肝细胞性肝癌病因学研究

１概述就世界范围而言，肝细胞性肝癌（ＨＣＣ）占癌肿的第６位，而为癌肿死因的第３位．仅１９９６年据估计全世界即有５４００００新病例被诊断，占全年所有新发现癌肿病例之５２％（ＷＨＯ，１９９７．Ｆｏｏｄ，ｎｕｔｒｉｔｉｏｎａｎｄｔｈｅｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ...

炎症性肠病的病因与发病机制

炎症性肠病(Inflammatory bowel dise-ase,下称IBD)主要包括克隆(Crohn)病(下称(CD)及溃疡性结肠炎(Ulcerative Colitis,下称UC).UC在国外常见,自50年代以来,年发病率为5/10万,在发展中国家有增加趋势.

悉尼胃炎分类法及其有关的几个问题

1990年8月悉尼召开的第九届世界胃肠病学大会上,Misiewicz 等提出的胃炎新分类法引起了学术界的广泛关注,本文拟对悉尼分类法作一概括性介绍,结合该分类法,对与慢性胃炎有关的几个问题进行讨论.一、悉尼胃炎分类法的主要内容与特点悉尼分类法由组织学和内镜两部分组成。组织学以病变部位(胃窦、胃体、全胃)为核心,确定三种基本诊断:急性胃炎,慢性胃炎及特殊类型胃炎。加上前缀病因学诊断和后缀形态学描述。悉尼分类法中所列的胃炎病因和(或)与发病相关的因素见表1。

加强对胃癌癌前状态的研究

我国每年死于胃癌者达16万人,居恶性肿瘤的首位。中晚期胃癌治疗效果很差,而早期胃癌经手术切除后,五年生存率则在90％以上。因此早期发现、早期确诊极为重要。胃癌的早期诊断,目前仍主要依靠胃镜检查,通过活检而确立。胃癌患者,一旦出现症状,再求医作胃镜,往往已过早期阶段。在一般人群中进行胃镜普查,消耗人力、物力甚大,我国目前条件,尚难办到。

关于非溃疡性消化不良的诊断和治疗

1991年全军非溃疡性消化不良(non-ulcer dyspepsia,NUD)专题研讨会对NUD的命名、定义、分类、诊断标准、研究方向以及与某些具有消化不良的疾病间的关系作了细致讨论,形成纪要[本刊1992;(1):68],读后受益非浅。正如纪要上所述,过去曾将某些一时不易明确诊断的疾病都扔到NUD这个“字纸篓”中,

非溃疡性消化不良

消化不良(dyspepsia)一词的含义甚不明确,而临床上极为常见,通常是指一组来自上消化道的症状,主要包括上腹痛或不适、食后饱胀、易饱、厌食、嗳气、烧心、反胃、恶心及呕吐等。消化不良可由许多上消化道器质性疾病或全身性疾病引起,其中尤以消化性溃疡病为常见。自从x线及内镜被广泛应用以来,溃疡病的诊断已日趋完善,可将消化不良分为溃疡性及非溃疡性两大类。

胃肠道水、电解质及酸硷平衡失调

水、电解质及酸硷失调在胃肠道疾病中极为常见,严重者可以致命。本文拟就正常胃肠道中水与电解质的转运及常见胃肠疾病中水电解质及酸硷失调情况作一简要的介绍。为了叙述方便,分胃源性及肠源性两部分进行叙述。正常胃肠道水与电解质的转运胃肠道内包含两部分体液:一部分是胃肠壁内的细胞外液,另一部分是胃肠腔内的食糜。

不同病变胃粘膜端粒酶活性及其亚单位的检测

目的：探讨端粒酶及其亚单位（ＴＰ１、ｈＴＲ、ｈＴＲＴ）在胃粘膜癌变过程中的作用。方法：端粒酶的检测采用端粒末端重复序列扩增技术（ｔｅｌｏｍｅｒｉｃ ｒｅｐｅａｔ ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｐｒｏｔｏｃｏｌ，ＴＲＡＰ），端粒酶亚单位的检测采用ＲＴ－ＰＣＲ法。结果：端粒酶阳性检出率在慢性萎缩性胃炎、肠上皮化生、异型增生及胃癌中分别为２４．６％（１４／５７）、３８．９％（７／１８）、３７．５％（３／８）及９２．３％（６０／６５），正常胃粘膜未检测到端粒酶活性，与以上各病变组织有显著性差异（Ｐ＜０．０５～０．０１），而慢性萎缩性胃炎、肠上皮化生和异型增生组织中端粒酶阳性率亦明显低于胃癌组织（Ｐ＜０．０１）；端粒酶的表达与临床病理指标无相关性；ＲＴ－ＰＣＲ定性检测发现端粒酶亚单位ｈＴＲ和ＴＰ１在大多数胃粘膜中都有表达，而ｈＴＲＴ主要在胃癌及部分癌前组织中表达，且在胃癌中ｈＴＲＴ的表达与端粒酶活性之间具有明显的相关性（Ｐ＜０．０１）。结论：端粒酶不仅在胃癌组织中高表达，在部分癌前组织中也有表达。提示端粒酶在胃癌的发生过程中可能具有重要作用；端粒酶亚单位ｈＴＲＴ不仅可能作为胃癌的诊断指标，而且还可能作为胃癌基因治疗的靶?

As_2O_3对胃癌细胞周期及端粒酶活性的影响

目的 探讨三氧化二砷 (As2 O3 )对SGC 790 1胃癌细胞端粒酶活性及细胞周期的影响及其机制。方法 细胞凋亡、细胞周期分布及相关蛋白的表达采用流式细胞术 ;端粒酶活性的检测采用端粒末端重复序列扩增 ELISA法 (TRAP ELISA) ,端粒酶亚单位mRNA及c mycmRNA的表达采用RT PCR技术。结果 As2 O3 可明显抑制SGC 790 1细胞的生长 ,细胞凋亡率明显增加 ,G0 /G1期细胞减少 ,S和G2 /M期细胞增加 ,Bcl 2、c myc、PCNA蛋白表达减少 ,Bax蛋白表达增加 ,端粒酶活性明显下降 ;端粒酶亚单位hTR和TP1mRNA无明显变化 ,hTRTmRNA表达减少 ,同时 ,c mycmRNA的表达亦减少。结论 As2 O3 对SGC 790 1细胞的抑制作用可能是通过二条途径实现 :一个是诱导细胞凋亡 ,另一个是通过下调hTRTmRNA的表达来下调端粒酶活性 ,其机制有可能与c myc和Bcl 2基因的减少以及Bax基因的增加有关。

人端粒酶蛋白催化亚单位反义基因转染对胃癌细胞恶性表型的逆转作用

目的 探讨人端粒酶蛋白催化亚单位（ｈＴＲＴ）反义基因治疗对胃癌细胞恶性表型的逆转作用。方法 采用基因重组技术，构建ｈＴＲＴ正、反义真核表达载体，采用脂质体法导入ＳＧＣ－７９０１细胞，检测细胞生长曲线、端粒酶活性凋亡、细胞周期、软琼脂中克隆形成率及裸鼠体内成瘤性的变化。结果 成功构建ｈＴＲＴ正、反义真核表达载体，并导入ＳＧＣ－７９０１胃癌细胞株中，获得稳定表达正、反义基因的细胞系７９０１－Ｓ、７９０１－ＡＳ１和７９０１－ＡＳ２。７９０１－ＡＳ１和７９０１－ＡＳ２出现显著生长抑制现象，端粒酶活性明显下降，细胞凋亡增加，异型性减小，Ｇ０／Ｇ１期细胞增加，Ｓ和Ｇ２Ｍ期细胞减少，增殖指数减小，软琼脂中无克隆形成，裸鼠体内成瘤消失。结论ｈＴＲＴ反义基因治疗可以明显抑制ＳＧＣ－７９０１细胞的增殖，部分逆转肿瘤细胞的恶性表型，其机制可能主要是通过诱导细胞分化而非诱导细胞凋亡途径实现的，提示ｈＴＲＴ基因可以作为肿瘤治疗的靶基因。

胃幽门螺杆菌感染与抑癌基因失活的关系

目的探讨胃癌及癌前病变组织中幽门螺杆菌(H.pylori)感染与抑癌基因失活间的相互关系.方法运用 DNA-PCR 技术检测 H.Pylori 感染,采用 PCR-RFLP,PCR-SSCP,RT-PCR 及免疫组化技术分析182例胃癌及癌前病变及正常胃粘膜中抑癌基因 APC,MCC,DCC,YNZ22及 p53基因的杂合缺失、突变、mRNA 及蛋白异常表达.结果胃癌及癌前病变组织中 H.pylori 的感染率(IM61.7%,Dys 63.3%,GC 42.3%)显著高于正常胃粘膜(17.5%,P<0.05).但胃癌及癌前病变间 H.pylori 感染率无显著差别(P>0.05),胃肠两型胃癌中 H.pylori 感染率分别为47.1%及42.2%,两者无显著差别(P>0.05).胃癌及癌前病变组织中存在多种抑癌基因失活.H.pylori 感染与癌前病变-肠化生中 APC 基因异常蛋白表达有关(Hp^+43.2%vsHp^-13.0%,P<0.05).胃癌组织 H.pylori 感染阳性组中APC 基因突变(50.0%)及蛋白表达(63.6%)、p53基因蛋白表达率(59.1%)显著高于阴性组(vs 16.7%,P<0.05;vs30.0%,P<0.01;vs 20.0%,P<0.01).结论幽门螺杆菌感染及多种抑癌基因失活可能与胃癌的发生发展相关,H.pylori 感染与 APC,p53基因失活可能相关.

胃癌前组织和胃癌中Bax基因表达及其与细胞凋亡的关系

目的为探讨胃癌前组织及胃癌中 Bax 基因表达状况及其与细胞凋亡的关系.方法应用原位杂交和免疫组化技术检测正常胃粘膜10例、慢性胃炎72例和胃癌53例中/Bax 基因的表达,并采用凋亡细胞原位检测方法对组织切片中凋亡细胞进行原位观察和比较.结果 Bax 基因在正常胃粘膜及不同胃粘膜病变中均有不同程度的表达.Bax mRNA 在肠化生中的表达率为69.4%,显著高于正常胃粘膜(20.0%,X^2=7.892,P<0.01).Bax 蛋白在肠化生中的表达率为77.8%,显著高于正常胃粘膜(30.0%)、萎缩性胃炎(43.8%)、异型增生(50.0%)和胃癌(54.7%)(X^2=8.129,5.829,4.548,4.951,P<0.01及 P<0.05).X^2检验表明两种方法检测阳性率差异无显著性.凋亡细胞原位检测结果显示,Bax 蛋白表达阳性肠化生、异型增生和胃癌中的凋亡细胞指数显著高于 Bax 蛋白阴性组(t=2.283,2.557,3.928,P<0.05及 P<0.01),Bax 蛋白表达状态与细胞凋亡指数呈正相关(r=0.439,P<0.01).结论 Bax 基因对胃癌前组织及胃癌细胞凋亡具有促进性调控作用,细胞凋亡调控异常在胃癌发病中可能起重要作用.

胃粘膜Hp感染与细胞凋亡和Fas抗原表达的关系

目的 通过观察幽门螺杆菌 (Hp)感染诱导胃粘膜上皮细胞凋亡与Fas抗原表达的关系 ,探讨Hp诱导胃粘膜上皮细胞凋亡的机制。方法 采用脱氧核糖核酸末端转移酶介导的缺口末端标记 (TUNEL)技术原位观察和比较Hp根除前后胃粘膜上皮细胞凋亡的变化 ,采用免疫组织化学染色检测Fas抗原表达变化。结果 Hp阳性患者胃粘膜上皮细胞凋亡指数为 12 .78% ,明显高于Hp阴性者 (3 .63 % ,P <0 .0 1) ;Hp根除后胃粘膜上皮细胞凋亡指数 (4.3 7% )较治疗前明显降低 (12 .46% ,P <0 .0 1) ,而持续阳性者凋亡指数无明显降低。Hp阳性患者胃粘膜上皮细胞Fas抗原表达率为 67.92 % ,高于Hp阴性者 (45 .0 0 % ) ;Fas抗原表达阳性的Hp阳性患者在Hp根除后Fas抗原细胞密度显著减少 (P <0 .0 1) ,而Hp未被根除者Fas抗原表达阳性细胞密度无明显变化。结论 Hp感染可诱导胃粘膜上皮细胞凋亡 ,这可能是Hp参与胃癌发生的重要机制之一 ;Hp感染可促进Fas抗原表达增加 ,这可能是Hp感染诱导胃粘膜上皮细胞凋亡的机制之一。

幽门螺杆菌感染与胃癌前病变演化的关系

目的:了解幽门螺杆菌(Helicobacterpylori,Hp)长期感染是否促进胃黏膜肠上皮化生和异型增生的形成与发展,评价5a随访根除Hp感染对胃癌前病变的作用并探讨其机制.方法:采用前瞻性队列研究方法,对首次胃镜检查诊断为慢性胃炎而不伴有肠上皮化生和异型增生的患者作为入选病例,入选时Hp阳性患者80例,Hp阴性者30例.Hp阳性患者根据自愿原则采用根除Hp治疗或采用对照治疗.全部病例跟踪随访5a.并采用脱氧核糖核酸末端转移酶介导的缺口末端标记(TUNEL)技术及免疫组织化学染色对Hp阳性患者Hp根除前后及Hp阴性者胃黏膜上皮细胞凋亡和增生情况进行原位观察和比较.结果:Hp阳性观察组肠上皮化生的发生率(32.6%)显著高于Hp阴性对照组(12.0%,χ2=4.147,3.893,P<0.05)和Hp根除观察组(12.9%,χ2=3.869,P<0.05).Hp阳性观察组异型增生的发生率(19.6%)显著高于Hp阴性对照组(4.0%,χ2=3.893,P<0.05).Hp根除观察组肠上皮化生和异型增生的发生率与Hp阴性对照组无统计学差异.Hp阳性患者胃黏膜上皮细胞凋亡指数及PCNA指数(12.7%,14.6%)均显著高于Hp阴性患者(2.9%,8.0%,t=7.241,6.368,P<0.01),Hp根除后胃黏膜上皮细胞PCNA指数和凋亡指数(14.3%,12.9%)均显著下降(9.2%,3.6%,t=5.642,7.410,P<0.01),而Hp未根除者上述指标则无显著性变化.结论:Hp感染可能通过刺激胃黏膜上皮细胞凋亡与增生的调节紊乱,使胃黏膜的不稳定性增加,促进胃黏膜肠上皮化生和异型增生的形成与发展,从而增加患胃癌的危险性.根除Hp感染能明显降低肠上皮化生和异型增生的发生率.

胃癌前病变及胃癌中细胞凋亡及其与FasL表达的关系

目的研究胃癌前病变及胃癌中细胞凋亡与ＦａｓＬ表达的关系，探讨细胞凋亡在胃癌发病中的作用．方法采用脱氧核糖核酸末端转移酶介导的ｄＵＴＰ缺口末端标记（ＴＵＮＥＬ）技术及免疫组化染色对正常胃粘膜１０例，慢性胃炎７２例和胃癌５０例中凋亡细胞及ＦａｓＬ表达状态进行原位观察和比较．结果萎缩性胃炎、Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型肠化生及异型增生的凋亡细胞指数（１２８％，１７０％，１４６％，９６％，８０％）显著高于正常粘膜（３４％）和癌（５８％）（ｔ＝５６１，７５７，５１８，４７１，４０３；ｔ＝４３３，６４３，４１５，３０７，２１１；Ｐ＜００１及Ｐ＜００５）；异型增生组织凋亡细胞指数（８０％）显著低于萎缩性胃炎和Ⅰ型、Ⅱ型肠化生（１２８％，１７０％，１４６％；ｔ＝２６７，４７３，２９２；Ｐ＜００５及Ｐ＜００１）；Ⅲ型肠化生的凋亡细胞指数（９６％）显著低于Ⅰ型、Ⅱ型肠化生（１７０％，１４６％；ｔ＝３６９，２１３；Ｐ＜００１及Ｐ＜００５）．正常胃粘膜无ＦａｓＬ表达，胃癌前病变及胃癌中均有不同程度的ＦａｓＬ表达．ＦａｓＬ表达阳性肠化生、异型增生和胃癌中的凋亡细胞指数（１９８％?

大鼠实验性腺胃粘膜癌变过程中Ha－ras基因第12位密码子点突变的研究

大鼠实验性腺胃粘膜癌变过程中Ｈａ－ｒａｓ基因第１２位密码子点突变的研究李春启，刘为纹，吕有勇，张青云，邓国仁，房殿春（第三军医大学西南医院消化内科）６３００３８癌基因的激活和抗癌基因的失活是肿瘤发生、发展的分子基础。ｒａｓ基因家族是目前研究得较深入的...

hTRT反义基因对胃癌细胞端粒酶及凋亡相关基因表达的影响

目的:探讨人端粒酶蛋白催化活性亚单位(humantelomerasereversetranscriptase,hTRT)反义基因治疗对胃癌细胞端粒酶及凋亡相关基因表达的影响.方法:采用基因重组的方法,构建hTRT正?反义真核表达载体,并用脂质体导入SGC-7901胃癌细胞株,检测转染细胞增殖能力?细胞周期?端粒酶活性?端粒酶亚单位及bcl-2,c-myc基因表达的变化.结果:成功构建hTRT正?反义真核表达载体,并导入胃癌细胞,筛选出稳定表达正?反义hTRT的阳性克隆7901-S,7901-AS1和7901-AS2.反义细胞增生能力明显减弱,凋亡细胞和G0/G1期细胞增多,增生指数下降,端粒酶活性下降,端粒酶亚单位hTRT的表达减少,而TP1,hTR无明显变化,进一步研究发现bcl-2和c-myc基因的表达在转录和翻译水平均明显下调.结论:hTRT和c-myc,bcl-2基因的调节作用是相互的,反义hTRT基因可以通过下调胃癌细胞hTRT?c-myc?bcl-2基因的表达,一方面降低端粒酶活性,另一方面一定程度增加凋亡细胞的比率,从而抑制细胞的生长.

幽门螺杆菌诱导胃粘膜上皮细胞凋亡与Bax蛋白的表达

目的观察幽门螺杆菌(Hp)感染诱导胃粘膜上皮细胞凋亡与Bax 蛋白表达的关系,探讨 Hp 诱导胃粘膜上皮细胞凋亡的机制。方法采用脱氧核糖核酸末端转移酶介导的缺口末端标记(TUNEL)技术原位观察和比较73例慢性胃炎患者胃粘膜上皮细胞凋亡情况,对其中50例 Hp 阳性患者 Hp 根除前后胃粘膜上皮细胞凋亡的变化进行检测;并采用免疫组织化学染色检测 Bax 蛋白表达变化。结果 Hp 阳性患者胃粘膜上皮细胞凋亡指数为12.8%,明显高于 Hp 阴性者(3.6%)(t=6.64,P<0.01);Hp 根除后胃粘膜上皮细胞凋亡指数(4.4%)较治疗前明显降低(12.5%,t=5.39,P<0.01),而持续阳性者凋亡指数无明显降低,Hp阳性患者胃粘膜上皮细胞 Bax 蛋白表达率为62.3%,显著高于Hp 阴性者(35.0%,x^2=4.36,P<O.05);Bax 蛋白表达阳性的 Hp 阳性患者在 Hp 根除后 Bax 阳性细胞密度显著减少(t=3.18,P<0.01),而 Hp 未被根除者 Bax 阳性细胞密度无明显变化。结论 Hp 感染可诱导胃粘膜上皮细胞凋亡,这可能是 Hp 参与胃癌发生的重要机制之一;Hp 感染可促进 Bax 蛋白表达增加,这可能是 Hp 感染诱导胃粘膜上皮细胞凋亡的机制之一。

胃癌微卫星不稳定性和抑癌基因杂合缺失

目的研究微卫星不稳和抑癌基因缺失在胃癌发生中的作用．方法采用ＰＣＲ为基础的方法，检测了５３例胃癌中６个微卫星标记突变及ＡＰＣ／ＭＣＣ和ＤＣＣ基因杂合缺失（ＬＯＨ）．结果胃癌微卫星不稳的检出率为３２１％（１７／５３）．７例（１３２％）为微卫星高频率不稳（３个以上微卫星标志），１０例（１８９％）为微卫星低频率不稳（１或２个微卫星标记）．肠型胃癌微卫星高频率不稳的发生率（２５０％）显著高于弥漫型胃癌（３４％）（Ｐ＜００５）．高频率不稳组未发现有ＡＰＣ，ＭＣＣ和ＤＣＣ基因ＬＯＨ，微卫星高频率不稳与ＡＰＣ／ＭＣＣ和ＤＣＣ基因ＬＯＨ呈负相关．结论微卫星不稳在部分胃癌，特别是肠型胃癌早期发生中起重要作用，高频率不稳胃癌与遗传性非息肉大肠癌有共同的特点．与此相反。

胃粘膜肠化生组织YNZ22基因杂合缺失及p53基因突变、蛋白表达的研究

为探讨YNZ2 2基因杂合缺失 (LOH)及 p5 3基因突变、蛋白表达在胃粘膜肠上皮化生中的作用 ,应用PCR RFLP、PCR SSCP及免疫组化技术检测了不同类型肠化生组织中YNZ2 2基因LOH、p5 3基因素 5～ 8外显子突变及其蛋白表达。结果显示 ,YNZ2 2LOH率为 19.4% (6 / 31) ,p5 3突变率为 2 9.8% (14/ 47) ,p5 3蛋白表达率为 10 .0 % (6 / 6 0 )。将肠化生分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型 ,发现Ⅲ型肠化生中 p5 3突变率及其蛋白阳性表达率分别为5 7.1% (8/ 14)和 2 7.8% (5 / 18) ,均显著高于Ⅰ (18 2 % )、Ⅱ型肠化生 (2 .4% ) (均P <0 .0 5 )。p5 3蛋白表达与 p5 3基因突变显著相关 (P <0 .0 5 ) ,YNZ2 2LOH与 p5 3突变及蛋白表达无显著相关性 (P >0 .0 5 )。提示 ,YNZ2 2基因LOH及 p5 3基因异常可能在胃粘膜肠化生的发生及其癌变中起一定作用 ,p5 3基因有可能成为胃癌早期诊断的分子指标。