。A、B组E3/3、E3/4基因型与C组比较,P均<0.01。A组ApoE等位基因ε2、ε3、ε4频率分别为12.50%、73.61%、11.11%,B组分别为9.57%、78.19%、13.30%,C组分别为8.46%、86.54%、5.00%。A、B组ApoE等位基因ε3、ε4与C组比较,P均<0.05。共检测到3例LPL ser447stop杂合子变异,其中B组2例,C组1例。各组间比较,P均>0.05。结论 HDP患者胎盘组织中ApoE3/4基因表型、ApoEε4等位基因频率增高,ApoEε3等位基因频率降低;ApoE3/4基因表型可能是HDP的危险因素,ApoEε4等位基因可能是HDP的遗传易患因子,而ApoEε3等位基因则具有保护作用。LPL ser447stop基因多态性可能与HDP的发生无关。