创面siRNA敲降HO-1改善小鼠放创复合伤创面愈合的实验研究

目的检测血红素加氧酶1(heme oxygenase-1,HO-1)在放创复合伤(radiation-wound combined injury,R-W-CI)创面修复中的表达情况,评价通过siRNA敲降HO-1对放创复合伤创面愈合的改善作用。方法将36只8周龄雄性C57BL/6J小鼠按随机数字表法分为单纯皮肤创伤组(W组,n=18)和合并全身辐射(6 Gy)损伤的皮肤创伤组(R-W-CI组,n=18),建立单纯皮肤创伤与放创复合伤的小鼠模型。在创面愈合过程中,拍照记录创面愈合情况并通过Image J量化分析残留面积;取材创面组织进行HE染色及病理组织学观察;动态检测外周血象评估造血系统损伤情况。通过创面组织定量PCR及Western blot检测创面HO-1表达水平及变化情况。将26只8周龄雄性C57BL/6J小鼠随机分为siRNA敲降HO-1组(si-HO-1组,n=13)和siRNA阴性对照组(si-NC组,n=13)。放创复合伤致伤后,si-HO-1组在每个创面涂抹负载si-HO-1(5μmol/L)的F127凝胶60μL,si-NC组创面涂抹等量负载阴性对照si-NC的F127凝胶。通过创面组织Western blot检测HO-1的敲降情况,观察创面面积变化,对伤后第3天样本进行定量PCR检测IL-1β、IL-6、TNF-α等炎症因子的表达变化,组织切片进行Ki67免疫组织化学和HE染色;对第9天创面组织进行HE染色病理评估;综合评价敲降HO-1对放创复合伤创面愈合的改善作用。结果与W组相比,创面残留面积的半定量分析表明R-W-CI组愈合在伤后第7、10天显著延迟(P<0.01);第7天的HE病理显示R-W-CI组再上皮化延缓,肉芽组织生长不良;同时R-W-CI组外周血白细胞及其分类计数显示在损伤后早期即显著下降(P<0.05)。检测发现,R-W-CI组创面HO-1蛋白在伤后第3、7天表达略高于W组,但无显著差异(P>0.05),而在第10天显著升高(P<0.05),同时伴有全长与截短形式的分布改变;定量PCR显示R-W-CI组在伤后第7天、10天的创面组织HO-1的表达显著高于W组(P<0.05)。放创复合伤创面siRNA干预实验显示:与si-NC组比较,si-HO-1组能有效敲降创面HO-1蛋白含量(P<0.05),促进伤口收缩(P<0.05),减小创面宽度(P<0.01),上调致伤第3天创面IL-6、TNF-α等炎症因子表达,促进创缘组织细胞增殖,改善肉芽组织生长情况。结论放创复合伤创面修复过程中存在HO-1蛋白的持续高表达,创面siRNA敲降HO-1可以改善R-W-CI组小鼠创面乏炎状态,促进创面愈合。

大鼠小肠上皮细胞培养体系的建立及其影响因素的探讨

作者引进并建立了大鼠小肠上皮细胞（ＩＥＣ－６）的培养传代和活性检测的实验方法，且对几种影响因素进行了探讨，实验发现，ＩＥＣ－６在一定密度范围内与＾３Ｈ－ＴｄＲ参入量呈正相关变化；培养７２ｈ以内，参入量随时间延长而增加，＾３Ｈ－ＴｄＲ，５５．５Ｋｂｑ／孔内，计数值与剂量间呈线性关系，胎牛血清浓度以１０％为宜，但不加胰岛素组显著降低，ｐＨ值以７．２６最好，ＩＥＣ－６在４～２６Ｇｙ照射范围内。

防原医学实验教学改革的探索

防原医学是军队一门重要的军事预防医学主干学科,该文就如何改进防原医学实验教学内容,提高学员动手能力;如何发挥教员主导作用,抓好实验教学环节,建好开放型实验室;如何将科研成果的新方法引入实验教学进行探索与实践。帮助教员与学员形成创新思维,激发创新意识,充分调动学员的积极性,培养学员的智能,提高防原实践能力等大有裨益。

放烧复合伤大鼠血清对小鼠骨髓造血祖细胞的影响

以单纯烧伤、放射损伤为对照 ,观察放烧复合伤大鼠血清对骨髓造血祖细胞的影响及细胞因子的变化。用6 0 Coγ射线全身照射 12Gy ,5kW溴钨灯致大鼠背部 30 %全身体表面积Ⅲ度烧伤。伤后 3、12、2 4、4 8、72和 96小时无菌抽取大鼠血清。按 10 μg m1蛋白加入到骨髓红系或粒系培养体系中培养。伤后 2 4小时 ,应用ELISA法检测血清TNFα水平 ,应用放射免疫法检测IL 6含量。结果显示 ,无论烧伤或放烧复合伤血清组 ,伤后 3、12、2 4、4 8、72和 96小时的CFU E、BFU E和CFU GM培养集落数 ,均显著高于正常对照组 (P <0 .0 1) ,且以伤后 2 4小时最高 ,烧伤组高达 342 .8%、2 6 1.6 %和 2 2 8.4 % ;复合伤组为 2 5 2 .4 %、2 0 5 .1%和 174 .2 %。但当加入放射损伤大鼠血清时 ,CFU E、BFU -E和CFU GM集落数生长较少 ,最高为 12 .7%。同时 ,烧伤组和复合伤组血清TNFα和IL 6水平显著高于正常对照组 ,更高于放射损伤组。结论 :烧伤或放烧复合伤后的血清对骨髓红系和粒系造血均有明显的促进作用 ,放射损伤后的血清则有明显的抑制作用 ;该作用与血清细胞因子变化有关。

大鼠放创复合伤时皮肤创伤愈合的形态学观察

目的 探讨全身辐射对创伤后皮肤愈合的组织学与超微结构变化特点。方法 用6 0 Coγ射线照射 2、4、6Gy ,并在大鼠背部致 2 .5 %体表面积全层皮肤创面 2个。于伤后不同时间 ,用HE染色、透射电镜观察其创面变化及形态学改变。结果 放创复合伤后 ,创伤愈合速度随照射剂量增加而明显减缓。单创组伤后 3d创面底部即见成纤维细胞增生 ,伤后 10～ 15d ,胶原瘢痕形成 ,可见新生血管网、神经末梢 ,表皮细胞生长逐渐覆盖伤口 ,2 0d时创面已愈合。但 6Gy组损伤严重 ,伤后 3d见大量渗出物、血凝块、坏死组织 ,15d表皮细胞蔓延生长缓慢 ,仍见胞核异型、扭曲、皱褶。 2Gy组影响较轻 ,伤后 7d已有肉芽组织生长 ,15d见纤维瘢痕形成。结论 放创复合伤时皮肤愈合过程较为复杂 ,肉芽组织及表皮细胞生长的受抑程度随照射剂量增加而加重。

防原医学实验教学准备及其相关问题探讨

本文对防原医学实验教学的准备特点、准备程序进行了探讨(包括实验教材、场所、仪器、试剂准备,预试验、课前复查制度);提出了搞好实验教学的三点见解:提高认识,团结协作,是做好实验准备工作的前提;加强领导,完善制度,是保证实验效果的重要环节;实验技术人员素质的提高,是完成实验教学准备的关键.

参加首次模拟核爆演练教学调查分析

目的 :为进一步搞好模拟核爆演练与防原医学教学改革。方法 :对 12 2名学员采用选择性不署名调查方法。结果 :98.4 %的学员认为很有必要进行军事医学演练 ,87.7%的学员对参加首次模拟核爆条件下的伤员救治演练感到很满意。防原医学课程设置满意率为 98.4 % ,认为实验课对防原理论掌握很有帮助者占 97.5 %。十个章节授课态度满意率在 89.3%～ 96 .7% ,认为年轻讲师授课效果好者占 82 %。结论 :防原医学课程设置适当 ,教师授课效果好 ;学员参加模拟核爆演练对其素质提高很有帮助 。

全身辐射对创伤后皮肤愈合的时间效应研究

目的探讨全身辐射对创伤后不同时间皮肤愈合的时效关系。方法采用60Coγ射线1～8Gy全身照射复合2.5%体表面积全层皮肤创伤(放创复合伤)模型。结果1～6Gy放射损伤时则分别延迟0.3、0.8、1.1、3.5、6.2和9.5d,与单纯创伤组相比,复合4Gy以上即有明显的愈合延迟作用。统计显示,1～8Gy放创复合伤后3～30d,各剂量组与未愈合创面%之间均有明显的效应关系变化。并推导出8个时间效应关系公式。结论放创复合伤时皮肤创面愈合延迟有明显的时间效应特点。

创伤修复中白细胞介素12的生物学特性及其作用

研究证实,白细胞介素12(IL-12)在创伤修复与创伤免疫领域中应用比较广泛,对烧伤、放射损伤、复合伤、多发伤等不同类型的创伤均有作用,但不同创伤条件下,IL-12水平的变化以及IL-12基因表达的作用是不相同的。IL-12具有的强大免疫调节功能与造血调控的多功能作用,主要由黏附细胞(单核/巨噬细胞)和B淋巴细胞产生,具有独特的分子结构和生物学意义。IL-12对自然杀伤细胞和T细胞有明显的增殖作用,对多种细胞因子有诱导作用,对Th1细胞有调节作用,可调节淋巴样细胞表面的一些分子基因表达。

分光光度定量溶血法检测大鼠脾脏抗体生成细胞活性

本文建立了分光光度定量溶血法检测大鼠脾抗体生成细胞活性的实验手段,并对其影响因素进行了探讨。大鼠脾细胞经 DU-7HS 分光光度仪自动扫描,最佳吸收波长为413nm,且随免疫脾细胞量的增加(2×10~6—1×10~7),吸光度值相应提高,呈正相关(r=0.997);补体浓度(1:5—1:40稀释)呈负相关(r=-0.982);绵羊红细胞浓度则随加入量的增加(0.2%—1.0%),介导溶血反应明显上升。此方法简便准确、灵敏度高、重现性好,可作为免疫功能检测的一个重要指标。

促进防原医学学科发展与加强对外学术交流的实践体会

总结30年来教研结合、开展对外学术交流、促进学科发展的实践经验:不因军事医学而影响对外交流;通过考察,掌握动态,促进合作;进修互访既培养了高水平技术骨干,又促进了教研协作。

烧伤大鼠血清对骨髓红系粒系造血的影响

目的:观察烧伤血清对骨髓红系粒系造血的影响,探讨促进造血细胞增殖的物质。方法:用5kW溴钨灯致大鼠背部30%体表面积Ⅲ度烧伤,伤后无菌抽取大鼠血清。按10mg/L蛋白加入到骨髓红系或粒系体系中培养。结果:烧伤后3,12,24,48,72和96h,骨髓红系(CFU-E,BFU-E)和粒分(CFU-GM)集落数均显著高于正常对照组;伤后24h达337.7,179.7,240.5个/1×105骨髓有核细胞(bonemarrowcell,BMC);对照组仅98.5,68.7,105.2个/1×105BMC;差异非常显著(t=8.31,9.65,7.84,P<0.01)。结论:烧伤血清对骨髓红系、粒系造血均有明显的促进作用。

放烧复合伤异体植皮后创面与皮肤病理学变化

目的观察放烧复合伤植皮后创面愈合与皮肤组织学的关系。方法采用 5GY全身照射复合15％三度烧伤的放烧复合伤大鼠模型，伤后24h进行异体植皮封闭创面 ,术后1、 3、 5、 7、 10、 20、 25、 30 d分别取材。结果不治疗组动物 10 d时，创面较干燥，但伤后10～ 15 d(溶痂期 )死亡鼠创面有大部分破溃。放烧复合伤经输血和植皮的治疗组动物伤后7～ 10 d时移植皮下仅有点状出血，此后逐渐被吸收，异体皮存活良好，20d开始长出新毛，30d已全部长毛。结论伤后24h切痂植皮，有利于保护创面、减轻感染。而伤后输注低淋巴细胞的照射血和异体植皮，使创面愈合延长异体皮活存。

Wistar大鼠临床血液学的部分生理数据和形态学特点

随着当代科学技术的飞速发展,实验动物科学已成为整个科技不可分割的组成部分。尤其在现代医学科学实验中,成果的评价、研究水平的高低,无不取决于实验动物的质量及可靠的生理数据。为此。

医学实验技术人员的继续教育

本文就489名医技人员的调查发现,实验系列仍存着高中初三级比例失衡、分布不均和素质低的状况,因而应通过调整和改革,建立一支素质高、能级优、结构合理的医枝队伍。同时要结合其工作需要和成人教育的特点,采取不同方式和不同层次的在职继续教育。文中还对实验专修科的课程设置提出了建议。

用~3H-TdR参入法检测大鼠胸腺细胞增殖活性

作者建立了大鼠胸腺细胞自发增殖功能测定的~3H-TdR参入法,并对其影响因素进行了探讨。实验发现,放射性计数值(min^(-1))随胸腺细胞数量增加(0→2×10~6/孔)呈高度正相关(r=0.9959);随~3H-TdR浓度增大(0→92.5kBq/孔)或标记时间延长(4→6→12h)而增高;但加PHA或Con-A对胸腺细胞DNA合成有抑制作用。胸腺细胞体外培养以pH7.6～8.0、37.5℃为宜。此法简便快速、细胞用量少,重复性好。

骨髓间充质干细胞的分离与培养

目的 摸索体外分离培养骨髓间充质干细胞的最佳条件 ,并观察其部分生物学活性。方法 采用常规的细胞培养传代技术以及光、电镜技术和细胞增殖活性检测法 ,观察不同贴壁时间、不同浓度血清、不同种植密度对骨髓间充质干细胞生长、增殖、形态的影响 ,并观察培养细胞的部分生物学特性。结果 以选用 4～ 2 4h贴壁的有核细胞 ,加入 5 %～ 1 0 %胎牛血清、种植密度(4～ 8)× 1 0 4个 /ml的培养条件为最适宜细胞生长 ;在此条件下 ,培养扩增的细胞仍具有干细胞多向分化性 ;其形态呈梭状 ,具有快速增殖的能力 ;培养细胞在 3～ 4d进入对数生长期 ,随后进入平台期 ,分裂相细胞明显减少 ;光镜下细胞呈梭状或类成纤维状 ,2～1 0代的细胞呈均质状 ;超微结构显示为早期幼稚细胞形态。结论 建立了骨髓间充质干细胞体外分离、培养的条件 ,探讨了骨髓间充质干细胞部分生物学特性 。