BVDV-E2截短基因重组卡介苗对牛的免疫效果评价

为评价牛病毒性腹泻病毒(BVDV)E2截短基因重组卡介苗对牛的免疫效果,将BVDV抗原抗体阴性牛随机分为rBCG-pMV361-E2-1(1 aa-297aa)、rBCG-pMV361-E2-2(1 aa-345 aa)、rBCG-pMV361-E2-3(1 aa-374 aa)、rBCG-pMV361-E2-4(45 aa-297 aa)、rBCG-pMV361-E2-5(45 aa-345 aa)、rBCG-pMV361-E2-6(45 aa-374 aa)、BVDV对照组、BCG对照组和PBS对照组,各组牛免疫相应疫苗后通过特异性抗体检测、淋巴细胞增殖试验、淋巴细胞亚群检测和细胞因子检测分析疫苗的免疫效果。结果显示,BVDV E2截短基因重组卡介苗均可诱导BVDV特异性抗体的产生,rBCG-pMV361-E2-1组抗体水平高于其他重组卡介苗试验组和BVDV对照组。淋巴细胞增殖试验结果显示,rBCG-pMV361-E2-2组SI为2.038±0.21,显著高于其他重组卡介苗试验组(P<0.01)。牛外周血CD4^+、CD8^+T淋巴细胞亚群检测结果显示,rBCG-pMV361-E2-5组牛外周血中CD4^+和CD8^+ T淋巴细胞亚群含量与PBS组比较,差异极显著(P<0.01)。IFN-γ检测结果显示,rBCG-pMV361-E2-1的IFN-γ水平显著高于其他试验组和对照组(P<0.01)。研究表明,rBCG-pMV361-E2-1可诱导接种牛产生较好的体液免疫应答,rBCG-pMV361-E2-1、rBCG-pMV361-E2-2和rBCG-pMV361-E2-5在诱导细胞免疫应答上效果较好。

结核分枝杆菌的耐药机制研究进展

结核病是由结核分枝杆菌引起的一种人兽共患慢性传染病,随着结核分枝杆菌自身演变和抗结核病药物的使用,导致结核分枝杆菌产生耐药性。目前根据结核病患者是否接受过抗结核病药物的治疗,将结核分枝杆菌的耐药性分为两种,一种是原发性耐药,另一种是获得性耐药。为了探索结核分枝杆菌的耐药机制,本文对原发性与获得性耐药机制进行阐述,为后续新型抗结核病药物的研发奠定理论基础。

牛病毒性腹泻病毒E2蛋白的亚细胞定位研究

为深入研究牛病毒性腹泻病毒E_2蛋白的生物学功能,了解其在哺乳动物细胞中的亚细胞定位情况,采用RT-PCR扩增牛病毒性腹泻病毒Changchun184株E_2基因,将其克隆至真核表达载体pc DNA3.1/V5His A中,并进行酶切鉴定和测序分析,将构建的重组质粒pc DNA3.1/V5His A-E_2经脂质体介导转染至MDBK细胞。继续培养48h后,在激光共聚焦显微镜下观察E_2蛋白在细胞中的亚细胞定位情况。结果表明,E_2蛋白在细胞核与细胞质中均有表达,且绿色荧光呈点状均匀分布。该研究为进一步研究牛病毒性腹泻病毒E_2蛋白的相关功能奠定了基础。

牛病毒性腹泻病毒蛋白与宿主蛋白相互作用的研究进展

牛病毒性腹泻病毒(Bovine viral diarrhea virus,BVDV)属于黄病毒科、瘟病毒属,同属病毒还有经典猪瘟病毒(Classical swine fever virus,CSFV)以及羊边界病毒(Border disease virus,BDV)^([1])。该病毒为单股正链RNA病毒,基因组12.3 kb~12.5 kb,有囊膜,病毒粒子近似圆形,直径40 nm~60 nm,表面有明显的纤突,由一个大约编码4000个氨基酸的开放阅读框(Open reading frame,ORF)以及5’和3’两个非编码区(5’UTR和3’UTR)组成^([2])。BVDV 5’UTR序列高度保守约由380个核苷酸组成,其可通过自身结构的折叠形成特殊的二级结构,与宿主细胞内控制翻译起始和延伸的相关蛋白结合,从而通过与胞内相关因子的作用调控BVDV的转录及翻译;BVDV 3’UTR约由230个核苷酸组成,保守性也较高。有研究表明,BVDV 3’UTR和5’UTR共同控制病毒的翻译与复制^([3])。BVDV可分为BVDVⅠ型和BVDVⅡ型两种基因型,也可分为致细胞病变型(Cytopathic,Cp型)和非致细胞病变型(Non-cytopathic,Ncp型)两种生物型^([4-5])。共编码4个结构蛋白(囊膜蛋白Erns、E1、E2和核衣壳蛋白C)和7~8个非结构蛋白(N^(pro)、P7、NS23或NS3、NS4A、NS4B、NS5A和NS5B)^([6])。

牛呼吸道疾病综合征病原免疫逃避机制研究进展

牛呼吸道疾病综合症(Bovine respiratory disease corn-plex,BRDC)是由多种细菌和病毒感染引起的综合性疾病,给我国乃至世界养牛业造成了重大的经济损失[1]。BRDC病原体主要包括:牛疱疹病毒1型(Bovine herpesvirus-1,BHV-1)、牛呼吸道合胞体病毒(Bovine respiratorysyncytial virus,BRSV)、牛病毒性腹泻病毒(Bovine viraldiarrhea virus,BVDV)、牛副流感病毒3型(Bovine parin-fluenza-3virus,BPl3V)、牛冠状病毒(Bovine corona virus-es,BCV)、溶血性曼氏杆菌(Mannheimia haemolytica)、牛支原体(Mycoplasma bovis)、昏睡嗜组织杆菌(Histophilussonmi)和多杀氏杆菌(Pasteurella multocida)等[2]。

牛病毒性腹泻病毒非结构蛋白研究进展

牛病毒性腹泻病毒(BVDV)是引起牛病毒性腹泻-黏膜病(BVD-MD)的病原,感染后可造成牛腹泻、流产、繁殖障碍、持续感染等症状,且急性BVD致死率较高,对我国乃至世界养牛业造成了严重影响。目前,国内外对BVDV的研究主要聚焦在其结构蛋白方面,对于在BVDV复制、转录、翻译中起重要作用的非结构蛋白的研究较少,缺乏对BVDV非结构蛋白的功能进行系统的总结。论文对BVDV非结构蛋白功能方面近年来的研究进展进行了汇总,以期对今后牛病毒性腹泻黏膜病的致病机制、诊断及预防提供参考。

抑制鹿源多药耐药结核菌中药的筛选

为了筛选对鹿源多药耐药结核菌有效的中药耐药抑制剂,通过MABA法检测24种中药的水和乙醇提取物对多药耐药结核菌及标准菌H37Rv的体外抗菌效果,将筛选出的抗菌效果好的黄连醇提物和黄连水提物采用紫外分光光度法进行活性成分含量测定,同时以MABA法与标准品比较体外抗结核菌活性。结果显示,黄连、独活和侧柏叶有明显的抗结核活性,其中黄连水粗提物和乙醇粗提物效果最佳,测得它们活性成分即总生物碱含量分别为22.74%和35.23%,并显示二者与小檗碱的体外抗结核作用相同。

外泌体在动物病毒感染中作用研究进展

外泌体是最小的细胞外囊泡,作为一种重要的细胞间通讯载体,广泛存在于体液中。外泌体本身可以携带复杂的核酸和蛋白质,越来越多的研究表明其在病毒感染中起着重要作用。因此,病毒利用外泌体产生感染的作用机制受到了国内外学者的广泛关注。作者通过对近年来外泌体在病毒感染中相关作用的研究进行总结,以期为外泌体在抗病毒方面的研究提供参考。

反向遗传操作技术在瘟病毒属研究中的应用

反向遗传操作技术已经成为研究瘟病毒属的一条有效的途径。针对反向遗传技术在瘟病毒属基因结构和功能研究、致病机制研究和新型疫苗研制中的应用以及瘟病毒属的感染性克隆策略的选择进行了综述,以期为预防、控制和消灭瘟病毒属病毒提供参考。

酵母双杂交筛选与牛病毒性腹泻病毒NS4B互作的宿主蛋白

为探究NS4B蛋白在牛病毒性腹泻病毒(bovine viral diarrhea virus,BVDV)感染和复制过程中的作用,利用酵母双杂交(yeast two hybrid,Y2H)技术筛选与BVDV NS4B蛋白互作的宿主细胞蛋白质。以构建的BVDV NS4B重组质粒pGBKT7-NS4B作为诱饵质粒,采用酵母双杂交技术,与牛肾细胞MDBK-cDNA文库进行杂交。将获得的阳性克隆菌落经质粒抽提、测序分析和免疫共沉淀试验,确定可与NS4B互作的宿主细胞蛋白。结果表明,成功构建了诱饵质粒pGBKT7-NS4B,该质粒可在酵母菌中表达NS4B蛋白。采用酵母双杂交技术从牛肾细胞基因组文库获得14个阳性克隆,阳性克隆经测序、互补试验、免疫共沉淀验证后明确可与BVDV NS4B蛋白互作的宿主蛋白为SYNGR2和RABACI。上述研究为进一步研究BVDV NS4B蛋白在BVDV感染和复制中的作用机制奠定了理论基础。

HoBi瘟病毒一步法荧光定量PCR检测方法的建立

为建立快速检测HoBi瘟病毒的方法,根据GenBank提交的HoBi基因序列,使用软件设计2对引物和1条探针,通过体外转录获得定量标准品RNA。通过对荧光定量PCR将各反应条件进行优化,建立了HoBi瘟病毒一步法荧光定量PCR检测方法。该方法具有良好的特异性、敏感性和重复性,对牛病毒性腹泻病毒-1（BVDV1）-NADL、BVDV2-JN、猪瘟病毒（CSFV）、羊边界病毒（BDV）、小反刍兽疫病毒（PPRV）、牛轮状病毒（RV）和伪狂犬病病毒（PRV）核酸检测为阴性;最低核酸检测量为103拷贝/μL;组内变异系数和组间变异系数均小于2%。结果表明,所建立的HoBi瘟病毒一步荧光定量PCR检测方法具有特异性强、敏感性高、重复性好和快速等特点,可用于HoBi瘟病毒感染的流行病学调查和早期诊断。

鹿茸及鹿血中布鲁氏菌实时荧光定量PCR检测方法的建立

为建立可应用于快速检测鹿茸及鹿血中布鲁氏菌的方法,保证鹿产品的药用、食用安全,试验根据布鲁氏菌特异性基因IS711设计合成引物和探针,建立实时荧光定量PCR方法,对反应条件进行优化,并绘制标准动力学曲线,Y=-3.14X+37.62,R^(2)=0.997。结果表明:该方法具有良好的重复性、敏感性和特异性,组内、组间重复性试验Ct值标准差小于0.5,变异系数均小于2%,最小检测拷贝数为2.65×10^(1)Copies/μL。该方法对目的基因检测灵敏度高,可用于鹿茸及鹿血相关样本的检测,也可用于布鲁氏菌的定性和定量检测,为相关鹿产品的质量安全评估提供重要技术保障。

布鲁菌真核表达载体pVAX1-L7/L12-Omp31的构建及鉴定

根据Gen Bank中的布鲁菌核糖体蛋白L7/L12和外膜蛋白Omp31的基因序列设计引物,用重叠延伸PCR方法扩增融合基因,将基因克隆至p VAX1载体,构建p VAX1-L7/L12-Omp31重组质粒。采用脂质体转染的方法,将融合质粒转入Vero细胞中,用间接免疫荧光法和Western blotting检测转染后细胞外源基因的表达情况。结果显示:转染48 h后,融合基因蛋白在细胞内高效表达,为研究融合质粒在布鲁氏菌病动物模型中的免疫效果奠定了基础。