gp96多肽复合物介导的细胞毒性T淋巴细胞对食管腺癌细胞的免疫杀伤作用

目的 :研究肿瘤细胞来源的gp96多肽复合物介导的对同一类型肿瘤的免疫治疗作用。方法 :提取纯化食管腺癌细胞系SEG 1裸鼠成瘤组织的gp96蛋白多肽复合物 ,与外周血单个核细胞 (PBMNC)诱导培养的树突状细胞(DC)结合 ,制备gp96 DC疫苗 ;台盼蓝拒染法测定淋巴细胞增殖率 ;ELISA方法检测细胞毒性T淋巴细胞 (CTL)培养上清液的γ干扰素 (IFN γ)含量 ,MTT法检测CTL对靶细胞SEG 1的杀伤率。结果 :5 5g瘤组织提取纯化gp96蛋白12 0 μg ;单独DC、单独gp96及gp96 DC均能刺激淋巴细胞增殖 ,产生CTL ,释放IFN γ ,对靶细胞SEG 1均显示一定的杀伤作用 ,以gp96 DC的作用最明显 ,在效靶比 4 0∶1时 ,杀伤率为 6 8%。单独DC诱导的CTL对SEG 1、K5 6 2的杀伤作用与非抗原刺激的淋巴细胞比较 ,统计学差异无显著性。结论 :肿瘤来源的热休克蛋白gp96可使DC具有更强的刺激T淋巴细胞增殖的能力 ,所产生的CTL对靶肿瘤细胞有明显的特异杀伤作用。

Apoptin引起肿瘤细胞G_2-M阻滞

目的 :研究凋亡素 (apoptin)特异诱导肿瘤细胞凋亡的作用 ,探讨其用于肿瘤治疗的可能性。方法 :用PCR技术克隆了apoptin基因 ,将其插入预先装有FLAG标签的真核表达质粒pcDNA3.1中 ,并构建了带有apoptin基因的腺病毒载体 ,观察转染pcDNA3.1/FLAG/apoptin和 /或Ad/apoptin重组腺病毒感染后apoptin在几种细胞中的表达及细胞形态的改变 ,用流式细胞术分析PI染色后Ad/apoptin感染细胞的DNA含量变化。结果 :apoptin在Hela、Bcap37、A5 4 9、HepG2、SKOV3等肿瘤细胞核中表达 ,apoptin重组腺病毒感染后细胞核染色质呈颗粒状 ,最后凝聚成不规则大块并出现核固缩。正向和反向插入apoptin的重组腺病毒均引起G2 M细胞增多 ,但前者引起G2 M阻滞更为显著 ,需要的感染复数 (MOI)也较低。结论 :apoptin可引起肿瘤细胞周期G2 M阻滞和染色质凝聚。

实时定量PCR阵列检测小鼠大脑组织microRNA表达谱

目的:分析小鼠大脑组织microRNA(miRNA)表达谱,为研究特定miRNA及其靶基因、中枢神经系统miRNA相关的调节网络,以及miRNA在中枢神经系统疾病中的作用提供参考。方法:采用RNA加尾和引物延伸序列RT-PCR法,将精心设计的特异引物按Tm值排成阵列,用梯度实时PCR仪在不同的退火温度扩增每一个miRNA,并计算出每种miRNA相对于内参的表达量。结果:共检测了285个miRNA,阳性者260个,它们丰度不同,频数分布图大致呈正态。大部分miRNA的表达水平与已发表的芯片结果一致,而阳性率高于芯片结果。源自同一miRNA前体的2个成熟miRNA表达量,有些相差无几,有些则相差甚多。同簇相邻miRNA的丰度有些相近,有些则差异明显,提示miRNA转录后的归宿决定其丰度。结论:采用实时定量PCR阵列法,分析了小鼠大脑组织的miRNA表达谱,特别是获得了一些低丰度miRNA在小鼠大脑中表达的数据,这将有助于对这些低丰度miRNA的功能研究。

通过引物设计和提高退火温度提高实时定量PCR检测microRNA的特异性(英文)

目的:了解因某些microRNA(miRNA)家族成员序列相似,以及同一种成熟miRNA的长度不均一对PCR定量检测结果的影响,寻找区分相似miRNA成员和准确定量的方法和条件。方法:采用RNA加尾和引物延伸实时定量RT-PCR法,设计不同位置错配的引物,以克隆到质粒中的全长成熟miRNA为模板,比较在不同退火温度下各种错配引物与完全匹配引物在扩增miRNA上的效率差异,并根据由此得出的经验设计let-7家族成员引物,以克隆的成熟miRNA为模板,检测其在不同退火温度下区分相似家族成员的能力。此外,设计了10组3′末端碱基位置不同的特异引物,比较了它们在检测小鼠大脑miRNA表达水平上的差异。结果:提高退火温度12℃～14℃将最大限度增加特异性而不降低敏感性,将引物的3′末端置于差异碱基或其附近可以有效区分相似miRNA序列,将引物3′末端置于miRNA第18～20个碱基,可避免漏检较短的成熟miRNA,使定量更真实准确。结论:精心设计引物并提高退火温度可提高实时定量PCR检测microRNA的特异性和准确性。

中国北方汉族人基质金属蛋白酶12基因多态性与慢性阻塞性肺疾病易感性的关系

目的 :研究中国北方汉族正常人、吸烟慢性阻塞性肺疾病 (COPD)患者、吸烟非COPD患者基质金属蛋白酶 12 82位点等位基因和基因型分布频率 ,初步探讨此基因多态性对COPD发病的影响。方法 :应用聚合酶链反应限制性片段长度多态性法 ,检测 10 0例北方汉族正常人 ,14 8例吸烟COPD患者 ,97例健康吸烟者基质金属蛋白酶 12 82位点等位基因和基因型。结果 :14 8例吸烟COPD患者基质金属蛋白酶 12 82位点基因型AA、AG及GG频率分别为 95 0 4 %、4 96 %及 0 ,等位基因A、G频率分别为97 6 4 %、2 36 % ,与 10 0例正常人、97例健康吸烟者的分布比较差异无显著性。结论 :在中国北方汉族人中 ,MMP12基因A 82G等位基因多态性与我国北方汉族吸烟COPD发病无关。

逆转录病毒介导的人卵巢癌p53基因治疗体外及小鼠体内实验研究

目的 :评价人卵巢癌的 p5 3基因治疗效果。 方法 :用携带人野生型 p5 3的逆转录病毒转导 p5 3蛋白表达缺如的人卵巢癌细胞系SK OV 3,通过体外及小鼠体内实验研究转基因的表达及对肿瘤的抑制作用。结果 :逆转录病毒介导的 p5 3基因能够在体外及小鼠体内人卵巢癌细胞SK OV 3中表达 ,并对人卵巢癌生长有抑制作用。体外抑制率为 5 7%～ 88% ;对体内肿瘤抑制率为 40 %。结论 :逆转录病毒介导的外源野生型p5 3能够抑制人卵巢癌生长 。

羟乙基淀粉对大鼠蛋白尿的治疗作用

目的 :探寻羟乙基淀粉治疗大鼠蛋白尿的可行性。方法 :建立蛋白尿大鼠动物模型 ,在静脉点滴 6 %羟乙基淀粉前后 ,通过大鼠输尿管插管收集肾后膀胱前尿液 ,测定尿蛋白分子量并比较治疗前后尿蛋白含量 ,采用聚丙烯酰胺凝胶电泳法对尿蛋白分子量进行分析 ,同时观察治疗前后血肌酐和尿素氮变化。结果 :羟乙基淀粉治疗后尿蛋白定量较治疗前明显下降 ,尿蛋白电泳表明高、中分子蛋白条带数目和含量较治疗前显著减少。治疗前后尿量、血肌酐和尿素氮无明显变化。结论 :羟乙基淀粉能够安全、有效地减少实验大鼠的蛋白尿 。

MicroRNAs在唐氏综合征模型小鼠海马中的异常表达

目的:寻找唐氏综合征模型鼠Ts65Dn和对照二倍体组小鼠海马组织中差异表达的microRNAs。方法:从小鼠的海马组织中提取小分子RNA,采用RNA加尾和引物延伸RT-PCR法检测microRNAs。通过geNorm软件和Normfinder软件分析选择最佳的内参照基因,将每种microRNAs按其引物Tm值排成阵列,用梯度实时PCR仪在不同的退火温度扩增,并计算每种相对于microRNAs内参照基因的表达量。结果:geNorm和Normfinder两种方法均选定miR-27a为最稳定的内参照基因,共检测了52种microRNAs,其中miR-33和miR-19a在Ts65Dn小鼠海马组织中表达显著下调,miR-130在Ts65Dn小鼠海马组织中表达显著上调,小鼠16号染色体三体区段包含的miR-802在Ts65Dn小鼠和对照二倍体小鼠海马组织中表达量均低,差异没有统计学意义。结论:MicroRNAs在Ts65Dn小鼠海马组织中的异常表达可能与唐氏综合征脑发育不良有关。

HRP-HBVDNA探针在临检应用中的研究

本文介绍了一种简便的检测血清ＨＢＶＤＮＡ 的方法。参照Ｒｅｎｚ 等人的标记方法，构建了直接酶标ＨＲＰＨＢＶＤＮＡ 探针。此探针经与固定在硝酸纤维素滤膜上的血清靶ＤＮＡ 杂交后，可通过化学发光自显影检测技术观察结果。敏感度可检测０－１ｐｇ 靶ＤＮＡ，相当于同位素探针的灵敏度。对６３ 份ＨＢｓＡｇ ＨＢｅＡｇ 和ＡｎｔｉＨＢｃ ＥＬＩＳＡ 阳性血清以及２４ 份ＨＢｓＡｇ ＡｎｔｉＨＢｃ 阳性，ＨｂｅＡｇ 阴性血清用ＨＲＰＨＢＶ ＤＮＡ 探针进行检测，结果探针ＨＢＶ ＤＮＡ 阳性率分别为１００ ％ （６３） 和５８ ％ （１４） ；对５０ 份ＨＢｓＡｇ，ＥＬＩＳＡ 阴性和ＡＬＴ 正常的血清，探针ＨＢＶ ＤＮＡ 全部阴性。实验结果表明本方法具有很大的推广应用价值。

p16基因抑制乳腺癌细胞MCF-7增殖的体外和体内实验研究

目的 :探讨p16基因对乳腺癌的治疗作用 ,为乳腺癌 p16的基因治疗提供实验依据。 方法 :构建p16的逆转录病毒载体 pLMSN ,包装成病毒后 ,体外转导p16基因纯合性缺失的乳腺癌细胞株MCF 7,Westernblot证明该基因在转导后的MCF 7细胞中有表达 ,用活细胞计数、流式细胞仪、形态观察等方法来检测 p16表达在体外对MCF 7细胞生物学行为的影响。进行SCID鼠体内成瘤实验和逆转录病毒直接注射SCID鼠乳腺癌模型的治疗性实验来观察 p16对乳腺癌细胞的体内抑制作用。 结果 :外源性 p16在MCF 7细胞中表达后 ,体外细胞发生形态改变 ,生长明显慢于对照细胞 ,流式细胞计数显示G1期细胞增多 ,细胞在SCID鼠体内成瘤性下降 ,p16逆转录病毒直接注射有使SCID鼠乳腺肿瘤缩小的趋势。结论

单结合胆红素与胆固醇成核关系的初步探讨

在制备出大量较为纯净的单结合胆红素的基础上，对５８例胆囊结石（胆固醇结石３８例、色素性结石２０例）和１８例非胆囊结石患者胆囊胆汁中３种不同比例的ＭＣＢ对胆固醇成核时间的影响进行比较，结果：胆固醇结石患者胆汁中胆固醇成核时间分别为：４３０±２．１７天、３５５±１９５天和２５０±１５６天；色素性结石患者胆汁中分别为：８３０±２５２天、７４５±１９０天和６９５±２３５天；非结石患者胆汁中分别为：７８３±２７８天、５７８±２０７天和４５６±２０４天。胆固醇结石和非结石患者胆汁中随ＭＣＢ比例的增加，胆固醇成核时间显著地缩短（Ｐ＜０．０１）；而色素性结石患者胆汁中ＭＣＢ比例的增加对胆固醇成核时间无显著影响（Ｐ＞０．０５）。提示ＭＣＢ有促胆固醇成核的倾向；可能在胆固醇结石形成的早期起一个始动因子的作用。

棉秆联合收获机关键部件设计与试验

为解决棉秆机械化收获中漏拔率高、拔净率低的问题,研制一种集棉秆拔除、打捆于一体的不对行棉秆联合收获机。采用由拔秆辊、清理辊和强制输送辊组成的三辊式拔棉秆台,突破棉秆拔除难的瓶颈问题;采用底板有漏土孔的链板输送装置,通过孔沿翘起的方式增加棉秆在输送过程中的震动,有效地减少棉秆压捆中的泥土含量;采用先切段再打捆的方式,解决棉秆在进入打捆装置前输送不畅的问题。本文着重对棉秆拔取过程和V形齿板进行分析,建立推拔棉秆的力学模型,推导出影响棉秆拔除的相关因素及影响方式。通过田间拔棉秆试验表明:该机具能够一次性完成棉秆的拔除、输送、清土、切段、打捆等工序,并且拔净率达70%以上。

论光传输技术的发展及其应用

随着社会的科技发展,越来越多的先进技术被用于现代人们的生产和生活,尤其电子信息及网络技术更是这个信息时代的发展的象征,在此背景下,通信工程系统的作用显得尤为的重要,而光传输技术则是通信工程的核心技术,本文就通过简单介绍光传输技术并对其在现代社会中应用做出简要的分析,同时对光传输在未来通信工程的发展方向进行探究。

论光纤通信技术的现状及发展

近几年来,光纤通信技术的迅速发展使正处于信息时代的当代社会如虎添翼,光纤通信技术的的新型技术的研发,大幅度提高现如今社会信息的传播效率,并且,光纤通信技术应用的面积不断的扩大。

FTTH建设中EPON网络规划探讨

本文通过在FTTH工程中的实际应用,简要介绍了EPON技术并从多个角度阐述了EPON网络规划的及注意事项。

多辊式棉秆收获台的研究与试验

棉花秸秆是重要的可再生生物质能源,其收获技术的滞后严重制约了棉秆的资源化利用。针对棉花种植行距不一致,以及棉秆收获机作业中常出现的适用范围小、拔断率高、功率消耗大等问题,创新研制了多辊式棉秆收获台。同时,介绍了收获台的工作原理以及关键部件的设计分析,对主要性能指标进行了田间试验。试验结果表明:各项指标达到了设计要求。

基于Adams的棉田残茬废膜收集打捆机分析

地膜残留已经成为影响黄河三角洲棉区可持续发展的一个主要因素,而现有的残膜回收机具大多存在适应性差、结构复杂和不能够起根茬等问题。针对上述实际情况,提出了一种结构简单、能够将残膜和根茬一起回收并打捆的棉田残茬废膜收集打捆机,并对其进行了理论分析。同时,应用Adams对其主要部件残茬废膜清理齿辊和刷膜轮进行了运动学和动力学仿真分析,得出残茬废膜清理齿辊和刷膜轮的理论齿数比和转速比,并得出了残茬废膜清理齿辊上的齿和地面的碰撞力与转速和牵引拖拉机行进速度的关系。

1LF——3型化肥深施机

KF—3型化肥深施机是与上海—50型拖拉机配套使用的深耕犁底施肥机具,一次可完成深耕、犁底施肥作业。 该机由机架、链轮和锥齿轮传动系统以及排肥器、搅拌器。

棉田残膜污染及机械化回收技术探讨

介绍棉田残膜污染危害的主要表现,包括降低棉田肥力、影响棉种发芽和棉花根系生长、影响棉田机具作业、影响机采棉质量等;通过对比提出机械化残膜回收是目前棉田残膜污染治理的最佳方式;对残膜机械化回收的各主要作业环节进行了简要介绍,总结了棉田残膜机械化回收存在的主要问题。

高职学生创新创业能力提升的探索与研究

在互联网+新形势背景下,针对目前高职院校存在教师创业经验比较匮乏,高职院校学生创新创业能力普遍较差,创业兴趣不浓厚的现象,提出解决的方案及具体实施的过程,从而建立适合高职院校的创新创业体系,通过系列活动的开展来提升学生创新创业能力。