人类白细胞抗原相合同胞新鲜脐血移植治疗儿童β重型地中海贫血

背景:异基因造血干细胞移植是目前根治重型地中海贫血最有效的方法,然而仅有不到一半的患者能找到相合的骨髓或外周血干细胞。同胞来源脐血干细胞与骨髓和外周血干细胞具有不同的特征,是重型地中海贫血患者移植治疗的一种潜在造血干细胞替代来源。目的:探讨应用人类白细胞抗原相合同胞新鲜脐血移植治疗儿童β重型地中海贫血的疗效。方法:选择2010年6月至2020年6月南方医科大学南方医院收治的β重型地中海贫血患儿48例,男28例,女20例,中位年龄4岁,均接受人类白细胞抗原相合同胞新鲜脐血移植治疗,脐血移植前均采用清髓性不含抗胸腺细胞球蛋白的预处理方案,脐血移植后均采用环孢素A+吗替麦考酚酯+/-短程甲氨蝶呤预防移植物抗宿主病。结果与结论:(1)48例患儿输注的总有核细胞中位数为8.17×10^(7)/kg,输注的CD34^(+)细胞中位数为2.40×10^(5)/kg,脐血移植后中位随访时间98个月,44例植入成功,粒细胞和血小板植入中位时间分别为28 d和31 d,其中37例移植后植入证据检测为供者型完全嵌合,7例移植后早期检测为供受者稳定混合嵌合;(2)44例植入成功患儿中,4例发生急性移植物抗宿主病,分别为Ⅰ级(n=2)和Ⅱ级(n=2),受累器官均为皮肤,均未发生慢性移植物抗宿主病;(3)脐血移植后,48例患儿中5例发生巨细胞病毒感染及激活,12例发生败血症,3例发生侵袭性真菌病,21例发生口腔炎,8例发生出血性膀胱炎,1例发生肝静脉闭塞;(4)48例患儿中,47例存活,1例在移植后28 d因重症肺炎合并急性心力衰竭死亡,43例无病存活,3例发生原发性植入失败,1例发生移植后全血细胞减少,5年总生存率和无病生存率分别为98%和89%,1年时移植相关死亡的累计发病率为2.1%;(5)结果显示,人类白细胞抗原相合同胞新鲜脐血移植治疗儿童β重型地中海贫血的效果良好,移植物抗宿主病的发生风险低。

儿童非高危急性早幼粒细胞白血病诱导期加一剂蒽环类治疗的疗效和安全性SCCLG/SCCCG-APL协作组

目的成人非高危急性早幼粒细胞白血病(NHR-APL)的去化疗诱导治疗,其疗效和安全性在儿童患者中尚未得到验证,需开展儿童的研究。方法数据来自华南儿童APL协作组的前瞻性研究资料,≤16岁、完成诱导治疗的NHR-APL患儿纳入分析。在砷剂+全反式维甲酸诱导治疗的基础上,比较加或不加1剂量去甲氧柔红霉素/米托蒽醌10mg/m^(2)(化疗或无化疗组)的缓解情况和不良事件率。结果化疗组139例,无化疗组27例,两组的诱导治疗结果比较:达血液学完全缓解的中位天数分别为26.0(22.0,31.5)d和31.0(27.5,35.0)d(P=0.002);分子学完全缓解分别有29.5%和3.7%(P=0.005);外周血白细胞计数>10×10^(9)/L分别有43.2%和74.1%(P=0.003);最高白细胞中位数分别为8.6(IQR 4.9,18.4)×10^(9)/L和22.7(IQR 16.0,41.7)×10^(9)/L(P<0.001);确诊分化综合征分别有5.8%和33.3%(P<0.001);出凝血事件发生率分别为14.4%和51.9%(P<0.001)。感染、颅内高压、心和肝功能异常等不良事件的发生率两组相似(均P>0.1)。结论儿童NHR-APL可能有别于成人患者,与无化疗比较,诱导治疗加1剂量蒽环类疗效更好,并发症的风险更低。

初诊儿童急性髓系白血病合并中枢神经系统白血病的临床治疗及预后分析

目的 分析华南儿童急性髓系白血病(C-HUNAN-AML-15)方案应用于中枢神经系统白血病(CNSL)的临床特征及治疗预后,为AML CNSL的治疗提供参考依据。方法 回顾性分析2015年1月—2020年12月收治的CNSL患儿的ELN风险分层以及AML相关融合/突变基因发生率、比较化疗组与移植组生存的差异。结果 研究纳入584例AML,其中CNSL 18例,发病比例为3%。ELN风险分层低危组占50%,中危组占39%,高危组占11%。AML最常见的合并基因变异是AML1/ETO 39%(7/18)、WT1突变22%(4/18)、c-KIT突变22%(4/18)、MLL/AF9 17%(3/18)。18例中采用单纯化疗11例,造血干细胞移植7例,中位随访时间为16.5(1~62)个月。5年总体OS和EFS分别为(74.2±11.2)%、(75.2±10.9)%。其中化疗组的预计5年OS和EFS分别为(90.9±8.7)%、(90.9±8.7)%,均高于移植组的5年OS和EFS分别为(50.5±20.4)%、(51.4±20.4)%,但两组间OS和EFS尚未见统计学差异(P=0.114)。化疗组中FLAG-IDA组预计5年OS和EFS分别为(83.1±11.0%)、(81.8±11.6)%,较DAE组的5年OS和EFS(53.3±24.8)%、(53.3±24.8)%升高,但两组间OS和EFS亦尚未见统计学差异(P=0.263)。结论 华南地区儿童急性髓系白血病协作组中枢神经系统白血病(CNSL)在低中危组病例数高于高危组,通过大剂量阿糖胞苷联合鞘注治疗对低危合并CNSL的患儿预后较好。

FLAG-IDA诱导化疗方案中不同剂量阿糖胞苷治疗儿童急性髓系白血病疗效比较

目的分析儿童急性髓系白血病(AML)在FLAG-IDA诱导化疗方案中接受不同剂量阿糖胞苷的疗效及安全性。方法回顾性分析2015年1月至2022年10月收治的初诊AML患儿的临床资料,依照FLAG-IDA诱导化疗方案中阿糖胞苷使用剂量分为标准剂量和高剂量两组,比较诱导化疗后两组间疗效及毒副反应情况。结果纳入121例AML患儿,男71例、女50例,初诊中位年龄6.7(2.6~10.9)岁。标准剂量组30例,高剂量组91例。与标准剂量组比较,高剂量组诱导化疗的完全缓解率较低,中性粒细胞减少持续时间较短,化疗后天冬氨酸氨基转移酶与丙氨酸氨基转移酶水平较高,差异有统计学意义(P<0.05)。两组间毒副反应差异无统计学意义(P>0.05)。中位随访时间为37.0(12.0~46.0)月。标准剂量组的3年总体生存率和无事件生存率分别为(91.1±6.0)%、(79.5±8.3)%,高剂量组的3年总体生存率和无事件生存率分别为(64.5±11.5)%、(57.5±10.7)%,两组间3年总体生存率和无事件生存率差异均无统计学意义(P>0.05)。结论在诱导化疗中选择标准剂量的阿糖胞苷可能获得更优的疗效,发生肝功能损害的程度相对较低。

儿童造血干细胞移植后心包积液研究进展

心包积液是儿童造血干细胞移植(HSCT)后潜在的危及生命的一种并发症。儿童心包积液发生率为4.4%~37.8%。心包积液的发生与移植相关血栓性微血管病、预处理药物、移植物抗宿主病、移植物类型、免疫抑制剂、感染等多种危险因素均有关。有关心包积液的治疗尚缺乏统一方案,主要为支持治疗、病因治疗和心包穿刺引流。该文就近年来HSCT后心包积液的危险因素及治疗研究进展进行了综述,为完善儿童HSCT后心包积液早期识别及诊疗规范提供建议。

急性白血病凋亡因子Fas配基的表达研究

目的：研究Fas配基在急性白血病的表达与意义。方法：用免疫组化SP法检测临床55例急性白血病Fas配基的表达。结果：16/55的急性白血病患者出现白血病细胞Fas配基阳性；阳性病例均为急性髓性白血病(16/39)；Fas配基阳性细胞占白血病细胞总数的(59.6±29.8)％。结论：Fas配基在部分急性髓性白血病中高表达，Fas/Fas配基途径可能参与这部分急性髓性白血病的免疫逃避。

全淋巴细胞清除治疗儿童难治性获得性血友病甲1例

获得性血友病甲（HAA）是指体内产生凝血因子FⅧ（FactorⅧ）特异性抗体而导致的出血性疾病．临床表现与遗传性血友病甲相似，每年发生率为1／1，000，000，但常见于老年人及产后妇女，儿童少见。临床治疗以输注新鲜血浆或浓缩FⅧ止血，糖皮质激素加环磷酰胺免疫治疗一般疗效较好。我院收治1例儿童获得性血友病甲．对糖皮质激素、环磷酰胺等多种免疫抑制剂无效。给予全淋巴清除治疗后治愈，现报告如下。

MRC AML 10方案治疗儿童急性髓性白血病临床研究

目的探讨英国MRC AML 10方案在中国治疗儿童急性髓性白血病(AML,不含急性早幼粒细胞性白血病)的疗效及可行性。方法回顾性分析2001年12月至2009年12月按计划完成MRC AML 10方案(部分病例联合造血干细胞移植)治疗的19例AML患儿临床资料,采用Kaplan Meier方法进行生存分析及Log-Rank检验。结果 19例AML患儿诱导完全缓解率达94.7%,随访24-106个月(中位随访时间69个月),五年预计存活率(OS)及无病存活率(LFS)分别达73.7%及68.4%;其中低危患儿的LFS为87.5%,非低危患儿为54.5%,两组间差异无统计学意义(P=0.181);单纯化疗患儿的OS为81.8%,化疗联合造血干细胞移植患儿OS为50.0%,两组间差异无统计学意义(P=0.147)。AML M1、M2和AML M4、M5、M7的LFS分别为84.6%和33.3%,两组间差异有统计学意义(P=0.026)。结论 MRC AML 10方案治疗中国AML患儿同样取得较好的临床疗效。

儿童第二次非血缘供者造血干细胞移植2例

目的探索非血缘造血干细胞移植后复发病例进行第二次移植的可行性。方法患幼年型慢性粒单细胞性白血病(JMML)及重型β-地中海贫血的两例患儿接受非血缘供者造血干细胞移植后分别于移植后的10个月和1个月后原疾病复发,前者给予福达华加环磷酰胺预处理后输注原供者干细胞,降低预防移植物抗宿主病强度;后者给予含TBI预处理,移植另一非血缘供者外周血干细胞。结果两例患者第二次移植后均获得稳定植入,JMML患者并发急慢性移植物抗宿主病,完全缓解至+24月;地中海贫血患者已完全脱离输血状态至+23月。结论对于非血缘造血干细胞移植后复发的患儿,第二次非血缘供者造血干细胞移植是可行的。

小鼠骨髓间充质干细胞调节T细胞亚群表达趋化因子受体的研究

目的:研究小鼠T淋巴细胞亚群受骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)调控表达趋化因子受体的变化。方法:小鼠骨髓细胞悬液进行贴壁培养法分离出骨髓间充质干细胞,经培养扩增后按不同比例(10%及1%)与经过植物血凝素(PHA)刺激的小鼠淋巴细胞混合培养,流式细胞术检测趋化因子受体CXCR3,CCR5,CCR7在不同T细胞亚群中表达的变化。结果:在CD3+CD8+亚群中,添加了骨髓间充质干细胞的两个培养组均较对照组增高表达CXCR3及CCR7(P<0.05),而CCR5仅在10%MSC的高浓度组较对照组有增高表达。在CD3+CD4+亚群中,CXCR3的表达在10%MSC组、1%MSC组及对照组表达差异均无统计学意义(P>0.05);CCR5及CCR7在添加了骨髓间充质干细胞的两个培养组均较对照组增高表达,且在该两种骨髓间充质干细胞浓度梯度中呈剂量依赖性。结论:骨髓间充质干细胞在与淋巴细胞呈一定的细胞比例共培养时能不同程度上调T淋巴细胞及亚群表达趋化因子受体CXCR3、CCR5、CCR7,提示骨髓间充质干细胞可提高T淋巴细胞亚群的趋化能力。

实践教师团队模式 促进儿科学教学改革

为顺应现代教学模式发展,针对儿科学教学中存在的困难和问题,探索和实践教师团队模式,最大程度地发挥教师的个人专长和特色,实现优势互补,保证教学质量平衡发展;充分调动学生学习积极性;促进教师的自身发展;高效利用教师资源,缓解师资压力,从而促进儿科学的教学相长.

Fas死亡信号激发域cDNA的克隆、表达及体外生物学效应

目的 :克隆及表达Fas死亡信号激发域 (FasActivationDomain ,FasAD)片段 ,获得具有生物学活性的FasAD多肽。方法 :应用半巢式逆转录 多聚酶链反应 (RT PCR)扩增Fas死亡信号激发域cDNA片段 ,构建Intein表达型原核表达载体FasAD pTYB12 ,应用IMPACTTM CN系统表达及进行一步法亲合层析分离、纯化FasAD多肽。结果 :DNA序列测定显示克隆的FasADcDNA碱基排列顺序与Genebank(M6 74 5 4 )所示完全一致。重组表达载体FasAD pTYB12经IPTG诱导 ,成功表达可溶性融合蛋白 ,进一步分离、纯化获得分子量约 5 0 0 0的FasAD多肽 ,Westemblot显示FasAD多肽能被兔抗人Fas多抗识别。初步的生物学活性鉴定显示 ,该FasAD多肽抑制rhFasL诱导的细胞凋亡的生物学活性最高可达 70 %。结论 :可利用IMPACTTM CN系统制备Fas死亡信号激发域的小分子量多肽 ,为深入研究Fas结构与功能的关系及与配体的相互作用提供了相关的实验基础 ,为进一步开发相关的生物免疫调节剂提供了实验依据。

融合表达Fas死亡信号激发域的重组载体FasAD-pTYB2的构建

目的构建融合表达Fas死亡信号激发域(Fasactivationdomain,FasAD)的重组载体FasAD-pTYB2。方法应用半巢式逆转录-多聚酶链反应(RT-PCR)技术克隆Fas死亡信号激发域cDNA片段FasAD,插入通用载体pGEM-T中鉴定,然后装入Intein表达型原核载体pTYB2中,经IPTG(isopropylthio-β-D-galactoside)诱导表达融合蛋白。结果DNA序列测定显示克隆的cDNA片段序列正确。初步获得融合蛋白的表达,经Western-blotting鉴定,融合蛋白具有良好的Fas抗原性。结论上述结果提示可利用该表达型重组质粒制备人Fas死亡信号激发域多肽/intein的融合蛋白。

监测FasL表达评估异基因造血干细胞移植后T细胞免疫功能状态

目的评估异基因造血干细胞移植后Ｔ淋巴细胞免疫功能状态。方法采用三色荧光标记的流式细胞术，对４例异基因造血干细胞移植、２例自体干细胞移植患者移植前后的Ｔ淋巴细胞及其亚群的ＦａｓＬ表达进行监测。结果移植前Ｔ细胞的ＴａｓＬ、表达率仅（２.１３％±２.０２％），与正常对照组无显著差异（Ｐ＞０.０５），移植后异基因造血干细胞移植患者ＦａｓＬ表达水平升高，尤以急性ＧＶＨＤ患者表达升高显著（Ｐ<０.０５），而自体干细胞移植患者的ＦａｓＬ表达未见明显改变。结论异基因造血干细胞移植术后部分Ｔ淋巴细胞处于激活状态； ＦａｓＬ表达可能与ａＧＶＨＤ相关；对ＦａｓＬ表达的监测可从细胞、免疫分子两个层次对Ｔ细胞免疫功能状态进行评估，该体系的完善对临床判断预后、指导治疗可能有较直接的参考价值。

小卫星DNA序列特性及其在临床血液学中的应用

小卫星DNA序列具有高度多态性,高度杂合性和体细胞稳定性。小卫星DNA序列作为一种标志物应用于检测白血病微小残留病,对无特异性基因改变的急淋和急非淋有独特意义;应用于骨髓移植后的植入证明,灵敏度高,特异性强,且不受供者性别、血型及HLA型别的限制。

磁共振成像(T2~*)检测重型地中海贫血患者心脏、肝脏铁负荷及其临床意义

目的联合血清铁蛋白、心脏及肝脏磁共振T2-sta(rT2*)评估重型β-地中海贫血(β-TM)患者的心脏、肝脏铁超负荷的临床意义。方法南方医科大学南方医院输血+去铁治疗的β-TM中选择28例≥10岁,血清铁蛋白>1000μg/L的患儿,2010-2011年分批赴香港进行心脏T2*、肝脏T2*检测,检测结果分别与年龄、血清铁蛋白、左心室射血分数(LVEF)进行比较。结果 14例(50%)发生心肌铁超负荷,其中心脏T2*<10 ms(重度)7例,10-14 ms(中度)2例,15-20 ms(轻度)5例;肝脏铁过载28例(100%),其中2.7-6.3 ms(轻度)2例,1.4-2.7 ms(中度)7例,<1.4 ms(重度)19例;发生LVEF下降共2例(7.14%),其中1例患者重度心肌铁超负荷;肝脏T2*与心脏T2*呈正相关(r=0.378,P=0.047),心脏T2*与血清铁蛋白呈负相关(r=-0.479,P=0.01),年龄与血清铁蛋白、LVEF、心脏T2*、肝脏T2*均不相关。结论磁共振成像(T2*)是检测β-TM患者输血所致心脏、肝脏铁超负荷的有效、无创的手段,联合血清铁蛋白可作为评估机体重要脏器铁过载的主要诊断指标。

动员后的同胞骨髓联合脐血混合移植治疗儿童重型β-地中海贫血8例

目的：总结分析动员后的同胞骨髓联合脐血混合移植治疗儿童重型β-地中海贫血的效果。方法：南方医科大学附属南方医院儿科2005-01/2009-03行同胞骨髓＋脐血混合移植的重型β-地中海贫血患儿8例,男5例,女3例,年龄4.0-7.5岁,按Pesaro标准进行地中海贫血临床分度,Ⅰ-Ⅱ度7例,Ⅲ度1例。供者年龄1-4岁,预处理前4d开始予以粒细胞集落刺激因子10μg/（kg·d）,共5d,第5天抽取骨髓以及输注脐带血至患儿体内。结果：所有患儿均在移植后4周内恢复造血。8例患儿中有7例发生感染,4例患儿出现Ⅰ度肝静脉闭塞,2例患儿出现Ⅰ度急性移植物抗宿主病,1例患儿发生局限型慢性移植物抗宿主病。移植后32d因肺部感染和心脏衰竭1例死亡,7例存活。结论：动员后的同胞骨髓联合脐血混合移植治疗儿童重型β-地中海贫血安全可靠,初步结果满意,但移植后存在一定的并发症需高度重视。

磁共振检测重型β-地中海贫血患者内分泌腺体铁过载的临床意义

目的联合肝脏、胰腺、垂体磁共振T2-star(MRI T2*)评估重型β-地中海贫血(β-TM)患者相关脏器铁过载的临床意义,分析去铁酮治疗前后的肝脏、胰腺、垂体MRI T2*变化的临床意义。方法选择长期(输血史≥1年,输血次数>10次)治疗β-TM患者中年龄≥10岁26例,其中男性7例,女性19例。2010年7月～2011年7月规律输血,仅口服去铁酮去铁治疗,治疗前、服用去铁酮满1年时分别赴香港威尔斯亲王医院进行胰腺MRI T2*(胰腺T2*)、肝脏MRI T2*(肝脏T2*)、垂体MRIT2*(垂体T2*)检测。结果服用去铁酮治疗前,肝脏铁浓度(LIC)(22.42±7.21)mg/g;服用去铁酮满1年时,肝脏LIC(21.46±7.69)mg/g。治疗前后肝脏、胰腺、垂体MRI T2*值[(1.48±1.23)ms vs(1.55±1.18)ms,(9.09±9.96)ms vs(9.51±13.00)ms,(9.74±4.46)ms vs(10.14±4.76)ms]比较,差异无明显统计学意义(P>0.05)。治疗前后肝脏与胰腺MRI T2*值均呈正相关(P<0.05);治疗前后LIC与胰腺T2*值均呈负相关(P<0.05)。肝脏与垂体、胰腺与垂体MRI T2*值治疗前后均不相关(P>0.05)。年龄与肝脏、胰腺及垂体的MRI T2*值无相关关系(P>0.05)。结论 MRI T2*可以作为评估β-TM患者胰腺、垂体铁负荷有效、安全的检测工具;可通过肝脏铁负荷来推测胰腺铁负荷,胰腺铁负荷与年龄无关;但肝脏负荷并不能作为垂体铁负荷的推测手段。去铁酮的临床疗效难以定论,有待进一步研究。

由HbH病和重型β地中海贫血引起的一个罕见中间型地中海贫血病例及其产前诊断应用

目的分析1例中间型地中海贫血(地贫)患者的基因型与表型的关系,探索进行重症β地贫复合血红蛋白H病这类复杂基因型组合方式的产前诊断临床实践。方法表型检测采用标准的血液学分析技术测量红细胞参数和血红蛋白组分。采用反向点杂交技术诊断β地贫基因突变,采用缺口聚合酶链反应技术检测α地贫缺失突变。通过基于家系调查的表型与基因型分析探讨该病例的发病机制。利用羊水细胞DNA对该家系1例地贫高风险胎儿进行产前基因诊断。结果先证者诊断为β0/β+地贫(βCD17A>T/βIVS2-654C>T)双重杂合子复合血红蛋白H病(--SEA/-α4.2)的偏重的中间型地贫患儿,其父母分别为β地贫杂合子合并轻型α地贫和β地贫杂合子合并静止型α地贫个体。在此基础上,我们对该家庭的地贫高风险胎儿进行了产前基因诊断,结果显示胎儿的基因型为重症β地贫合并静止型α地贫,通过遗传咨询实施了中止妊娠。结论首次报道罕见中间型地贫案例,为国内外产前诊断提供可借鉴的临床经验。