逆转录病毒介导HSV-TK基因治疗膀胱癌及旁观者效应的观察

目的 观察HSV TK/GCV治疗膀胱癌的体内效果及旁观者效应。方法 用逆转录病毒感染鼠源性膀胱癌细胞T739,以不同比例的T739和T739TK细胞建立膀胱癌腹腔肿瘤模型 ,同时 ,在背部皮下以母代细胞T739建立皮下肿瘤 ,观察GCV治疗前后肿瘤大小变化及动物存活时间。结果 动物存活时间随基因转移效率提高而延长 ,腹腔肿瘤生长受到抑制 ,背部肿瘤在 5 0 %以上转移效率时肿瘤生长缓慢。结论 HSV TK/GCV对膀胱癌的体内杀伤效应随基因转移效率提高 ,并存在远距离旁观者效应。

HSV-TK基因在膀胱癌小鼠体内的转移和丙氧鸟苷治疗效果

目的探讨HSV-TK基因在膀胱癌动物体内的转移途径,观察HSV-TK/GCV(丙氧鸟苷)系统体内治疗的效果。方法在T739同基因鼠膀胱癌皮下肿瘤模型中,以裸质粒DNA瘤内直接注射、脂质体包裹和逆转录病毒介导等3种不同方法转移HyTK基因,观察丙氧鸟苷对膀胱癌的治疗效果。结果脂质体复合物组及逆转录病毒组背部肿瘤生长减慢,抑瘤率分别为54%、68%;动物平均存活时间分别比对照组延长28.81%、44.16%。结论脂质体、逆转录病毒介导的基因转移是膀胱癌基因治疗的有效手段。

HSV-TK基因在膀胱癌的体内转移和GCV的治疗效果

[目的]探讨HSV TK基因在膀胱癌动物体内的合适转移途径 ,观察HSV TK/GCV系统的体内治疗效果。[方法]在T739同基因鼠膀胱癌皮下肿瘤模型中 ,以裸质粒DNA瘤内直接注射、脂质体包裹和逆转录病毒介导3种不同方法转移HyTK基因 ,观察GCV对膀胱癌的治疗效果。[结果]脂质体复合物组及逆转录病毒组背部肿瘤生长减慢 ,抑瘤率分别为54%、68%。动物平均存活时间分别比对照组延长28.81%、44.16%。[结论]脂质体。

单纯疱疹病毒胸苷激酶/丙氧鸟苷系统对膀胱癌体内杀伤作用的研究

目的 :探讨逆转录病毒介导的单纯疱疹病毒胸苷激酶 /丙氧鸟苷 (HSV TK/GCV)系统对膀胱癌的体内杀伤作用。方法 :用逆转录病毒载体感染鼠源性膀胱癌细胞株T739,体外观察其对GCV的敏感性。在鼠源性T739膀胱癌动物模型中 ,以逆转录病毒单次或重复感染方法介导TK基因转移 ,观察GCV治疗前后肿瘤体积大小及动物存活时间变化。结果 :TK基因导入T739后获得了GCV敏感性 ,体内肿瘤生长受到抑制 ,动物存活时间延长 ,但单次和重复感染组之间无差别。结论 :逆转录病毒成功介导膀胱癌体内基因转移 ,HSV TK/GCV系统在体内对膀胱癌有杀伤作用 ,其可望对膀胱癌作为基因治疗。

微创经皮肾镜取石术中肾盂压力改变对肾形态的影响

目的探讨经微创皮肾镜取石术(MPCNL)中肾盂内压力变化对肾及肾周形态的影响。方法 50例采用MPCNL处理的肾结石患者,术中通过逆行置入的输尿管导管连接尿动力学仪监测肾盂内压力,将压力≥40cmH2O且累计时间≥5min者作为高压组(n=21),其余为低压组(n=29),手术后即刻和术后13、、5d行CT扫描以明确肾及肾周形态变化。结果高压组肾盂压力平均为26.5(13～149)cmH2O,低压组为22.4(11～125)cmH2O。所有患者术后即刻均发现肾周积液,肾实质增厚1.2～4.3mm,与术前相比有统计学差异(P<0.05),术后即刻高压组肾实质厚度为17.4±1.7mm,与低压组(16.2±2.3mm)间有统计学差异(P<0.05),此后积液逐渐吸收,肾实质厚度与术前无统计学差异(P>0.05)。结论 MPCNL时肾盂压力仅有数分钟超过40cmH2O,灌注液的逆流和外渗是MPCNL常见现象,肾盂压力越高其程度越严重,但均可在短时间内吸收。

X线斜向辅助定位在经皮肾镜取石术中的应用

目的探讨在经皮肾镜取石术中应用X线斜向辅助定位法建立经皮肾通道的可行性。方法甲组101例,采用X线斜向辅助定位法建立经皮肾通道,乙组95例采用常规X线穿刺定位法,比较两组建立通道所需穿刺次数、穿刺时间及安全性上的差异。结果甲组平均穿刺次数2.1次,乙组4.1次;甲组平均穿刺时间4.5min,乙组12.4min;两者均相差显著(P<0.01)。甲组无大出血、肾盂穿孔,乙组2例出现肾盂穿孔,3例因穿刺导致严重出血终止手术或改开放手术。结论经皮肾镜取石术中应用X线斜向辅助定位法可快速确定经皮肾穿刺的角度和深度,简明、安全、易掌握,并适用于有开放手术史、肾脏旋转不良等情况下的穿刺。

前尿道内支架管在治疗前尿道狭窄中的应用

目的:观察在前尿道狭窄患者中留置前尿道支架管的临床疗效。方法:选取2005年1月至2008年5月在本院住院治疗及进行门诊尿道扩张的患者共38例作为治疗组,并将同期在本院采取尿道扩张器扩张的患者38例纳入对照组,通过最大尿流率(Qmax)及扩张次数等指标对两组的临床疗效进行对比分析。结果:尿流率检测表明留置支架管后所有患者的Qmax均较术前明显增加,对拔管后6个月随访结果进行分析,治疗组Qmax>15ml/s的患者显著多于对照组(P<0.05)。结论:采用前尿道内留置支架管治疗前尿道狭窄不但显著减少扩张次数,减轻患者的经济负担,也显著改善患者的生活质量,前尿道狭窄患者中留置前尿道内支架管不失为临床上一种较好的治疗手段,并取得了良好的预期效果,简单易行,效果确切,值得推广。

留置前尿道内支架管治疗前尿道狭窄疗效观察

目的观察留置前尿道支架管治疗前尿道狭窄的临床效果。方法选取2005—2008年5月在我院住院治疗或门诊就诊的尿道狭窄患者共38例作为治疗组,选取同期采取尿道扩张器扩张的患者38例作为对照组,观察两组的治疗效果。结果采用前尿道支架管治疗前尿道狭窄显著减少了尿道扩张次数,术后进行的尿流率检测表明留置前尿道支架管后所有患者的最大尿流率均较术前明显增加,与对照组比较差别有统计学意义(P<0.05),并能有效改善患者的主观症状。结论前尿道狭窄患者中留置尿道内支架管为一种较好的治疗手段,并取得了良好的预期效果,有进一步推广的价值。

尿道下裂手术术式的选择及护理

目的:探讨尿道下裂手术术式的选择及护理体会。方法:选取2003年5月～2008年9月期间收治的93例确诊尿道下裂患者,对阴茎头型患者采用尿道口前移、阴茎头成形法(MAGPI术式);尿道口在阴茎体外2/3段伴有阴茎轻度下弯者采用尿道板纵切卷管法或加盖岛状皮板法(Snodgrass术或On-lay术);有严重阴茎下弯的所有阴茎体型采用横裁或纵裁包皮岛状皮瓣尿道成形(Duckett术);阴囊型或会阴型用阴囊中缝皮管加横裁包皮岛状皮瓣成形尿道(Duplay联合Duckett术);对重度尿道下裂患儿采用弧形带蒂阴茎阴囊联合皮瓣尿道成形术;对腹侧包皮外板发育良好患儿及合并阴茎下曲的患儿采用腹侧带蒂帽状包皮皮瓣法。结果:治愈82例,并发尿道瘘6例,尿道狭窄5例,治愈率为88.1%(82/93)。81例获随访,平均随访时间23.5个月(1～42个月),随访期间患儿排尿正常。结论:尿道下裂术式的选择并无统一标准,主要根据术者的经验及患者尿道及阴茎、阴囊皮瓣发育情况选择。细心周到的术后护理能降低术后并发症的发生率。

三聚氰胺氰尿酸盐致肾脏损害的实验研究

目的研究三聚氰胺氰尿酸盐对大鼠肾脏的毒性作用。方法 SD大鼠90只,随机分为200、400mg/kg三聚氰胺氰尿酸盐组和对照组,每组30只。三聚氰胺氰尿酸盐组分别给予200、400mg/kg三聚氰胺氰尿酸盐灌胃,对照组则给予2ml无菌蒸馏水灌胃,每天1次,连续60d。各组随机选定6只大鼠用代谢笼收集前7d的24h尿液,进行24h尿量和24h尿酸排泄量测定及尿沉渣涂片检查。各组分别于灌胃第4、14、31、45、60天随机处死6只大鼠进行血肌酐、尿素氮、尿酸、血清胱抑素水平测定,并观察肾组织病理改变及晶体形成情况。结果与对照组比较,200mg/kg三聚氰胺氰尿酸盐组大鼠尿量增多(P<0.05),而400mg/kg三聚氰胺氰尿酸盐组大鼠尿量仅在第7天时低于对照组(P<0.05)。随着药物剂量的增高及时间延长,三聚氰胺氰尿酸盐组大鼠血清胱抑素逐渐升高,而血尿酸浓度逐渐降低(P<0.05)。200mg/kg三聚氰胺氰尿酸盐组从第31天、400mg/kg三聚氰胺氰尿酸盐组从第4天测得尿素氮、血清胱抑素、肌酐升高(P<0.01)。第2天开始三聚氰胺氰尿酸盐组尿沉渣涂片发现特异性晶体。200mg/kg三聚氰胺氰尿酸盐组给药第31天以及400mg/kg三聚氰胺氰尿酸盐组给药第4天解剖发现大鼠肾脏开始出现病理改变。结论一定剂量三聚氰胺氰尿酸盐连续灌胃可使大鼠肾脏内形成三聚氰胺氰尿酸盐晶体,并在晶体形成前导致肾小球滤过功能受损,此晶体堵塞肾小管可造成肾脏损害甚至急性肾衰竭。此外,三聚氰胺氰尿酸盐具有一定的利尿作用,可影响尿酸代谢,降低血尿酸的浓度。

全反式维甲酸增强HSV-TK/GCV对BIU-87细胞旁观者效应的观察

目的 体外观察全反式维甲酸 (all transretinoicacid ,ATRA)对BIU -87细胞缝隙连接细胞间通讯 (gapjunctionintercellularcommunication ,GJIC)及旁观者效应的影响。方法 用染料划痕标记技术观察ATRA对BIU- 87细胞GJIC功能的影响 ,MTT法观察ATRA处理后HSV TK/GCV对BIU- 87细胞旁观者效应的变化。结果 ATRA显著改善BIU- 87细胞GJIC功能 ,并提高HSV -TK/GCV的旁观者杀伤作用。结论 ATRA可以改善BIU -87细胞间通讯功能 ,可能是ATRA增强HSV

微创经皮肾镜取石术对肾功能的影响

目的通过测定尿蛋白的改变明确微创经皮肾镜取石术对肾功能的影响。方法对50例复杂性肾结石患者行微创经皮肾镜取石术，术后即刻及术后每天留取患侧肾造瘘管尿标本定量测定尿微量白蛋白（尿Atb）及β2微球蛋白（尿β2-M）。结果术前尿微量白蛋白高于正常，术后即刻尿微量白蛋白明显增高，与术前相比差异有统计学意义（P〈0．05），此后尿微量白蛋白逐渐减少，但第5天尿微量自蛋白仍高于正常，与术前相比差异有统计学意义（P〈0．01）；术后即刻尿β2-M明显增高，与术前相比差异有统计学意义（P〈0．01），此后逐渐恢复，于术后第4日恢复至术前水平，术前相比无显著性差异（P〉0．05），术后第5天较术前相比差异有统计学意义（P〈0．05），尿β2-M趋于更少。结论微创经皮肾镜取石术后出现了短暂肾功能损害，在保持通畅引流及避免感染的情况下肾功能逐渐好转，但仍需一定时间才能恢复。

经皮肾穿刺取石术中影响肾结石一次清除率的原因

目的:探讨在经皮肾穿刺取石术中影响肾结石一次清除率原因,并提出相应的对策。方法:在对435例肾结石患者行经皮肾穿刺取石术的不同的时间段,分别使用B超或X线引导、气压弹道或钬激光碎石、俯卧位或侧卧位等方法。结果:不同的时间段、结石和方法导致结石的一次清除率不一致,333例结石一次性清除,其余102例结石需再次经皮肾穿刺取石术或ESWL处理,但有43例拒绝再次治疗。结论:在经皮肾穿刺取石术中术者的经验和判断、肾结石的复杂性、肾穿刺部位的准确性、灌注液的外渗、肾出血等因素是影响肾结石一次清除率重要原因,应在术前应作好个性化方案;肾结石一次清除率对结石的总清除率有重要影响。

微创经皮肾镜取石术治疗复杂性肾结石

目的探讨微创经皮肾镜取石术治疗复杂性肾结石的方法及效果。方法回顾性分析167例（共194。肾）复杂性肾结石患者诊疗资料：肾盂肾盏多发结石96例（共113肾），结石最长径2．8cm（2．0～4．6cm）；肾铸形或鹿角形结石71例（共81肾），结石最长径5．8cm（4．1—8．4em）。采用微创经皮肾镜取石术，碎石方法为联合应用钬激光和气压弹道碎石。结果建立经皮肾通道211条，从穿刺到建立第一条通道时间平均6min；X线透视平均时间为52s；其中10例二次取石；单通道取石177侧患肾，双通道取石17侧患肾。结石清除率84．02％（163／194），平均手术时间85min，平均住院时间12d；术后平均血红蛋白下降12．8∥L，其中6例输血，2例延迟出血，1例经输血、抗炎等保守治疗治愈，1例行肾动脉选择性栓塞，脓毒血症2例经加强抗感染、对症治疗后治愈，无周围脏器损伤等严重并发症。结论微创经皮。肾镜取石术疗效确切，具有高效、安全、并发症少等优点，是治疗复杂性肾结石的有效办法。

HyTK基因转导联合丙氧鸟苷对鼠膀胱癌细胞的体外杀伤作用

目的 探索HyTK基因转导丙氧鸟苷 (ganciclovir,GCV)对鼠膀胱癌细胞的影响。方法 脂质体介导法将PL(HyTK)SN质粒转染PA3 17细胞 ,潮霉素B筛选 ,直到出现抗性克隆 ,扩增培养 ,NIH3T3细胞测定病毒滴度 ,用逆转录病毒上清液感染T73 9细胞 ,潮霉素B筛选 ,直到出现抗性克隆 ,扩增培养 ,命名为T73 9 TK。RT PCR对T73 9 TK细胞进行鉴定。然后观察其在体外膀胱癌细胞的杀伤作用。结果 RT PCR证实HyTK基因已插入T73 9细胞并有其mRNA的表达 ,经不同浓度GCV处理后的T73 9 TK细胞均表现出有杀伤作用 ,而T73 9细胞在各个剂量的GCV作用下生长均良好。结论 GCV对转导了HyTK基因的T73

“十字定位法”建立手术通道在经皮肾穿刺取石术中的应用

目的探讨经皮肾穿取石术中通过简单精确的定位建立手术通道的方法。方法术中用C臂机垂直和水平透视,确定穿刺点与结石的水平和垂直距离,计算出进针的角度和深度,精确穿刺。结果86例患者的102条手术通道均一次快速穿刺成功,准确建立。结论“十字定位穿刺法”能确保经皮肾穿刺取石术中快速安全建立手术通道。

经尿道灌注自杀基因治疗大鼠膀胱癌的实验研究

目的:探讨经尿道膀胱灌注脂质体和逆转录病毒载体介导的自杀基因(HSVtk),观察在羟基无环鸟苷(ganciclovir,GCV)作用下大鼠膀胱肿瘤的生长情况。方法:用N-甲基-亚硝基脲(MNU)膀胱灌注建立大鼠原位膀胱癌模型。经尿道膀胱灌注脂质体、逆转录病毒载体HSVtk基因,随后腹腔内注射GCV,连续6天。结果:经尿道膀胱灌注HSVtk基因后48h,RT-PCR检测出膀胱肿瘤中HSVtk基因表达。逆转录病毒组和脂质体组膀胱总重量与裸质粒组和对照组相比有显著差异,表明膀胱肿瘤的生长被抑制。TUNEL法原位检测肿瘤组织中凋亡细胞不仅出现在表层细胞,而且深层细胞大量凋亡,推测旁观者效应可能发挥了一定作用。结论:经尿道膀胱灌注脂质体DNA或重组逆转录病毒载体可以向肿瘤转导HSVtk基因。HSVtk/GCV系统能抑制大鼠原位膀胱肿瘤的生长,显示出抗肿瘤作用。

膀胱灌注逆转录病毒载体HSV-TK基因治疗大鼠膀胱癌

目的：研究膀胱内灌注逆转录病毒载体单纯疱疹病毒胸腺嘧啶核苷激酶(HSVtk)基因治疗膀胱癌的作用。方法：用 N-甲基-亚硝基脲(MNU)膀胱灌注诱导建立大鼠原位膀胱肿瘤模型，该肿瘤与人类膀胱肿瘤病理特点非常相似。随后经尿道膀胱灌注逆转录病毒载体 HSV-TK 基因，腹腔内注射羟基无环鸟苷(ganciclovir，GCV)，连续6天。结果：经尿道膀胱灌注逆转录病毒 HSV-TK 基因后48小时，RT-PCR 检测出膀胱肿瘤中 HSV-TK 基因表达。GCV 处理后，肿瘤体积以及膀胱总重量检测表明膀胱肿瘤的生长被显著抑制。肿瘤细胞 DNA 电泳显示诱导凋亡可能是 HSV-TK/GCV 系统治疗肿瘤的重要机制。结论：经尿道膀胱灌注重组逆转录病毒载体可以向肿瘤转导 HSV-TK 基因。HSV-TK/GCV 系统能抑制鼠原位膀胱肿瘤的生长。

HSV-TK/GCV系统对鼠膀胱癌远距离旁观者效应的实验研究

目的 探讨单纯疱疹病毒胸腺激酶(HSV- TK)基因联合羟基无环鸟苷(GCV)对体内膀胱癌的远距离旁观者效应的效果。方法 将转染HSV -TK基因的膀胱癌细胞和未转染HSV TK的膀胱癌细胞分别种植于小鼠双侧背部;给予GCV治疗,观察肿瘤的大小变化,小鼠存活天数改变,及膀胱癌细胞病理学改变。结果 在HSV- TK/GCV系统作用下,转染HSV- TK的TK +肿瘤大小明显小于对照组,肿瘤生长受到抑制;但对侧未转染HSV -TK基因的TK 肿瘤产生远距离旁观者效应不明显。结论 HSV- TK/GCV系统对体内其他部位未转染HSV- TK基因膀胱癌细胞产生远距离旁观者效应不明显。

NGAL在肾间质纤维化不质阶段的表达及意义

目的动态观测单侧输尿管梗阻（UUO）大鼠肾组织中中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白分子（NGAL）的表达变化，探讨NGAL在肾小管间质纤维化发展中的作用机制。方法48只SPF级雄性SD大鼠随机分为UUO模型组及假手术（SOR）组，每组24只，UUO组行左侧输尿管梗阻术，SOR组仅游离左侧输尿管不结扎。术后第1、4、7、14天分别处死每组6只大鼠，取左。肾行HE和Masson染色，并用免疫组化ELiVision^TM—plus法检测肾组织NGAL的表达。结果HE、Masson染色切片示：UUO组间质损伤指数与肾纤维化程度在术后不同时间点明显高于SOR组（P〈0．05）。免疫组化结果显示：SOR组大鼠肾组织中肾小管有一定量NGAL表达，UUO组术后第l天NGAL表达显著升高，第4天与其相比，差异无统计学意义，术后第7天表达量下降，术后第14天时明显低于第7天（P〈0．05），但仍高于SOR组（P〈0．05）。结论实验大鼠梗阻侧肾组织中NGAL的表达在梗阻早期明显上升，并保持一定高表达状态，但随着梗阻时问延长而下调，提示NGAL可能在肾间质纤维化早期起负向调节作用。