大牛地气田集输管道低洼处腐蚀机理研究

为了研究大牛地气田集输管道低洼处腐蚀机理,通过模拟管道沿线积液分布,确定距起点1207 m的管道低洼处为重点监测点,在现场开展管段开挖与挂片安装工作。采用失重测试计算挂片腐蚀速率,结合扫描电镜(SEM)、能谱(EDS)、X射线衍射(XRD)等手段表征腐蚀产物微观结构和成分。结果表明:采气树处挂片均匀腐蚀速率为0.0035 mm/a,腐蚀程度轻微,无明显局部腐蚀倾向;低洼处挂片均匀腐蚀速率为0.0599 mm/a,局部腐蚀速率为0.1380 mm/a,孔蚀系数为2.3,局部腐蚀程度严重。低洼处管段试样表面腐蚀产物结构疏松,腐蚀产物主要由FeCO_(3)、FeS、Fe_(2)O_(3)组成,推测腐蚀主要由CO_(2)和H_(2)S 2种腐蚀性气体引起,积液中的Cl^(-)起到加速作用。

割理结构对WW盆地煤层气井井壁稳定性影响研究

煤层气作为清洁的非常规能源在我国储量丰富,成为增储上产的重要补充来源,且煤层气的开采能有效防止瓦斯泄露爆炸,但煤岩弹性模量和强度低,割理结构发育,煤层气井井壁常发生掉块卡钻,制约了煤层气的高效开发。文章首先研究了煤岩微观结构,建立了同时考虑面割理和端割理影响的煤岩强度准则,结合双孔双渗井周应力模型,研究了割理结构对WW盆地井壁稳定性的影响。结果表明:该区块煤岩黏土矿物含量较少,水化作用较弱;面割理端割理与面割理相互垂直交错切割煤岩,严重削弱了煤岩强度;割理结构对煤岩井壁坍塌压力具有显著影响,若不考虑割理影响,将得到错误的坍塌压力随井眼轨迹的变化规律。割理产状对三种井型坍塌压力影响研究表明,直井坍塌压力不随割理倾角的变化而变化,受割理倾向的影响较大;当割理倾角较大时,沿水平最小地应力方向的水平井稳定性较好;在特定的割理方位情况下,沿水平最大地应力方向的水平井不会沿割理发生剪切滑移破坏。

PCR和斑点杂交检测鸡传染性贫血病毒

通过聚合酶链反应（ｐｃＲ）扩增鸡传染性贫血病毒（ｃＡＶ）ＤＮＡ特定片段，将此ｐｃＲ产物用Ｄｉｇｏｘｉｇｅｎｉｎ标记后作为探针进行斑点杂交，以此检测ＣＡＶ并作流行病学调查。对从江苏省不同地市随机采集的２月龄左右不同疾病的病鸡ＤＮＡ样品进行检测，在被检的５２个不同鸡群来源的病料中，有３６个鸡群来源的病料ＤＮＡ显示ＣＡＶ阳性（群阳性率为６９．２％）；备组织中ＣＡＶＤＮＡ含量有所差异，依次为胸腺＞脾、骨髓、肝＞肾、法氏囊、脑。用ＰＣＲ检测得到的阳性鸡的组织病料感染ＳＰＦ鸡，在感染后第２４天检查，出现贫血症状。初步调查表明，在江苏一些地区ＣＡＶ感染已相当普遍，但它与发病的关系还有待于进一步研究。

特超强毒648株马立克氏病病毒的囊膜糖蛋白gE基因的克隆和序列比较

鸡马立克氏病毒特超强毒 (vv+MDV) 648株的囊膜糖蛋白 gE基因经PCR扩增并克隆入pUC1 8载体。 648株gE基因经核酸序列分析测定 ,全长为 1 494碱基。所编码的蛋白具有跨膜糖蛋白的一些特征。它含有 8个潜在的糖基化位点、N端有一段疏水区 (1～ 1 9aa)所构成的信号肽、C端有一段疏水区 (391～ 41 9aa)所构成的膜锚着序列。经 648株 (vv+MDV)和马立克氏病毒强毒 (vMDV)GA株的 gE相比较 ,在MDV血清 1型中 gE是较为保守的 ,二者仅有 2个核苷酸的差异 (第 51 2位、第 1 472位 ) ,并导致了有二个相应的氨基酸的改变 (第1 71位Leu/Pro、第 491位Arg/Lys)。

鸡贫血病毒VP1基因在大肠杆菌中的高效表达及其生物学特性的初步分析

将鸡贫血病毒 (CAV)VP1蛋白 44 9个氨基酸中的 42 4个氨基酸 (占 95 % )编码序列分二段 ,分别克隆入表达性载体 pGEX - 5X - 3,在大肠杆菌以GST融合蛋白的形式获得了高效表达。以表达产物免疫小鼠 4次 ,制备了抗CAV的多克隆抗体。通过对CAV感染的MSB1细胞做间接免疫荧光试验 (IFA) ,结果为阳性。这表明表达物保留了天然VP1相关的抗原性。用此抗CAV抗体和所建立的IFA方法对临床CAV凝似病料成功地进行了实验室诊断。

第46代鸡贫血病病毒细胞凋亡素基因的体外扩增、克隆、序列比较

通过聚合酶链式反应 (PCR)扩增了第 46代鸡贫血病病毒 (CAV)Cux株的细胞凋亡素 (Apoptin)基因 ,并克隆入pGEX_5X_3质粒载体中。通过限制性内切酶分析、序列测定 ,验证了克隆的正确性。细胞凋亡素基因全长为 36 3bp ,编码 12 1个氨基酸。与Meehan .等发表的CAVCux株序列相比 ,第 46代细胞适应毒的细胞凋亡素基因的第 2 0 9个核苷酸由CT ,与澳大利亚株、美国株CAV序列分别有 5个和 2个碱基的差别 ,并且均匀分布在 5’端前 2 10碱基区 ,而在 3’端序列较为保守。与同处欧洲的英国株CAV序列相比 ,序列较为一致。本研究对所克隆的调亡素编码蛋白进行了疏水性分析和抗原表位优势分析。

鹅源腺病毒Y_(81)G_(4)株基因组末端倒置重复序列(ITR)的核酸鉴定和结构分析

对鹅源腺病毒株Y81G4 基因组两侧末端序列测定和比较 ,鉴定出其ITR区。Y81G4 株ITR全长为 12 5bp ,远长于其它禽Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ群腺病毒ITR长度。在Y81G4 株ITR中有一些腺病毒ITR序列特征 :① 5 _C(A/T) (A/T)NTCAT_腺病毒典型起始序列 ;② 9～ 13bp存在腺病毒科共有的 (A/T)T(A/T)ATA保守序列 ;③在ITR区 37～ 42bp出现的GNGGCG保守序列 ;④在ITR 45～ 5 0bp出现TGACGT保守序列。此外 ,哺乳动物腺病毒ITR中被转录因子SP1所识别的序列和以增强DNA复制启动的两个宿主核蛋白NFⅠ和NFⅢ的结合序列在Y81G4 株TIR中并没有出现。经DNASTAR软件“Clustal”方法对禽腺病毒Y81G4 株ITR与其它腺病毒ITR的同源性进行比较 ,其同源性由高到低依次为 :禽Ⅲ群减蛋综合征病毒 (EDSV ,10 0 % ) >羊腺病毒 (OAV ,43 .5 % ) >禽Ⅱ群火鸡出血性肠炎病毒 (HEV ,30 .8% )和禽Ⅰ群鸡胚致死孤儿病毒 (CELO株 ,2 8.2 % ) >人腺病毒 12型 (HAd12 ,2 6 .4% )和牛腺病毒 1型 (BAd1,2 6 .4% )。通常在腺病毒科同一亚属或亚群中ITR是很保守的 ,因而推测Y81G4

鸡贫血病毒细胞凋亡素基因的原核表达及其免疫学活性

将鸡贫血病毒 (CAV)细胞凋亡素基因克隆入表达性载体 p GEX- 5 X- 3,在大肠杆菌中以融合蛋白的形式获得表达。再以表达产物免疫小鼠 ,制备抗 CAV凋亡素的多克隆抗体。以其对 CAV感染的 MSB1细胞作间接免疫荧光试验(IFA)检测呈阳性 ,表明表达产物保留了其相关的天然抗原特性。

鸡贫血病毒衣壳蛋白基因的PCR扩增和克隆

通过聚合酶链式反应（ＰＣＲ）扩增鸡贫血病毒（ＣＡＶ）衣壳蛋白基因（１．４ｋｂ），并将此基因克隆进ｐＵＣ－１８载体中。通过原位杂交、酶切分析、Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交及其标记成探针对ＣＡＶ基因组的特异性反应等试验证实所获得的克隆是含有ＣＡＶ衣壳蛋白基因的重组质粒克隆。

鸡贫血病毒全基因组点突变体的体外构建及其在宿主细胞MSB1的转染研究

在已构建鸡贫血病毒 (CAV)全基因组体外克隆 (pCAV2 4)的基础上 ,设计一对特定引物 ,用PCR定向点突变方法扩增出含有完整的EcoRI位点的CAV全基因组 (2 3kb) ,并克隆入pUC18载体中 ,获得阳性克隆 ,命名为pCAVE+ 。经酶切鉴定和序列分析EcoRI位点两侧序列 ,原先不完整的EcoRI位点 ( GACTTC )已被定向点突变为完整的EcoRI位点 ( GAATTC )。对重组质粒pCAVE+ 以EcoRI酶切回收CAV全基因组DNA ,在体外连接并经纯化后 ,经Effectene转染易感宿主细胞MSB1。将转染细胞培养上清连续传代 8次以后 ,出现病毒复制 (MSB1细胞培养基颜色不再变黄 )。取此时细胞培养液感染无CAV的 1日龄SPF小鸡 ,14天出现典型的鸡贫血症状和胸腺萎缩、骨髓脂肪变性等病变。获得了能在体外自主复制并组装成完整CAV病毒子的感染性核酸。

鸡贫血病病毒VP_2基因在大肠杆菌中的表达及其特性

将鸡贫血病病毒 (chicken anaem ia virus,CAV) VP2 基因克隆入表达性载体 p GEX- 5 X- 3,在大肠杆菌以谷胱甘肽转移酶 (GST)融合蛋白的形式获得了表达。以此表达产物免疫小鼠 ,制备抗 CAV VP2 的多克隆抗体。通过对 CAV感染的 MSB1细胞作间接免疫荧光试验 (IFA)检测 ,结果为阳性 ,这表明表达产物保留了 CAV相关的抗原特性。本研究为进一步探索 CAV VP2 的生物学特性奠定了基础。

ZY754—5型封隔器的研制与应用

针对Y341－114型封隔器存在密封效果较差、有效期短、解封不彻底、反洗通道关闭不严和卡死等缺点，濮阳汇达集约工具厂研制了ZY754—5型封隔器。这是一种液压坐封、上提油管解封的水力机械压缩式封隔器。介绍了ZY754—5型封隔器的设计要点、工作原理和主要技术参数，叙述了室内试验和现场试验情况。28口井的现场试验表明，ZY754—5型封隔器克服了Y341—114型封隔器的缺点，在适应井径范围内可满足水井分注与卡漏的要求，坐封成功率和分注合格率为100％，有效期延长1倍以上。

Y344-110找漏管柱的研制与应用

针对江 45 3找漏管柱存在的封隔器胶筒容易损坏、节流器密封不严等问题 ,设计了Y344 - 110找漏管柱。该管柱采用新研制的Y344 - 110封隔器和 10 0mm节流器。经现场 16口井试验表明 ,该管柱外径小 ,解决了套变井径大于 110mm油水井验套的工艺难题。并且该管柱多次坐封 ,封隔器胶筒也不会损坏 ,密封可靠 ;节流器阀芯和阀座之间采用软密封 ,密封性好 ,开启压力稳定。找漏工艺 1次成功率由以前的 30 %提高到 10 0 % ,取得了较好的经济效益。

鹅源腺病毒基因组E3区的鉴定和分析

在构建鹅源腺病毒Y81G4株Hind文库的基础上,通过特定的引物采用PCR方法从腺病毒文库的A片段中扩增并序列分析鉴定了腺病毒的E3区。E3区二端分别是保守性较强的pⅧ基因和纤维蛋白基因。和人腺病毒E3区相比,鹅源腺病毒E3区具有以下二个显著特征:(1)长度较短,全长仅为238个核苷酸;(2)E3区不具有明显的编码框。本研究也进一步证实了此鹅源腺病毒应归类于Ⅲ型禽腺病毒。

32Y型增压注水泵柱塞结构的改进

针对３２Ｙ型增压注水泵的柱塞经常在小端的φ１１ｍｍ通孔和直径φ１８ｍｍ处发生断裂破坏的现象（数口井的使用平均寿命仅有３２７．７ｈ），通过对柱塞结构、工作受力特征和装配关系的描述，认为原柱塞的结构不甚合理。经改造后的柱塞，使用寿命明显延长了，达到原平均寿命的７．５倍。

生化型耐温耐盐泡排体系的起泡及稳泡性能评价

针对低压、高含水天然气井的积液问题,优选出起泡、稳泡性能优良的OPUS-087泡排剂。实验结果表明,OPUS-087在矿化度为7.2×10~4mg/L、温度为90℃时,起泡高度可达77.5mm,起泡性能及耐温耐盐性能良好;在凝析油的质量分数不高于20%时,可以保持起泡性能基本不变,抗凝析油性能良好。生物表面活性剂稳泡体系H19的质量分数为0.03%时,可使OPUS-087泡排剂溶液的起泡高度由77.5 mm提高到100 mm。

I群禽腺病毒江苏分离株(FAVI-JS)的分离鉴定

通过形态学、致细胞病变和序列比较等对一株疑为I群禽腺病毒江苏分离株FAVI_JS进行了鉴定 ,试验结果表明 :该病毒为球形、无囊膜、二十面体对称 ,直径为 70nm～ 80nm ;不具有凝集鸡、鸭、鹅红细胞的能力但可以凝集大鼠红细胞。在鸡胚肾细胞 (CEK)上可致细胞变圆 ,折光性增强等病变 ;通过PCR方法扩增出的FAVI_JSL、R、ITR三个片段 ,经过测序分析并与GenBank上发表的属于血清I型的CELO病毒、FAV_1、FAV_A和血清 8型的禽腺病毒 (FAV_8)全基因组的相应序列比较 ,FAVI_JS与I群禽腺病毒各毒株在三个片段上同源性都很高 ,其中与血清I型的同源性高达 96 %以上 ,在根据对遗传上具有重要意义的ITR序列绘制的遗传进行树分析 ,FAVI_JS与Ⅲ群禽腺病毒EDS、Y81G4株明显属于不同的分支 ,而与群禽腺病毒 ,特别是与血清I型的禽腺病毒更接近 ,这些结果证明 。

传染性法氏囊病病料中MDV、CAV、REV的共感染检测

从江苏、山东、浙江、河南、上海、广西、云南等地收集根据临床表现及病理变化诊断为传染性法氏囊病( IBD)的病鸡法氏囊样品 66份 ,用相应的核酸探针及斑点杂交法分别检测样品中鸡传染性贫血病病毒( CAV)、马立克氏病病毒 ( MDV)、网状内皮细胞增生病病毒 ( REV)的感染 ;用抗 IBD血清做琼扩检测 IB-DV。结果显示 ,部分地区病料中这些病毒有不同程度的二重感染、三重感染甚至四重感染。提示在研究特定毒株 IBDV的毒力时 ,应考虑多重感染对致病性的影响。