抑制lncRNA TUG1下调核苷酸结合寡聚结构域样受体蛋白1炎症小体在延缓阿尔茨海默病进展的作用

目的探讨敲低长链非编码RNA(lncRNA)牛磺酸上调基因1(TUG1)抑制核苷酸结合寡聚结构域样受体蛋白1(NLRP1)炎症小体在缓解阿尔茨海默病进展中的作用。方法选取9~10周龄遗传背景为C57/BL6的野生型小鼠(WT组,10只)或淀粉样前体蛋白(APP)/早老素1(PS1)转基因小鼠(30只)。APP/PS1转基因小鼠随机分为模型(model)组,模型+敲低lncRNA TUG1组[model+lncRNA TUG1短发夹RNA(shRNA)组]和model+shRNA非靶标(NT)组,每组10只。分别采集12周龄第1天(3月龄)和32周龄第1天(8月龄)小鼠外周血和脑皮质组织,并分离皮质中的原代小胶质细胞和原代星形胶质细胞,每个时间点每组5只小鼠。Real-time PCR分别测定3月龄和8月龄上述4个分组小鼠脑皮质组织和原代小胶质细胞中lncRNA TUG1和巨噬细胞移动抑制因子(MIF)mRNA的水平,以及原代星形胶质细胞中补体蛋白C1r和C1s mRNA的水平。ELISA法测定其外周血浆中MIF含量。对3月龄和8月龄小鼠脑皮质原代小胶质细胞和原代星形胶质细胞共培养。CCK-8法测定上述2种细胞的增殖能力。Western blotting分别测定3月龄和8月龄上述4个分组小鼠脑皮质组织中MIF、白细胞介素1β前体(pro-IL-1β)、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、Caspase-1(p20)、Caspase-1(full)、NLRP1及NLRP3蛋白的表达水平。采用免疫荧光染色法测定8月龄各分组小鼠脑皮质组织中β淀粉样蛋白(Aβ)表达。结果3月龄和8月龄时,与WT组小鼠相比,model组小鼠脑皮质组织和原代小胶质细胞中lncRNA TUG1和MIF相对表达水平显著上调,原代小胶质细胞和原代星形胶质细胞增殖能力增强(P<0.05)。与model组相比,model+lncRNA TUG1 shRNA组小鼠脑皮质组织和原代小胶质细胞中lncRNA TUG1和MIF的相对表达水平显著降低,原代小胶质细胞和原代星形胶质细胞增殖能力降低(P<0.05)。与WT组相比,model组小鼠外周血浆中MIF含量显著升高;小鼠脑皮质组织中pro-IL-1β、ASC、Caspase-1(p20)、Caspase-1(full)、NLRP1以及NLRP3的蛋白表达水平显著升高;Aβ免疫荧光强度明显增强(P<0.05)。与model组相比,model+lncRNA TUG1 shRNA组小鼠外周血浆中MIF含量显著降低;小鼠脑皮质组织中pro-IL-1β、ASC、Caspase-1(p20)、Caspase-1(full)和NLRP1的蛋白表达水平显著降低,Aβ免疫荧光强度明显降低(P<0.05),而NLRP3蛋白质的表达水平无明显变化(P>0.05)。与model组相比,model+shRNA NT组小鼠上述所有检测指标差异均无显著性(P>0.05)。结论APP/PS1转基因小鼠脑皮质组织和原代小胶质细胞中lncRNA TUG1和MIF因子表达上调与脑皮质内NLRP1炎症小体激活成正相关,敲低lncRNA TUG1可缓解阿尔茨海默病的进展。

脑卒中相关性肺炎病原菌分布及耐药性分析

目的分析宁夏地区脑卒中相关性肺炎病原学分布情况及耐药特点,为临床合理应用抗感染药物提供参考依据。方法对2012年12月-2013年11月宁夏医科大学总医院收治的133例脑卒中相关性肺炎的痰培养结果进行回顾性分析,分析其病原菌分布及耐药情况。结果 73例患者痰培养结果阳性,培养阳性率为54.89%,共分离出118株致病菌,其中革兰氏阴性菌103株,占87.29%;革兰氏阳性菌8株,占6.78%;真菌7株,占5.93%.排名前三位的致病菌为肺炎克雷伯菌、鲍曼不动杆菌及铜绿假单胞菌。肺炎克雷伯菌对亚安培南、哌拉西林/他唑巴坦、阿米卡星高度敏感,而鲍曼不动杆菌及铜绿假单胞菌对大部分头孢类抗生素完全耐药。结论肺炎克雷伯菌、鲍曼不动杆菌及铜绿假单胞菌为卒中相关性肺炎的主要病原菌,耐药现象普遍,约有一半患者存在混合感染,临床医师用药时应根据其分布特点及耐药性合理选择抗菌药物,延缓细菌耐药性的不断增长。

脑出血合并肺部感染的相关危险因素分析

目的探讨与脑出血患者并发肺部感染相关的危险因素及其对预后的影响。方法对2012年12月至2013年11月宁夏医科大学总医院收治的304例脑出血患者相关临床资料进行回顾性分析。结果 1304例脑出血患者,并发肺部感染119例(39.14%)。脑出血合并肺部感染的发生与脑出血部位有关(P<0.05)。2单因素分析提示其相关危险因素有年龄、吸烟、意识障碍、吞咽困难、气管插管及气管切开、心脏病、慢性阻塞性肺病、糖尿病及低蛋白血症(P<0.05)。3多因素logistic回归分析结果显示合并吞咽困难、意识障碍、心脏病、糖尿病、吸烟及低蛋白血症为脑出血患者发生肺部感染的独立危险因素。4脑出血并发肺部感染组GCS评分低于无肺部感染组(P<0.05);死亡率和平均住院日高于无肺部感染组(P<0.05)。结论脑出血肺部感染发生与脑出血部位及多种因素相关,积极控制危险因素可降低其发生率及死亡率。

颈椎MRI表现为“蛇眼征”的连枷臂综合征1例报告

连枷臂综合征（FAS）是一种散发的缓慢进展的运动神经元病。现报道1例颈椎MRI表现为＂蛇眼征＂的患者如下。1病例男,20岁,因＂右上肢无力3年,加重伴左上肢无力10个月＂于2015年10月19日入院。患者于2012年夏天发现右上肢举重物时费力,不举重物时无力不明显,同时家属发现其双上肢较细,右上肢明显,余肢体活动无障碍,

羊布鲁氏菌外膜蛋白Omp31的基因克隆、原核表达及其对小胶质细胞凋亡的影响

目的本研究旨在构建布鲁氏菌外膜蛋白Omp31的原核重组质粒pET-30a-omp31,表达并纯化Omp31融合蛋白,初步探讨布鲁氏菌外膜蛋白Omp31对小胶质细胞凋亡的影响。方法对羊种布鲁氏菌Omp31基因进行PCR扩增,并将其定向克隆到原核表达载体pET-30a上,构建原核表达重组质粒pET-30a-omp31,表达、纯化布鲁氏菌Omp31融合蛋白,并用Omp31融合蛋白刺激小鼠小胶质细胞株BV2,利用流式细胞术分析其对小胶质细胞凋亡的影响。结果经过双酶切及测序验证证明成功构建了Omp31基因的原核表达载体pET-30a-omp31,将其进行蛋白的诱导表达、纯化,得到了较纯的Omp31融合蛋白,其融合蛋白的分子量为31kDa左右。将Omp31蛋白刺激小鼠小胶质细胞,发现不同浓度Omp31蛋白刺激组的细胞凋亡率均低于空白对照组(P<0.05)。结论通过基因克隆技术成功构建了Omp31基因的原核表达载体pET-30a-omp31,并对其进行蛋白诱导表达、纯化、复性后得到了Omp31融合蛋白,Omp31融合蛋白能够抑制小胶质细胞的凋亡。

细菌性脑膜炎患者脑脊液细菌基因组DNA的提取及16S rDNA的鉴定

目的探讨16SrDNA聚合酶链式反应(PCR)在细菌性脑脊液病原菌检查中的应用价值。方法收集临床疑诊为细菌性脑膜炎的患者脑脊液标本,高速离心富集细菌后,进行脑脊液中细菌基因组DNA的提取,再进行16SrD-NA PCR扩增和琼脂糖凝胶电泳。将检测结果与传统的细菌培养结果进行比较。结果 58例患者脑脊液样本中,23例16SrDNA PCR阳性,阳性率为39.7%;58例脑脊液样本中细菌培养阳性为10例,阳性率为17.2%。PCR检测阳性率明显高于传统的细菌分离培养法(P<0.05)。结论脑脊液细菌基因组DNA提取及16SrDNA PCR鉴定技术操作简单,耗时短,灵敏度高,在细菌性脑膜炎病原学诊断方面具有良好的应用前景。

人尿激肽原酶治疗急性脑梗死30例临床观察

目的:观察人尿激肽原酶(尤瑞克林)在急性脑梗死治疗中的有效性和安全性。方法:对30例急性脑梗死患者给予单用尤瑞克林治疗2周,治疗前后以NIHSS、mRS量表评价疗效。结果:治疗后30例患者NIHSS评分低于治疗前,差异有统计学意义(P<0.05);mRS评分低于治疗前,有显著性差异(P<0.01)。基本痊愈4例,显著进步16例,进步5例,无变化4例,恶化1例,总显效(基本痊愈+显著进步)20例。出现恶心呕吐者2例,转氨酶增高者1例,所有治疗未见血压明显下降(下降>30%)。血尿常规、血糖、血脂、肾功能未见明显变化。结论:应用尤瑞克林治疗急性脑梗死安全且临床疗效肯定。

伴脑干和脊髓受累及白质乳酸正常的脑白质病一例

1 病例报告 患者女,32岁。以“步态不稳11年,加重6个月”入院。21岁出现步态不稳,左右摇晃易摔倒;22岁感双下肢无力,自卧位和坐位时起立困难,上下楼梯需搀扶;23岁步态不稳较前加重,迈步不知远近、落脚不知深浅,夜晚较白天重。入院前6个月步态不稳再次加重,就诊当地医院考虑“脊髓后索病变”,给予口服B族维生素、叶酸片、辅酶和烟酰胺片等治疗后无好转。无视力、听力和语言障碍,无饮水呛咳、吞咽困难和二便障碍。否认肝炎、肺结核和水痘等传染病史,否认颅脑外伤和脑炎病史,无发热抽搐和夜盲症病史。20岁结婚,顺产两个男孩。父母系近亲结婚,否认其他家庭成员患有类似疾病。入院查体:意识清楚,言语清晰、流利,舌肌纤颤;双下肢肌力5 -级,双下肢膝腱反射和跟腱反射活跃;左侧Hoffmann征和Rossolimo征阳性,下颌反射、双侧掌颌反射阳性,右下肢 Babinski征可疑阳性;双侧指鼻试验、轮替实验、跟-膝胫试验均欠稳准,右下肢显著,Romberg(+);胸6水平以下痛觉减退,双髋以下音叉震动觉减退,双下肢关节位置觉、运动觉稍差,双足弓形足并足下垂,跨阈步态。

pEGFP-N1-omp25荧光真核表达载体的构建及鉴定

目的克隆布鲁氏杆菌外膜蛋白omp25基因并构建荧光真核表达载体p EGFP-N1-omp25,检测其在大鼠脑内的表达。方法根据Genebank中omp25基因的核苷酸序列,设计并合成1对引物,以布鲁氏杆菌总基因组DNA为模板,进行PCR扩增得到omp25基因片段,并将omp25基因片段及质粒p EGFP-N1分别进行进行酶切、体外连接,使其定向重组,构建其重组质粒。将制备的重组质粒经侧脑室注射至大鼠,检测p EGFP-N1-omp25在大鼠脑内的表达。结果 PCR扩增出642bp大小的片段,挑取的LB固体培养基上的单菌落经菌液PCR、酶切、测序表明成功构建了p EGFP-N1-omp25荧光真核表达载体。质粒经大鼠侧脑室注射后,脑组织冰冻切片可见荧光表达。结论采用体外重组技术,成功构建了布鲁氏杆菌外膜蛋白omp25基因的真核表达载体,且重组质粒在大鼠脑组织内成功表达。

pEGFP-N1-VirB8真核表达载体的构建及其在大鼠脑内的表达

目的构建布鲁氏菌Ⅳ型分泌系统VirB8蛋白的真核表达载体pEGFP-N1-VirB8,研究其在大鼠脑内的表达,为探讨VirB8蛋白的功能及在布鲁氏菌致脑损害中的作用奠定基础。方法利用从羊种布鲁氏菌中提取的总DNA为模板,从中扩增出羊布鲁氏菌VirB8全长序列,并克隆到真核表达载体pEGFP-N1上,构建pEGFP-N1-VirB8真核重组载体。采用注射法将阳离子脂质体和重组质粒pEGFP-N1-VirB8混合后注入大鼠侧脑室,以空白质粒及生理盐水为对照组,转染1周后取脑组织制作冰冻切片,在荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白(greenfluoerscentportein,GFP)的表达,并用Western blot检测融合蛋白的表达。结果经双酶切及测序鉴定证明pEGFP-N1-VirB8载体构建成功;荧光显微镜下观察可见转染pEGFP-N1-VirB8表达载体的大鼠脑组织有GFP的表达;Western blot结果显示,VirB8融合蛋白在大鼠脑组织中表达。结论 pEGFP-N1-VirB8载体构建成功,且阳离子脂质体介导的pEGFP-N1-VirB8重组质粒在大鼠脑内可成功表达VirB8融合蛋白。

尤瑞克林治疗急性脑梗死的临床观察

目的观察人尿激肽原酶(尤瑞克林)在急性脑梗死治疗中的有效性和安全性。方法将60例急性脑梗死患者分为尤瑞克林治疗组和对照组(常规治疗),每组30例,治疗2周,治疗前后以NIHSS、mRS量表评价疗效。结果治疗组治疗前、后NIHSS评分差异有统计学意义(P<0.05),两组治疗后NIHSS评分差异有统计学意义(P<0.05);治疗组治疗前、后mRS评分有显著性差异(P<0.01),两组治疗后mRS评分差异有统计学意义(P<0.01)。总显效率治疗组为76.67%,高于对照组的36.67%(P<0.01)。结论尤瑞克林治疗急性脑梗死安全且临床疗效肯定。

US/O_3工艺改善农药废水可生化性和生物毒性的效能

采用超声/臭氧(US/O3)工艺处理农药废水,废水BOD5/COD由0.03提高至0.55,EC50从11%增至52%,生物毒性降低78.85%。在一定范围内,随反应时间的增加和初始pH的升高,废水可生化性不断提高,生物毒性显著降低,但当初始pH大于9、反应时间超过120 min时,废水可生化性出现下降趋势;当初始pH大于11、反应时间超过120 min时废水生物毒性出现升高趋势。

阿伦尼斯模型下可靠性增长数据的统计分析

本文以阿伦尼斯(Arrhenius)模型作为环境应力模型,解决利用不同环境应力下可靠性增长试验数据,求试验结束时设备可靠度的置信下限问题。给出了模型参数的极大似然估计,进而求出可靠度的置信下限。模拟研究结果表明,上述方法效果良好,估计的精度能满足工程要求。

诺西那生钠治疗脊髓性肌萎缩症一例

脊髓性肌萎缩(spinal muscular atrophy,SMA)是一种常染色体隐性遗传性神经肌肉疾病,以近端肢体和躯干进行性、对称性肌无力和肌萎缩为主要临床表现,发病率约为1/10000,人群携带率约为1/50,是导致婴幼儿早期死亡的最常见的一种遗传性神经肌肉病[1-2]。根据患者起病时间和所能达到的最大运动功能,SMA可分为5种类型,以Ⅰ型、Ⅱ型、Ⅲ型最常见。0型是该疾病最严重的形式,常于出生后数周内死亡;Ⅰ型最严重,常在6个月之前发病,无法独坐及行走,通常于2岁前死亡;Ⅱ型常在出生后6~18个月之间发病,可实现独坐,但无法站立和行走,大多数可活至成年;Ⅲ型通常在出生18个月后起病,能够实现独立行走,寿命正常或轻微缩短,然而,这些运动功能随着时间逐渐丧失;Ⅳ型症状最轻,通常在成年发病,预期寿命正常[1]。诺西那生钠(nusinersen)是被美国食品和药品监督管理局(FDA)批准的第一种用于治疗SMA的药物[3],该药2019年在我国批准上市,也是国内首个用于治疗SMA的药物。本文作者前瞻性观察诺西那生钠治疗1例SMAⅢ型患者的疗效及安全性,并结合国内外相关文献进行分析,以加深读者在SMA诊疗上的认识。

神经型布鲁氏杆菌病临床分析

目的分析探讨神经型布鲁氏杆菌病的临床特点,提高临床医师对本病的诊断水平。方法回顾性分析6例神经型布鲁氏杆菌病病例临床资料。结果此组资料中6例患者男女比例为5∶1,病程10 d^8个月,4例急性起病,2例亚急性起病;4例有牛羊接触史,1例经常接触屠宰工人;患者均有发热,其他主要症状有头痛5例。4例行腰椎穿刺,3例腰穿压力升高,脑脊液细胞学结果以淋巴细胞反应为主。3例脑脊液培养阳性,均为羊种布鲁氏杆菌。5例布鲁氏杆菌凝集实验阳性;6例患者血常规无明显感染征象。结论神经型布鲁氏杆菌病临床表现多样,以发热、头痛为主要临床症状,实验室检查及影像学表现不典型,脑脊液培养阳性率低,临床易误诊,故早发现、早用药、足疗程治疗可改善患者预后。

全基因组测序用于宁夏羊种3型布鲁氏菌毒力基因筛选的研究

目的从3株布鲁氏菌分离株的全基因组序列中筛选出可能导致脑损害的关键毒力基因,为后续筛选布鲁氏菌致脑损害毒力基因的研究奠定基础。方法通过BCSP31PCR、传统生化实验对3株分离于布鲁氏菌病患者外周血中的布鲁氏菌进行鉴定分型。利用Illumina Hiseq2000平台对3株布鲁氏菌进行全基因组测序与比较基因组学分析,根据文献报道分析筛选出布鲁氏菌的经典毒力基因,通过检索NCBI核酸数据库查找出所选毒力基因的参考序列,利用所选参考序列分别与3株布鲁氏菌全基因组序列做BLAT比对分析。结果3株布鲁氏菌经BCSP31PCR、传统生化实验鉴定为羊种3型;比较基因组分析显示3株布鲁氏菌与标准株参考序列的同源性比例均达到99.02%。BLAT比对分析发现所选毒力基因wbkA、pgm、hemolysin、hemolysin III和Omp25在这3株布鲁氏菌全基因组序列中的比对分数均达到99%以上。结论本研究所选取的3株羊种3型布鲁氏菌的全基因组中存在经典的毒力基因序列。

聚合铝铁对A^2/O系统EPS及生物絮凝性能的影响

通过向实验室构建的A2/O模型好氧池末端投加聚合铝铁(PAFC)来强化系统的生物除磷,使得出水总磷达到《城市污水处理厂污染物排放标准GB 18918-2002》中的一级A标准,并重点分析投加的PAFC对A2/O系统中活性污泥胞外聚合物(EPS)和活性污泥生物絮凝性能的影响.结果表明,随着PAFC投药量的增加,A2/O系统活性污泥EPS总量变化不大,但EPS组分中蛋白/多糖含量的比值逐渐降低,由投药前的3.30降低至投药后的2.30;EPS中金属离子含量逐渐增加,在厌氧-缺氧-好氧的运行周期内,各处理单元污泥的EPS中金属铝离子含量增加.投加PAFC后,活性污泥颗粒变大,二沉池出水的Zeta电位明显降低,由投药前-15.83 mV降低至-21.20 mV,污泥产量增加.因此,适量投加PAFC后,生物絮凝性能得到改善,出水中悬浊颗粒减少,出水水质变好.

针灸联合奥拉西坦治疗脑出血的疗效及对患者神经功能和炎性因子的影响

目的:探讨脑出血患者经针灸联合奥拉西坦治疗后的临床疗效。方法:选取2015年2月2018年7月期间我院收治的90例脑出血患者,根据随机数字表法将患者分为对照组(n=45)和研究组(n=45),对照组给予奥拉西坦治疗,研究组在对照组的基础上联合针灸治疗,比较两组临床疗效、血肿体积、脑水肿体积、神经功能及炎性因子水平,记录两组治疗期间不良反应情况。结果:研究组治疗2个疗程后的临床总有效率为91.11%(41/45),高于对照组的71.11%(32/45)(P<0.05)。治疗2个疗程后,两组患者的简易精神状态量表(MMSE)评分升高,且研究组高于对照组(P<0.05);两组患者美国国立卫生院卒中量表(NIHSS)评分降低,且研究组低于对照组(P<0.05);两组白介素-8(IL-8)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、超敏C反应蛋白(hs-CRP)均下降,且研究组低于对照组(P<0.05)。两组不良反应发生率对比无差异(P>0.05)。与治疗第1 d相比,两组治疗第7 d、治疗第28 d血肿体积呈先增大后缩小趋势(P<0.05),脑水肿体积呈持续缩小趋势(P<0.05);研究组治疗第28 d血肿体积、脑水肿体积小于对照组(P<0.05)。结论:针灸联合奥拉西坦治疗可有效改善脑出血患者的临床症状,减轻炎症反应及神经功能损害,安全性较好。