猪病毒性腹泻有效防控——生猪产业无法回避的现实问题

猪病毒性腹泻并不是一种传染病,而是一大类感染消化道病毒病的统称,因其临床症状均导致腹泻而得来,其病源包括4种猪肠道冠状病毒和猪轮状病毒(PoRV)。猪肠道冠状病毒主要包括猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪德尔塔冠状病毒(PDCoV)和新发的猪急性腹泻综合征冠状病毒(SADS-CoV)。

基于OBE-CDIO理念的四维专业课程思政建设与实践探索

立德树人是高校教育的中心任务和根本目标,传统理工科课程内容的德育意识薄弱、价值涵纳度较低,专业课程思政有效发挥思政课程外的德育功能,新时代德、技、能并进的高等人才培养模式探索势在必行。该文以专业教育为载体,融合线上、线下理论课程和项目制实践课程三维空间一体化模式开展专业思政教育;以成果导向教育为核心、以学生为中心,全过程评价并持续改进,在OBE-CDIO理念下构建时间维度的成果导向和项目驱动专业培养模式,实现三维空间与时间维的4D专业课程思政建设,以形成思政要素和专业教育协同、立体化施教,达到高层次的育人目标。

Ni,Co元素对FeCrAlCu系高熵合金涂层组织和耐磨性能的影响

为了解决金属零件表面的防护问题,采用冷喷涂辅助感应重熔合成高熵合金涂层的方法,在45#钢基体表面制备FeCrAlCu,FeCrAlCuNi,FeCrAlCuCo,FeCrAlCuNiCo高熵合金涂层,通过XRD,SEM,EDS,TEM,磨擦磨损试验机等,研究Ni,Co元素添加对FeCrAlCu系高熵合金涂层的相结构、显微组织以及耐磨性能的影响。结果表明:FeCrAlCu系高熵合金涂层均为FCC+BCC相构成,其中Ni元素添加可以促进FCC相形成,Co元素添加促进B2相(AlCo)生成。FeCrAlCu系高熵合金涂层组织均为树枝晶,随着Ni,Co元素的同时添加,涂层中的枝晶数目增加,并明显粗化。Ni,Co元素同时添加时,FeCrAlCuNiCo高熵合金涂层的摩擦性能最佳,涂层的硬度为565.5HV,摩擦因数为0.349,磨损率为3.97×10^(-5)mm^(3)·N^(-1)·m^(-1)。

猪急性腹泻综合征冠状病毒S蛋白多克隆抗体的制备及在检测该病毒感染中的应用

为制备猪急性腹泻综合征冠状病毒(SADS-CoV)纤突蛋白(S)的多克隆抗体(PAb),本研究经PCR扩增SADS-Co V S蛋白S1亚基C端结构域(S1-CTD)基因片段(384 bp),并将其克隆至原核表达载体p GEX-6p-1中,构建重组质粒p GEX-6p-1-S1-CTD,经双酶切和测序鉴定正确后,转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,利用IPTG诱导表达,通过western blot鉴定重组S1-CTD蛋白(rS1-CTD)的表达及反应原性。结果显示,r S1-CTD以包涵体的形式表达,在40 ku处出现特异性条带。诱导表达后的r S1-CTD经不同浓度尿素重悬并超声离心,SDS-PAGE检测后切胶纯化,得到纯化的重组蛋白。利用BCA试剂盒测得蛋白的浓度为33μg/m L。将该重组蛋白乳化后经3次免疫新西兰大白兔,并在3免一周后采血,分离血清获得S1-CTD蛋白PAb。将SADS-Co V感染Vero E6细胞24 h后,以获得的兔PAb为一抗,分别采用western blot和间接免疫荧光试验(IFA)检测该PAb的反应原性。Western blot结果显示,在约250 ku处出现特异性条带,而阴性对照组无该条带;IFA结果显示,SADS-Co V感染的细胞中出现绿色荧光,而阴性对照细胞无绿色荧光。将SADS-Co V感染仔猪的回肠组织制备病理切片,以制备的PAb为一抗,通过免疫组织化学(IHC)检测SADS-Co V的抗原。结果显示,该组织切片中出现棕色阳性信号,而阴性对照仔猪回肠组织切片则无该棕色信号。表明该PAb可与感染SADS-Co V的仔猪回肠组织中的相应抗原发生特异性免疫反应。综上所述,本实验制备的S1-CTD蛋白PAb具有良好的反应原性和免疫原性,可以用于western blot、IFA、IHC检测体内外SADS-Co V的感染,为后续SADS-Co V检测方法的建立及S蛋白生物学功能的研究奠定基础。

猪急性腹泻综合征冠状病毒诱导细胞自噬并增强病毒复制的研究

为研究猪急性腹泻综合征冠状病毒(SADS-CoV)感染细胞是否诱导自噬及自噬对病毒复制的影响,本研究将SADS-CoV(MOI 0.1)接种Vero E6细胞培养36 h后,经透射电子显微镜观察可见,SADS-CoV感染的细胞中出现了包裹胞浆的自噬体样双层膜结构,证实SADS-CoV可以诱导Vero E6细胞发生自噬。构建pEGFP-LC3的真核表达质粒并经双酶切及测序鉴定正确后转染Vero E6细胞,24 h后以SADS-CoV感染,24 h后经激光共聚焦显微镜观察可见,与阴性对照组细胞相比,感染SADS-CoV的细胞出现绿色荧光的点状聚集。进一步将SADS-CoV(MOI 0.1)感染Vero E6细胞不同时间后通过western blot检测自噬相关蛋白LC3-Ⅱ和p62表达水平的变化,结果显示,与阴性对照组相比,SADS-CoV感染组LC3-Ⅱ的表达水平升高,LC3-Ⅱ/GAPDH比值呈上升趋势,而p62蛋白表达水平则显著降低(P<0.05),表明SADS-CoV感染能够诱导Vero E6细胞产生完整的自噬应答。为了探究自噬对病毒复制的影响,本研究分别采用自噬抑制剂3-MA和自噬诱导剂Rapamycin处理Vero E6细胞后以SADS-CoV感染,于感染后不同时间收获细胞,通过western blot和病毒滴度(TCID_(50))测定检测SADS-CoV N蛋白表达水平的变化。结果显示,与仅感染病毒的对照组相比,采用3-MA处理Vero E6细胞后SADS-CoV N蛋白的表达水平及TCID_(50)均显著降低(P<0.05),而采用Rapamycin处理后SADS-CoV N蛋白的表达水平及TCID_(50)则均显著升高(P<0.05)。针对ATG5基因设计3条特异性的ATG5 si RNA(siATG5-1/2/3),将干扰效率较好的siATG5-1转染Vero E6细胞后再以SADS-CoV感染,24 h后检测病毒滴度并利用western blot检测SADS-CoV N蛋白表达水平的变化。结果显示,与未转染siATG5的3组阴性细胞相比,转染细胞中SADS-CoV N蛋白的表达水平及病毒滴度均显著降低(P<0.05)。本研究首次表明SADS-CoV感染可以诱导宿主细胞自噬并促进病毒的复制,该结果为深入研究SADS-CoV感染与其致病机理以及防控该病毒的感染奠定了基础。

Fe_(0.5)CrMnAlCu高熵合金及涂层的组织与性能

采用真空电弧熔炼与冷喷涂辅助感应重熔制备Fe_(0.5)CrMnAlCu高熵合金及涂层。利用XRD、SEM、显微硬度计、磨料磨损实验机对高熵合金及涂层的相结构、微观组织以及耐磨损等性能进行测试分析。结果表明:真空电弧熔炼制备的Fe_(0.5)CrMnAlCu高熵合金为FCC和BCC相固溶体结构,其组织形貌主要为枝晶和枝晶间组织,冷喷涂辅助感应重熔合成Fe_(0.5)CrMnAlCu高熵合金涂层的相结构为单一的BCC结构,其组织形貌为枝晶和枝晶间组织。由于感应重熔合成Fe_(0.5)CrMnAlCu高熵合金涂层较电弧熔炼制备的高熵合金具有更大的晶粒尺寸,同时涂层的原子尺寸差δ大于合金的原子尺寸差,导致感应重熔合成Fe_(0.5)CrMnAlCu高熵合金涂层的硬度是真空电弧熔炼高熵合金的1.37倍,其磨损率比真空电弧熔炼制备的高熵合金磨损率降低18%。真空电弧熔炼与冷喷涂辅助感应重熔制备Fe_(0.5)CrMnAlCu高熵合金及涂层的磨损机制主要是黏着磨损、磨粒磨损。

猪急性腹泻综合征冠状病毒S1蛋白抗体间接ELISA检测方法的建立

为建立猪急性腹泻综合征冠状病毒(SADS-CoV)S1蛋白抗体的间接ELISA检测方法,本研究通过构建重组真核分泌型表达质粒p CAGGS-S1-His并转染HEK293F悬浮细胞进行可溶性表达S1蛋白。转染重组质粒5 d后的细胞上清利用HisTrapTMExcel亲和层析柱纯化,浓缩后的蛋白经SDS-PAGE、western blot鉴定显示获得了分子量约为130 ku且大于理论大小的重组S1蛋白,表明该蛋白为分泌表达且具有良好的翻译后修饰。利用获得的重组S1蛋白作为包被抗原,通过优化反应条件,初步建立了SADS-CoV S1蛋白抗体的间接ELISA检测方法。该方法与猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪德尔塔冠状病毒(PDCoV)、猪轮状病毒(PoRV)和猪圆环病毒2型(PCV2)阳性血清均无交叉反应,仅与SADS-CoV阳性血清反应,表明该方法特异性较强;该方法检测SADS-CoV阳性血清,当稀释至1:3 200时仍为阳性,表明该方法具有较高的敏感性;对4份阳性血清的批内和批间重复性试验的变异系数均小于10%,表明该方法具有良好的重复性和稳定性;利用该方法和间接免疫荧光试验(IFA)对50份临床样品检测,结果显示该间接ELISA检测到9份阳性样品,41份阴性样品;IFA检出5份阳性样品,45份阴性样品,二者的总符合率为92%。综上表明,本研究建立的间接ELISA检测方法能够特异、灵敏地检测SADS-CoV S1蛋白抗体,可以用于SADS-CoV灭活疫苗的免疫效果评价以及该病原的血清学流行病学调查和免疫水平监测,为SADS-CoV所致疫病的鉴别诊断和防控奠定基础。

稳定表达ATP5a细胞系的建立

目的:通过慢病毒表达系统构建稳定表达ATP5a蛋白的猪回肠上皮细胞IPI-2I细胞系,筛选获得过表达ATP5a的稳定细胞株,为研究ATP5a介导的生物学功能在病毒复制中的作用提供细胞模型。方法:提取HEK 293细胞的cDNA为模版,通过PCR扩增将ATP5a基因克隆入慢病毒载体中,获得重组质粒p LVX-ATP5a-IRES-Zs GReen1,利用慢病毒包装系统将重组质粒与辅助质粒PSPAI2、PMG 2.0按照3:2:1共转染293T细胞,48 h后收集细胞上清获得稳定表达ATP5a蛋白的慢病毒颗粒,将重组慢病毒颗粒感染IPI-2I细胞,利用流式筛选技术获得阳性细胞,通过Western Blotting验证ATP5a的表达。结果:成功构建ATP5a过表达慢病毒载体,并通过倒置荧光显微镜观察显示获得纯度高于90%的稳定表达细胞株,Western Blotting结果显示ATP5a蛋白可在细胞系中稳定表达。结论:本研究成功建立了稳定表达ATP5a蛋白IPI-2I稳定表达细胞系,为ATP5a蛋白生物学特性研究奠定了基础。

冷喷涂Fe_(0.5)CrMnAlCu混合金属涂层沉积过程的分子动力学模拟

采用分子动力学方法模拟计算了低压冷喷涂过程中不同金属元素粉末的最低沉积温度.计算结果表明:Mn粒子在600 K时就可以有效沉积;Fe粒子需要700 K及以上的喷涂温度;Cr粒子则需要1100 K及以上温度才能有效沉积;而Al和Cu粒子在500~800 K的温度均可以实现有效沉积,并且两种粒子的扁平率最大值超过了0.6.不同金属元素混合粉末在700 K沉积时,由于沉积过程中不同粉末颗粒的相互影响和夯实作用,即使Cr粒子未达到沉积条件,Cr粒也和其他元素颗粒一样沉积在涂层中.

采用规划识别理论预测系统调用序列中的入侵企图

规划识别是一种根据观察数据识别和推断被观察对象目的或意图的预测理论 .在计算机系统入侵检测研究中 ,为了提前预测出异常事件的发生 ,提出了一种基于规划识别理论的入侵企图预测方法 .通过对主机上的系统调用序列为观察对象建立预测模型 ,提出了一种带参数补偿的贝叶斯网络动态更新算法 ,对观察对象的目的进行预测 .实验结果表明动态贝叶斯网络对预测系统调用序列中的异常入侵企图有较高的精度 .

超声介入肩峰下滑囊联合结节间沟注射术在肩周炎治疗效果的临床观察

目的:观察超声介入肩峰下滑囊联合结节间沟注射术对肩周炎的治疗效果。方法:80例肩周炎患者随机均分两组,治疗组在超声介入下行肩峰下滑囊联合结节间沟注射术,对照组根据解剖定位进行注射。结果:肩关节功能评分组内治疗前后比较有显著性差异(P<0.05)。两组治疗前比较无显著性差异(P>0.05),治疗后治疗组比对照组显著改善(P<0.05)。结论:超声介入肩峰下滑囊联合结节间沟注射术治疗肩周炎的疗效优于传统解剖定位注射。

猪传染性胃肠炎华毒弱毒株纤突蛋白B、C抗原位点片段基因的克隆与序列分析

猪传染性胃肠炎华毒 (TGEVH)是我国分离的代表毒株 ,H弱毒株是我国自行培育成功的具有良好免疫原性的疫苗株。应用RT_PCR方法扩增出 1.3kb的目的片段 ,包括S基因的编码的B、C两个主要抗原位点的片段 ,目的片段与pUC19质粒载体进行连接 ,转化 ,鉴定后得到阳性重组质粒 ,命名为pTS1,将重组质粒插入的目的基因片段进行序列分析和比较 ,其结果表明TGEVH株S基因 5′端B、C位点片段 1190bp的核苷酸序列与国外的TGEV毒株Miller、Purdue_115、FS772 / 70及台湾省TFI毒株序列均具有很高的同源性 ,达 94.72 %以上。推导的氨基酸序列同源性为 94.70 %以上。编码抗原位点C的序列与其它毒株完全一致 ,但在B位点发生改变 ,即第 97个氨基酸发生改变 ,由Trp突变为Ser。该核苷酸该片段全长 12 6 1bp ,包括起始密码子ATG及基因间的共同序列ACTAAAC。本研究首次报道了国内的TGEV分离株_H弱毒株S基因的RT_PCR扩增及其编码的B、C抗原位点片段的分子克隆及序列分析 ,为进一步揭示TGEV强弱毒差别的分子机制。

尖晶石LiMn_2O_4锂充放电池的电化学研究

本文报导尖晶石型ＬｉＭｎ２Ｏ４化合物的制备方法，用循环伏安法和交流阻抗技术研究了Ｌｉ／有机电解液／ＬｉＭｎ２Ｏ４电池的电化学行为。

猪流行性腹泻病毒N蛋白单克隆抗体的制备与鉴定

以纯化的重组PEDV N蛋白为抗原免疫7周龄雌性BALB/c小鼠,利用淋巴细胞杂交瘤技术获得了7株稳定分泌抗重组N蛋白特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为9C1、7H8、3C10、6C4、10G9、2C10和4B3。7株杂交瘤细胞诱导小鼠产生的腹水抗体效价分别为1∶3 200、1∶3 200、1∶6 400、1∶12 800、1∶25 600、1∶64 00和1∶12 800。9C1、7H8、3C10、6C4、10G9和2C10免疫球蛋白类型均为IgM,轻链均为κ链;4B3免疫球蛋白类型为IgG2a,轻链为κ链。Western blot试验结果显示,这7株单克隆抗体均能与天然的PEDV N蛋白发生反应。

尼可地尔对豚鼠心肌细胞膜及线粒体膜电位的影响

研究KATP通道开放剂尼可地尔 (Nic)对豚鼠心肌细胞膜和线粒体膜电位的影响 .用激光共聚焦显微镜和特异性荧光探针 ,观察不同剂量的Nic及KATP通道阻滞剂格列本脲 (Gli)引起急性分离的豚鼠心肌细胞膜电位 ,线粒体膜电位荧光值的变化 .Nic1mmol·L- 1引起细胞膜电位在 1min内迅速超极化〔膜电位荧光值减少 ( 75± 12 ) %〕 ,Gli 3μmol·L- 1可阻断其变化 ;0 .1和 1mmol·L- 1Nic可使线粒体膜电位去极化和膜电位荧光值在 1,2 ,5min分别增加( 12± 3) %和 ( 32± 8) % ,( 2 5± 6) %和 ( 39± 9) % ,( 34± 6) %和 ( 4 5± 12 ) % ;3μmol·L- 1Gli可抑制其变化 .结果说明低浓度Nic只引起线粒体膜电位去极化 ,高浓度Nic还可使细胞膜电位发生超极化 。

缺血-再灌注不同时间点给予尼可地尔对犬心肌梗死范围的影响

目的 证实尼可地尔是通过激活心肌细胞 KATP通道而起到使梗死心肌范围明显缩小的作用 ;进一步了解在冠状动脉 (冠脉 )闭塞心肌缺血前后和再灌注时给予尼可地尔产生的心肌保护作用是否相同 ,为临床上应用 KATP通道开放剂防治急性心肌缺血性疾病提供依据。方法 35条犬随机分为 5组 ,每组 7只。缺血再灌注组 (IR组 ) :冠脉左前降支 (L AD)闭塞 90 min,再灌注 12 0 min。缺血前给予尼可地尔组 (PNIC组 ) :L AD闭塞前 10 min经静脉给予尼可地尔 10 0μg/ kg,随后给予 10μg· kg- 1 · min- 1 持续静脉滴注至再灌注结束。缺血后 15 m in给予尼可地尔组 (INIC组 ) :L AD闭塞后 15 m in经静脉给尼可地尔 10 0μg/ kg,随后给予10 μg· kg- 1· min- 1持续至再灌注结束。再灌注开始时给予尼可地尔组 (RNIC组 ) :L AD闭塞 90 min,再灌注开始时立即静脉给尼可地尔 10 0 μg/ kg,随后给予 10 μg· kg- 1· m in- 1持续至再灌注结束。KATP通道阻滞剂组(GL IB+INIC组 ) :在 L AD闭塞前 10 min经静脉给予优降糖 0 .3m g/ kg 10 min,随后步骤同 INIC组。各组均在冠脉闭塞前、冠脉闭塞后 1h、再灌注 2 h测定血流动力学指标 ;再灌注 2 h后用图像分析仪测量氯化三苯四唑 (TTC)染色的梗死心肌范围 (IA)和危险心肌范围 (

猪捷申病毒Swine/CH/IMH/03分离株细胞适应性和致病性研究

为确定猪捷申病毒(PTV)Swine/CH/IMH/03株的易感细胞系及其致病性,本实验将该病毒接种不同细胞,通过细胞病变、电子显微镜观察和PCR技术进行鉴定。并进一步将该病毒回归本动物鉴定其致病性。试验结果表明,PTV Swine/CH/IMH/03对IB-RS-2和PK-15细胞系敏感,能够在IB-RS-2和PK-15细胞系中增殖。致病性试验结果显示,Swine/CH/IMH/03分离株能够导致实验猪出现神经症状,剖检可见脑、肾、脾、肠道发生出血,病理组织学检查可见脑实质内胶质细胞浸润、肾脏间质小血管淤血、脾淋巴细胞减少、小肠伴有出血及淋巴细胞浸润等病理变化,对仔猪具有强致病性。

AlCoCrCuFeNi_(x)高熵合金涂层组织与性能

Ni是FeCrNiCo系高熵合金中的重要元素,对合金的性能有关键性的影响。本文通过激光重熔辅助冷喷涂的方法,在45#钢表面制备AlCoCrCuFeNi_(x)(x=0,0.5,1,1.5,2)高熵合金涂层。结果表明:涂层组织主要由柱状晶和枝晶间组织组成。当0≤x≤0.5时,涂层组织结构的晶格应变ε会随原子尺寸差异δ的增大而增大;当0.5≤x≤2时,涂层组织结构的晶格应变ε会随原子尺寸差异δ的减小而减小。价电子浓度(C VE)随着Ni含量的增加而增加。这导致随着Ni含量的增加,涂层中BCC相含量先增多后减少,FCC相含量先减少后增多。当0≤x≤0.5时,涂层中的枝晶组织为BCC相,枝晶间组织为FCC相;当0.5≤x≤2时,涂层中的枝晶组织由BCC相向FCC相转变,枝晶间组织由FCC相向BCC相转变;当x=0.5时,涂层的性能达到最优,硬度为596.7HV,摩擦因数为0.35,磨损率为3.76×10^(−5)mm^(3)/(N∙mm)。

血清中性粒细胞明胶酶相关性载脂蛋白胱抑素C在早期诊断冠状动脉介入术后对比剂肾病中的意义

目的 前瞻性研究血清中性粒细胞明胶酶相关性载脂蛋白（NGAL）、胱抑素C（CYSC）在早期预测和诊断冠状动脉介入术后对比剂肾病（CIN）中的临床意义.方法 收集360例接受冠脉造影及介入治疗的患者资料.用酶法测定所有入选患者术前及术后12 、24 及48 h血清肌酐（Scr）值 用免疫比浊法检测所有入选患者术前及术后12及24 h血清CYSC值 用ELISA方法检测所有入选患者术前、术后2及24 h血清NAGL值 对比剂肾病以传统方法定义.将发生对比剂肾病的病例与未发生对比剂肾病的病例进行比较.结果 360例患者中,发生CIN的患者12例（发生率为3.33%）.CIN组与非CIN组的血NGAL水平在术后2 h 及24 h差异均有统计学意义（P＜0.05）.在CIN组内,术后2 h血NGAL水平较术前显著升高（P＜0.05） 术后24 h血NGAL水平较术后2 h也有明显升高（P＜0.05）.CIN组中,术后24 h CYSC值与术前对比差异有统计学意义 （P＜0.05）,而CIN组术后24 h CYSC值与非CIN组相比差异有统计学意义（P＜0.01）.CIN组内,血NGAL值及CYSC值均与Scr值呈正相关.血CYSC与血NGAL正相关.ROC分析证实,血NGAL的ROC曲线下面积为0.887,以102.29 ng/mL为诊断截点时,其在CIN诊断中的敏感性及特异性分别是75.0%及82.4%.血CYSC的ROC曲线下面积为0.978,以1.925 mg/L为诊断截点时,其在CIN诊断中的敏感性及特异性分别是91.7%及91.4%.结论 血清NAGL、CYSC均是较好的CIN早期预测指标,其中血NGAL是能最早发现肾功能受损的指标,血清CYSC是预测CIN准确率最高的指标.

基于Windows Native API序列的异常检测模型

针对Windows操作系统受到的越来越多的严重攻击,提出一种基于Native API序列的多步一致模型和指数迭代检测算法,实现了从内核空间检测Windows操作系统中的异常入侵.通过设计内核虚拟设备来截获系统服务分配表,从而可实时地获取Native API信息.用被截获的正常Native API数据建立一步和二步一致模型,并以此描述进程的正常行为.在检测过程中,通过指数迭代检测算法,可对不断出现的Native API的正常指数进行度量.采用报警提取算法对正常指数进行分析可惟一地确定对应的攻击,为管理员及时掌握系统的安全状况提供了保证.在不同的Windows操作系统环境下的实验结果表明,该方法有较好的检测精度.