大肠埃希氏菌疫苗生产用菌种种子批的建立与鉴定

为了研制仔猪大肠杆菌病三价(K88+K99+987P)灭活疫苗,以大肠埃希氏菌生产菌种C83549(k88)第2代和C83644(k99)、C83710(987p)第3代基础种子作为原始种子,建立了用于仔猪大肠杆菌病疫苗生产的大肠埃希氏菌基础种子批,分别对种子批的F1、F5、F10、F13代进行了全面鉴定。结果表明,各代种子的培养特性、生化特性均符合大肠埃希氏菌特征,抗原结构分别为C83549(O149∶K88)、C83644(O68∶K99)和C83710(O9∶987P);各代次菌株的菌毛抗原RIHA单位≥800,菌种免疫原性鉴定合格;各菌株经口服途径灌服1.5×10^(10)CFU/头,可引起仔猪100%发病。因此,3个菌株均可用作仔猪大肠杆菌病三价(K88+K99+987P)灭活疫苗生产的菌种。

猪链球菌MnmE蛋白功能的初步研究

为了解析猪链球菌中MnmE蛋白的生物学功能,通过同源重组技术获得了mnmE基因缺失菌株,采用活菌计数、高效液相色谱、质谱分析、荧光定量PCR等技术,鉴定MnmE蛋白在猪链球菌中的主要功能。结果显示,与野生菌株(SC19)相比,mnmE基因缺失菌株(△mnmE)在酸性条件pH 4.5下的存活能力显著下降;氨基酸靶向代谢组学共检测到23种氨基酸及其衍生物,其中△mnmE缺失菌株中有17种氨基酸具有显著差异(P<0.05,倍数差异>1.2),尤其是精氨酸上调4.8倍,丝氨酸上调2.9倍。荧光定量PCR发现△mnmE缺失菌株中与环境适应性相关的精氨酸分解代谢基因ArcA下调表达显著,丝氨酸合成酶SerB上调表达显著。初步鉴定了MnmE蛋白与猪链球菌对酸性环境适应性相关,MnmE蛋白缺失后,精氨酸分解代谢基因下调表达导致精氨酸在菌体里积累,不能被分解成CO_(2)、ATP、NH_(3),使得细菌代谢紊乱、适应性减弱。

焦棓酸对猪链球菌体外抑菌效果试验

研究焦棓酸对猪链球菌的体外抗菌活性及对生物被膜的抑制作用,并初步探讨其抑菌机制。采用96孔微量稀释法测定常用抗菌药物及焦棓酸对猪链球菌的最小抑菌浓度和最小杀菌浓度;平板活菌计数法和分光光度计测定焦棓酸对猪链球菌作用的时间-杀菌曲线;采用结晶紫染色法检测焦棓酸对猪链球菌生物被膜形成的影响;通过荧光定量PCR从转录水平分析焦棓酸对猪链球菌生长与生物被膜形成相关基因表达的情况。结果显示,猪链球菌2型HB菌株对磺胺异恶唑、磺胺甲恶唑耐药严重,焦棓酸对猪链球菌2型HB菌株的最小抑菌浓度为32μg/mL,最小杀菌浓度为64μg/mL,并且焦棓酸对猪链球菌的抑制作用呈剂量依赖性;焦棓酸在16μg/mL能显著抑制猪链球菌2型HB菌株生物被膜形成的能力;另外,经焦棓酸处理后,发现猪链球菌的生长、生物被膜形成、毒力相关基因ftsZ、stK、mrp、fbps、gapdh、ccpA、luxS下调表达。综上所述,焦棓酸可为耐药猪链球菌在临床上感染的治疗提供新思路。

新生仔猪大肠杆菌病的防治

为了更好地防治新生仔猪大肠杆菌病,本试验将已确诊为新生仔猪大肠杆菌病猪场的母猪随机分成疫苗免疫组、疫苗免疫联合药物防治组、药物防治组和对照组共4个组,进行新生仔猪大肠杆菌病防治试验,分别统计各组母猪的平均产仔数以及仔猪黄痢的发病率和死亡率。结果显示,药物防治组、疫苗免疫组和疫苗免疫联合药物防治组的母猪平均产仔数分别为11.7头、11.5头和11.4头,与对照组(11.4头)无明显差别;仔猪发病率分别为12.57%、7.51%和3.51%,死亡率分别为5.14%、2.31%和1.17%,与对照组相比均有较大程度的降低。结果表明,试验猪场除了加强饲养管理外,采用疫苗免疫和药物防治相结合的方法,可有效降低新生仔猪大肠杆菌病的发生。

某规模化猪场外环境中非洲猪瘟监测及防控建议

国内养殖企业经过近5年的摸索,已经总结出1套完善的非洲猪瘟生物安全防控技术体系,其中猪场场外环境中ASFV的监测环节是最为重要的部分。笔者对贵州某集团种猪场1年的监测数据进行分析发现,车辆风险系数较高,其次是人员和物资,值得注意的是2-3月和6-8月为该地区的疫情高发期,这与阴冷潮湿、调猪频率、周边疫情等因素有密切关系。因此,场外监测是猪场防控中最为重要的一道防线,尤其重视车辆和人的监测,同时,笔者提出通过了解当前非洲猪瘟流行特点、提高猪群健康度、有效降低猪场环境病毒的载量和重视硬件生物安全改造等措施,在场内外环境和生产管理过程中构建好猪场的生物安全体系,可有效阻断非洲猪瘟病毒的传播途径。

山羊支原体山羊肺炎亚种MCCG-0521乳酸脱氢酶基因的克隆表达及其编码氨基酸的生物学分析

旨在获得山羊支原体山羊肺炎亚种MCCG-0521乳酸脱氢酶(L-lactate dehydrogenase,LDH)的蛋白表达产物,分析其编码氨基酸的生物学特性,为进一步研究LDH蛋白的功能奠定基础。试验完成了LDH基因的克隆和密码子改造,成功将LDH基因中473、761、779 nt处的A突变为G,使改造后的LDH基因能在大肠埃希氏菌Rosetta中正确表达。SDS-PAGE电泳结果显示,IPTG诱导目的蛋白表达后获得一条大小约34 ku的蛋白条带,Western blot结果表明获得的原核表达产物可与抗6×His tag的单克隆抗体发生特异性反应,研究采用DNAStar Protean模块分析了LDH的二级结构、蛋白骨架柔性区域和可能的B细胞抗原优势表位,为进一步研究其功能奠定了基础。

复杂环境下少样本域自适应雷达RD智能识别技术

针对复杂电磁环境下,传统基于雷达回波的目标识别方法定位精度差和识别能力不足的问题,以典型海背景环境下的雷达时频二维像目标为研究对象,提出了复杂环境下少样本域自适应雷达智能RD识别技术,通过设计基于分离注意力的偏移区间配准目标识别算法架构,实现了对目标的精确定位和识别,同时设计了域自适应技术对源域和目标域进行特征配准,解决少样本条件下算法场景适应性不足的问题。通过在雷达回波仿真数据和真实数据上对算法测试验证,取得了较优的结果,证明了该算法的有效性。

柴油发动机电控故障排除的具体处理方法

矿山机械设备故障诊断以及预防性维修管理成为必然趋势。文章针对矿用卡车发动机和传统机械控制的发动机相比较,电控发动机的电脑控制单元是发动机电控中的核心,主要负责收集传感器的检测数据,根据不同的运行状态对矿用卡车发动机进行电子控制,可以实现有效节油,把排放污染降到最低和提高燃油经济性,使发动机输出功率最大化。

链球菌的危害及天然化合物抗链球菌作用的研究进展

链球菌种类众多,对人类危害严重的三种链球菌为肺炎链球菌、变异链球菌与猪链球菌。目前,肺炎链球菌是导致儿童、老人死亡的重要病原菌,变异链球菌是龋齿的主要病因,而猪链球菌是人畜共患病原菌,上述三种链球菌对畜牧业和人类健康造成重大危害。然而,随着抗生素的不合理使用,这三种链球菌的耐药性逐年升高。天然化合物有毒副作用较小、不易产生耐药性的特点,是开发抗链球菌药物的重要资源宝库。文章综述了不同种类天然化合物(茶多酚类、生物碱类、黄酮类、抗菌肽类、精油类等)抗链球菌的作用(结合溶血素、作用于ATP酶、抑制拓扑异构酶、影响细菌生长分裂等),以期为研发抗链球菌的天然化合物提供参考。

一株猪圆环病毒2d基因型毒株的全基因组序列及其衣壳蛋白的小鼠免疫原性分析

旨在确定引起湖北省某规模化猪场断奶仔猪多系统衰竭综合征(postweaning multisystemic wasting syndrome,PMWS)的主要病原。本研究采集该猪场具有PMWS典型临床症状的仔猪组织样品,经PCR检测,发现其存在猪圆环病毒2型(porcine circovirus 2,PCV2)感染。对阳性样品中PCV2全基因组进行扩增和测序后,与国内外流行毒株进行全基因组和ORF2基因的比对,分析其核苷酸同源性。通过猪肾上皮细胞系PK-15对病毒进行分离培养和鉴定,对其核衣壳蛋白Cap的抗原表位和小鼠免疫原性进行分析和评估。病毒分离鉴定结果表明,成功分离到1株PCV2毒株(名称:XY2022;GenBank登录号:OM249965.1),全基因组长度为1767 nt,在PK-15细胞上的毒价为10~(5.70)TCID_(50)·mL^(-1);序列分析结果显示,XY2022属于PCV2d,与参考毒株的全基因组核苷酸相似性为94.3%~99.8%,ORF2核苷酸相似性为89.2%~99.6%;Cap的免疫原性分析和测定结果显示,相比于其他基因型毒株的Cap,XY2022 Cap的线性免疫优势区、线性中和表位和构象中和表位均存在差异位点,PCV2d(XY2022)Cap和PCV2b(WH)Cap均可诱导小鼠机体产生抗PCV2的中和抗体,但2d Cap诱导的中和抗体水平更稳定。本研究为湖北省PCV2的流行病学研究和变异毒株的防控提供了参考,可为研究PCV2致病机制和开发新型疫苗提供材料。

基于非洲猪瘟病毒MGF505-3R蛋白的间接ELISA检测方法的建立

为了建立检测非洲猪瘟病毒(ASFV)的间接ELISA检测方法,试验基于ASFV MGF505-3R基因序列,构建pET-28a(+)-3R原核表达系统和pFastBac1-3R杆状病毒表达系统,分别通过37℃诱导5 h和28℃培养5 d获得3R重组蛋白,以此为包被抗原建立快速检测ASFV的间接ELISA检测方法,对该检测方法的反应条件、阴阳性临界值、敏感性、特异性及重复性进行检测,并用该检测方法与ASFV抗体ELISA检测试剂盒对70份临床血清样品进行符合率验证试验。结果表明:原核表达系统与杆状病毒表达系统表达的3R重组蛋白抗原特异性均良好。利用杆状病毒表达系统表达的3R重组蛋白为包被抗原建立的间接ELISA检测方法的最佳条件为:包被浓度为2μg/mL,血清稀释度为1∶80,5%BSA 37℃封闭2 h,ASFV阳性血清(一抗)37℃孵育90 min,辣根过氧化物酶(HRP)标记的羊抗猪IgG(二抗)37℃孵育45 min。该间接ELISA检测方法的批间和批内变异系数均小于10%;与猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪圆环病毒2型(PCV-2)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)等常见病原阳性血清无交叉反应;该检测方法的临界值为0.38,ASFV阳性血清稀释至640倍检测仍高于临界值。该检测方法与ASFV抗体ELISA检测试剂盒的阳性符合率、阴性符合率、整体符合率分别为92%(37/40)、86%(26/30)、90%(63/70)。说明试验基于3R重组蛋白建立的间接ELISA检测方法具有良好的特异性、敏感性与重复性,可以用于临床血清样品中ASFV抗体的检测。

饮食习惯与代谢性疾病发生(临洮县)的调查分析报告

众所周知,日常饮食习惯和健康密切相关。良好的饮食习惯可以提供身体所需的营养,维持身体健康,预防多种疾病的发生,合理膳食营养对居民保持健康有促进作用。而不合理的饮食习惯则可能导致营养不足或过剩,从而对健康产生负面影响。并且营养与慢性病发生、发展密切相关,日常膳食情况也可能会影响慢性代谢疾病。所以我们在临洮县通过网络问卷用频数法做了饮食习惯与代谢性疾病发生的调查,发现与中年人相比年轻人更多点外卖,大部分人有果蔬自给的情况(79.79%),不文化程度的人在某些食品上表现出显著差异性,吸烟(17.62%)饮酒(31.09%)的占比较高,三餐规律的人较多,大多数人喝4~5杯(500 ml)的水,对自己饮食习惯满意的比例为67.36%,被调查的人大部分认为饮食习惯与高血压、糖尿病、高血糖和高血脂之间存在一定的相关性。

基于MCD软件的自动化生产线虚拟调试平台

为了提高自动化生产线的设计效率,降低设备调试风险和费用,针对密封盒装配自动化生产线,设计了一种基于MCD软件的自动化生产线虚拟调试平台。运用MCD软件构建虚拟自动化生产线,通过TIA Portal软件设计可编程序控制器程序和触摸屏,借助PLCSIM Advanced软件实现MCD软件模型和可编程序控制器程序之间的通信,并实现虚拟可编程序控制器对MCD软件模型的控制。通过虚拟调试平台与真实平台的对比试验分析,确认虚拟调试平台的运行和动作与实际生产线表现出高度一致性和准确性,验证了虚拟调试平台设计的合理性和可行性。

两种稻飞虱对杀虫剂的敏感性比较

分别于 2 0 0 0年和 2 0 0 1年测定了桂林、安庆和东台 3地区褐飞虱、白背飞虱对 10种杀虫剂的敏感性 ,并分析了两种飞虱对杀虫剂的敏感性差异。结果表明 ,在年度间和地区间 ,其敏感性差异不显著 ,而药剂间的差异显著。吡虫啉和醚菊酯是毒力最高的两个药剂 ,但吡虫啉的个体一致性较差 ,明显低于醚菊酯。合理利用这两个药剂 ,可以作为避免单一药剂长期使用、延缓抗性发展和延长药剂使用寿命的良策。

褐飞虱对吡虫啉的抗性机理和靶标分子毒理学

褐飞虱Nilaparvata lugens是水稻最重要的害虫之一,长期依赖化学防治导致了该害虫对不同类型杀虫剂抗性的产生,对新烟碱类杀虫剂吡虫啉高水平抗性的产生更是造成了巨大的粮食生产损失。近年来在褐飞虱对吡虫啉抗性机理,以及在抗药性机理研究推动下吡虫啉作用靶标褐飞虱神经系统烟碱型乙酰胆碱受体(nicotinic acetylcholine receptors,nAChRs)毒理学等方面取得了许多研究进展。nAChRs是昆虫神经系统中最重要的神经递质受体,是几类重要杀虫剂的作用靶标,其中以新烟碱类杀虫剂为代表。通过对比敏感品系和室内连续筛选获得的高抗吡虫啉品系,在褐飞虱两个nAChRs亚基Nlα1和Nlα3中均发现了抗性相关点突变Y151S,该突变导致了受体与吡虫啉结合亲和力的显著下降,而对内源神经递质乙酰胆碱的亲和力影响很小。Nlα1与褐飞虱另外两个亚基Nlα2和Nlβ1共聚成一个受体,构成吡虫啉低亲和力结合位点;Nlα3与褐飞虱另外两个亚基Nlα8和Nlβ1共聚成一个受体,构成吡虫啉高亲和力结合位点。不仅褐飞虱nAChRs与吡虫啉抗性相关,某些nAChRs附属蛋白也直接影响褐飞虱对吡虫啉的抗性,如Lynx蛋白。关于褐飞虱nAChRs组成、抗药性相关变异、受体附属蛋白对抗药性的影响等方面的研究,均为国内外前沿报道,不仅有助于对新烟碱类杀虫剂抗性机理的理解,对昆虫nAChRs毒理学同样具有很大的推动作用。

解毒酶系在褐飞虱对马拉硫磷的抗性发展中的作用

室内抗性筛选结果表明 ,褐飞虱对马拉硫磷抗性的上升呈“S”形。酯酶的变化在抗性上升中起到重要作用 ,与抗性上升存在很好的相关性 ;而多功能氧化酶和谷胱甘肽转移酶只在抗性发展的最初阶段发挥一定的作用。

褐飞虱抗有机磷品系的交互抗性及适合度研究

测定了褐飞虱敏感品系和两个实验室选育的抗有机磷品系的交互抗性。结果表明 :有机磷杀虫剂和氨基甲酸酯杀虫剂之间存在交互抗性 ;两个抗性品系对拟除虫菊酯类和吡虫啉均无明显的交互抗性。通过建立两个抗性品系和敏感品系的生命表 ,发现抗性品系适合度显著下降 ,低龄若虫存活率和羽化率低 ,成虫寿命缩短 ,卵历期延长 ;在繁殖上均表现为交配率、产卵量和孵化率下降 ;马拉硫磷抗性品系还表现为若虫历期延长。用种群数量趋势指数 (I)来确定两个抗性品系的相对生物适合度 ,发现与敏感品系相比 ,甲胺磷抗性品系和马拉硫磷抗性品系的相对适合度仅分别为 0 4 9和0 19。认为

稻飞虱饲养与抗药性筛选的方法研究

就几种新鲜稻苗对褐飞虱和白背飞虱生长发育和繁殖的影响进行了比较 ,发现 2 0～ 2 5℃下无土培育的幼苗最适合室内稻飞虱生长、发育和繁殖 ,适合室内飞虱的大批量饲养。通过不同筛选方法对褐飞虱和白背飞虱进行抗性筛选 ,比较不同方法的筛选效果 ,发现稻苗和飞虱同时喷雾的方法操作方便、抗性发展快 。

求职行为的心理学研究

心理学家将有效的求职行为看作成功就业的前提。求职行为是一个复杂的动态过程,求职行为的测量可分为三个维度:频率-强度,内容-性质,短期-长期。求职行为的预测因素研究很多,研究结果也多种多样。关于求职结果的测量指标最近有了新的进展,即不再简单地将就业状态二分为就业和未就业,而是考虑到了各种不充分就业状态。文章最后讨论了求职行为研究的现代特点及可能远景。

计划行为理论在求职领域的应用与评价(综述)

计划行为理论是社会行为研究中最有影响力的理论模型之一。在求职行为研究领域,计划行为理论的预测力在西方国家的一些研究中得到了验证,但仍存在着改进的余地。针对主体规范与行为意向之间较弱的关系,有研究者建议,在原有预测变量的基础上增加示范性规范,可以显著提高模型的预测力;文化价值观也值得给予更多的重视;感知到的行为控制力的概念有完善的必要;将执行意向作为目标意向与行为的中介变量可以提高意向对行为的方差解释率。这些探索为求职行为的研究带来若干启示。