抗人卵巢癌抗体可变区cDNA的克隆与ScFv的构建和表达及放射免疫显像

目的 :为研究小分子抗体作为导向载体的作用 ,制备抗人卵巢癌单克隆抗体COC183B2 的单链抗体 (sin glechainFv ,ScFv) ,并进行放射免疫显像 (radioimmunoimaging ,RII)。 方法 :利用PCR技术从COC183B2 杂交瘤细胞中扩增COC183B2 重链可变区基因 (VH)和轻链可变区基因 (VL) ,并将其克隆入高效表达载体 pTHA90中。重组子转化大肠杆菌TOP10 ,IPTG诱导表达ScFv融合蛋白 ,经改进氯化亚锡法进行99mTc标记 ,在卵巢癌裸鼠皮下瘤模型上进行RII。结果 :(1)ScFv融合蛋白以包涵体形式获高效表达 ;(2 )改进氯化亚锡法成功进行小分子抗体ScFv99mTc的标记 ,标记率达 98% ;(3)应用99mTc标记ScFv融合蛋白进行RII,肿瘤显像早 ,图像清晰。结论 :应用单链抗体ScFv可改善RII。

抗人卵巢癌单域抗体V_H 基因的克隆、表达及放射免疫显像

为研究小分子抗体作为导向载体的作用 ,制备抗人卵巢癌单克隆抗体COC1 83B2 单域抗体(重链可变区 ,VH) ,并进行放射免疫显像 (RII) .利用PCR技术从COC1 83B2 杂交瘤细胞中扩增COC1 83B2 的VH 基因片段 ,并将其克隆入高效表达载体pTHA90中 .重组子转化大肠杆菌TOP10 ,IPTG诱导表达VH 融合蛋白 ,经改进氯化亚锡法进行锝 ( 99mTc)的标记 ,在卵巢癌裸鼠皮下瘤模型上进行RII.结果表明 :( 1 )VH 融合蛋白以包涵体形式获高效表达 ;( 2 )改进氯化亚锡法成功进行VH 融合蛋白99mTc的标记 ,标记率达 96%以上 ;( 3)用99mTc标记VH 融合蛋白进行RII,肿瘤显像早 ,图像清晰 .说明99mTc可用于小分子抗体标记 ,应用单域抗体VH

人卵巢上皮癌细胞原代培养及细胞系BUPH:OVSC-1的建立

目的 :为人卵巢上皮癌的研究提供更多体外研究模型 ,确立卵巢上皮癌原代培养的条件 ,建立细胞系。方法 :将 2 5例卵巢上皮癌手术切除的肿瘤组织或腹水标本进行体外培养 ,比较不同组织培养方法的效果。对所建卵巢癌细胞系的形态学、染色体核型、生长增殖及裸鼠种植情况进行观察。结果 :建立一套人卵巢上皮癌原代培养方法 ,使其体外培养传代数扩展至 10～ 15代。经原代培养得到一株人卵巢癌细胞系BUPH :OVSC 1,其形态学、染色体核型分析、接种致瘤性的观察结果表明 ,该细胞系符合人体恶性细胞特征。裸鼠种植瘤病理切片该细胞呈肉瘤样细胞形态 ,电镜及角蛋白免疫组化证实其为上皮起源。结论 :应用改良的卵巢上皮癌原代培养方法能改善细胞的体外生存期。BUPH :OVSC 1是一株特殊的人卵巢癌细胞系 ,符合人卵巢肉瘤样癌细胞系的特征 。

人卵巢浆液性囊腺癌永生化细胞系BUPH∶OVCA-3的建立及其生物学特性

介绍人卵巢浆液性囊腺癌永生化细胞系的建立 ,研究其生物学特性 .以卵巢浆液性乳头状囊腺癌的腹水细胞为材料 ,进行体外培养 .将永生化基因———SV4 0T抗原基因转染第 2代细胞 ,得到永生化细胞系 .通过光学显微镜、生长曲线测定、染色体分析、双层软琼脂培养、裸鼠接种、免疫组化等 ,研究其生物学特性 ,并与其来源细胞的生物学特性进行比较 .建立了一株人卵巢浆液性囊腺癌永生化细胞系 ,命名为BUPH∶OVCA 3,现已传至 6 0余代 .其生物学特性为 ,细胞生长旺盛 ;具有人体恶性细胞的核型特征 ;细胞恶性度较低 ,不具有集落形成能力及裸鼠接种致瘤性 ;除较未永生化细胞生长速率增快 ,饱和密度增加外 ,仍保留上皮细胞的分化表型 .结果表明 ,BUPH∶OVCA 3为一株恶性度较低的人卵巢浆液性囊腺癌永生化细胞系 ,保留其来源细胞的生物学特性 。

人卵巢肉瘤样癌细胞系BUPH:OVSC-1的建立及其生物学特性

目的:介绍人卵巢肉瘤样癌细胞系的建立,研究其生物学特性。方法:以手术切除的卵巢肉瘤样癌腹壁转移组织为材料,进行体外培养,建立人卵巢肉瘤样癌细胞系。通过光学显微镜、电子显微镜、生长曲线测定、染色体分析、双层软琼脂培养、裸鼠接种、免疫组化等,对其生物学特性进行研究。结果:首次建立一株人卵巢肉瘤样癌细胞系,命名为BUPH:OVSC-1,现已传至100余代。其生物学特性为,形态学观察细胞呈肉瘤样细胞形态,超微结构证实为上皮起源;细胞生长旺盛;染色体为假二倍体,染色体丢失,且有三条标记染色体;具有集落形成能力;裸鼠皮下种植瘤生长快,与原组织形态相似;组织化学奥辛蓝过碘酸雪夫氏反应、免疫组化角蛋白7及波形蛋白染色均阳性。结论:BUPH:OVSC-1为一株高度恶性人卵巢癌细胞系,符合人卵巢肉瘤样癌细胞系的特征,可作为卵巢肉瘤样癌研究的实验模型。

SV40T基因介导的永生化对细胞生物学特性的影响

目的研究SV40 T基因对其诱导的永生化细胞系细胞表型的影响。方法以手术切除的卵巢肉瘤样癌腹壁转移组织为材料,进行体外培养。将永生化基因———SV40 T抗原基因转染第10代细胞,经筛选,抗性克隆扩大培养,得到永生化细胞系。通过光学显微镜、电子显微镜、生长曲线测定、染色体分析、双层软琼脂培养、裸鼠接种、免疫组化等,研究转染与未转染细胞的生物学特性,通过四甲基偶氮唑蓝比色法(MTT)在相同条件下检测转染与未转染细胞对顺铂、阿霉素、足叶乙甙、拓扑替康四种化疗药物的敏感性。结果建立人卵巢肉瘤样癌细胞系,命名为BUPH:OVSC-1。经SV40 T抗原基因转染,建立人卵巢肉瘤样癌永生化细胞系,命名为BUPH:OVSC-2,两者均已长期稳定传代。通过比较,两者的生物学特性无明显差别,对不同化疗药物的敏感性无明显差别。结论SV40 T基因永生化的细胞保留了原细胞的分化表型,SV40介导的永生化细胞系可作为体外研究的模型。

人卵巢癌细胞系BUPH:OVSC-1的建立及化疗药物对其生长的影响

目的 :介绍人卵巢肉瘤样癌细胞系BUPH :OVSC 1的建立 ,筛选卵巢肉瘤样癌敏感的化疗药物。方法 :以手术切除的卵巢肉瘤样癌腹壁转移组织为材料 ,进行体外培养 ,建立人卵巢肉瘤样癌细胞系。通过MTT的方法在相同条件下检测该细胞系对顺铂、阿霉素、足叶乙甙、拓扑替康四种化疗药物的敏感性。结果 :建立卵巢肉瘤样癌细胞系BUPH :OVSC 1,该细胞在体外对阿霉素非常敏感 ,对顺铂较敏感 ,对足叶乙甙和拓扑替康的敏感性较差。结论

宫颈癌根治术中腹膜代阴道临床分析

目的探讨宫颈癌根治术中腹膜代阴道延长术的临床价值。方法对15例Ⅰa～Ⅱa期病例行宫颈癌根治术（广泛性子宫切除加盆腔淋巴清扫术），术中同时行腹膜代阴道延长术。取同期对照组20例，未行腹膜代阴道延长术。结果此手术形成的阴道具有宽敞、光滑、湿润、弹性好等与正常阴道类似的生理功能，性生活满意。结论年轻患者宫颈癌根治术中腹膜代阴道能有效地提高生活质量，值得临床推广。

卵巢肉瘤样癌细胞系的生物学特性及对化疗药物的敏感性

目的研究人卵巢肉瘤样癌永生化细胞系BUPH:OVSC2的生物学特性,筛选卵巢肉瘤样癌敏感的化疗药物。方法以手术切除的卵巢肉瘤样癌腹壁转移组织为材料,进行体外培养。将永生化基因———SV40T抗原基因转染第10代细胞,经筛选,抗性克隆扩大培养,得到人卵巢肉瘤样癌永生化细胞系。通过光学显微镜、电子显微镜、生长曲线测定、染色体分析、双层软琼脂培养、裸鼠接种、免疫组化等,研究其生物学特性。用MTT的方法检测该细胞系对顺铂、阿霉素、足叶乙甙、拓扑替康四种化疗药物的敏感性。结果人卵巢肉瘤样癌永生化细胞系,BUPH:OVSC2,现已传至100余代。其生物学特性为,形态学观察细胞呈肉瘤样细胞形态,超微结构证实为上皮起源;细胞生长旺盛;具有恶性细胞的特征,恶性度高。该细胞在体外对阿霉素和顺铂非常敏感,对足叶乙甙尚敏感,对拓扑替康不敏感。结论BUPH:OVSC2为一株恶性度高的人卵巢肉瘤样癌永生化细胞系,保留了其来源细胞的生物学特性,阿霉素与顺铂联合治疗可能是卵巢肉瘤样癌较敏感的化疗方案。

人卵巢癌永生化细胞系BUPH:OVSC-2的建立及其生物学特性研究

背景与目的:利用永生化技术建立预期表型的细胞系,已成为建系的重要手段之一,而人卵巢癌永生化细胞系的建立国内外少有报道。本文介绍人卵巢肉瘤样癌永生化细胞系的建立,以及对其生物学特性的研究。方法:以手术切除的卵巢肉瘤样癌腹壁转移组织为材料,进行体外培养。将永生化基因SV40T抗原基因转染第10代细胞,经筛选,抗性克隆扩大培养,得到永生化细胞系。通过光学显微镜、电子显微镜、生长曲线测定、染色体分析、双层软琼脂培养、裸鼠接种、免疫组化等,研究其生物学特性,并与其来源细胞的生物学特性进行比较。结果:建立一株人卵巢肉瘤样癌永生化细胞系,命名为BUPH:OVSC-2,现已传至90余代。其生物学特性为:形态学观察细胞呈肉瘤样细胞形态,超微结构证实为上皮起源;细胞生长旺盛;具有恶性细胞的特征,恶性度高。通过比较,与其来源细胞的生物学特性无明显差别。结论:BUPH:OVSC-2为一株恶性度高的人卵巢肉瘤样癌永生化细胞系,保留了其来源细胞的生物学特性,可作为卵巢肉瘤样癌研究的实验模型。

互联智慧分级诊疗服务体系的探讨与体会

为顺应新医改要求,根据河南经济社会和卫生事业发展实际情况,借鉴国内外分级诊疗做法,按照"平等自愿、资源共享、优势互补、协同提高"原则,以"技术纽带为核心,IT纽带为工具,政策纽带为方向"的互联智慧分级诊疗合作模式,逐步建立区域学科联合体,实现学科之间融会贯通,构建了以三级医院为龙头,以市级医院为区域中心、以县级医院为基础纽带、以社区卫生服务中心/乡镇卫生院为预防教育网底,构建了符合省情的分工明确、覆盖广泛、资源共享、互联智慧、服务同质、便民惠民的分级诊疗服务体系。

T、B淋巴细胞和一氧化氮合酶在宫颈癌及癌前病变中的表达及其意义

目的研究宫颈上皮内瘤样病变Ⅲ级(CINⅢ)、宫颈癌和癌旁组织中T淋巴细胞、B淋巴细胞、巨噬细胞及诱生型一氧化氮合酶(iNOS)的表达及其意义。方法分别取20例正常宫颈上皮(NCE)、CINⅢ和宫颈浸润癌患者宫颈组织样本。用免疫组化方法检测其鳞柱状交界上皮间质内、损害性病变上皮组织内和浸润性癌组织内T淋巴细胞(CD3)、细胞毒性淋巴细胞(CD8)、B淋巴细胞(CD20)、巨噬细胞(CD68)和iNOS的表达及意义。结果与正常对照组和浸润性宫颈癌组相比,CD3、CD20、CD68及iNOS的阳性率在浸润癌癌旁组织中明显增高(P<0.05)。与浸润性宫颈癌组相比,CDCD+3和CDCD+20淋巴细胞更多存在于CINⅢ患者的组织内(P<0.05)。结论 T淋巴细胞、B淋巴细胞和iNOS在浸润性宫颈癌肿瘤旁组织间质内存在高表达。检测T淋巴细胞及B淋巴细胞亚群和iN-OS可用于宫颈癌及癌前病变的免疫监测。

科研护士岗位管理模式探索

学科建设是医院发展中的永恒主题,科研与学科建设相辅相成,护理科研是护理学科发展的重要推动力量,而人才培养是学科和科研建设的核心。自2017年7月开始,某院设置科研护士岗位,积极探索科研护士岗位设置和管理,初步建立了"选拔-培养-任用-考核评价"模式,积累了一定经验,现做简要介绍,为国内科研护士的科学培养和管理提供借鉴。

高表达ALDH1对卵巢癌HEY细胞株干细胞特性的影响

目的:探讨通过无血清悬浮培养的方法培养卵巢癌HEY细胞株,富集悬浮细胞球并检测悬浮细胞中乙醛脱氢酶1(ALDH1)表达的情况,评价ALDH1是否可作为卵巢癌干细胞的标志物。方法:1用含有生长因子的无血清培养基对卵巢癌HEY细胞株进行悬浮培养获得细胞球,与贴壁生长的细胞进行比较。2通过流式细胞检测技术筛选出ALDH1阳性(ALDH1^+)及ALDH1阴性(ALDH1^-)细胞,通过软琼脂克隆形成实验、裸鼠移植瘤实验检测两组细胞的自我复制、增殖、克隆形成及侵袭能力。3通过3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(MTT)方法检测两组细胞经卡铂药物处理后体外增殖能力。4Western blotting检测两组细胞中的β-连环素(β-catenin)的表达情况。结果:1悬浮细胞中ALDH1^+细胞比例明显高于贴壁细胞(P<0.05)。2显微镜下观察,ALDH1^+细胞球克隆形成率高于ALDH1^-(P<0.05);ALDH1^+裸鼠瘤体积大于ALDH1^-移植瘤(P<0.05)。3经卡铂药物处理后,ALDH1^+细胞球从第4天开始增殖情况明显高于ALDH1^-组(P<0.05)。4Western blotting检测示,ALDH1^+中β-catenin的表达明显高于ALDH1^-(P<0.05)。结论:用含有生长因子的无血清培养基培养卵巢癌HEY细胞株能够形成卵巢癌干细胞球并高表达ALDH1,ALDH1^+细胞恶性程度更高,化疗耐药性能更强,ALDH1可作为一种卵巢癌干细胞标志物。

照顾者虐待老年人行为评估及影响因素的研究进展

随着老年人数增长,长期照护负担加重,老年人虐待事件发生率逐渐上升,已引起广泛关注。本文大量查阅国内外文献,汇集各国照顾者虐待老年人的行为评估工具,并分析照顾者虐待老年人相关影响因素,以指导我国研制本土化评估工具,预警老年人虐待事件发生可能性,制定有效可行的干预措施,将预防的关口前移,营造和谐照护氛围,提高老年人生存质量。

沉默β-catenin对卵巢癌干细胞特性的影响

目的:探讨β-catenin蛋白对卵巢癌干细胞特性及细胞增殖的影响。方法:采用β-catenin siRNA技术沉默SKOV3中β-catenin基因,形成SKOV3-RNAi细胞。转染空载体siRNA的SKOV3-NC细胞作为对照。流式细胞技术测定CD44、CD117表达;通过卡铂作用后细胞的平板克隆计数及MTT法检测沉默β-catenin基因后细胞增殖能力,通过裸鼠背部皮下移植瘤实验检测细胞的体内成瘤能力。结果:与SKOV3-NC细胞相比,SKOV3-RNAi细胞在无血清培养条件下细胞球形成明显减少(P<0.05),且CD44、CD117荧光强度均明显降低(P<0.05)。卡铂作用于细胞后,SKOV3-RNAi细胞克隆数的减少量比SKOV3-NC细胞更为显著,同时细胞生长速度明显减慢;裸鼠体内,SKOV3-RNAi的成瘤能力较SKOV3-NC细胞明显降低。结论:沉默β-catenin基因后,卵巢癌细胞系SKOV3的干细胞特性明显减弱,细胞增殖也受到抑制。

运用Cox回归方法建立卵巢浆液性癌患者的预测生存概率表

目的建立预测卵巢浆液性癌患者3年生存率和5年生存率的数学模型及生存率表。方法收集882例卵巢浆液性癌病历资料,创建数据库。运用单因素Cox回归和多因素Cox回归方法处理数据。结果 5项预后相关因素(包括:年龄、肿瘤分期、肿瘤分级、残留癌大小,是否规范化疗),经单因素Cox回归分析,得到回归系数,有统计学意义。第二步多因素Cox回归分析得到的回归系数,与单因素回归系数相乘,得到总回归系数,由此创建预测卵巢浆液性癌患者3年生存率和5年生存率的数学模型。当预后因素处在最好条件下时,患者3年生存率和5年生存率分别为77.17%和53.71%。将最好条件和最差条件下所有可能的预测生存率列表。经检验预测生存率与实际生存率拟合较好。结论这5项预后因素对预测卵巢浆液性癌的生存率有重要影响。所获得到的数学模型以及预测3年生存率和5年生存率表有临床应用意义。

腹腔镜辅助阴式子宫切除术中切除双侧输卵管对卵巢近期功能的影响

目的：探讨腹腔镜辅助阴式全子宫切除术中切除双侧输卵管对卵巢近期功能的影响。方法选取河南省人民医院2010年7月至2012年6月有子宫切除指征的220例良性子宫疾病患者，根据行腹腔镜辅助阴式子宫切除术中是否切除双侧输卵管分为两组，110例行腹腔镜辅助阴式子宫切除＋输卵管切除术作为观察组，110例行腹腔镜辅助阴式子宫切除术，保留输卵管患者作为对照组；分别于术前（月经第3～5天）及术后1、6、12个月，同位素法测定血清卵泡刺激素（follicle stimulating hormone，FSH）、黄体生成素（luteotropic hormone，LH）、雌二醇（estradiol，E2）水平，改良 Kupperman评分评估围绝经期症状，经阴道彩色多普勒超声检测卵巢血供变化及盆腔情况，以评价患者卵巢功能变化。结果与术前相比，对照组患者术后1、6、12个月，血清 FSH、LH 显著升高，E2降低（P ＜0．05）；改良 Kupperman 评分逐渐升高（P ＜0．05）。观察组与对照组同期相比，FSH、LH 升高及 E2降低均不明显，差异无统计学意义（P ＞0．05）。结论腹腔镜全子宫切除术中切除双侧输卵管对卵巢近期功能无明显影响。

BcL-2和C-fos在卵巢上皮性肿瘤中的表达及意义

探讨抗凋亡基因ＢｃＬ２ 和原癌基因Ｃｆｏｓ 在卵巢上皮性肿瘤发生发展中的作用及其临床意义，采用单克隆抗体免疫组化技术对４２ 例卵巢上皮组织进行ＢｃＬ２ 和Ｃｆｏｓ 蛋白表达的检测。８ 例正常卵巢组织均未检测出二基因产物的表达。ＢｃＬ２ 和Ｃｆｏｓ 在良、恶性卵巢肿瘤组织中检出率分别为２０％ （２／１０）、５９－４％ ；３０％ （３／１０）、４６－９％ 。ＢｃＬ２ 阳性在良性恶性组织间差异显著（Ｐ＜０－０５）。二基因产物表达均随病理分级升高而增加，高中分化与低分化比较差异均极显著（Ｐ＜０－０１）。ＢｃＬ２ 阳性提示较好的预后（Ｐ＜０－０１）。Ｃｆｏｓ 阳性预后欠佳（Ｐ＜０－０５）。二基因产物表达无相关性。结果表明，ＢｃＬ２ 和Ｃｆｏｓ 在卵巢上皮性肿瘤的发生、发展、分化中起作用。ＢｃＬ２ 过表达预后较好，Ｃｆｏｓ 过表达预后差，二基因产物表达可作为临床预后评估指标。

去甲斑蝥素联合ABT-737对宫颈癌细胞增殖及凋亡的影响

目的:研究去甲斑蝥素(norcantharidin,NCTD)联合ABT-737对宫颈癌细胞增殖及凋亡的影响。方法:采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测NCTD单药或联合ABT-737对宫颈癌细胞株HeLa、SiHa增殖的影响;采用流式细胞术分析NCTD联合ABT-737对宫颈癌细胞凋亡的影响。结果:NCTD单药能够显著抑制宫颈癌细胞株HeLa、SiHa的增殖,抑制作用呈剂量依赖性。NCTD与ABT-737联用后抑制作用明显增强。1μmol/L ABT、60μmol/L NCTD及两药联用诱导HeLa细胞的凋亡率分别为(31.65±7.75)%、(40.34±14.52)%和(63.03±10.90)%,诱导SiHa细胞的凋亡率分别为(9.76±0.04)%、(22.04±3.03)%和(58.36±2.31)%。NCTD、ABT两药联合的促凋亡作用比单药显著增强(P<0.05)。结论:NCTD单药在体外能够明显抑制宫颈癌细胞HeLa、SiHa的增殖,与ABT-737联用后抑制增殖和促凋亡作用更加显著。