牛奶中高分子质量蛋白致敏作用的初步研究

目的探讨牛奶中高分子质量蛋白在牛奶过敏过程中的致敏作用。方法选取牛奶过敏患者血清30例,皮肤点刺试验阳性,血清特异性Ig E(s Ig E)检测结果均为阳性且≥1+。健康对照血清1例,血清s Ig E检测阴性,无过敏史。空腹采血,收集血清于-20℃冻存备用。利用Sephadex G200凝胶层析获得牛奶高分子质量蛋白,通过蛋白免疫印迹法(Wetern blot)和酶联免疫吸附测定(ELISA)检测高分子质量蛋白与牛奶过敏患者血清s Ig E的结合活性。结果 SDS-PAGE显示Sephadex G200凝胶层析纯化得到的高分子质量蛋白主要包括3条带,分子质量约为67、80和160 ku,推断其可能是牛血清白蛋白、乳铁蛋白和免疫球蛋白。经Western blot分析,3种高分子质量蛋白与牛奶过敏患者血清均能反应,并且在67 ku附近条带最明显。经ELISA分析,高分子质量蛋白与牛奶过敏患者血清的阳性反应率比β-乳球蛋白略高(分别是46.7%、43.3%)。结论牛奶中高分子质量蛋白组分能够诱导特异性抗体产生,这些组分在牛奶过敏过程中具有重要的致敏作用。

体检人群蟹蛋白质特异性IgG水平及所识别蛋白质组分分析

目的分析体检人群对蟹过敏原食物不耐受情况及蟹特异性IgG所识别的蛋白质成分。方法用丙酮去脂、PBC浸取法提取中华绒螯蟹蛋白质液,用粗提蛋白质作为包被抗原,用间接ELISA法检测391例体检人群血清中特异性IgG抗体,分析不同年龄、性别间对蟹的不耐受率差异;用SDS-PAGE分析粗提蛋白质组分,并以筛选出的抗体效价较高的血清作为识别抗体,用western blot分析提取液中主要与特异性IgG结合的成分。结果在391例血清中,蟹不耐受率为39.9%,其中轻度不耐受率为35.1%,中度不耐受率为4.9%。青年组中蟹不耐受率为25.4%,中、老年组中蟹不耐受率为65.0%,差异有统计学意义;男、女对蟹的不耐受率无明显统计学差异。不同个体血清的western blot图谱(条带)存在差异。结论人群中某些个体存在蟹蛋白质的特异性IgG抗体,但只有部分个体抗体效价较高,并且特异性抗体所识别的蛋白质组分存在个体差异。

蛋白酶K预处理在SARS-CoV-2核酸提取中的应用探讨

目的探讨蛋白酶K(PK)在新型冠状病毒(SARS-CoV-2)不同类型标本中的应用价值。方法通过对临床上确诊新型冠状病毒肺炎(COVID-19)患者核酸检测阳性的50份鼻咽拭子标本和20份粪便标本分别进行平行实验,向其中一份加入PK进行预处理(PK组),而另外一份则不加入PK(未处理组)。使用NucliSENS easyMAG磁珠提取系统对标本进行RNA提取,提取的RNA经实时荧光定量PCR(qPCR)进行SARS-CoV-2核酸检测。结果对50份鼻咽拭子标本和20份粪便标本的qPCR结果中ORF基因和N基因的循环阈值进行分析,未处理组和PK组实验结果比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论在使用NucliSENS easyMAG磁珠提取系统对SARS-CoV-2鼻咽拭子标本和粪便标本进行提取时,PK的预处理对核酸检测结果没有影响。

新型冠状病毒核酸临床检测要点及经验

2019年12月以来,新型冠状病毒感染引起的肺炎病例数快速攀升。因患者体内病毒核酸的存在是目前唯一的确诊依据,而目前临床上普遍反映核酸检测阳性率不够理想,故对病毒核酸检测的实验室条件、检验人员及检测过程中各个环节都有较高要求。本文着重阐述了新型冠状病毒核酸检测各个环节中的检测要点、最新的行业规范及共识内容,同时探讨临床检测中的疑难问题,以期为新型冠状病毒所致疾病的准确诊断提供理论依据。

天津大学生过敏性疾病的调研与分析

目的了解天津地区大学生过敏性疾病相关症状的发生情况和特点,为制定过敏性疾病预防措施提供参考。方法以现场问卷调查的方式,对天津医科大学广东路校区所有大一至大四在校学生进行问卷调查,问卷主要内容包括一般情况、过敏原、过敏症状、成人与儿童时期过敏原变动、过敏人群的季节分布、城乡分布、家族史及治疗措施等7部分。问卷收回后录入数据库,进行统计分析。结果调查总共发放问卷788份,收回727份,应答率为92.3%,有效问卷663份,其中139例患过敏性疾病,患病率为21.0%。过敏原以花粉、化妆品、粉尘、药物为主,引起的主要症状是皮疹、皮肤瘙痒脱屑、耳洞瘙痒发炎。儿童时期过敏而成年后不过敏的过敏物有水产品、药物、花粉、鸡蛋、牛奶、小麦等。调查对象中286人来自城市,81人(28.3%)有过敏史;377人来自农村,58人(15.4%)有过敏史,城市过敏患病率高于农村,且差异有统计学意义(P<0.05)。42例学生有家族过敏史,父母有无过敏性疾病其子女过敏性疾病患病率的差异有统计学意义(P<0.05)。过敏好发季节以不定季或春夏季为主。过敏者中67例(48.2%)曾选择自己购买抗过敏药作为控制措施,94例(67.6%)就医治疗,100例(71.9%)选择远离过敏原,25例(18.0%)未采取措施。结论天津市大学生过敏性疾病患病率较高,早期确诊并预防,以及开展相关健康教育是十分必要的。

结核性胸腔积液和恶性胸腔积液患者的临床特征及实验室指标的诊断效能研究

目的分析结核性胸腔积液患者和恶性胸腔积液患者的临床特征,探讨胸水实验室指标在结核性胸腔积液和恶性胸腔积液鉴别诊断中的价值。方法收集2017年1月—12月四川大学华西医院结核性胸腔积液和恶性胸腔积液患者的临床资料及胸水实验室指标,筛选出具有统计学差异的实验室指标,采用logistic回归分析建立实验室指标联合诊断模型,用Hosmer-Lemeshow检验模型的拟合度,绘制联合诊断的受试者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线,计算ROC曲线下面积(area under curve,AUC),分析联合诊断效能。结果 128例结核性胸腔积液患者和164例恶性胸腔积液患者的平均年龄分别为(51.60±21.02)、(63.52±11.87)岁,结核性胸腔积液患者易出现咳嗽、咳痰、发热、胸痛、气紧症状,两组间比较差异有统计学意义(P<0.05)。结核性胸腔积液患者胸水中的腺苷脱氨酶水平为(23.06±21.29)U/L,比恶性胸腔积液患者高(P<0.05)。恶性胸腔积液患者胸水中的白蛋白、葡萄糖、糖类抗原(carbohydrate antigen,CA)125、CA19-9、癌胚抗原和细胞角蛋白19片段抗原水平高于结核性胸腔积液患者(P<0.05)。logistic回归分析发现,CA125、癌胚抗原和葡萄糖作为主效应被纳入模型中,利用预测值绘制ROC曲线,AUC为0.914[95%置信区间(0.864,0.964)],提高了诊断效能。结论结核性胸腔积液和恶性胸腔积液患者临床表现多样化且特异性不高,联合检测胸水中的CA125、癌胚抗原和葡萄糖,并利用其建立联合诊断模型,可较好地鉴别结核性胸腔积液和恶性胸腔积液。

HKDC-1基因多态性与中国西部结核病患者一线抗结核药物性肝损伤的相关性研究

目的探讨己糖激酶结构域-1(hexokinase domain-containing protein 1,HKDC-1)基因多态性与中国西部结核病患者应用一线抗结核药物性肝损伤(anti-tuberculosis drug-induced liver injury,ATDILI)之间的关系。方法纳入2016年11月-2018年4月于四川大学华西医院就诊的结核病患者746例,收集临床资料及相关实验室指标,根据肝功能指标将其分为ATDILI组和非ATDILI组,采用QIAamp?DNA Blood Mini Kit提取DNA,利用高通量基因分型技术对HKDC-1基因7个单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)分型,比较SNP在两组间差异。结果 ATDILI组118例,非ATDILI组628例。临床症状中,发热、体重减轻的发生率在两组间差异有统计学意义(P=0.004、0.024)。rs906219位点C等位基因与ATDILI低易感性相关[比值比(odds ratio,OR)=0.737,95%置信区间(confidence interval,CI)(0.556,0.957),P=0.033]。加性模型和显性模型显示,CC/CA基因型相较于AA基因型具有较低的ATDILI发生风险[CC vs. AA:OR=0.563,95%CI(0.325,0.976),P=0.039;CC+CA vs. AA:OR=0.533,95%CI(0.348,0.817),P=0.004]。结论 HKDC-1中rs906219 SNP在中国西部人群中与ATDILI发生具有相关性,为个性化的抗结核治疗提供了线索。

TLR4基因多态性与肺结核易感性相关性研究的更新meta分析

目的通过meta分析,更全面、客观地评价Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)基因的单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)与肺结核患病风险的关系。方法在PubMed、Embase、中国知网、万方和维普数据库中对2019年6月13日以前发表的关于肺结核与TLR4基因SNP相关的文献进行系统全面的检索。根据提前制定的纳入排除标准筛选文献,并根据事先编制的数据采集表格记录纳入文献的基本特征和SNP数据,使用Stata 15.0软件对效应量进行合并。结果最终纳入符合标准的原始文献17篇,进而提取TLR4基因上研究最广泛的4个SNP位点(rs4986790、rs4986791、rs10759932、rs11536889)的等位基因和基因型数据,并对它们的等位基因、显性、隐性、纯合、杂合遗传模型分别进行meta分析。结果显示,rs10759932的C等位基因会增加肺结核患病风险[比值比(odds ratio,OR)=1.144,95%置信区间(confidence interval,CI)(1.043,1.254),P=0.004];相较于TT基因型,rs10759932的CC+CT基因型和单独的CT基因型也会增加肺结核患病风险[OR=1.218,95%CI(1.084,1.369),P=0.001;OR=1.227,95%CI(1.085,1.387),P=0.001]。而rs4986790、rs4986791以及rs11536889这3个SNP与肺结核易感性之间无统计学相关性(P>0.05)。结论 TLR4基因上的SNP位点rs10759932的等位基因模型、显性模型(CC+CT vs. TT)和杂合模型(CT vs. TT)与肺结核患病风险密切相关。

WNT信号通路中抑制基因WIF1与DKK1基因多态性与中国汉族人群结核易感性的相关性研究

目的初步探究WNT信号通路中关键抑制基因WIF1和DKK1多态性位点与结核易感性、临床特征及实验室指标的相关性。方法纳入四川大学华西医院2014年12月—2016年11月期间475例结核病患者和370例健康对照,采用高通量基因分型技术对WNT信号通路中WIF1基因rs58635985位点和DKK1基因rs11001548位点多态性进行分型检测,并收集受试者相关临床资料。应用χ2检验、logistic回归模型等统计学方法分析单核苷酸多态性位点的等位基因、基因型、遗传模型在两组之间的分布差异,以及其是否影响结核患者临床表征。结果 WIF1 rs58635985位点和DKK1 rs11001548位点的等位基因(P=0.275、0.949)、基因型(P=0.214、0.659)及遗传模型:加性模型(P=0.214、0.659)、显性模型(P=0.414、0.827)与隐性模型(P=0.227、0.658)的频率分布在结核病组与健康对照组比较中差异无统计学意义。亚组分析显示:rs58635985和rs11001548等位基因和基因型分布差异无统计学意义(肺结核组vs.健康对照组:P>0.05;肺结核组vs.肺外结核组:P>0.05)。rs58635985位点和rs11001548位点在结核病相关临床特征(发热、盗汗、乏力等)以及实验室指标(血常规、红细胞沉降率、TB-DNA等)分析中差异无统计学意义(P>0.05)。结论未发现WIF1基因rs58635985位点和DKK1基因rs11001548位点与中国西部地区汉族人群结核病遗传易感性、临床特征及实验室指标有关联,后续仍需扩大样本量在不同人群中进行验证分析。

流式荧光杂交技术检测四川大学华西医院体检女性人乳头瘤病毒感染亚型分布

目的通过分子生物学方法对四川大学华西医院健康体检女性进行宫颈人乳头瘤病毒(human papilloma virus,HPV)分型检测,了解成都地区正常女性中HPV感染情况及亚型分布,为宫颈癌早期有效防治及国内HPV疫苗研发提供理论依据。方法采用流式荧光杂交技术对2018年5月1日—2019年5月31日于四川大学华西医院行体检的25 148例女性进行HPV-DNA分型检测。分析计算总体HPV感染阳性率、HPV亚型分布及感染特征;分析计算不同年龄段分组中HPV阳性率,组间比较采用χ2检验。结果四川大学华西医院体检的成都地区女性HPV感染总体阳性率为12.19%(3 066/25 148),高危型HPV阳性率为8.69%(2 186/25 148),感染率前5位的亚型为HPV52、HPV53、HPV58、HPV16和HPV39;低危型HPV阳性率为4.66%(1 171/25 148),感染率前5位的亚型为HPV61、HPV81、HPV43、HPV44和HPV6。HPV感染者以单一亚型感染为主,占81.74%(2 506/3 066),多重感染者以二重感染最多见,占13.96%(428/3 066)。各年龄段分组中,60~69岁年龄组的HPV感染阳性率最高(12.87%),70~89岁年龄组的HPV感染阳性率最低(10.88%),不同年龄组HPV阳性率差异无统计学意义(χ2=4.035,P=0.544)。结论根据四川大学华西医院体检的成都地区女性HPV感染情况,建议将高危型HPV感染率最高的HPV52、HPV53、HPV58纳入国内HPV疫苗筛选评估及宫颈癌防治体系中。

活动性肺结核患者外周血中长链非编码RNA lnc-PAPSS2-2的表达及其诊断价值的探究

目的评价长链非编码RNA lnc-PAPSS2-2(lnc-PA)在活动性肺结核患者外周血中的表达情况及其对活动性肺结核的诊断价值。方法收集2011年1月—2018年1月于四川大学华西医院就诊的活动性肺结核患者798例、健康体检者1 650例及所有研究对象的电子病历(electronic health record,EHR)资料(年龄、性别、血常规及免疫学指标等)。采用实时荧光定量聚合酶链反应方法检测lnc-PA表达水平。进一步结合EHR进行分析并利用列线图模型评价lnc-PA对活动性肺结核的诊断价值。结果活动性肺结核患者全血中lnc-PA的表达水平显著低于健康对照(P<0.001)。列线图模型详细分析了lnc-PA、EHR以及两者联合的诊断效能,训练集受试者工作特征曲线(receiver operating characteristic curve,ROC曲线)下面积依次为0.619、0.962和0.964,验证集ROC曲线下面积依次为0.626、0.950和0.950。结论 lnc-PA诊断活动性肺结核价值较差,EHR诊断能力较好,提示lnc-PA作为活动性肺结核生物标志物的临床应用价值有待于进一步探索。