目的:探究CD4^(+)CD25+CD127low调节性T细胞(regulatory T cell,Treg)和CD4^(+)CD25-CD127+效应性T细胞(effector T cell,Teff)在卵巢癌细胞生长环境中的糖代谢特征。方法:流式细胞术(fluorescence-activated cell sorting,FACS)分选CD4...目的:探究CD4^(+)CD25+CD127low调节性T细胞(regulatory T cell,Treg)和CD4^(+)CD25-CD127+效应性T细胞(effector T cell,Teff)在卵巢癌细胞生长环境中的糖代谢特征。方法:流式细胞术(fluorescence-activated cell sorting,FACS)分选CD4^(+)Treg细胞和CD4^(+)Teff细胞,建立两种细胞与SKOV3细胞的共培养体系,采用实时荧光定量PCR(real-time fluorescence quantitative PCR,RT-PCR)和Western blot检测CD4^(+)Treg细胞、CD4^(+)Teff细胞糖代谢相关基因和蛋白的表达水平,比色法检测细胞糖摄取和糖酵解水平。结果:SKOV3共培养组CD4^(+)Treg细胞糖代谢相关基因和蛋白的表达水平高于CD4^(+)Teff细胞和CD4^(+)Treg细胞单独培养组(P<0.05);SKOV3共培养组CD4^(+)Treg细胞糖摄取和糖酵解水平高于CD4^(+)Teff细胞[(59.78±2.57)pmol vs.(44.93±1.86)pmol,P<0.05;(15.31±2.05)mmol/L vs.(7.98±0.88)mmol/L,P<0.05]。结论:卵巢癌细胞生长环境中的人外周血CD4^(+)Treg细胞糖代谢水平高于CD4^(+)Teff细胞,卵巢癌细胞可以促进人外周血CD4^(+)Treg细胞糖代谢相关蛋白和基因表达水平上调。展开更多
文摘目的:分析趋化因子受体8(C⁃C motif chemokine receptor 8,CCR8)在卵巢癌肿瘤浸润性调节性T细胞(regulatory T cell,Treg)中的表达,探讨CCR8对Treg分化的作用。方法:构建C57BL/6小鼠卵巢癌细胞ID8荷瘤模型;流式细胞术检测小鼠肿瘤组织、脾脏和外周血中Treg上CCR8的表达比例,CCR8^(+)Treg上免疫检查点相关蛋白程序性细胞死亡蛋白1(programmed cell death protein 1,PD⁃1)、细胞素性T淋巴细胞抗原4(cytotoxic T⁃lymphocyte antigen 4,CTLA⁃4)、可诱导的T细胞共刺激分子(inducible T cell costimulators,ICOS)、淋巴细胞激活基因3(lymphocyte activation gene 3,LAG⁃3)的表达;流式细胞术检测CCR8变构抑制剂AZ084加入前后对C57BL/6小鼠脾脏中初始CD4^(+)T细胞向Treg分化的影响。结果:卵巢癌荷瘤小鼠肿瘤中Treg上的CCR8表达相比脾脏、外周血的Treg显著增高;相比CCR8^(-)Treg,CCR8^(+)Treg上免疫检查点相关蛋白表达更高;AZ084有效抑制小鼠脾脏中初始CD4^(+)T细胞向Treg的分化。结论:CCR8^(+)Treg在肿瘤浸润性Treg中占主要比例,CCR8作为卵巢癌浸润性Treg的主要标志物,变构CCR8蛋白可以抑制Treg的分化。靶向消除CCR8^(+)Treg可为改善卵巢癌肿瘤微环境的免疫抑制状态提供新思路。
