焦孔素E介导的细胞焦亡在肿瘤诊治中的作用研究进展

焦孔素(GSDM)E是GSDM家族成员之一,可被激活的Caspase‑3特异性切割,形成具有成孔活性的GSDME‑N片段,从而介导细胞焦亡的发生。GSDME介导的细胞焦亡与肿瘤发生、抗肿瘤免疫及放化疗敏感性等密切相关,且可用于肿瘤的筛查和预测等。本文对GSDME介导的细胞焦亡作用机制及其在肿瘤诊治中的研究进展进行综述。

致康胶囊结合腹腔镜手术治疗卵巢癌临床效果及安全性观察

目的 观察致康胶囊结合腹腔镜手术治疗卵巢癌临床效果及安全性。方法 回顾性分析山西省人民医院妇产科妇科一病区2019年2月-2022年3月收治的85例卵巢癌患者临床资料,两组以治疗方法不同进行分组,分为对照组(44例)和观察组(41例),对照组患者行腹腔镜手术治疗,观察组患者采取腹腔镜手术治疗,并结合致康胶囊治疗,数据对比:治疗效果、中医证候积分(皮下瘀斑及下腹痛、肢体麻木、月经延缓、口干不欲饮等)变化、并发症、术后3 d及术后7 d患者疼痛评分(visual analogue scale/score, VAS)、治疗前后肿瘤标志物指标变化及血清炎症因子指标变化、免疫指标变化、不良反应等。结果 观察组患者治疗总有效率(92.68%,38/41)比对照组高(72.73%,32/44),P<0.05;两组患者治疗前中医证候积分(皮下瘀斑及下腹痛、肢体麻木、月经延缓、口干不欲饮等)、人附睾分泌蛋白4(human epididymis protein 4,HE4)及糖类抗原125(carbohydrate antigen 125,CA125)等肿瘤标志物、白介素-6(interleukin-6,IL-6)及白介素8-(interleukin-8,IL-8)等血清炎症因子、CD3^(+)、CD4^(+)及CD8^(+)、NK细胞等指标比较,P>0.05,各组患者治疗后中医证候积分(皮下瘀斑及下腹痛、肢体麻木、月经延缓、口干不欲饮等)降低,HE4及CA125、IL-6、IL-8水平下降,治疗后观察组患者中医证候积分(皮下瘀斑及下腹痛、肢体麻木、月经延缓、口干不欲饮等)及HE4及CA125、IL-6、IL-8水平均低于对照组,CD3^(+)、CD4^(+)、CD8^(+)、NK细胞指标高于对照组,P<0.05;观察组并发症率(2.44%,1/41)低于对照组(15.91%,7/44)(P<0.05);观察组患者术后3 d及7 d VAS评分低于对照组(P<0.05);两组均未见治疗不良反应。结论 致康胶囊结合腹腔镜手术治疗卵巢癌临床效果显著,且安全性较高,值得应用。

IDO与卡铂诱导卵巢癌耐药的免疫学研究

目的:通过卡铂诱导卵巢癌耐药的细胞系对免疫细胞功能影响的研究,从免疫学角度探讨耐药卵巢癌转移或复发的机制。方法:建立卵巢癌SKOV3细胞对卡铂耐药的细胞系SKOV3/CBP,ELISA法检测SKOV3和SKOV3/CBP细胞吲哚2,3双加氧酶(IDO)表达;将两组细胞分别与淋巴细胞、NK细胞及C8^+T细胞培养,MTT法检测淋巴细胞的增殖能力、LDH检测NK细胞的杀伤能力及ELISPOT检测C8^+T细胞的杀伤能力。结果:与SKOV3细胞株相比,耐药细胞株SKOV3/CBP内IDO表达明显增强(P<0.05),且与其共培养的淋巴细胞的增殖能力、NK细胞的杀伤能力及CD8+T细胞的杀伤能力较SKOV3组降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:卡铂耐药SKOV3细胞内IDO表达增加,其可通过降低免疫细胞作用的敏感性而发生免疫逃逸促进耐药肿瘤的转移和复发,IDO可作为卵巢癌卡铂耐药治疗新的靶点。

紫杉醇联合顺铂诱导的凋亡卵巢癌细胞的免疫原性

目的:探讨紫杉醇联合顺铂诱导凋亡的卵巢癌细胞被DCs交叉提呈后能否促进免疫应答。方法:常规贴壁法刺激正常人外周血单核细胞分化诱导为DCs,6d后将DCs和紫杉醇联合顺铂体外诱导的凋亡人卵巢癌细胞HO8910共同培养(凋亡组),并以冻融细胞共培养DCs组(冻融组)或单独DCs组(空白组)作对照,以激光共聚焦扫描和流式细胞仪检测不同培养组DCs的分化和成熟程度。分别将各组成熟DCs与同一来源的磁珠分选的CD8+T细胞共培养,3H-TdR掺入法检测其增殖能力;LDH释放反应检测CTL对肿瘤细胞的杀伤能力;同时应用ELISPOT图像分析仪检测致敏后CD8+T细胞INF-γ的分泌能力。结果:(1)紫杉醇联合顺铂诱导的凋亡卵巢癌细胞可被DCs有效吞噬,并促进DCs的成熟及其抗原提呈作用;(2)3H-TdR检测显示凋亡肿瘤细胞能诱导CD8+T细胞增殖(P<0.05);(3)LDH释放实验与ELISPOT图像分析均证明凋亡肿瘤细胞诱导的CTL杀伤活性显著强于冻融组和空白组细胞(P<0.01)。结论:紫杉醇联合顺铂诱导的凋亡卵巢癌细胞具有较强的免疫原性,可促进DCs分化和成熟,进一步促进CD8+T细胞增殖、分泌与杀伤功能。

紫杉醇联合卡铂对荷瘤鼠细胞免疫功能影响的研究

目的:揭示紫杉醇联合卡铂对荷瘤大鼠免疫系统的影响,探讨化疗后是否存在免疫功能逆转的"窗口期"。方法:取25只Fischer 344大鼠,随机分为5组,取4组于右腋下种植NuTu-19卵巢癌细胞株,待荷瘤体积生长至0.5cm3后,以牺牲大鼠的时间为第0天,取3组分别于-15天(化疗晚期)、-10天(化疗中期)、-6天(化疗早期)在荷瘤的大鼠腹腔内注射紫杉醇、卡铂。流式细胞技术检测化疗后各时期淋巴细胞数量及刺激活化后外周血Tc1淋巴细胞的功能亚群,H3-TdR掺入法检测化疗后淋巴细胞的增殖。结果:荷瘤鼠与正常大鼠相比,淋巴细胞数量无显著差异,荷瘤组淋巴细胞亚群CD3+T、CD4+T、CD8+T、NK细胞下降,但仅CD3+T细胞较正常组有差异(P<0.05)。荷瘤组肿瘤抑制性Treg细胞明显增高(P<0.05),而具有杀伤功能的Tc1细胞在荷瘤组明显下降(P<0.05),NK的杀伤功能在两组间无显著差异。移植瘤大鼠化疗后免疫功能变化:(1)在用药后不同阶段淋巴细胞数呈先下降后逐渐恢复至正常的变化规律,在化疗后6天降到最低点,15天恢复至化疗前水平;(2)化疗后6天淋巴细胞降到最低,其增殖力最强;(3)化疗后机体外周血中CD3+T、CD4+T、CD8+T细胞、肿瘤抑制性Treg细胞绝对数均先下降后恢复,化疗后6天降到最低,较未化疗组均有统计学意义,化疗后10天开始恢复,化疗后15天均恢复到化疗前水平;(4)化疗后CD8+T细胞中Tc1细胞比例逐渐增高,化疗后6天较未化疗组增高且有统计学意义,化疗后15天达到最高,但较化疗后6天无显著性差异,表明化疗促进具有杀伤功能Tc1的表达。结论:荷瘤鼠的机体呈负调节免疫状态,肿瘤的发生引起了免疫功能的逃逸,肿瘤的免疫治疗应该具有针对性;紫杉醇联合卡铂打破机体内原有的抗肿瘤免疫抑制状态,机体有可能通过免疫重建诱生了增强的抗肿瘤免疫应答,从而使抗肿瘤免疫抑制状态得到暂时逆转,表明机体经化疗后存在免疫"窗口期"。

紫杉醇和顺铂诱导下的凋亡卵巢癌细胞对树突细胞提呈功能影响

目的:本研究旨在探索紫杉醇、顺铂诱导卵巢癌细胞凋亡后能否具有较强的免疫原性,并可以被抗原提呈细胞交叉提呈并促进免疫应答。方法:用巨噬细胞-集落刺激因子(GM-CSF)和白介素-4(IL-4)刺激人外周血单核细胞分化诱导为树突状细胞(DC),6d后将DC和经紫杉醇联合顺铂在体外诱导发生凋亡的人卵巢癌细胞株共同培养,并以冻融细胞共培养DC组和单独DC组作对照,共培养4h后,进行激光扫描共聚焦显微镜观察DC细胞对凋亡细胞的吞噬作用,同时以流式细胞术(FCM)检测不同培养组DC的分化和成熟程度。结果:紫杉醇、顺铂诱导的凋亡卵巢癌细胞可被DC有效吞噬,与对照组相比,凋亡组DCs的表达及成熟度均明显增高,并具有统计学意义(P(0.05)。结论:紫杉醇、顺铂诱导的凋亡卵巢癌细胞具有较强的免疫原性,可以促进DC的分化和成熟。

卵巢癌患者一线化疗后CD8^+T细胞和NK细胞数量及功能动态变化的研究

目的:研究晚期卵巢癌患者经一线化疗后体内CD8+T细胞和NK细胞数量及功能的动态变化。方法:选取术后行紫杉醇联合卡铂化疗的晚期卵巢上皮癌患者共13例,采集化疗前(S0)、化疗后5～7天(S1)、化疗后12～14天(S2)和化疗后25～28天(S3)外周血,流式细胞术检测患者外周血中CD3+、CD4+、CD8+和NK细胞的百分比及绝对数量。采用体外自体肿瘤细胞裂解物脉冲淋巴细胞共培养的方法检测不同时间点CD8+T细胞IFN-γ的分泌功能,并以LDH释放法测定NK细胞对K562细胞的杀伤活性。结果:在一个完整的化疗周期中,CD3+、CD4+、CD8+细胞的绝对数目均于S1期降至最低点,且与S0期分别都有显著性差异。与对照组相比,当体外给予自身肿瘤细胞裂解物刺激诱导培养后,在S1、S2和S3期产生IFN-γ的CD8+细胞比例均较对照组显著增加,且CD8+IFN-γ+细胞比例在S2期达到最高。NK细胞的绝对数目于S1期降至最低点,且与S0期有显著性差异,NK细胞的比例及杀伤活性在化疗前、后均无显著性差异。结论:卵巢癌患者于一线化疗后机体经历免疫重建的过程,该过程中CD8+T细胞介导的免疫应答一过性增高,而NK细胞的杀伤活性无明显变化。化疗后免疫重建期可能是免疫治疗实施的最佳窗口期。

化疗对肿瘤免疫功能影响的研究进展

手术和化疗能有效减少肿瘤负荷,但系统化疗都有致淋巴细胞减少的不良反应,因此传统观念认为化疗会抑制免疫系统,并干扰随后的免疫治疗。最近的一系列研究却有了突破性的发现:系统化疗在导致淋巴细胞暂时减少的同时,机体可通过多个机制改善和提高抗肿瘤免疫应答,且部分化疗药物对机体的免疫治疗起协同作用,化疗联合免疫治疗给肿瘤生物治疗带来新希望与突破点。综述常见化疗药物对肿瘤患者的免疫功能影响。

晚期卵巢癌患者一线化疗后机体免疫重建的动态研究

目的:研究晚期卵巢癌患者一线化疗后免疫细胞数量和表型的动态变化,探询化疗后机体是否存在免疫重建的动态过程,为制定化疗联合免疫治疗方案提供实验依据。方法:选取术后行紫杉醇联合卡铂化疗的晚期卵巢上皮癌患者共13例,采集化疗前(S0)、化疗后5～7 d(S1)、化疗后12～14 d(S2)和化疗后25～28 d(S3)外周血,流式细胞术检测患者外周血中CD3+、CD4+、CD8+细胞、CD4+CD25+Treg细胞的百分比及绝对数量,并进一步分析CD4+和CD8+细胞中记忆细胞、原始细胞的比例。结果:在一个完整的化疗周期中,淋巴细胞的总数量在化疗后S1期下降至最低,S2期即开始恢复,到S3期则已恢复到化疗前水平;CD3+、CD4+、CD8+细胞及CD4+CD25+Treg细胞的绝对数目均于S1期降至最低点,且与S0期分别都有统计学差异;CD8+细胞的比例于S1期降至最低;CD4+CD25+Treg细胞的比例于S2期降至最低;CD4+CD45RO+和CD8+CD45RO+细胞的比例于S2期升至最高,而CD8+CD45RA+细胞的比例于S2期最低。结论:紫杉醇联合卡铂诱发卵巢癌患者于化疗后5～7 d出现一过性淋巴细胞减少症,之后开始产生淋巴细胞自稳性增生(免疫重建)。免疫重建期可能是免疫治疗实施的最佳窗口期。

化疗免疫“窗口期”对卵巢癌治疗影响的实验研究

目的:采用荷瘤动物模型经化疗联合被动免疫治疗,初步探讨化疗免疫"窗口期"对卵巢癌免疫应答的影响及其可能的免疫学机制。方法:以荷瘤大鼠为研究对象,根据紫杉醇联合卡铂对荷瘤鼠免疫功能改变的不同时期给予CTL(cytotoxic T-lymphocyte)主动免疫治疗。观察荷瘤体积及机体免疫微环境改变。结果:荷瘤鼠紫杉醇和卡铂化疗后不同时期给予CTL转输治疗,其中化疗后第6天即淋巴细胞数最少期,给予免疫治疗,肿瘤生长最缓慢;CT扫描结果示,化疗后6天+免疫治疗组的瘤体积最小,且与其余治疗组有统计学意义。荷瘤鼠免疫功能示,化疗后6天+免疫治疗组中淋巴细胞抗原特异性增殖及CD8+T细胞最明显,而Treg(T-Lymphocytes,Regulatory)细胞明显降低。结论:紫杉醇和卡铂联合CTL治疗肿瘤具有协同作用,其中化疗后6天(即淋巴细胞降到最低期)是CTL免疫治疗的最佳时间点。化疗造成的肿瘤个体免疫功能的低下或是免疫系统空间的释放(所谓的免疫"窗口期")为诱导特异性的抗肿瘤免疫应答提供了可能,免疫状态的检测是保证肿瘤患者化疗联合免疫治疗方案治疗有效性的重要前提之一。

1-甲基色氨酸对卵巢癌细胞耐药性的逆转

目的通过2,3-双加氧酶(IDO)抑制剂1-甲基色氨酸(MT-1)对耐药细胞的生物学特性监测,探讨MT-1是否可以逆转耐药卵巢癌细胞的耐药性。方法将MT-1与耐药卵巢癌细胞株即SKOV3/CBP细胞株共培养后,用酶联免疫法检测细胞内IDO浓度,MTT法监测细胞耐药及细胞增殖速度,Matrigel小室检测细胞侵袭能力。结果与未加入MT-1组相比,加入MT-1组SKOV3/CBP中IDO的表达明显降低且差异有统计学意义(P<0.05);同时加入MT-1组SKOV3/CBP细胞的半数抑制浓度(IC50)及耐药指数(RI)均明显下降,且癌细胞的侵袭能力降低均较未加入组差异有统计学意义(P<0.05),加入MT-1后对耐药细胞的增殖能力增加但较未加入组在各时间段差异无统计学意义(P>0.05)。结论 MT-1降低耐药SKOV3/CBP中IDO的表达,降低耐药细胞的半增殖指数及细胞的侵袭能力从而逆转其耐药性,MT-1可作为卵巢癌耐药治疗的新手段。

1-甲基色氨酸作用卵巢癌耐药细胞后对免疫细胞功能的影响

目的应用1-甲基色氨酸(MT-1)干预卵巢癌耐药细胞SKOV3/CBP,探讨其干预耐药癌细胞能否对免疫细胞增殖及功能有影响。方法将MT-1与卵巢癌耐药细胞株即SKOV3/CBP细胞株共培养后加入淋巴细胞,以未加入MT-1的SKOV3/CBP细胞株为对照,四甲基偶氮唑盐(MTT)法监测淋巴细胞的增殖能力,随后分别将耐药SKOV3/CBP及SKOV3/CBP+MT-1与自然杀伤细胞(NK)细胞、CD8+T细胞共培养,乳酸脱氢酶(LDH)检测NK细胞的杀伤能力,酶联免疫斑点检测(ELISPOT)CD8+T细胞的杀伤能力。结果与未加入MT-1组对比,加入MT-1组SKOV3/CBP细胞中的淋巴细胞的增值,NK细胞的杀伤能力及CD8+T细胞的杀伤能力增强且差异有统计学意义(P<0.05)。结论 MT-1可提高卵巢癌耐药细胞对免疫细胞作用的敏感性,故MT-1可作为卵巢癌耐药治疗的新手段。

宫颈癌前哨淋巴结的研究进展

宫颈癌发病率居女性生殖器恶性肿瘤的首位,淋巴转移是其最重要的转移方式,前哨淋巴结是发生淋巴转移的第一站。通过对前哨淋巴结多种方法的识别及免疫功能的研究,进而判断淋巴转移情况,为早期宫颈癌的治疗、预后提供一定的应用价值。

妊娠晚期正常孕妇及妊娠期高血压疾病孕妇血浆内同型半胱氨酸含量血清叶酸 维生素B_(12)差异及分析

妊娠期高血压疾病的发病机制有多种说法,目前公认的是内皮细胞激活和损伤学说,其中血浆同型半胱氨酸（Hcy）水平是近年来的研究热点之一。

人乳头瘤病毒基因亚型分布与宫颈病变的关系探讨

大量流行病学及实验室研究资料均表明：高危型人乳头瘤病毒（HPV）持续感染是宫颈癌和宫颈上皮内瘤变（CIN）发生的主要病因。本文对就诊于我院行宫颈脱落细胞HPV筛查并经病理活检确诊的238例宫颈病变患者临床资料进行分析,探讨人乳头瘤病毒各亚型与宫颈癌及癌前病变发生的关系,为本地区宫颈癌的防治提供理论指导。

口服小剂量叶酸对预防子痫前期发生的回顾性研究

子痫前期是妊娠期特发而且威胁母儿健康的严重病症,有效预防和控制子痫前期的发展将更好地改善母儿预后。本研究对2009年1月至12月在我院住院分娩的756例孕产妇补充叶酸情况及子痫前期发生情况进行回顾性分析,以探讨小剂量叶酸对预防子痫前期发生的作用,现报告如下。

喜树碱药物NSC606985抗卵巢癌细胞活性及其机制的研究

目的:体外观察喜树碱药物NSC606985对人卵巢癌细胞的生长抑制效应、凋亡诱导效应以及抗癌机制。方法:采用MTT法检测不同浓度(6.25,12.5,25,50,100nmol/L)NSC606985作用特定时间(24,48,72h)后对人卵巢癌COC1细胞的生长抑制效应,用AnnexinV-FITC/PI双染法FCM检测NSC606985对COC1细胞的凋亡诱导效应,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测缺氧(2%O2)对HIF-1α,AMFR及RhoC mRNA表达水平的影响。用免疫印迹技术(Western blot)检测物理性缺氧及氯化钴(CoCl2)化学模拟缺氧下HIF-1α蛋白的表达水平以及NSC606985对HIF-1α的调控效应。结果:纳摩尔浓度的NSC606985可以显著抑制人卵巢癌COC1细胞生长,呈现剂量及时间依赖效应。不同浓度(50,100,200nmol/L)NSC606985作用24h凋亡细胞比率分别是68.44%,80.86%,91.98%,具有剂量依赖性。在人卵巢癌细胞系COC1和SKOV3中,缺氧(2%O2)14h对HIF-1α、AMFR及RhoC mRNA的表达无影响,却可以上调HO-8910PM细胞HIF-1αmRNA水平。物理性缺氧(2%O2 14h)及CoCl2化学模拟缺氧(50μmol/L或150μmol/L 24h)诱导COC1,HO-8910PM及SKOV3等卵巢癌细胞株HIF-1α蛋白高水平表达,NSC606985(20～400nmol/L 14h或24h)可呈剂量依赖性显著下调缺氧诱导的HIF-1α蛋白。结论:NSC606985抑制卵巢癌细胞增殖具有剂量和时间依赖性,可能与诱导细胞凋亡相关。缺氧下HIF-1α在卵巢癌细胞的恶性生物学行为中发挥重要作用,NSC606985可通过下调缺氧诱导的HIF-1α蛋白发挥独特的抗癌机制。

抗癌中药复方协同顺铂对Fas/FasL介导SKOV3细胞免疫逃逸的逆转作用

目的研究抗癌中药复方(CHMP)药血清及其协同顺铂(DDP)对Fas/FasL介导SKOV3细胞免疫逃逸的逆转作用。方法根据前期研究结论制备抗癌中药复方(CHMP)1及CHMP2复方颗粒药最佳时相及剂量的药血清;观察CHMP与顺铂之间的协同作用;流式细胞术(FCM)分析对照组(A组)、CHMP1组(B组)、CHMP2组(C组)、顺铂组(D组)、CHMP1+顺铂(E组)、CHMP2+顺铂组(F组)等各组药血清对各实验组细胞SKOV3表面Fas/FasL分子及各实验组SKOV3细胞对JurkatT细胞凋亡的诱导。结果各组药血清处理72h后,SKOV3细胞表面Fas抗原表达率较对照组明显升高(P<0.01),SKOV3细胞表面FasL抗原表达率较对照组也显著降低(P<0.01)。但顺铂处理的SKOV3细胞FasL抗原表达与对照组相比显著提高(P<0.05)。SKOV3与JurkatT细胞共同培养时各组细胞凋亡率与对照组相比明显降低(P<0.05),联合用药与顺铂相比可减少JurkatT细胞的凋亡。结论 SKOV3细胞表面的FasL可能与JurkatT细胞表面的Fas结合,通过Fas/FasL途径诱导T淋巴细胞凋亡来逃避免疫系统的攻击。联合用药与顺铂相比可减少JurkatT细胞的凋亡,从而增加其对肿瘤细胞的杀伤活性。与化疗药顺铂具有协同作用,解毒化瘀复方与顺铂的协同作用优于补益复方。

流式细胞仪在检测淋巴结树突状细胞中的应用

目的利用流式细胞术多参数分析的特点对淋巴结树突状细胞含量准确计数。方法手术取宫颈癌淋巴转移和非淋巴转移患者淋巴结组织。将组织用机械法制备成单个细胞悬液,调整细胞浓度为5×106个细胞/ml。每例标本分两管,一管只加树突状细胞(dendritic cell,DC)标记物CD83抗体,另一管加CD83的同时再加白细胞表面共同抗原CD45RO,用流式细胞仪分别检测两管CD83阳性百分率。结果淋巴结转移组中双标记组和单标记组间CD83的表达差异显著;非淋巴结转移组中双标记组和单标记组间CD83的表达差异显著;淋巴结转移组与非淋巴结转移组在单标记和双标记间CD83表达率也有显著差异。结论肿瘤的转移与周围淋巴结树突状细胞减少有关。对于含量很少的树突状细胞像在淋巴结这样成分较复杂组织中计数,采用双参数分析是必要的。

复发性外阴阴道假丝酵母菌病的免疫机制及免疫治疗

复发性外阴阴道假丝酵母菌病以白假丝酵母菌感染为主,其发病机制仍不太明确,目前更多研究认为宿主遗传免疫因素在复发性外阴阴道假丝酵母菌病发病中起着重要作用,相应的微生态制剂和疫苗也在研发应用中。