荧光原位杂交分离探针非典型信号研究进展

荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization,FISH)分离探针因设计、判读相对简单而广泛应用于肿瘤的病理诊疗。目前针对FISH分离探针中出现的非典型信号类型及意义尚无系统研究。该文根据国内外相关研究,系统总结了FISH分离探针非典型信号的类型、意义、出现的可能原因及机制,为FISH分离探针非典型信号的判读及深入研究提供理论基础。

GLIS3在肝细胞癌中的表达及临床意义

目的 探讨锌指蛋白GLIS3在肝细胞肝癌(HCC)中的表达及其临床意义。方法 收集TCGA、GTEx和GEO等数据库中GLIS3在肝细胞肝癌中的表达值,对2101例HCC组织和1448例正常肝组织进行综合分析,利用实时定量逆转录聚合酶链反应技术检测肝细胞癌细胞系(MHCC-97H、SK-HEP-1)和正常肝细胞细胞系(LX2)中GLIS3 mRNA的表达,使用免疫组化技术检测96例HCC组织及其相邻的96例非癌组织中GLIS3蛋白的表达水平。结果 数据库分析结果显示,GLIS3在癌组织中的表达明显低于非癌组织(P<0.001)。GLIS3在MHCC-97H、SK-HEP-1肝细胞癌细胞系中的表达明显低于正常肝细胞细胞系(t=2.933,P<0.05;t=11.892,P<0.05)。GLIS3蛋白表达在不同HCC患者肿瘤数目方面差异具有统计学意义(P<0.05)。GLIS3与HCC患者预后相关(P<0.05)。结论 GLIS3在肝细胞肝癌组织中表达较低,可能成为肝细胞癌治疗潜在的靶点、诊断和预后判断的标记物。

MBBS全英班《病理学》网络教学创新经验分享

广西医科大学MBBS全英教学班留学生毕业后,参加生源国医师资格考试成绩及就业情况欠佳,受“新冠”疫情影响改为全网络教学后,教学面临更加艰难的环境。广西医科大学病理学教研室将虚拟仿真、第二课堂、以案例为基础的教学法及形成性评价等教学方式应用于MBBS全英班《病理学》网络教学中,教学效果有明显提高,收获了一定的教学创新经验。

甲状腺癌组织中JAK2、STAT3的表达水平与临床病理特征及预后的关系

目的探讨甲状腺癌组织中Janus激酶2(janus kinase 2,JAK2)及信号转导因子和转录激活因子3(signal transducer and activator of transcription 3,STAT3)的表达与临床病理特点的关系以及对患者预后的影响。方法选择2018年8月—2020年8月广西医科大学第一附属医院术后确诊为甲状腺癌的72例患者,取患者的癌组织(癌组织组)和癌旁组织(癌旁组织组)标本。通过免疫组化法对比两组的JAK2和STAT3的阳性表达率,观察甲状腺癌组织中JAK2、STAT3的表达与临床病理特点的关系,比较JAK2、STAT3表达的患者的生存期。结果癌组织组的JAK2、STAT3阳性率明显高于癌旁组织组,差异有统计学意义(χ^(2)=55.125、48.347,P<0.05);JAK2的表达与患者的临床分期、肿瘤大小和淋巴结转移显著相关(r=23.590、16.470、12.710,P<0.05);而STAT3的表达与患者的临床分期、淋巴结转移和包膜侵犯显著相关(r=15.460、13.950、10.860,P<0.05);生存分析显示JAK2和STAT3阳性患者的存活率比阴性患者低。结论JAK2/STAT3信号通路在甲状腺癌组织中高表达,STAT3和JAK2的表达与癌组织的恶性程度有关,与甲状腺癌的发生发展关系密切,有望成为治疗甲状腺癌新靶点。

转录因子CREB3L1在甲状腺癌组织中的表达及生物学意义

目的探讨转录因子环腺苷酸响应元件结合蛋白3-样1(CREB3L1)在甲状腺癌(THCA)组织中的表达及其临床意义。方法从GEO、ArrayExpress、SRA、TCGA等数据库检索下载CREB3L1 mRNA在THCA组织中的表达谱,应用Wilcoxon非参数检验检测CREB3L1 mRNA在THCA组织和正常甲状腺组织中表达水平的差异;计算CREB3L1表达值的标准化均数差(SMD)及汇总受试者工作特征(SROC)曲线下面积等指标,综合评估CREB3L1 mRNA在THCA组织中的表达水平及其对THCA的区分能力。用上述数据集批量获取CREB3L1在THCA组织中的相关过表达基因,应用CistromeDB预测CREB3L1转录靶基因,用clusterProfiler对CREB3L1在THCA组织中的相关过表达基因、CREB3L1转录靶标交集基因进行基因本体和京都基因与基因组百科全书功能注释。在THPA数据库中查看CREB3L1蛋白在THCA组织中的表达水平。结果与正常甲状腺组织比较,THCA组织中CREB3L1蛋白表达水平呈上调趋势。基于基因芯片、高通量测序数据集共纳入1175例THCA组织和791例正常甲状腺组织样本。CREB3L1 mRNA在THCA组织中呈高表达[SMD=0.11,95%可信区间(95%CI):0.01~0.20],集成SROC曲线下面积为0.62(95%CI:0.57~0.66)。CREB3L1蛋白在THCA组织中高表达患者5年生存率比低表达者低。交叉基因主要富集在细胞周期信号通路上,主要生物学功能为细胞器裂解。细胞分裂周期6蛋白(CDC6)与CREB3L1呈正相关。结论CREB3L1在THCA组织中高表达不利于患者的预后,有可能通过靶向基因CDC6参与了THCA的发生、发展。

人呼吸道禽流感病毒受体的分布趋势(英文)

禽类流感病毒和人类流感病毒具有很强的受体识别特异性,分别与唾液酸α-2,3Gal和α-2,6Gal受体分子结合而感染各自的宿主细胞.这种受体结合特异性是流感病毒在禽类和人类之间跨种属传递的主要障碍.应用凝集素组织化学染色技术,探讨人呼吸道各解剖学部位流感病毒唾液酸受体的分布特征.结果显示,唾液酸α-2,3Gal受体,即禽类流感受体,主要分布在下呼吸道的呼吸部即呼吸细支气管和肺泡,而在主气管、支气管和细支气管仅少量分布.相反,人类流感病毒受体,唾液酸α-2,6Gal受体在气管、支气管呈高密度分布,随着支气管分级逐渐降低分布减少,至肺泡分布最少.但比较人呼吸道发育成熟过程中,唾液酸α-2,3Gal和α-2,6Gal受体的表达,未发现明显差别.禽流感H5N1病毒体外感染人呼吸道组织试验结果表明,肺泡上皮较支气管和气管上皮易感染,与唾液酸α-2,3Gal受体分布特点相符合.结果提示,人呼吸道可被禽流感病毒感染,目前H5N1病毒极少发生人传人的特点,可能与个体间上呼吸道唾液酸α-2,3Gal受体表达差异有关.

微课在病理学教学中的应用探索

病理学是一门介于基础医学与临床医学之间的桥梁性形态学课程,可培养医学生早期临床思维能力。针对病理组织学形态学习特点、传统教学模式的不足和课时缩减问题,将微型视频网络课程,即"微课"的概念引入由课堂向课外延伸的创新授课模式,分析微课自身存在的优点和缺点,探讨微课在医学教育改革中实施的可行性和应用于临床专业本科病理学教学的具体实践方案。

RNAi沉默Sp3基因对肝癌HepG2细胞增殖的影响

目的:采用基因沉默和慢病毒转染技术,沉默人肝癌细胞HepG2中特异蛋白3(specificity protein 3,Sp3)的表达,观察沉默Sp3基因后的肝细胞的增殖能力变化.方法:采用Sp3-siRNA慢病毒转染人肝癌细胞HepG2,通过免疫印迹法和PCR技术检测Sp3的表达以验证转染效果,通过MTT检测细胞生长曲线和流式细胞技术测定细胞周期.结果:Western blot实验表明,实验组的Sp3表达量明显少于空白组和阴性对照组(0.37±0.08 vs 0.83±0.17,0.66±0.13,F=8.442,均P<0.05).RT-PCR也得到相同的结果(0.47±0.05 vs 0.74±0.08,0.70±0.16,F=7.322,均P<0.05).MTT实验结果显示,与空白对照和阴性对照组相比,实验组细胞在48、72和96h时的增殖明显受到抑制(0.28±0.18 vs 0.34±0.19,0.35±0.07,F=3.888;0.57±0.11 vs 0.84±0.05,0.74±0.08,F=12.721;0.72±18.1 vs 0.98±0.05,0.93±0.9,F=6.342,均P<0.05).流式细胞术结果显示实验组细胞主要分布在G1期.结论:RNAi沉默Sp3基因导致人肝癌HepG2细胞体外增殖能力下降.

血管活性肠肽在胃腺癌中的表达及意义

目的：研究胃腺癌中是否存在分泌血管活性肠肽（VIP）的肿瘤细胞，探讨VIP在胃腺癌发生中的作用。方法：通过免疫组化方法，检测30例正常胃窦黏膜，30例不典型增生胃黏膜和74例胃腺癌组织中VIP蛋白的表达，以及中分化胃腺癌细胞系SGC-7901，低分化胃腺癌细胞系BGC-823及未分化胃腺癌细胞系HGC-27中VIP蛋白的表达。结果：36／74例（48．6％）胃腺癌组织中发现VIP阳性细胞，其中高分化7例，中分化15例，低分化14例。阳性细胞形态不规则，多数为细胞浆着色，少数细胞膜着色，核大而不规则。4／30例（13．3％）不典型增生及3／30例（10．0％）正常胃窦黏膜存在VIP阳性细胞。胃腺癌细胞株VIP蛋白呈高水平表达，其中SGC-7901阳性率为71．5％，BGC-823阳性率为82-3％，HGC-27阳性率为92．8％，VIP免疫反应阳性颗粒主要出现在胞浆。结论：胃腺癌组织的肿瘤细胞有较高VIP蛋白表达；胃腺癌细胞株分泌VIP蛋白，且阳性率有随其分化程度降低而升高的趋势。推测VIP蛋白可能与胃腺癌的发生有密切的关系。

不同冻存液冻存慢病毒转染后稳转肝癌细胞株HepG2的效果比较

目的筛选冻存慢病毒转染后稳转肝癌细胞株HepG2的最佳冻存液。方法采用甘油和二甲基亚砜(DMSO)2种不同冻存保护剂,以4种不同比例的冻存液分别冻存慢病毒转染后肝癌细胞HepG2及未转染的HepG2细胞,并对上述细胞复苏后的存活率及增殖能力进行比较分析。结果采用甘油为冻存保护剂时,冻存液[DMEM∶胎牛血清(FBS)∶甘油]比例为0∶9∶1的转染后细胞存活率最高(P=0.001);未转染细胞存活率与冻存液比例无关(P=0.293)。采用DMSO为冻存保护剂时,转染后细胞存活率为0%;未转染细胞存活率在60%及以上,且与冻存液比例无关(P=0.487)。冻存液中血清含量越高,复苏后细胞的增殖能力越强(P<0.05)。结论冻存慢病毒转染后的稳转肝癌细胞株HepG2的最佳冻存液为90%FBS+10%甘油。

新医学教学模式下病理学教学的改革及探索

病理学是研究疾病发生、发展的医学基础学科,是衔接临床医学与基础医学之间的桥梁,其教学内容多,涉及面广,知识零散抽象,是医学教育的难点及重点。本教研室依据新医学教学模式在教学目标、教学内容以及教学手段方面进行一系列的改革,并取得了良好的效果,提高了病理学教学质量。

乳腺癌中ALDH1的表达及其与细胞凋亡、caspase-3的关系

目的探讨乳腺癌中乙醛脱氢酶1(aldehyde dehydrogenase class 1,ALDH1)的表达及其与细胞凋亡、caspase-3的关系。方法应用免疫组化SP法检测ALDH1和caspase-3在67例浸润性乳腺导管癌组织中的表达,应用TUNEL法检测组织中的细胞凋亡。结果 (1)乳腺癌组织中ALDH1阳性率为68.7%,与年龄负相关,与肿瘤直径、TNM分期正相关。caspase-3阳性率为62.7%,与组织学分级、TNM分期和ER正相关。(2)ALDH1阴性组凋亡指数(AI)=(3.45±2.77)%,高于ALDH1阳性组(1.78±1.74)%;乳腺癌中caspase-3阴性组AI=(1.58±1.51)%低于阳性组(2.74±2.49)%;ALDH1与caspase-3表达无关。结论 ALDH1参与细胞凋亡的作用机制可能与caspase-3无关,ALDH1蛋白在癌组织异常表达可能为临床治疗提供潜在的靶点。

GPC3与肝癌细胞增殖的相关性

目的:探讨肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)组织内及体外细胞培养中磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3(glypican-3,GPC3)与细胞增殖的关系.方法:采用免疫组织化学方法检测54例HCC组织中GPC3的表达,并对比其与Ki-67标记指数及各种临床病理参数的关系.使用shRNA抑制SMMC7721肝癌细胞系中GPC3的表达,MTT检测肝癌细胞的增殖变化.结果:在HCC组织中,GPC3与Ki-67指数有关(r=0.521,P=0.000),也与分化程度、血管浸润情况具有相关性(r=0.287,0.289;P=0.035,0.034).体外实验结果显示,抑制GPC3表达后,实验组细胞增殖活性明显低于阴性对照组和空白对照组(F=45.38,P=0.000).结论:GPC3在HCC的发生、发展和浸润过程中起重要作用,主要与影响肝癌细胞增殖有关.

RNAi沉默Sp3基因对裸鼠人肝癌种植瘤细胞侵袭能力的影响

目的:构建裸鼠人肝癌种植瘤模型,观察沉默特异性蛋白3(specificity protein 3,Sp3)对裸鼠人肝癌种植瘤侵袭能力的影响,并探讨其机制.方法:将Sp3 shRNA转染人肝癌HepG2细胞,并设无关序列阴性组及空白组为对照,建立3组裸鼠人肝癌种植瘤模型.观察裸鼠肿瘤的成瘤率,瘤体进行HE染色观察其病理学改变,采用Real-time PCR及免疫组织化学检测瘤组织中Sp3、β-连接素(β-catenin)、E-钙黏附蛋白(E-cadherin)及基质金属蛋白酶9(matrix metalloproteinase 9,MMP-9)mRNA和蛋白的表达情况.结果:实验组的成瘤率明显低于其他两组(60%vs 100%,100%);HE观察实验组肿瘤细胞侵袭能力明显降低.荧光定量PCR检测结果显示,种植瘤中实验组的Sp3、β-catenin及MMP-9 mRNA相对表达量明显低于空白组及阴性组,差异有统计学意义(F=29.692,P=0.001;F=21.894,P=0.002;F=109.414,P<0.001);实验组瘤体中E-cadherin mRNA的相对表达量高于其他两组(F=66.983,P<0.001).免疫组织化学结果显示,实验组Sp3蛋白表达为30±5.69、β-catenin蛋白表达为28±5.13、MMP-9蛋白表达为97±10.41均低于空白组及阴性组;E-cadherin蛋白表达为132±4.36明显高于其他两组,差异有统计学意义(P=0.000).结论:Sp3可通过上调β-catenin及其下游基因MMP-9表达,同时下调E-cadherin的表达,增强人肝癌细胞的侵袭能力.

长链非编码RNA反义泛素C端水解酶L1在结直肠癌中的表达及其临床意义

目的:探讨长链非编码RNA(Lnc RNA)反义泛素C端水解酶L1(UCHL1-AS1)在结直肠癌中的表达及其临床意义。方法:利用RT-PCR方法检测48例结直肠癌及相应癌旁组织中UCHL1-AS1的m RNA表达水平,分析其与临床病理特征的关系。结果:与癌旁组织相比较,UCHL1-AS1 m RNA在结直肠癌中表达明显下调(P<0.05)。UCHL1-AS1 m RNA在结直肠癌组织表达下调与年龄、淋巴结转移、神经侵犯、分化程度相关(P<0.05),与性别、大小、部位、临床分期、癌栓形成无关。结论:UCHL1-AS1 m RNA在结直肠癌组织中表达下调,为下一步研究其在结直肠癌中的作用机制奠定了基础。

宫颈上皮内瘤变组织中人类乳头状瘤病毒分型检测的意义

目的探讨广西地区宫颈上皮内瘤变(CIN)石蜡包埋组织中人类乳头状瘤病毒(HPV)分型检测的临床意义及基因芯片技术的应用。方法应用基因芯片技术分别对CINⅠ级28例、CINП级25例、CINШ级25例病理石蜡包埋组织标本进行HPV分型检测。结果 CINⅠ级HPV阳性率为46.4%(13/28),其中单一感染12例,三重感染(HPV16,33,59)1例;HPV亚型的感染频度依次为(前3位):HPV16(14.3%)、58(10.7%)和52(7.1%)。CINП级阳性率为64.0%(16/25),其中单一感染15例,双重感染(HPV11,18)1例;HPV亚型的感染频度依次为(前3位):HPV16(20.0%)、58(12.0%)和18(12.0%)。CINШ级HPV阳性率为96.0%(24/25),其中单一感染17例,双重感染7例(HPV16和58双重感染为主,共3例);HPV亚型的感染频度依次为(前3位):HPV16(52.0%)、58(28.0%)和33(16.0%)。结论 HPV16和58是广西地区各级CIN中最常见的感染亚型,HPV分型检测能够早期发现病原并且指导后续的治疗;基因芯片技术敏感性高,特异性强,可应用于病理石蜡包埋组织HPV分型检测。

结直肠息肉、腺瘤及腺癌中间质细胞CD34和α-SMA的表达及其意义

目的探讨CD34和平滑肌肌动蛋白(α-SMA)在结直肠息肉、腺瘤及腺癌中的诊断价值。方法应用免疫组化SP法检测正常组织、息肉、腺瘤及腺癌各40例中的间质细胞CD34、α-SMA的表达。结果 CD34在正常组织中高表达,在腺癌中低表达,差异有统计学意义;CD34在息肉中的表达比在腺癌中表达要高,两者差异有统计学意义;而正常与息肉、息肉与腺瘤以及腺瘤与腺癌之间比较差异无统计学意义;α-SMA在正常组织中低表达,在腺癌中高表达,两者比较差异有统计学意义;另外α-SMA正常组织与息肉及正常组织与腺瘤中的表达差异均具有统计学意义;α-SMA在息肉和腺癌中的表达差异有统计学意义,而α-SMA在息肉和腺瘤及腺瘤和腺癌中的表达差异无统计学意义。结论在结直肠息肉、腺瘤和腺癌病变中表现为CD34表达缺失而α-SMA表达获得;检测结直肠标本中间质细胞CD34和α-SMA的表达有助于帮助病理诊断以及对病变的转化有一定的提示作用。

Sp3与VEGF在肝细胞癌中的表达及相关性

目的:研究转录因子Sp3(transcription factor Sp3)和血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)在肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)中的表达意义及二者的相关性.方法:采用免疫组织化学法检测Sp3在111例HCC组织及相应的癌旁肝组织中的表达情况并检测VEGF在上述HCC组织中的表达情况分析Sp3和VEGF的相关性及二者与临床病理特征的关系,分析Sp3与预后的关系.结果:Sp3在HCC组织中中等和强阳性(n=92)表达率为82.9%,在癌旁肝组织中中等和强阳性(n=33)表达率为29.7%,组间差别有统计学意义(P=0.000).Sp3和VEGF在HCC组织中存在正相关关系(r=0.352,P=0.000).Sp3和VEGF表达水平与肿瘤分化程度有关,其中Sp3还与肿瘤大小有关,VEGF则与TNM分期有关.二者与性别、年龄、有无肝硬化基础及HBsAg等情况无关.Sp3高表达的病例其预后较相对低表达的生存情况差,差别有统计学意义(P=0.041).结论:Sp3在HCC中高表达,并与VEGF正相关,二者协同能反映肿瘤的分化程度和侵袭能力,因此Sp3有望作为HCC的诊断指标,并与VEGF协同判断HCC的恶性程度.

乳腺疾病冷冻切片832例误诊与延迟诊断分析

目的评价乳腺疾病术中快速冷冻切片诊断的准确率,分析容易误诊、延迟诊断的疾病。方法对2009年8月—2014年9月832例乳腺疾病的术中快速冷冻切片与术后常规石蜡切片诊断结果进行回顾性分析。结果乳腺疾病术中冷冻切片确诊率为98.08%,误诊率为0.60%,均为假阴性,常见于良性叶状肿瘤、导管内乳头状瘤;延迟诊断率为1.32%,常见于导管内癌、导管内乳头状瘤、硬化性腺病。结论术中快速冷冻切片诊断对乳腺疾病术中定性有重要意义,提高对误诊、延迟疾病的认识水平,可提高准确率。

FN1在乳腺癌组织中的表达及其与临床病理的关系

目的:探讨乳腺癌组织中纤维连接蛋白1(FN1)的表达与临床病理的关系。方法:通过免疫组化SupervisionTM二步法检测79例乳腺癌组织和其中相应的40例癌旁乳腺组织中FN1蛋白的表达。结果:1FN1在乳腺癌组织中的表达明显高于癌旁乳腺组织(P<0.01)。2FN1表达水平随组织学分级、肿瘤大小、淋巴结转移、临床分期的等级升高而增加(均P<0.05);FN1在HER2阳性中高表达(P<0.05),在ER/PR阳性中低表达(P<0.01);FN1的表达在分子亚型中存在差异(P<0.01),在HER2过表达型中明显高于Luminal型(P<0.01)。3FN1诊断乳腺癌组织的ROC曲线下面积为0.927,诊断淋巴结转移的ROC曲线下面积为0.631。结论:FN1异常表达参与乳腺癌发生发展过程。