陈旧颅骨的DNA检验

陈旧颅骨DNA含量低且降解严重,一直是法医DNA检验的难点之一。本文介绍了一种改善陈旧颅骨DNA检验效果的方法,在几起陈旧颅骨案件DNA检验中,从取材部位的选择、脱钙液浓缩与回收、大体系提取纯化等方面对DNA提取进行优化,成功获得常染色体和Y染色体STR多态性检验结果。结果表明:颞骨岩部可作为陈旧颅骨检验优选的取材部位,与颅骨其他部位相比成功率较高;此外,在骨粉脱钙环节,利用Amicon Ultra-1510K离心超滤管可去除脱钙液中大量的水分和离子等小分子,从而将大分子DNA截留回收,有效降低了DNA损耗量;另外,陈旧颅骨DNA质量较差,提高骨粉使用量、增加提取纯化体系也能明显提升DNA回收量。本方法提高了陈旧颅骨的DNA回收量和质量,可为后续类似陈旧骨骼、牙齿DNA检验提供借鉴。

“温和”差异裂解法在性侵积案检验中的应用

本文通过分享一起性侵积案的检验过程及成功经验,总结出一种独特的“温和”差异裂解法,为处理陈旧混合斑检材提供一种新的解决方案。生物检材为案发时受害人穿的秋裤,前期PSA确证实验的结果为阳性,并通过一步裂解法获得了比较完整的男女混合DNA分型,随后通过常规的差异裂解法仅能获得上清女性分型,沉淀部分未获得有效分型结果。经过多次摸索,尝试将第一步女性成分裂解条件变为:裂解液1 mL,蛋白酶K(protease K,PK)工作浓度50μg/mL,37℃裂解20 min;女性成分消化结束后,沉淀洗涤次数调整为1 mL超纯水洗涤1次,最终成功获得了单一女性及单一男性的DNA分型。后续利用模拟的男女混合斑样本对该方法进行进一步测试,发现当混合斑中男女成分的比例不超过1∶40时,该方法具有良好的效果。

牙齿的DNA提取及STR分型研究

目的建立有效的牙齿DNA提取方法。方法使用物理及化学方法去除牙齿表面污染物,经脱钙、裂解、纯化从牙粉中提取DNA进行STR分型。结果对96例牙齿检材进行DNA检验,获得STR分型的有94例,在查找尸源的案件中发挥了重要作用。结论本方法操作简单快速,能够显著提高牙齿DNA检验的成功率。

脱落毛发及毛干DNA的STR分型研究

目的探讨脱落毛发及毛干细胞核DNA提取、含量和STR分型问题。方法对脱落毛发或毛干进行DNA提取和定量,使用低扩增体系、增加循环次数和多次平行扩增等方法扩增DNA样本,采用叠加比较的方法分析STR分型。结果 15cm脱落毛发样品DNA含量大于0.3ng的样品占52.8%,STR分型成功率为55.6%;15cm毛干样品DNA含量大于0.3ng的样品占30.6%,STR分型成功率为25%。结论采用增加循环次数、多次平行扩增等LCN-STR分型方法和Mini-STR试剂盒有助于脱落毛发及毛干的STR基因座分型获得。

一种焚烧骨骼的DNA提取方法

本文介绍了一种针对烧骨的DNA有效提取方法。对烧骨进行研磨制成骨粉,对骨粉进行大体系脱钙和裂解,采用Amicon~Ultra-15离心过滤器对获得的脱钙、裂解上清液进行浓缩,提高DNA的回收率,使用硅胶膜法对浓缩后的DNA溶液进行纯化,并经复合STR扩增检验。使用上述方法成功完成两起严重焚烧骨骼案件的检验,确定了受害人身源。

66年骨骼检验1例

近年来,骨骼的DNA检验技术取得很大进展,在一些疑难案件的侦破中屡见奇功,但对于时间特别长、微小破碎骨骼的检验成功率仍然较低。近来,作者利用实验室内建立的骨松质DNA检验方法快速成功检验了一根66年的掌骨,现报道如下。

葡萄胎的DNA检验

目的探讨一例强奸案中的葡萄胎样本的DNA检验及结果分析。方法用Identifiler试剂盒对葡萄胎样本和受害人血样进行荧光复合STR基因座扩增并分型。结果该例的葡萄胎在15个STR基因座上分型均为纯合子,应属于单精子受精的完全性葡萄胎。结论葡萄胎类型多种,对应着不同的DNA分型,在实际案件的检验中应引起注意。

显微操作法提取混合斑中精子细胞方法的探讨

目的尝试建立一种提取混合斑中精子细胞的检测方法。方法在人为控制条件下,制备精液—阴道液混合斑,分别使用显微操作法与差异裂解法分离精子细胞,提取DNA,进行STR基因型检测。结果采用显微操作法检测成功率11/12,差异裂解法成功率1/12,两者有显著性差异。结论显微操作法可有效获取精子细胞,排除女性物质和其它杂质的干扰,STR分型成功率优于差异裂解法。

土壤细菌群体多样性的T-RFLP分析应用探讨

目的探讨土壤细菌群体多样性的末端限制性片段长度多态性(terminal restriction fragment length poly-morphism,T-RFLP)分析在法庭科学应用的相关问题。方法依据不同土壤中的细菌群体存在多样性和差异,联合利用细菌16S rDNA序列、末端限制性片段长度多态性(terminal restriction fragment length polymorphism,T-RFLP)方法对5个来源不同的土壤样品和4个同一来源土壤样品的细菌群体多样性进行比较分析,计算土壤样品间的相似系数。结果不同来源的5个土壤样品间相似系数,最大者为0.44,最小为0.3;同一来源的4个土壤样品相似系数,最大为0.87,最小为0.76。结论不同来源土壤的细菌群体多样性存在差异。

藏獒犬11个STR基因座遗传多态性

目的建立犬STR复合扩增体系，为犬个体识别和亲权鉴定提供一种检测方法。方法用自行建立的11个犬STR基因座复合扩增体系，使用AB13130XL遗传分析仪，对107份藏獒唾液DNA样本的扩增产物进行检测及统计学分析。结果除1个基因座杂合度低于60％，其他10个基因座杂合度均高于70％；11个基因座PIC值均在0．6以上；11个基因座中有8个基因座的个体识别率在0．938以上，其余3个基因座均在0．826以上；父权排除率除TETRA为0．267，其余在0．401—0．749之间，偶合机率1．08×10^-18。结论此11个犬STR基因座在藏獒犬中具有较高的个体识别能力，可用于犬类个体识别和亲权鉴定。

DNA检验技术在野生动物保护中的应用

随着生物技术的发展,法医DNA检验技术在保护野生动物的工作中得到了越来越多的应用。本文介绍了全球野生动物犯罪现状及保护措施,简述了法医DNA检验技术在野生动物物种鉴定、来源地确认、个体识别和亲子鉴定等方面的实际应用,重点评述了法医DNA技术用于野生动物保护的几种常用检验方法以及各自的优缺点,探讨了法医DNA技术用于野生动物保护存在的问题及其发展前景。

由一起命案浅谈Y-STR应用新模式

Y染色体是男性特有的染色体,可用于判定父系遗传。以Y染色体遗传规律为基础,公安机关已建立了Y-STR家系种类排查方法,用以划定侦查范围、确定犯罪嫌疑人所在的家系。一般而言,Y-STR家系排查主要应用于封闭区域,具有良好的甄别作用,可有效提高办案效率,在开放性地域中应用作用有限。本文报道了一起发生在江苏省苏州市某地的恶性杀人案件,该案件的侦破中应用Y-STR技术确定犯罪嫌疑人籍贯,缩小侦查范围并最终破案,为建立一种Y-STR应用新模式提供了启示。

Y-STR单倍型在大家系中的差异研究

目的研究三种不同的Y-STR分型体系(Yfiler,Yfiler~?Plus和快速突变Y-STRs)在家系遗传过程中所展现出的变异程度。方法选取一遗传关系清晰的汉族家系,利用Yfiler~?Plus复合扩增系统和包含7个快速突变Y-STR基因座的复合扩增系统,得到所采男性样本32个Y-STR基因座的分型数据,统计分析Y-STR单倍型在世代遗传中的变化程度。结果同一家系不同男性个体的Y-STR单倍型具有一定的多样性,并且与Y-STR单倍型包含的基因座数量和基因座突变率有关;当家系中两名男性个体相隔10次减数分裂时,其Yfiler单倍型不一致的概率为7.35%,Yfiler Plus单倍型不一致的概率是91.2%,快速突变Y-STR单倍型不一致的概率则为100%。结论包含不同Y-STR基因座组合的Y-STR单倍型在世代遗传过程中的变化程度差异较大,在亲权鉴定和家系排查过程中特别是当Y-STR分型体系包含快速突变Y-STR基因座时应留心关注。本研究对Y-STR数据库建设中的采样规则和基因座选择也有参考价值。

单细胞分离检验技术在法医学中的应用研究

法医单细胞分离检验技术是微量混合DNA样本检验最有效的方法之一。常规的单细胞分离检验技术包括单细胞分离、单细胞裂解、PCR扩增、数据分析。本文将详细介绍单细胞分离检验技术原理和应用进展,同时展望了单细胞测序在法医DNA的应用前景。近5年来,单细胞分离、全基因组扩增和二代测序技术的结合而产生的单细胞测序技术,将为法医遗传学检测提供一种全新的技术和思路,尤其为微量混合生物样品检验提供全新的技术手段。

应用大麻性别检验技术破案2例

1案例案例1：某年8月,公安部物证鉴定中心一案件,要求对送来的疑似大麻烟检材进行鉴定。案例2：某年7月,公安部物证鉴定中心一案件,要求对送来的疑似大麻植物数株（干叶）,进行性别鉴定。

两种提取骨骼、牙齿DNA的方法

目的建立提取骨骼、牙齿DNA的新方法。方法收集380例骨骼、牙齿检材,其中347份为常规骨骼、牙齿(常规组),33份为陈旧骨骼、牙齿(疑难组)。常规组检材以Handy-Eco仪器、疑难组则用冷冻研磨仪研磨成粉,以Kingfisher自动化系统提取DNA,用Identifiler Plus进行STR分型检测。结果用HandyEco Kingfisher法(H-K法)成功提取345例常规骨骼、牙齿检材的DNA,成功率99.42%;用Freeze-mill Kingfisher法(FM-K法)成功获取32例疑难骨骼、牙齿检材的DNA,成功率96.97%。结论采用H-K法和FM-K法对骨骼和牙齿DNA的检验成功率较高,可选择应用于工作实践中。