人腹膜间皮细胞的培养及特征

目的 :建立人腹膜间皮细胞 (HPMC)培养模型 ,检测HPMC细胞外基质蛋白及白细胞介素 (IL - 8)的表达。方法 :采用胰蛋白酶 -EDTA消化法 ,从人的腹膜组织中分离HPMC。采用形态学和链霉菌抗生物素蛋白 过氧化物酶连接法 (即SP法 ) ,对培养细胞进行鉴定。采用SP法检测HPMC纤维连接蛋白 (FN)、胶原Ⅲ和胶原V及转化生长因子 (TGF) β1表达。采用逆转录多聚酶链反应 (RT -PCR)检测HPMCIL - 8mRNA和FNmRNA的表达。结果 :光镜示细胞融合后呈多边形 ,超微结构下可见丰富的微绒毛和内质网 ,免疫组化染色结果示HPMC可表达角蛋白 ,波形蛋白 ,胶原Ⅲ ,FN ,TGFβ1蛋白 ,Ⅷ因子、胶原V表达阴性。人腹膜间皮细胞亦表达FNmRNA和IL - 8mRNA。结论 :HPMC培养模型的建立 ,可为进一步研究腹膜纤维化的防治及IL - 8在腹膜透析中的作用提供理论依据。

16年腹膜透析的基础和临床研究回顾

总结16年以来中南大学湘雅二医院肾内科腹膜透析的基础与临床研究的经验与成果。在国内率先成功构建了腹膜透析及腹膜纤维化动物模型,分离、鉴定了腹膜间皮细胞;利用细胞、分子生物学方法,系统研究了腹膜透析液的生物相容性、腹膜间皮细胞透析损伤的分子机制与防治措施,观察了促纤维化细胞因子转化生长因子-β1(TGF-β1),结缔组织生长因子(CTGF)及过氧化物酶体增生物激活受体-γ(PPAR-γ)等在腹膜纤维化发病机制中的重要作用,并初步阐明了它们的基因表达调控机制。首次在腹膜透析研究领域中利用纳米载体介导TGF-β1-shRNA与pCTGF-shRNA质粒在腹膜细胞与组织中的表达。在临床研究方面,研究了腹膜透析置管定位新方法、腹膜透析溶质转运特点及其机制、腹膜透析治疗模式及其他并发症的防治。

去甲斑蝥素对TGF-β_1诱导的人近端肾小管细胞上皮间质转分化以及转录因子Snail1表达的影响

目的:探讨去甲斑蝥素对体外人源性肾小管细胞株(HK-2)上皮间质转分化以及转录因子Snail1的影响。方法:常规培养HK-2细胞,分为对照组、TGF-β1组、去甲斑蝥素组(NCTD组)。对照组为无血清DMEM培养,TGF-β1组为TGF-β15ng/ml诱导,NCTD组为不同浓度NCTD(0.5、1.0、2.5μg/ml)与TGF-β1(5ng/ml)共同作用,各组作用时间48h。采用RT-PCR、Western blot分别检测α-SMA、E-cadherin与Snail1表达水平的变化。结果:与对照组相比,TGF-β1组α-SMA mRNA和蛋白表达上调(P<0.05),E-cadherin mRNA和蛋白表达下调(P<0.05);与TGF-β1组相比,NCTD干预组α-SMA mRNA和蛋白表达下调(P<0.05),而E-cadherin mRNA和蛋白表达上调(P<0.05),且均呈剂量依赖性。与对照组相比,TGF-β1组Snail1 mRNA和蛋白表达上调(P<0.05);与TGF-β1组比较,NCTD干预组Snail1 mRNA和蛋白表达下调(P<0.05),具有一定的剂量依赖关系。结论:去甲斑蝥素具有抑制肾小管上皮细胞EMT的作用,该作用可能与下调转录因子Snail1的表达有关。

高危患者围肾活检期的处理

肾活检病理检查是肾病内科临床常用的诊断技术，它不但可以明确肾脏病理变化和类型，有助于诊断疾病、制定治疗方案、判断患者预后，还有可能发现新的肾脏疾病。

增加腹部活动对腹膜透析小分子溶质转运的影响

目的：探讨腹部震荡和摇摆是否能增加小分子溶质转运；增加腹透病人的活动是否能增加膜腹透析的效能。方法：采用自身前后对照，观察了18例连续不卧床腹膜透析（CAPD）患者及6只雄性新西兰兔腹膜透析模型，摇摆和腹部震荡前后透出液内溶质（D）与血浆中相应溶质（P）比值（D／P）及溶质转运面积系数（MTAC）和引流量的变化。结果：动物实验表明：震荡与非震荡组肌酐D／P值在45分钟与60分钟具有显著差异（P＜0.05），而两组蛋白质D／P值及引流量无差异（P＞0．05）。临床研究表明：低频组与高额组2h和4h尿素氮D／P及2h肌酐值D／P较基础值均明显增加（P分别小于0．01，0．01．0．05），且两组比较均无差异（P＜0．05）；而蛋白质D／P值及引流量与基础蛋白质D／P及引流量比较均无差异（P＞0．05）。结论：摇摆和腹部震荡均能增加小分子尿素氮和肌酐的转运，对大分子蛋白质转运及超滤量无影响，提示增加CAPD病人的活动能提高腹膜透析的效能。

大剂量地塞米松冲击疗法联用肝素治疗“难治性”肾病综合征初步报告

大剂量地塞米松联用肝素治疗“难治性”肾病综合征18例,单纯地塞米松冲击19例。前者尿蛋白明显减少,血清白蛋白明显上升,总有效率94.4％,显效率83.3％;近期疗效明显优于地塞米松组,可作为治疗“难治性”肾病综合征可取方法之一。

血液透析中的低血压

血液透析中的低血压是血液透析过程中常见的并发症之一,发生率约为20%～30%。发生速度快,常使血液透析不能顺利进行,导致透析不充分,影响透析效率与质量,严重时可直接威胁患者的生命。因此如何预防、尽早发现和及时处理血液透析中的低血压对维持血液透析治疗、提高血液透析质量具有重要意义。

转化生长因子β_1介导的Smad信号通路对人腹膜间皮细胞外基质的调控

目的 探讨TGF - β1介导的Smad信号通路对人腹膜间皮细胞 (HPMCs)细胞外基质 (ECM)的调控机制。方法 原代培养的第三代HPMCs分成对照组与 5ng/mlTGF - β1刺激组 ,采用免疫组织化学染色和Western印迹法观察细胞内磷酸化Smad2 / 3(p -Smad2 / 3)的表达以及在细胞内的迁移 ,Western印迹、ELISA和RT -PCR法观察Smad7、结缔组织生长因子 (CTGF)、α-平滑肌肌动蛋白 (α-SMA)、纤溶酶原激活物抑制剂 -1(PAI- 1)、纤维连接蛋白 (FN)和I型胶原 (COL1)的mRNA及蛋白表达。结果 ①对照组细胞内几乎不表达p -Smad2 / 3,在刺激后 15min蛋白表达增加 ,主要分散在细胞质中 ,1h达高峰 ,主要集中在细胞核及周边 ,2h明显回落 ,又分散至细胞质中 ;②刺激组细胞内Smad7、CTGF、α -SMA和COL1的蛋白表达与对照组比均增加 ,其中Smad7、CTGF和α -SMA在 4 8h最明显 ,COL1呈时间依从性 ;刺激组上清液PAI - 1的蛋白含量与对照组比均增加 ,其中 2 4h最高 ,FN呈时间依从性 ;刺激组Smad7的mRNA表达与对照组比呈时间依从性增加 ,CTGF、α -SMA、PAI- 1、FN和COL1均增加 ,其中CTGF和α-SMA在 4 8h最高 ,PAI- 1在 2 4h最高 ,FN和COL1呈时间依从性。结论 TGF - β1能特异性激活HPMCs内Smad信号通路 。

pcDU_6质粒载体介导的TGFβ_1shRNA及pcDNA3.1介导的TGF-β_1反义RNA抑制人腹膜间皮细胞TGFβ_1的表达及细胞外基质的分泌

目的 研究转化生长因子 β1(TGF - β1)短发夹RNA(shorthairpinRNA ,shRNA)和TGF - β1反义RNA对体外培养的人腹膜间皮细胞 (HPMC)TGF - β1表达及细胞外基质分泌的影响。方法 利用带有U6启动子的pcDNA3.1(- )载体 (命名为pcDU6)构建TGF - β1短发夹RNA的产生质粒 ,用pcDNA3.1(- )载体构建反义TGF - β1基因真核表达载体 ,采用胰蛋白酶消化法从人大网膜组织中分离间皮细胞 ,建立稳定的体外培养模型。用脂质体转染表达转化生长因子 β1shRNA的pcDU6载体质粒和表达反义TGF - β1RNA的pcDNA3.1(- )的载体质粒入高糖 (4 .2 5 %D -葡萄糖 )和细菌脂多糖 (LPS)刺激下人腹膜间皮细胞。采用逆转录多聚酶链式反应 (RT -PCR)半定量分析HPMC中TGF - β1mRNA的表达以及纤维连接蛋白 (FN)、Ⅰ型纤溶酶原激活物抑制剂 (PAI- 1)和胶原Ⅰ (ColⅠ )的mRNA表达。采用双抗夹心法酶联免疫吸附实验检测HPMC培养液中TGF- β1蛋白质水平。结果 HPMC在高糖 (4 .2 5 %D -葡萄糖 )和细菌脂多糖 (LPS)的刺激下可明显上调TGF -β1的表达 (P <0 .0 1) ,TGF - β1反义RNA转染HPMC后 ,与对照组相比 ,转染 2 4小时后 ,FN、ColⅠ、PAI- 1mR NA分别下调 17.0 %、2 6 .0 %、9.6 % (P <0 .0 5 )。pcDU6载体质粒介导的转化生长因子

腹膜透析残余肾功能的保护

慢性肾脏疾病患者在透析治疗前由于医患双方都期望避免透析或延迟透析，残余肾功能（RRF）的保护是大家非常重视的问题。但是，在透析治疗开始后，尤其是血液透析（HD），RRF快速下降甚至完全消失，而医师却并不重视透析治疗后RRF的保护。令人欣慰的是，在最近20年来，有关RRF的文章逐渐增多，医生们越来越关注终末期肾脏疾病（ESRD）患者残余肾功能的保护问题。大多数学者认为持续性不卧床腹膜透析（CAPD）比血液透析能更好地保护残余肾功能，原因可能是腹膜透析避免了血浆渗透压快速变化和循环血容量减少而引起的肾组织缺血；加之对心血管系统影响小，可起到较好的保护作用。

腹膜透析患者的容量负荷问题

良好的容量平衡是腹膜透析充分性的重要指标之一，反之不仅影响腹膜透析的溶质清除，也是退出腹膜透析的主要原因。所以，腹膜透析患者容量负荷的平衡是影响腹膜透析成败的关键。目前研究表明，容量负荷过重会导致患者长期水潴留，诱发高容量负荷、高血压、左心室肥厚及充血性心力衰竭等并发症，这些心血管疾病是腹膜透析患者死亡的最常见原因.

腹膜透析腹膜纤维化的机制及防治

慢性肾脏病（CKD）是全世界关注的公共卫生问题之一，呈逐年明显上升的趋势，目前美国和澳大利亚的发病率为11％和16％，我国城市人群为9．4％，农村20．2％。最新的人口普查资料显示，全球CKD人群患病率已由1996年1．99％增加到2003年的9．83％。其中5％的患者最终进入尿毒症，必须接受肾脏替代治疗。

腹膜透析腹膜纤维化防治的研究进展

腹膜透析作为肾脏替代治疗方法已经有20多年的历史,它的疗效已得到极大地提高,目前已证明腹膜透析与血液透析一样有效,而且在某些方面优于血液透析.然而,腹膜透析要进一步得到患者更广泛的接受,还有许多需克服的问题,腹膜纤维化就是近年来越来越重要的一个影响因素.研究表明,随着插管技术的改进,感染率的下降,腹膜纤维化导致的超滤功能丧失已是慢性腹膜透析患者退出的主要原因[1].因此研究腹膜透析并腹膜纤维化的分子机理,探索有效防治措施,对延长腹膜寿命,提高腹膜透析水平意义重大.

大黄注射液对腹膜通透性的影响

采用２．５％葡萄糖腹透液＋大黄注射液和２．５％葡萄糖腹透液＋硝普钠分别对兔腹透模型进行腹膜透析；对照组仅用２．５％葡萄糖透析液。测定实验各组不同时间血液和透出液内肌酐、葡萄糖和蛋白质浓度；记录腹腔引流量。含大黄和硝普钠的透析液能增加腹膜对小分子溶质肌酐和葡萄糖的运转，前者作用时间较后者长；两者对大分子蛋白质的转运及水的超滤无差异。提示大黄注射液是一种较好的改善腹膜溶质转运功能的药物。

25％白蛋白溶液对腹膜超滤的影响

观察０．９％氟化钠溶液，３％萄萄糖溶液及２５％人血白蛋白溶液对兔腹膜透析模型腹膜超滤的影响。结果显示：０．９％氯化钠组和２５％人血白蛋白组的超滤量没有显著性差异（Ｐ＞０．０５），３％萄萄糖组超滤量明显高于０．９％氯化钠组（Ｐ＜０．０１）；提示在一定范围内提高腹膜透析液的萄萄糖浓度能增加腹膜超滤量，采用高浓度白蛋白溶液对腹膜超滤量无明显影响。