细胞凋亡的MTT染色法检测

目的研究MTT染色法用于检测细胞凋亡的可行性。方法以As2O3诱导K562细胞建立凋亡细胞模型,并比较以下3种方法检测凋亡的结果。MTT染色法检测、直接在光镜下进行形态学观察以及DNA凝胶电泳。结果MTT染色法可准确判定细胞凋亡,并可清晰分辨正常细胞、凋亡细胞和死亡细胞。结论MTT染色法是一种简单、可行的检测细胞凋亡的方法。

弱精子症患者精子线粒体MTCYB、MTATP6基因的检测

目的:探讨精子线粒体MTCYB、MTATP6基因突变与弱精子症的关系。方法:提取80例成年男性弱精子症和20例活力正常者的精子mtDNA,设计PCR引物并扩增MTCYB、MTATP6基因,PCR产物纯化后进行序列测定和BLAST序列比对。结果:在80例弱精子症样本中有60例同时扩增出MTCYB、MTATP6片段,16例仅扩增出MTATP6片段,4例仅扩增出MTCYB片段。在20例精子活力正常的样本中均同时扩增出MTCYB、MTATP6片段。弱精子症样本中MTCYB和MTATP6基因的缺失率分别为20%和5%。扩增片断的序列分析发现,在弱精子症样本中,MTATP6基因出现G8887A的点突变,突变率为20%,而MTCYB基因未见有规律的突变。精子活力正常的样本中MTCYB、MTATP6基因未检测到明显的点突变。结论:精子线粒体MTCYB和MTATP6的基因缺失以及MTATP6基因的G8887A突变可能影响成年男性的精子活力。

As_2O_3处理前后K562细胞基因表达变化的基因芯片检测

目的应用基因芯片研究三氧化二砷（As2O3）处理前后K562细胞基因表达的变化。方法提取As2O3处理前后K562细胞的总RNA,纯化为mRNA后再反转录为cDNA。cDNA经限制性内切酶Sau3AI切割后,cDNA片段分别用Cy3和Cy5标记,与自制的包含348个基因片段的胎盘库芯片杂交。结果杂交结果经扫描和软件分析,发现了11个差异表达的基因片段,其中有3个基因片段与细胞凋亡密切相关。结论 我们构建的胎盘库基因芯片可以成功地用于研究药物作用前后基因表达的变化。

基于生物信息学的精子特异表达基因的挖掘

目的研究精子中特异表达的基因,以加深对精子分子生物学的认识。方法采用GATHER、PANTHER和DAVID等在线生物信息学分析工具,分析从GEO中下载的人正常精子、人正常卵子和人10种不同组织细胞混合样本的基因芯片杂交数据,从中挖掘出在精子中特异表达的基因及其表达特征。结果人精子与正常对照组和人卵子细胞与正常对照组的差异基因筛选分析,分别得到8998和8981个差异表达基因。其中,有25个基因在精子中的表达量增加200倍。1709个在人精子高表达的基因探针(ratio大于5)中,有1218个在卵子细胞和正常对照组中表达无差异,有129个在卵子细胞中高表达,有362个在卵子细胞中低表达。精子中特异表达的基因主要位于蛋白质修饰与代谢、核苷酸代谢生物过程中,较少涉及细胞信号转导通路或在通路中发挥重要作用。此外,还发现:(1)有大量包含KRAB的转录因子和受体非依赖性的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶在精子中特异性高表达;(2)精子中特异表达的部分基因高度集中在神经干细胞和胚胎干细胞的基因转录表达谱中;(3)精子中糖酵解相关的酶系低表达。结论基于生物信息学的精子特异表达基因的挖掘,能充分利用不同的数据资源,更方便快捷地了解精子基因表达的全貌,加深对精子分子生物学的认识。

三氧化二砷作用机制研究进展

砷化合物在我国作为药物应用已有2400多年的历史了。自从20世纪90年代,我国学者应用三氧化二砷(As2O3)治疗急性早幼粒细胞性白血病并获得成功以来,人们对砷化合物进行了深入的研究,发现As2O3不仅对各型白血病有效,对其他多种恶性肿瘤也有良好的治疗效果。As2O3主要是通过抑制肿瘤细胞生长和肿瘤新生血管形成、诱导肿瘤细胞部分分化和凋亡等发挥抗肿瘤作用的。本文不仅对上述问题进行总结,还展望了新发展起来的基因表达谱分析技术———基因芯片技术在研究As2O3作用机制方面的应用前景。

双语教学效果评估

通过课前问卷调查,考试后成绩分析及课程结束后的经验交流,对在生物化学和分子生物学学科中开展双语教学试点工作进行评估,为以后全面开展双语教学提供经验和指导。

芯片杂交中荧光标记样品定量与非定量的比较研究

比较在芯片杂交中 ,荧光标记样品定量与非定量对杂交结果的影响。其方法是 ,提取经As2 O3 作用K5 6 2细胞前后的总RNA ,逆转录成cDNA第一链 ,并分别用Cy3/Cy5标记。标记后的样品再次定量或不定量 ,但均取相同体积上样与K5 6 2芯片杂交 ,用扫描仪扫描并分析。其结果 ,标记后样品定量与不定量杂交的结果都与理论推测一致 ,但以样品定量进行杂交的效果更好 ,标记样品杂交前再次定量的 ,分析发现 2个基因表达下调 ;杂交前不定量仅取相同体积进行杂交的 ,发现 6个基因片段表达下调 ,其中只有 2个基因与细胞凋亡通路密切相关。认为在芯片的杂交检测中 ,对荧光标记样品杂交前再次定量可大大提高杂交结果的可靠性。

精子质量与形态学分析及其关系

目的:探讨精子质量与形态学的临床应用价值及其关系。方法:248份精液标本按WHO标准进行精液常规分析,应用计算机辅助精液分析(CASA)分析精子密度、活力、活率以及动态参数;采用WHO推荐的Diff-Quik快速染色方法对精子形态进行染色;采用SPSS13.0软件进行统计学分析。结果:248份精子质量分析中,精子活力不足占74.6%,精子活力正常占25.4%,少精症占5.6%,少弱精症占4.8%,正常精液占24.6%;248份精子形态学分析中,形态正常精液占73.4%,畸形精子症占26.6%。精子活力和活率与形态正常精子百分率呈显著性正相关(r=0.52,r=0.53,P<0.01);各运动参数和精子密度也与形态正常精子百分率呈显著性正相关(P<0.01)。精子活力正常组形态正常精子百分率明显高于精子活力低下组(P<0.01)。结论:精子活力不足和畸形精子症是导致男性不育的主要原因,精子形态与精子活力、活率、密度和运动参数有密切关系,精子质量和形态学分析在临床男性不育的诊断中具有重要作用。

1层和2层梯度离心法分离精子的效果评价

目的:评价1层和2层Percoll密度梯度离心法分离精子的效果。方法:20份精液标本分别行50%1层,90%和45%Percoll2层密度梯度离心分离,处理前后应用SCA(sperm class analyzer)精子质量分析仪分析精子密度、活力和圆形细胞密度。结果:1层法分离后精子回收率为(65.5±12.8)%,明显高于2层法(P<0.01);1层和2层法分离后a级精子百分率明显高于处理前(P<0.05,P<0.01),而1层法分离后a级精子百分率明显低于2层法(P<0.05);1层法分离精子后c级精子百分率明显高于2层法(P<0.05),与处理前相比没有明显差异(P>0.05);2层法分离后a+b级精子百分率明显高于处理前(P<0.05),1层法分离后a+b级精子百分率与处理前相比没有明显差异(P>0.05);1层和2层法分离后圆形细胞密度明显低于处理前(P<0.05,P<0.01),两种方法之间没有差异(P>0.05)。结论:1层法分离后精子回收率较高,精子的活力改变不大;2层法分离后精子回收率较低,精子的活力明显改善;1层和2层法都可以较好地把精子与圆形细胞分开。两种方法各有优势,在精子体外处理中都有着重要的应用价值。

弱精子症患者精子中CRISP2基因及蛋白的初步研究

目的:探讨弱精子症患者精子中富含半胱氨酸的分泌蛋白2(CRISP2)mRNA及蛋白的表达水平,探讨其与精子活力的关系及相关的分子机制。方法:收集成年男性弱精子症患者精液78例,活力正常精液70例作为对照组,50% Percoll离心分离纯化后,提取精子总RNA及总蛋白,采用RT-PCR,SYBR Green实时定量PCR和Western印迹技术检测CRISP2 mRNA及蛋白相对表达量。结果:CRISP2基因在弱精子症患者精子中的表达量明显低于其在正常对照组精子中的表达量,下降达4.3倍;Western印迹发现CRISP2蛋白在弱精子症组较正常对照组下降达1.71倍,两组之间的表达量有明显的统计学差异(P<0.05)。结论:CRISP2基因及蛋白在弱精子症患者精子中的表达下调可能与精子活力下降有密切联系,提示CRISP2基因及蛋白可能成为弱精子症发病机制研究的一个分子靶标。

高效液相色谱衍生化法测定红参及生脉注射液中人参二醇和人参三醇的含量

用 ３，５二硝基苯甲酰氯（３，５ Ｄ Ｎ Ｂ）为衍生化剂，高效液相色谱法测定了红参和生脉注射液中人参二醇及人参三醇的含量。以 Ｃ１８硅烷键合相为填料，甲醇水（９５∶５）为流动相，检测波长 ２３０ ｎｍ ，进行反相高效液相色法测定。供试品经提取、水解和衍生化等操作处理后，测得红参中人参二醇及人参三醇的含量约为 ０．９％ 和 ０．５％ ；生脉注射液中分别约为 ０．７ ｍ ｇ／ｍ ｌ和 ０．５ ｍ ｇ／ｍ ｌ。

应用基因芯片技术研究成年男性精子的基因表达

目的:初步研究健康成人精子中基因的表达情况。方法:收集成年男性活力正常的精子,提取总RNA,以健康成人淋巴细胞总RNA作对照。两组RNA逆转录为cDNA之后,cDNA经酶切、加接头后进行RD扩增,在扩增同时分别掺入Cy3(精子)和Cy5(淋巴细胞)荧光染料标记,标记样品与自制的精子基因表达谱芯片杂交。结果:检测发现在560个基因片段中,有72个基因表达上调,321个基因表达下调,另外167个基因表达无差异。其中与基因复制、转录、翻译及调控等相关的基因表达基本属于无差异表达类型或低表达类型,而与精子发生相关的基因、精子本身的特异性抗原等基因显著高表达,精子中糖酵解相关基因表达上调,而与氧化磷酸化相关的基因则表达下调。结论:在健康成人精子中有丰富的基因表达,而且基因的表达与精子自身的功能和特点相一致。

弱精子症相关基因的生物信息学研究

目的:研究弱精子症特异表达基因,加深对弱精子症发生分子机制的认识。方法:采用GATHER、PANTHER以及ToppGene在线生物信息学分析工具,对弱精子症差异表达基因进行生物信息学分析挖掘。结果:通过上述生物信息学软件分析发现,弱精子症差异表达基因在细胞蛋白质及大分子生物代谢过程、蛋白修饰、细胞死亡、细胞凋亡以及凋亡介导中发挥着重要作用。结论:通过生物信息学挖掘发现弱精子症患者精子在活力下降的同时,精子的基本生命活动也下降,同时更易于发生凋亡或死亡。参与细胞骨架构成、微管运动、细胞运动的一些差异表达基因,如KIF3B、MYO15A、KIF6、KIF26B、KIF3A、DNHD2、DMN、DYNC2H1、STARD9、MYOHD1、TPM1等,可能与弱精子症相关,值得进一步深入研究。

基于文献挖掘的雄激素非依赖型前列腺癌特异表达基因的生物信息学分析

目的:比较雄激素依赖型与非依赖型前列腺癌的基因表达差异,加深对雄激素非依赖型前列腺癌形成的分子机制的认识,为前列腺癌防治找到新的有效手段。方法:通过FACTA工具从PubMed找出前列腺癌的相关基因进行分类,利用GATHER、PANTHER、STRING和ToppGene等在线工具对雄激素非依赖型前列腺癌特异表达基因进行生物信息学分析。结果:筛选雄激素非依赖型前列腺癌特异基因128个,这些特异表达基因在细胞信号转导、凋亡、肿瘤生成、细胞粘附、细胞增殖和分化等生物学过程起着重要作用。结论:通过生物信息学对雄激素非依赖型前列腺癌特异表达基因的挖掘发现,MMP9、EGFR、MMP2、ADM、MIF、IGFBP3、IL2、MET、BAD、RHOA、SPP1、EP300、SMAD3、RAF1、PTK2、TGFB2等基因在雄激素依赖型转变成非依赖型前列腺癌中可能起着重要作用。

应用RNA干扰技术抑制K562细胞BCR-ABL基因表达及诱导细胞凋亡

目的运用RNAi技术,设计针对BCR-ABL基因融合位点的siRNAs,研究其干扰后细胞变化。方法针对BCR-ABL基因的融合位点设计siRNAs,用脂质体法转染K562细胞,进行MTT法、RT-PCR及流式细胞仪检测,观察其干扰效果。结果转染组与对照组相比细胞增殖减少,BCR-ABLmRNA表达量降低,并有明显的细胞凋亡。结论运用RNAi技术,可以有效地抑制BCR-ABL的表达,诱导细胞凋亡,为白血病的分子机制研究和基因治疗奠定基础。

弱精子症相关基因与蛋白研究进展

男性不育病因复杂,其中弱精子症是导致男性不育的常见原因之一。然而,弱精子症的发病机制仍然不明确。近年来对弱精子症的研究取得了一定进展,一些基因(如tejin-2、DNAI1、DNAH5、DNAH11、AKAP4、SEPT4和Smcp)和蛋白(如精子蛋白ACTB、ANXA5、PRM1、PRM2、SABP等和精原蛋白Tf、PSA、PAP、Fractalkine等)被证实与弱精子症的发生有关,这些分子标记物的发现将为阐述弱精子症的分子机制提供基础,同时可能成为弱精子症诊断和治疗的靶标。

bcr-abl基因沉默对相关基因表达的影响

目的运用RNAi技术,研究使bcr-abl基因沉默后相关基因表达变化。方法针对bcr-abl基因的融合位点设计siRNAs,用脂质体法转染K562细胞,进行细胞计数及流式细胞仪检测,观察干扰效果,应用RT-PCR检测相关基因表达变化。结果转染组与对照组相比,细胞数减少,有明显的细胞凋亡,bcr-abl,N-ras,c-myc基因的mRNA表达量降低。结论运用RNAi技术,可以有效地诱导细胞凋亡,抑制相关基因的表达,为研究CML的发生机制奠定基础。

应用多媒体技术优化生物化学教学

通过介绍多媒体技术在生物化学教学过程中的应用,探讨了多媒体技术对生化教学方法上的改进、教学手段中的优化、学生主动学习意识的培养等方面的促进作用,提出了多媒体技术在生物化学教学中的应用势在必行.

细胞松弛素B对K562细胞脱核作用的观察

目的观察细胞松弛素B(cytochalasin B,CB)对K562细胞形态和增殖能力的影响.方法以人红白血病K562细胞为细胞模型,经不同浓度的CB作用不同时间(4～48 h),通过相差显微镜和Giemsa染色观察细胞形态学改变.细胞计数法绘制细胞不同条件下的生长曲线.结果细胞形态发生显著变化,处理组细胞出现不同程度的脱核,细胞生长受到显著抑制.结论CB对K562细胞的脱核作用与其浓度呈正相关,随作用时间延长而增强;秋水仙素有显著提高CB诱发细胞脱核的作用;CB对细胞的增殖能力有显著抑制作用.

应用微流路芯片高压凝胶电泳检测精子RNA

目的检测精子的RNA,以保证后续实验有可靠、准确的结果。方法收集成年男性活力正常的精子,提取其RNA,应用微流路芯片高压凝胶电泳检测精子总RNA,以健康成人淋巴细胞总RNA作对照。结果检测发现在人类精子中有大量的基因表达。精子RNA的电泳图出现两个峰,两峰的位置都较正常体细胞提前,先出的峰其形相对尖锐,后出的峰其形较宽,跨越5S,但仍呈典型的倒U形分布,两峰的比值,远远大于2∶1,在其他位置无明显吸收峰。结论应用微流路芯片高压凝胶电泳,可进行精子RNA简单、直观地检测和质量控制。