糖尿病肾脏疾病预后影响因素的COX比例风险回归模型分析

目的基于COX比例风险回归模型分析糖尿病肾脏疾病(diabetic kidney disease,DKD)预后的影响因素,为临床早期评估和防治DKD提供科学的依据。方法收集多中心(河南中医药大学第一附属医院、河南中医药大学第三附属医院、河南省中医院及郑州市人民医院)2010—2021年就诊治疗的DKD患者资料,包括一般资料、实验室指标、中医辨证分型及中医药治疗,以肾小球滤过率(eGFR)下降≥50%、血肌酐(Scr)翻倍、DKD 5期、死亡为结局指标,随访其发生时间及情况,利用COX比例风险回归模型分析筛选DKD预后影响因素。结果本研究最终纳入1947例患者,随访时间为4.65(4.557~4.746)年,发生复合终点事件305例(15.67%)。单因素COX回归分析结果表明,不同年龄、DKD病程≥4年、饮酒史、吸烟史、高血压、冠心病、脑血管病、糖尿病足、糖尿病眼病、糖化血红蛋白(HbA1c)、血尿酸(SUA)、Scr、24 h尿蛋白定量(24 h-UTP)、eGFR、湿热血瘀证、脾肾气虚兼湿聚血瘀证、脾肾阳虚兼血瘀证、中药熏洗、服用中药患者DKD预后情况比较,差异有统计学意义(P<0.05)。多因素COX回归分析结果表明,年龄[HR(95%CI)=2.52(1.92,3.30)]、DKD病程[HR(95%CI)=1.62(1.09,2.42)]、吸烟史[HR(95%CI)=1.61(1.13,2.29)]、饮酒史[HR(95%CI)=1.41(1.01,1.95)]、脑血管病[HR(95%CI)=1.33(1.01,1.75)]、糖尿病眼病[HR(95%CI)=1.43(1.13,1.82)]、SUA[HR(95%CI)=1.72(1.26,2.33)]、24 h-UTP[HR(95%CI)=1.48(1.14,1.91)]、脾肾气虚兼湿聚血瘀证[HR(95%CI)=2.22(1.44,3.43)]与DKD发生终点事件的风险关系密切(P<0.05),服用中药[HR(95%CI)=2.57(2.00,3.31)]能够减少终点事件的发生(P<0.05)。结论年龄、DKD病程、吸烟史、饮酒史、脑血管病、糖尿病眼病、SUA、24 h-UTP、脾肾气虚兼湿聚血瘀证是影响DKD患者预后的危险因素,而服用中药治疗为其保护因素。

基于Hedgehog通路探讨理肺消积丸对NSCLC A549细胞周期、增殖和迁移的影响

目的探讨理肺消积丸对A549细胞的影响作用及对Hedgehog通路的调控作用。方法采用MTT实验筛选理肺消积丸含药血清对A549细胞最佳干预浓度后,将细胞分为6组:对照组、理肺消积含药血清组、Hedgehog通路抑制剂组(Vismodegib组)、顺铂组、理肺消积含药血清+Vismodegib组、理肺消积含药血清+顺铂组。不同干预后,分别采用CCK-8实验检测细胞增殖能力,采用克隆形成实验观察细胞克隆形成能力,采用Transwell实验观察A549细胞迁移能力,采用流式细胞术观察细胞周期比例的变化,采用qRT-PCR和Western blot技术检测Hedgehog通路中Gli1、Ptch1、Smo和CyclinD1 mRNA和蛋白表达的变化。结果浓度为10%的理肺消积丸含药血清能显著抑制A549细胞增殖(P<0.05),降低细胞克隆形成和迁移能力(P<0.05),阻滞细胞周期从G1期到S期转变,同时抑制Gli1、Ptch1、Smo和CyclinD1 mRNA和蛋白表达(P<0.05),且与Vismodegib有良好的协同作用。结论理肺消积丸可显著抑制A549增殖和迁移能力,作用机制可能与其调控Hedgehog通路阻滞细胞周期有关。

保肺化纤方调控TGF-β1/smad2/3、Wnt1/β-catenin信号通路对BLM/PM2.5诱导的特发性肺纤维化大鼠肺组织胶原沉积的影响

目的探讨保肺化纤方经转化生长因子(transforming growth factor,TGF)-β1/smad2/3、Wnt1/β-连环蛋白(catenin)信号通路减轻博来霉素(bleomycin,BLM)/PM2.5暴露诱导的特发性肺纤维化(idiopathic pulmonary fibrosis,IPF)大鼠肺组织胶原沉积的作用机制。方法SD大鼠随机分为对照(Control)组、BLM+PM2.5(Model)组、保肺化纤方(BHF)组、吡非尼酮(pirfenidone,PFD)组、XAV-939组、BHF+PFD组、BHF+XAV-939组。采用一次性气管内雾化BLM法制备IPF大鼠模型,大气PM2.5实时浓缩全身暴露和给予相应药物干预。检测大鼠肺功能,观察肺组织病理和胶原沉积;采用免疫组化技术检测肺组织Ⅰ、Ⅳ型胶原(collagen,COL)、TGF-β1、smad2/3、β-catenin蛋白水平;采用qPCR技术检测肺组织TGF-β1、smad2/3、Wnt1、β-catenin mRNA水平。结果与Control组比较,Model组大鼠肺功能显著降低(P<0.01),肺组织可见大量炎症细胞浸润,肺泡壁断裂、增厚,胶原沉积等肺纤维化特征性病理改变,肺组织胶原容积分数(collagen volume fraction,CVF)、COLⅠ、COLⅣ蛋白及TGF-β1、smad2/3、β-catenin基因与蛋白表达均显著升高(P<0.01);与Model组比较,各治疗组均有效改善大鼠肺组织病理改变,显著降低肺组织CVF及COLⅠ、COLⅣ、TGF-β1、smad2/3、β-catenin蛋白表达水平(P<0.05,P<0.01),同时BHF组、BHF+PFD组、BHF+XAV-939组均能显著提高大鼠肺功能(P<0.05,P<0.01),明显下调肺组织TGF-β1、smad2/3、β-catenin基因表达水平(P<0.01);与PFD组比较,BHF+PFD组大鼠肺组织COLⅠ、TGF-β1蛋白及smad2、β-catenin基因表达均显著降低(P<0.05,P<0.01);与XAV-939组比较,BHF+XAV-939组smad3基因表达显著降低(P<0.01)。结论保肺化纤方可改善BLM/PM2.5诱导的IPF大鼠肺组织病理损伤,减少胶原沉积,提高肺功能,改善肺纤维化,其机制可能与下调TGF-β1/smad2/3、Wnt1/β-catenin通路有关。

基于粗糙集理论的正交设计提取工艺因素方法的研究

目的研究药物制剂生产过程中因素之间的内在规律,探讨应用粗糙集理论寻求最优的工艺方案方法。方法以经典名方四物汤为例,利用正交设计试验预处理数据,建立决策表,利用粗糙集规则模型进行分析。结果当四物汤的提取时间、加水量和提取次数的因素水平逐渐增高时,多糖成分含量水平也呈递增趋势。当提取时间为1.5小时、加水量为1∶20、提取次数为2次时,试验结果最好,为四物汤优化提取工艺的三因素三水平最佳组合。结论应用粗糙集理论可以探究药物制剂生产工艺因素之间以及因素与试验结果之间的相关关系,更全面地揭示其内在动态规律,并提供一种新颖的研究方法,进一步提高药物制剂的工艺质量。

药物分析实验课程思政探索与实践

重新审视药物分析实验教学大纲和教学要求,挖掘药物分析实验课程所蕴含的思政元素和所承载的思政功能,将其融入教学目标、教学环节、教学项目及课程评价体系,将家国情怀、时代责任担当、敢于创新的科研精神和实事求是的马克思主义精髓等作为政治引领与专业知识和技能一起根植在学生的心田,努力培养全方位发展的药学人。

二至丸HPLC指纹图谱建立

目的建立二至丸HPLC指纹图谱。方法该药物60%甲醇提取液的分析采用Syncronis C_(18)色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相0.1%磷酸-乙腈,梯度洗脱;体积流量1.0 mL/min;检测波长272 nm。再进行聚类分析、主成分分析、偏最小二乘法分析。结果10批样品HPLC指纹图谱中有34个共有峰,指认出其中13个,相似度均在0.950以上。各批样品聚为2类,3个主成分可代表变量数据91.8%的信息,5、12、17、32、20、23、26号峰是质量差异标志物。结论该方法专属性强,稳定性、重复性好,可以用于二至丸的质量评价。

课程思政在卫生化学教学中的实践与探索

作为预防医学专业的一门重要专业基础课程,卫生化学与公共卫生和预防医学的发展息息相关,蕴含着丰富的思政元素。将思政教育融入专业课教学过程中,是实现知识传授与思想引领同向同行以及立德树人根本目标的有效途径。以爱国教育、创新精神和辩证思维等作为思政元素,将卫生化学和课程思政相结合,探讨了思政教育在卫生化学教学过程中的具体实施策略。

构建多模块实践教学模式 推进药学创新人才的培养

分析了如何在药学专业实践教学环节培养学生的创新能力。从多模块、多层次对高校学生创新意识的形成进行了探索,强调应加速实验室的全面开放,增加大学生参与科研实践的机会;通过开展学生科技创新实践活动,创造有利于创新型人才培养的氛围;通过完善学生的科技活动激励机制,提出了面向创新教育的实验教学改革探讨与实践,为培养新世纪创新人才开辟有效的途径。

大黄苷元对大鼠药物代谢酶CYP2A6、CYP3A4活性的影响

研究大黄苷元对大鼠体内药物代谢酶CYP2A6、CYP3A4活性的影响,以预测大黄与临床常用药物的相互作用.大鼠分组,分别灌胃不同质量浓度大黄苷元、质量分数0.5%羧甲基纤维素钠(CMC-Na)、苯巴比妥钠(PB)、地塞米松(DEX)、β-奈黄酮(β-NF)和酮康唑(KET),取各给药组给药后24 h的肝微粒体(RLM)与CYP2A6、CYP3A4的探针底物香豆素、睾酮进行体外温孵,通过高效液相色谱法分别测定各底物的代谢产物7-羟基香豆素、6β-羟基睾酮的生成量,考察大黄苷元对CYP2A6、CYP3A4活性的影响.大黄苷元高、中、低剂量给药组代谢产物7-羟基香豆素的生成量高于空白给药组和KET给药组,均有统计学意义(P<0.05)、(P<0.01),大黄苷元高剂量给药组代谢产物6β-羟基睾酮的生成量高于空白给药组和KET给药组,均有统计学意义(P<0.05)、(P<0.01).随着大黄苷元给药剂量的增加,7-羟基香豆素、6β-羟基睾酮的生成量均随之增加.大黄苷元对CYP2A6、CYP3A4均有诱导作用,并且随着大黄苷元剂量的增加,其对CYP2A6、CYP3A4诱导作用均增强.

大黄5种蒽醌类成分在大鼠肝微粒体中的代谢及酶促反应动力学

研究大黄5种蒽醌类成分在大鼠肝微粒体中的代谢特征和参与代谢的细胞色素P450亚型.超速离心法制备大鼠肝微粒体,采用反相高效液相色谱(RP-HPLC)测定孵育液中大黄5种蒽醌类成分的质量浓度,研究大黄蒽醌类成分的酶促动力学,推导药物米氏常数(Km)和最大反应速度(Vmax),并计算体外酶对药物的清除率(Clint);用苯巴比妥钠(PB)、地塞米松(DEX)、β-奈黄酮(β-NF)诱导大鼠肝微粒体,观察大黄5种蒽醌类成分在各温孵体系中的代谢,同时观察不同质量浓度和不同种类的CYP酶特异性抑制剂对大黄蒽醌类成分代谢的影响.结果表明大黄芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚在肝微粒体中的Km、Vmax、Clint分别为(18.97±1.89)、(2.50±0.11)、(15.68±1.09)、(183.41±1.90)、(1.37±0.14)mg·L-1;(0.52±0.015)、(0.066±0.003)、(0.41±0.009)、(5.22±0.09)、(0.036±0.0034)mg·L-1·min-1;(2.69±0.12)、(2.56±0.16)、(2.61±0.20)、(2.81±0.10)、(2.63±0.18)min-1·10-2;经DEX、PB、β-NF诱导后,PB组、DEX组大黄蒽醌类成分代谢率高于CMC-Na组,具有显著性差异(P<0.05),β-NF组大黄蒽醌类成分代谢率低于CMC-Na组,无显著性差异(P>0.05);非那西汀、氟康唑、酮康唑的Dixon图均为一组相交于第二象限的直线.通过研究得知大黄5种蒽醌类成分在PB、DEX诱导的肝微粒体中代谢较快,CYP3A4、CYP2A6为介导大黄蒽醌类成分代谢的主要代谢酶;非那西汀、氟康唑、酮康唑均为为大黄蒽醌类成分的竞争性抑制剂.

连翘中连翘苷和多糖的提取工艺优化及含量测定

目的通过正交设计优选出闪式提取法提取连翘苷的最优工艺。方法以提取物中连翘苷含量为指标,以乙醇浓度、料液比、提取时间为考察因素,采用正交实验法优选连翘苷的闪提最优工艺;对闪式提取和回流提取连翘苷后的药渣提取多糖,并比较多糖的提取率。结果闪式提取的最佳工艺为:电压120 V,加10倍量70%乙醇闪式提取1 min,提取2次。此条件下连翘苷的含量为4.50 mg·g-1;回流法提取连翘苷的含量为4.06 mg·g-1。闪式提取和回流提取法的药渣中多糖的出膏率分别为2.16%,1.51%。结论闪式提取的连翘苷的含量及药渣中多糖的出膏率均高于回流提取,该工艺稳定可行。

HPLC-ELSD法测定人参不同部位13种人参皂苷的含量

目的建立同时测定人参药材主根、侧根、须根、芦头中13种人参皂苷类成分含量的高效液相色谱-蒸发光散射检测器(high performance liquid chromatography-evaporative light scattering detector,HPLC-ELSD)法。方法采用Venusil XBP C_(18)(L)色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相:乙腈-水梯度洗脱,流速:1 mL·min^(-1),柱温:20℃,蒸发光散射检测器参数:载气流量为2.9 L·min^(-1),压力为5.5×10~5Pa,漂移管温度为107℃,增益为1。结果人参皂苷Rg_1、Re、Rf、Rh_1、Rg_2、Rb_1、Rc、Rb_2、Rb_3、Rd、F_2、Rh_4、Rg_3分别在0.90~18.04、0.93~18.50、0.77~15.40、0.30~6.02、0.30~6.05、1.80~36.00、1.31~26.26、1.37~27.40、0.30~6.05、0.52~10.33、0.30~6.12、0.30~6.02、0.30~6.02μg内呈良好的线性关系(r>0.999 0),平均加样回收率(n=6)为97.1%~101.8%,RSD≤3.0%。结论该方法可用于同时测定13种人参皂苷的含量。

三七中总皂苷闪式提取工艺

目的比较闪式提取法和回流提取法对三七总皂苷提取率。方法以三七提取物的出膏率和三七总皂苷含有量的综合评分为考察指标,采用正交试验法对提取的结果进行比较。结果闪式提取的最佳工艺为12倍量70%乙醇,提取1 min。结论闪式提取法所得三七总皂苷的量高于回流提取法,而且操作简便、高效、提取率高。

HPLC法同时测定不同产地金花葵中6个成分的含量

目的建立同时测定金花葵中绿原酸、芦丁、金丝桃苷、异槲皮苷、杨梅素和槲皮素6个成分含量的高效液相色谱法。方法采用Venusil XBP C18色谱柱(250 mm×4. 6 mm,5μm),以体积分数0. 1%甲酸水(A)-乙腈(B)为流动相,梯度洗脱,流速为1. 0 mL·min^(-1),检测波长为355 nm,柱温为25℃。结果绿原酸、芦丁、金丝桃苷、异槲皮苷、杨梅素和槲皮素分别在质量浓度0. 19～12. 42 mg·L^(-1)、0. 42～26. 64 mg·L^(-1)、3. 94～252. 0 mg·L^(-1)、2. 32～148. 4 mg·L^(-1)、0. 52～33. 12 mg·L^(-1)、0. 188～12. 06 mg·L^(-1)内呈现良好的线性关系(r≥0. 999 5),平均加样回收率(n=6)分别为100. 5%、99. 72%、99. 77%、99. 10%、99. 97%和98. 89%,RSD分别为2. 86%、1. 65%、1. 96%、1. 70%、2. 74%和1. 51%;不同产地金花葵中上述6个成分含量分别为0. 007 3%～0. 0261%、0. 015 9%～0. 074 8%、0. 648 3%～1. 076 3%、0. 196%～0. 582 0%、0. 038 8%～0. 118 5%和0. 020 2%～0. 052 7%。结论建立的方法能满足金花葵中6个成分含量的准确测定,为金花葵的质量评价以及合理开发提供参考。

固相萃取-高效液相色谱法测定大鼠血浆中大黄素甲醚及其药动学研究

目的:建立血浆中大黄素甲醚的血药浓度测定方法,研究大黄素甲醚在大鼠体内的药代动力学.方法:大鼠分高(105.6 mg/kg)、中(52.8 mg/kg)、低(26.4 mg/kg)3个质量分数灌胃给予大黄素甲醚后,于0.083~24.000 h内12个不同时间点采集大鼠血浆,采用固相萃取法处理血浆样品,高效液相色谱-荧光检测法(HPLCFLD)内标法测定血药浓度.采用Venusil XBP C18(L)(4.6 mm×250 mm,5μm)色谱柱,流动相为V_(甲醇)∶V_(0.1%磷酸水)=70∶30,柱温30℃,激发波长435 nm,发射波长515 nm,以DAS2.0软件拟合计算药动学参数.结果:大黄素甲醚的血药质量浓度在0.024 2~5.920 0μg/m L范围内线性关系良好(r=0.992 7),检测限为0.008 1μg/m L,定量限为0.024 2μg/m L,提取回收率均大于90%,日内、日间精密度RSD均小于6%,高(105.6 mg/kg)、中(52.8 mg/kg)、低(26.4 mg/kg)3个质量分数大黄素甲醚药代动力学参数t_(1/2)分别为(10.97±6.6)、(14.23±11)、(13.25±5.6)min;ρ_(max)质量浓度分别为(0.49±0.17)、(0.41±0.15)、(0.29±0.12)μg/m L,AUC_(0-t)每小时质量浓度分别为(3.28±1.3)、(1.98±1.4)、(1.91±1.5)μg/m L.结论:本实验所建立的SPE-HPLC适用于大黄素甲醚在大鼠体内的血药浓度测定及其药代动力学研究,操作简便、快速、灵敏.

复方脑脉通有效部位与药材指纹图谱相关性研究

目的:建立脑脉通(大黄、人参、葛根)有效部位的HPLC指纹图谱,研究复方与组方药材指纹图谱色谱峰相关性。方法:采用HPLC-PDAD方法,建立脑脉通有效部位及各药材在203nm检测波长下的指纹图谱,以色谱峰保留时间为考察指标,对复方指纹图谱色谱峰归属进行分析。结果:建立了脑脉通复方有效部位的HPLC对照指纹图谱,标示出36个共有指纹峰,对复方特征峰进行了归属分析,确定了14个特征峰的药材归属。结论:该指纹图谱有助于提高脑脉通有效部位的质量控制水平。

骨筋丸胶囊质量标准研究

目的:建立骨筋丸胶囊质量标准。方法:采用TLC法对处方中血竭、三七进行了定性鉴别;采用HPLC法对方中士的宁和马钱子碱进行了含量测定。结果:本品定性鉴别薄层色谱特征明显,专属性强;士的宁平均回收率为100.59%,RSD为1.44%(n=6),马钱子碱的平均回收率为99.27%,RSD为1.55%(n=6)。结论:薄层色谱鉴别和含量测定方法准确可行,重复性好,可有效地控制骨筋丸胶囊的质量。

通脉软胶囊质量标准研究

目的建立通脉软胶囊的质量标准。方法采用TLC法对处方中人参、冰片进行了定性鉴别;采用HPLC法对方中的人参皂苷Rg1、Re、Rb1进行了含量测定。结果本品定性鉴别薄层色谱特征明显,专属性强;平均回收率:人参皂苷Rg1为98.40%,RSD=1.88%;Re为98.21%,RSD=1.94%;Rb1为98.48%,RSD=1.42%。结论薄层色谱鉴别和含量测定方法准确可行、重复性好、方法简便,可作为通脉软胶囊的质量控制方法。

中药类研究生创新能力培养的研究与思考

结合多年教学实践和研究生培养经验,以研究生主体为研究对象,分析了制约中药学类研究生创新能力培养的影响因素,并提出了相应的对策和建议。