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浅谈工业园区清洁生产审核程序设置
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作者 孙大光 刘德敏 孟彩红 《环境与发展》 2024年第3期15-23,34,共10页
随着《“十四五”全国清洁生产推行方案》等深化清洁生产工作的政策法规出台,清洁生产审核的对象也由单独企业扩展到工业园区。目前,工业园区的清洁生产审核工作处于示范试点阶段,有针对性且规范的园区清洁生产审核程序尚处于制定当中... 随着《“十四五”全国清洁生产推行方案》等深化清洁生产工作的政策法规出台,清洁生产审核的对象也由单独企业扩展到工业园区。目前,工业园区的清洁生产审核工作处于示范试点阶段,有针对性且规范的园区清洁生产审核程序尚处于制定当中。本文依据已完成的园区审核项目所取得的经验,参照企业审核程序的设置思路,按照整体性、差异性、目的性原则,建设性地提出园区清洁生产审核程序的框架内容,在为园区审核示范试点项目提供遵循和借鉴的同时,为后续编制园区清洁生产审核指南,提供科学的参考。 展开更多
关键词 清洁生产 清洁生产审核 工业园区 审核程序
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急性血糖波动对N末端B型利钠肽前体评估心功能的影响
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作者 刘阔 呼海娟 +3 位作者 刘德敏 王倩 张力辉 崔炜 《河北医药》 CAS 2024年第15期2316-2319,共4页
目的 研究短时间内血糖浓度波动对NT-proBNP水平的影响。方法 选取2019年9~10月进行OGTT试验的住院患者32例。分别检测每位患者在空腹时、OGTT试验开始后30 min、60 min、120 min和180 min时血浆NT-proBNP、血糖、胰岛素和C-肽的水平。... 目的 研究短时间内血糖浓度波动对NT-proBNP水平的影响。方法 选取2019年9~10月进行OGTT试验的住院患者32例。分别检测每位患者在空腹时、OGTT试验开始后30 min、60 min、120 min和180 min时血浆NT-proBNP、血糖、胰岛素和C-肽的水平。通过Pearson和Spearman相关分析探究个体NT-proBNP水平与血糖浓度的相关性,应用单因素重复测量方差分析和广义线性混合模型进一步分析检测时间、血糖、胰岛素和C-肽对NT-proBNP水平的影响。结果 相关分析表明,在32例患者中,只有5例患者的NT-proBNP水平与血糖浓度有相关性(P<0.05)。然而,每例患者NT-proBNP水平与血糖浓度的相关性趋势和最佳拟合曲线各不相同。单因素重复测量方差分析表明,不同时间和不同血糖浓度下NT-proBNP水平的差异无统计学意义[F(1.36,40.87)=1.23,P=0.29,η2=0.04]。广义线性混合模型表明NT-proBNP水平不受检测时间、血糖、胰岛素和C-肽浓度的影响(P>0.05)。结论 急性血糖浓度波动不影响NT-proBNP水平从而不影响NT-proBNP对心功能的评估。 展开更多
关键词 N末端B型利纳肽 血糖 心功能
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宽QRS波心动过速心电图的鉴别诊断原理
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作者 刘阔 段芳 +6 位作者 贾沁洁 王鹏博 周子涵 王倩 刘德敏 耿雪 崔炜 《中国心血管杂志》 北大核心 2024年第2期188-192,共5页
宽QRS波心动过速的鉴别诊断主要围绕异常传导的室上性心动过速和室性心动过速进行。起搏点独立于窦房结和(或)心房、传导方向异常及传导速度异常是依据心电图鉴别宽QRS波心动过速的基本原理。本文从以上三个方面结合病史及查体总结了通... 宽QRS波心动过速的鉴别诊断主要围绕异常传导的室上性心动过速和室性心动过速进行。起搏点独立于窦房结和(或)心房、传导方向异常及传导速度异常是依据心电图鉴别宽QRS波心动过速的基本原理。本文从以上三个方面结合病史及查体总结了通过心电图图形特征进行鉴别诊断的具体方法。 展开更多
关键词 心电图 心律失常 宽QRS波心动过速 鉴别诊断
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B型利钠肽对醛固酮诱导的肾小管上皮细胞中利钠肽受体A表达的影响及机制
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作者 李彤 呼海娟 +1 位作者 刘德敏 崔炜 《中国心血管杂志》 北大核心 2024年第5期444-452,共9页
目的研究B型利钠肽(BNP)对醛固酮(Ald)诱导的肾小管上皮细胞(RTEC)中利钠肽受体A(NPR-A)表达的影响,探寻肾脏发生BNP抵抗的机制。方法将正常状态的RTEC按BNP刺激浓度依次分为10-7 M BNP组、10-6 M BNP组和10-5 M BNP组;将Ald诱导的RTEC... 目的研究B型利钠肽(BNP)对醛固酮(Ald)诱导的肾小管上皮细胞(RTEC)中利钠肽受体A(NPR-A)表达的影响,探寻肾脏发生BNP抵抗的机制。方法将正常状态的RTEC按BNP刺激浓度依次分为10-7 M BNP组、10-6 M BNP组和10-5 M BNP组;将Ald诱导的RTEC按BNP刺激浓度依次分为Ald+10-7 M BNP组、Ald+10-6 M BNP组和Ald+10-5 M BNP组。通过实时定量聚合酶链反应检测RTEC上NPR-A的转录水平,蛋白质印迹法、免疫荧光染色技术及质膜蛋白分离技术检测NPR-A的蛋白表达水平,酶联免疫吸附法检测环磷酸鸟苷(cGMP)含量。结果在正常RTEC中,随着BNP刺激浓度的升高,NPR-A的mRNA含量、蛋白表达量及cGMP含量均呈先增加后减少的趋势,高浓度BNP会抑制NPR-A的基因转录和蛋白表达,降低cGMP含量。在Ald诱导的RTEC中,随着BNP刺激浓度的升高,NPR-A的mRNA含量、蛋白表达量及cGMP含量均在轻微增加后急剧减少,高浓度BNP会明显抑制NPR-A的基因转录和蛋白表达,减少cGMP生成。当受到相同浓度BNP刺激时,Ald诱导的RTEC上NPR-A的转录水平及cGMP生成量均低于相应的正常RTEC。结论在正常/Ald诱导的RTEC中,胞膜和胞质上NPR-A的蛋白表达水平的变化趋势与总蛋白水平相一致,即呈先升后降的动态变化特点,高浓度BNP会下调NPR-A水平,减少cGMP生成。心力衰竭时发生的BNP抵抗现象与肾脏NPR-A的变化密切相关,RTEC纤维化可能是BNP抵抗的机制之一。 展开更多
关键词 心力衰竭 B型利钠肽 肾脏 利钠肽受体A
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替格瑞洛对血清尿酸水平的影响及其机制的研究进展
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作者 周子涵 刘德敏 崔炜 《中国心血管杂志》 北大核心 2024年第3期263-268,共6页
高尿酸血症是导致心血管疾病患者预后不良的重要原因。研究表明,替格瑞洛会引起不同程度的血清尿酸水平升高,可能与肾尿酸转运体功能障碍和红细胞腺苷再摄取减少相关。本文就替格瑞洛引起尿酸升高的发生率、危险因素和潜在机制等研究现... 高尿酸血症是导致心血管疾病患者预后不良的重要原因。研究表明,替格瑞洛会引起不同程度的血清尿酸水平升高,可能与肾尿酸转运体功能障碍和红细胞腺苷再摄取减少相关。本文就替格瑞洛引起尿酸升高的发生率、危险因素和潜在机制等研究现状进行综述,旨在为替格瑞洛相关高尿酸血症的防治提供策略。 展开更多
关键词 替格瑞洛 尿酸 高尿酸血症 研究进展
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微小RNA靶基因调控的信号通路在急性心肌梗死演进过程中作用的研究进展
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作者 侯谦 马雅楠 刘德敏 《中国心血管杂志》 北大核心 2024年第5期486-491,共6页
急性心肌梗死(AMI)作为心血管疾病的危重症,是导致全球心血管疾病死亡的主要原因之一。近年来,越来越多的研究揭示了信号通路在AMI过程中发挥的作用,微小RNA(miRNAs)对AMI中信号通路的调控也逐渐得到重视。本文总结了miRNAs介导的信号... 急性心肌梗死(AMI)作为心血管疾病的危重症,是导致全球心血管疾病死亡的主要原因之一。近年来,越来越多的研究揭示了信号通路在AMI过程中发挥的作用,微小RNA(miRNAs)对AMI中信号通路的调控也逐渐得到重视。本文总结了miRNAs介导的信号通路在AMI中的作用,以期为miRNAs治疗应用于临床提供理论依据。 展开更多
关键词 微小RNA 靶基因 急性心肌梗死 信号通路
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2型糖尿病患者中脂联素基因多态性的研究 被引量:24
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作者 刘德敏 靳立忠 +2 位作者 于德民 李戈 张捷 《中华糖尿病杂志(1006-6187)》 CSCD 2004年第6期397-398,共2页
关键词 脂联素 2型糖尿病(T2DM) 患者 肥胖 2型糖尿病 基因多态性 外显子2 胰岛索抵抗 正常人 IR
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人脂联素cDNA的克隆及序列分析 被引量:5
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作者 刘德敏 靳立忠 +1 位作者 孙颖 张捷 《天津医药》 CAS 北大核心 2005年第2期71-73,共3页
目的:构建人脂联素cDNA的克隆并进行序列分析。方法:提取人脂肪组织总RNA,运用RT-PCR方法扩增人脂联素cDNA完全编码区,将扩增产物通过TA克隆技术克隆至pMD18-T载体,对重组质粒进行测序验证。结果:成功构建人脂联素cDNA的克隆,重组质粒(p... 目的:构建人脂联素cDNA的克隆并进行序列分析。方法:提取人脂肪组织总RNA,运用RT-PCR方法扩增人脂联素cDNA完全编码区,将扩增产物通过TA克隆技术克隆至pMD18-T载体,对重组质粒进行测序验证。结果:成功构建人脂联素cDNA的克隆,重组质粒(pMD18-T/ADPN)经测序与Genebank检索的脂联素cDNA序列进行对比证实为100%同源。结论:所构建的人脂联素cDNA克隆适于进一步的克隆表达。 展开更多
关键词 脂联素 CDNA序列 克隆表达 重组质粒 序列分析 测序 脂肪组织 T载体 克隆技术 CDNA克隆
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大鼠肝细胞的原代培养及鉴定 被引量:7
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作者 刘德敏 赵慧茹 +1 位作者 杨莉丽 孙颖 《天津医药》 CAS 北大核心 2006年第5期322-323,T0001,共3页
目的:探讨大鼠肝细胞原代培养的方法及细胞的鉴定。方法:采用胶原酶消化获取大鼠肝细胞进行纯化、培养,并采用免疫组织化学方法对其进行鉴定。结果:培养的肝细胞产量高、活力好,用相差显微镜对不同生长时期的肝细胞进行观察证实了细胞... 目的:探讨大鼠肝细胞原代培养的方法及细胞的鉴定。方法:采用胶原酶消化获取大鼠肝细胞进行纯化、培养,并采用免疫组织化学方法对其进行鉴定。结果:培养的肝细胞产量高、活力好,用相差显微镜对不同生长时期的肝细胞进行观察证实了细胞贴壁后变平变薄,双核细胞和多核细胞呈岛状连接的形态学特性,采用抗大鼠细胞角蛋白(ck18)的特异抗体进行免疫组化细胞爬片鉴定,经SP染色DAB显色后,阳性着色部位在胞浆呈棕黄色颗粒,阴性对照未见着色。结论:成功地体外培养了大鼠肝细胞并对其进行了鉴定,为进一步的实验研究奠定了基础。 展开更多
关键词 肝细胞 细胞培养技术 免疫组织化学 大鼠
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1-苯基-3-甲基-4-氰硫基-5-吡唑酮的合成及其对镅和铕的萃取研究 被引量:4
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作者 刘德敏 刘翔峰 +2 位作者 王世联 张小林 杨裕生 《核化学与放射化学》 CAS CSCD 北大核心 2004年第1期53-55,64,共4页
合成了1 苯基 3 甲基 4 氰硫基 5 吡唑酮(PMTCP),研究了该试剂单独萃取及其与2,2' 联吡啶协同萃取镅和铕的行为。实验结果表明,该试剂单独萃取镅和铕的能力都比较低,但优先萃取镅;含氮协萃剂2,2′ 联吡啶的加入可以明显提高镅的萃取... 合成了1 苯基 3 甲基 4 氰硫基 5 吡唑酮(PMTCP),研究了该试剂单独萃取及其与2,2' 联吡啶协同萃取镅和铕的行为。实验结果表明,该试剂单独萃取镅和铕的能力都比较低,但优先萃取镅;含氮协萃剂2,2′ 联吡啶的加入可以明显提高镅的萃取率,并将镅和铕的分离因数α(Am/Eu)由PMTCP单独萃取时的2 6提高到4 0。 展开更多
关键词 1-苯基-3-甲基-4-氰硫基-5-吡唑酮 合成 萃取剂 2 2’-联吡啶 萃取率
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微创治疗腰椎间盘突出症的临床研究进展 被引量:35
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作者 刘德敏 侯伟光 《中国疼痛医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第4期241-243,共3页
腰椎间盘突出症是骨科门诊常见的一种疾病,腰椎间盘突出症的治疗方法有保守治疗和手术治疗两种。微创是当今外科的发展方向,微创脊柱外科是脊柱发展的必然。本文就微创治疗腰椎间盘突出症的临床应用进展作一综述。
关键词 微创 腰椎间盘突出 经皮手术 内镜 进展
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Cyanex301和Cyanex302对镅和稀土元素的萃取研究 被引量:5
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作者 刘德敏 邵芸 +1 位作者 刘翔峰 杨裕生 《核化学与放射化学》 EI CAS CSCD 北大核心 1997年第4期18-22,共5页
用二烷基一硫代膦酸(Cyanex302)和二烷基二硫代膦酸(Cyanex301)作萃取剂,环己烷作稀释剂,研究了它们对示踪量镅和铕的萃取行为及在常量镧存在时,Cyanex301对镅、镧、铕和铥的萃取。结果表明,Cya... 用二烷基一硫代膦酸(Cyanex302)和二烷基二硫代膦酸(Cyanex301)作萃取剂,环己烷作稀释剂,研究了它们对示踪量镅和铕的萃取行为及在常量镧存在时,Cyanex301对镅、镧、铕和铥的萃取。结果表明,Cyanex301和Cyanex302萃取示踪量镅和铕时,镅与铕的萃取行为极其相似,但有常量稀土存在时,Cyanex301对镅有明显的选择性,镅与铕的分离因数接近200;稀土元素的萃取顺序为:DTm>DEu>DLa。 展开更多
关键词 稀土 Cyanex301 Cyanex302 萃取
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高效液相色谱——电化学检测法测定血浆中神经递质及其代谢产物 被引量:6
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作者 刘德敏 张纬 +2 位作者 彭先忠 王维忠 汤新之 《天津医药》 CAS 1996年第1期46-47,共2页
自1978年Hallman等,首先报道用高效液相色谱法检测血浆中儿茶酚胺以来,国内外已有许多改良方法问世,其中大多数是用于血浆中去甲肾上腺素、肾上腺素及多巴胺的测定。笔者认为测定去甲肾上腺素、肾上腺素及多巴胺应用酸性氧化铝吸附法较... 自1978年Hallman等,首先报道用高效液相色谱法检测血浆中儿茶酚胺以来,国内外已有许多改良方法问世,其中大多数是用于血浆中去甲肾上腺素、肾上腺素及多巴胺的测定。笔者认为测定去甲肾上腺素、肾上腺素及多巴胺应用酸性氧化铝吸附法较为准确易行。对于5-羟色胺与5-羟吲哚醋酸的测定虽然已有报道,但步骤较为复杂,一般实验室不具备条件不易推广使用。笔者与北京医科大学第一医院合作,根据实验室条件,参考有关资料,经过反复实验探讨,建立了一种操作简便、快速、灵敏度较高的检测方法,报道如下。 展开更多
关键词 神经递质 代谢产物 血浆 高效液相色谱
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5,7─二溴─8─羟基喹啉与含N协配体对镅和铕的萃取研究 被引量:4
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作者 刘德敏 刘翔峰 杨裕生 《核化学与放射化学》 EI CAS CSCD 北大核心 1997年第3期12-17,共6页
研究了在实验温度为25℃,水相为硝酸介质,离子强度为0.1mol/kg,氯仿为稀释剂时,5,7-二溴-8-羟基喹啉单独萃取及其与2,2′-联吡啶、2,9-二甲基-1,10-啡绕啉、4,7-二苯基-1,10-啡绕啉对三... 研究了在实验温度为25℃,水相为硝酸介质,离子强度为0.1mol/kg,氯仿为稀释剂时,5,7-二溴-8-羟基喹啉单独萃取及其与2,2′-联吡啶、2,9-二甲基-1,10-啡绕啉、4,7-二苯基-1,10-啡绕啉对三价镅和铕的协同萃取。结果表明:5,7-二溴-8-二羟基喹啉对镅的萃取能力略高于铕,分离因数βAm/Eu为1.29;3种协萃剂的协萃能力依次为:4,7-二苯基-1,10-啡绕啉>2,2′-联吡啶>2,9-二甲基-1,10-啡绕啉,相应的分离因数βAm/Eu分别为:10.80、1.62和0.49。 展开更多
关键词 羟基喹啉 萃取 二溴 HA
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亚甲基四氢叶酸还原酶677C→T及1298A→C基因多态性与糖尿病心血管病变的相关性 被引量:3
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作者 刘德敏 范新萍 于德民 《中华糖尿病杂志(1006-6187)》 CSCD 北大核心 2005年第3期219-222,共4页
目的探讨亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)基因多态性与糖尿病心血管并发症(DC)的关系。方法应用PCRRFLP法检测84例健康人(NC)和158例2型糖尿病患者[分为无DC(NDC)和DC组]的MTHFR677C→T及1298A→C基因多态性,比较各组间基因型分布和等位基... 目的探讨亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)基因多态性与糖尿病心血管并发症(DC)的关系。方法应用PCRRFLP法检测84例健康人(NC)和158例2型糖尿病患者[分为无DC(NDC)和DC组]的MTHFR677C→T及1298A→C基因多态性,比较各组间基因型分布和等位基因频率。结果DC组MTHFR677TT基因型分布及T等位基因频率均高于NC或NDC组,且叶酸水平较低(P<0.001);各组间MTHFR1298A→C基因型分布及等位基因频率差异无统计学意义(P>0.05);MTHFR基因型、年龄是DC的危险因子。结论MTHFR677C→T突变与DC的发生有关。 展开更多
关键词 亚甲基四氢叶酸还原酶 677C→T 1298A→C 基因多态性 糖尿病 心血管疾病 基因型
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老年糖尿病视网膜病与同型半胱氨酸及其相关酶研究 被引量:1
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作者 刘德敏 范新萍 +2 位作者 孙颖 于德民 张捷 《天津医药》 CAS 北大核心 2006年第1期4-6,共3页
目的:探讨同型半胱氨酸(HCY)及其代谢相关酶亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)基因多态性、血叶酸水平与视网膜病变(DR)的关系。方法:用反相高效液相色谱-荧光(rHPLC)法测定DR患者的血浆总HCY(tHcy),放射免疫法测定血浆维生素B12和叶酸水平,... 目的:探讨同型半胱氨酸(HCY)及其代谢相关酶亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)基因多态性、血叶酸水平与视网膜病变(DR)的关系。方法:用反相高效液相色谱-荧光(rHPLC)法测定DR患者的血浆总HCY(tHcy),放射免疫法测定血浆维生素B12和叶酸水平,以多聚酶链反应-限制性内切酶片段长度多态性法(PCR-RFLP)分析MTHFR677CT和1298AC基因型分布,并与健康查体者(对照组)比较。结果:DR组MTHFRC677T基因型频率分布及等位基因频率与对照组差异有统计学意义(P<0.001)。DR组tHcy水平高于对照组,叶酸浓度低于对照组。DR组677C→T突变者,tHcy浓度高于C组相同基因型者(P<0.05),MTHFR1298AC基因型分布及等位基因频率、突变型与野生型间tHcy及叶酸水平差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:高同型半胱氨酸血症(HHcy)是DR的危险因素。血浆HCY水平的升高与叶酸的降低有关。MTHFR基因677C→T突变是高同型半胱氨酸血症的原因,但MTHFR1298AC基因多态性与DR的发生无关。 展开更多
关键词 高同种半胱氨酸血症 亚甲基四氢叶酸还原酶 糖尿病视网膜病变 多态性现象(遗传学)
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2型糖尿病患者胰岛素受体胰岛素结合域基因突变的研究 被引量:1
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作者 刘德敏 张纬 +3 位作者 祁艳斌 王维忠 王嘉仪 汤新之 《天津医药》 CAS 北大核心 2001年第5期265-268,共4页
目的:研究胰岛素受体结合域基因突变与胰岛素受体(INSR)功能异常的关系。方法:采用聚合酶链反应-单链构象多态性(PCR-SSCP)分析法和核酸银染法,对70例2型糖尿病患者INSR结合域基因第2,3,6三个外显子(exon)及部分相邻内含子进行基因突变... 目的:研究胰岛素受体结合域基因突变与胰岛素受体(INSR)功能异常的关系。方法:采用聚合酶链反应-单链构象多态性(PCR-SSCP)分析法和核酸银染法,对70例2型糖尿病患者INSR结合域基因第2,3,6三个外显子(exon)及部分相邻内含子进行基因突变检测。结果:在对外显子6的检测中发现有9例突变,突变又可分为B,C两种不同的SSCP带型。其中B型7例,C型2例,C型突变经测序结果,与外显子6的3′端毗邻的内含子的第43位A→C突变。在外显子3中发现了2例突变,为同一带型。在外显子2中尚未发现突变带型。结论:INSR结合域基因的突变在2型糖尿病中出现的频率较低。C型突变对INSR结合域的影响及其在2型糖尿病发病中的作用尚待进一步研究。 展开更多
关键词 Ⅱ型糖尿病 胰岛素受体 胰岛素结合域基因 基因突变
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非胰岛素依赖型糖尿病患者红细胞内山梨醇含量的研究 被引量:1
18
作者 刘德敏 祁艳斌 +2 位作者 张纬 汤新之 王家驰 《中国糖尿病杂志》 CAS CSCD 1999年第4期230-230,共1页
关键词 糖尿病 NIDDM 红细胞 山梨醇 并发症 病理
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手术室护理干预对食管癌根治术患者麻醉苏醒期躁动及留置尿管耐受度的影响 被引量:59
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作者 刘德敏 刘红 《河北医学》 CAS 2016年第8期1361-1364,共4页
目的:探讨手术室护理干预对食管癌根治术患者麻醉苏醒期躁动及留置尿管耐受度的影响,为提高全身麻醉患者护理水平提供临床依据。方法:选取2013年8月至2015年8月在我院进行全身麻醉下行食管癌根治术患者80例,根据入院先后的顺序分为观察... 目的:探讨手术室护理干预对食管癌根治术患者麻醉苏醒期躁动及留置尿管耐受度的影响,为提高全身麻醉患者护理水平提供临床依据。方法:选取2013年8月至2015年8月在我院进行全身麻醉下行食管癌根治术患者80例,根据入院先后的顺序分为观察组和对照组各40例,对照组采取传统护理,观察组实施手术室护理干预,比较二者清醒时间、拔管时间、躁动发生情况及尿道刺激反应程度等。结果:两组患者麻醉时间、手术时间、术中输液量及术中出血量相似,差异无统计学意义(P>0.05)。观察组患者清醒时间(10.16±1.78)min、拔管时间(14.51±1.17)min,对照组患者清醒时间(12.24±1.82)min、拔管时间(16.70±1.23)min,差异有统计学意义(P<0.05)。观察组患者苏醒期躁动发生率及躁动程度均低于对照组,麻醉苏醒后观察组患者尿路刺激反应轻于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:对食管癌根治术患者实施手术室护理干预,能促进麻醉后清醒、缩短拔管时间、减少苏醒期躁动发生率和程度,提高留置尿管耐受度。 展开更多
关键词 护理干预 手术室护理 食管癌根治术 苏醒期躁动 尿道刺激反应
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绿色荧光蛋白标记的人脂联素真核表达载体的构建 被引量:1
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作者 刘德敏 杜春红 +1 位作者 孙颖 张捷 《天津医药》 CAS 北大核心 2007年第5期324-325,I0003,共3页
目的:构建绿色荧光蛋白(GFP)标记的人脂联素(Adiponectin)真核表达质粒。方法:用本实验室已构建好的人脂联素克隆载体pMD18-T/Adiponectin为模板,结合已设计好的特异性引物,采用PCR方法克隆出Adiponectin目的片段,将该目的片段再连至真... 目的:构建绿色荧光蛋白(GFP)标记的人脂联素(Adiponectin)真核表达质粒。方法:用本实验室已构建好的人脂联素克隆载体pMD18-T/Adiponectin为模板,结合已设计好的特异性引物,采用PCR方法克隆出Adiponectin目的片段,将该目的片段再连至真核表达载体pcDNA3.1/CT-GFP-TOPO上,转化入TOP10感受态细胞中,通过筛选得到融合有绿色荧光蛋白的重组质粒pcDNA3.1/CT-GFP-TOPO-Adiponectin。结果:PCR获得长度为736bp的目的片段,经pcDNA3.1/CT-GFP-TOPO真核表达载体连接、筛选及序列分析后,证实所插入的目的片段与genebank检索的人脂联素cDNA序列(AccessionNM-004797)100%匹配。结论:绿色荧光蛋白标记的人脂联素真核表达载体构建成功。 展开更多
关键词 脂类 遗传载体 质粒 绿色荧光蛋白质类 聚合酶链反应
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