放射性肺纤维化大鼠动物模型的建立及其病变规律

用 60 Coγ射线对二级雌性 Wistar大鼠 (体重 ( 2 2 0± 2 0 ) g) 2 2 3只进行 30 Gy全胸单次照射 ,其中照射野为 4 .5cm× 4 .0 cm,照距为 3m,剂量率为 2 .7Gy/ min。分别于照后 3、7、1 4、2 1、2 8、4 2、56、70、90、1 80、2 70、36 5d共 1 2个时间点进行了取材观察。结果表明 ,肺脏病变初期呈急性变化 ,以后转为亚急性或慢性进行性发展过程 ,可大致分为 2个阶段 4个期。早期即急性炎症期或渗出期 ,中期为增生期 ,这 2期合为疾病的第 1阶段 ,称为放射性肺炎。后期即纤维化期 ,晚期即胶原化期 ,这 2期共同构成本病的第 2个阶段 。

幽门螺杆菌尿素酶B基因的克隆与高效表达

目的克隆并表达幽门螺杆菌尿素酶B基因。方法提取幽门螺杆菌染色体DNA用PCR方法扩增尿素酶B基因。将其克隆至表达载体pQE30,转化大肠杆菌M15,IPTG诱导表达。结果分离得到了1.7kb的ureB基因片段,并在大肠杆菌中实现了该基因的高效表达。在37℃诱导表达4h后,表达产物约占细菌总蛋白的34.0%。表达以可溶性蛋白和包涵体两种形式存在,其中主要是包涵体的形式,目的蛋白占不溶性蛋白的55.8%。结论幽门螺杆菌ureB基因的克隆与表达为Hp疫苗的研制打下了基础。

应用斑点ELISA检测产肠毒素性大肠杆菌定居因子抗原

产肠毒素性大肠杆菌(ETEC)在发展中国家是引起婴幼儿和旅游者腹泻的最主要病原菌。据WHO预测,全世界每年因ETEC引起腹泻而致死的5岁以下婴幼儿多达80万。该菌的致病机制是,它能粘附并定居到宿主小肠表皮细胞,繁殖产生耐热肠毒素或不耐热肠毒素,前者主要由定居因子抗原(CFA)负责,

任意引物PCR及其应用研究进展

任意引物PCR技术又称为随机扩增多态性DNA技术,它是在PCR技术基础上发展起来的一项分子检测技术。它具有简便、快速,一套引物可用于多个物种的分析,不需预知分析对象的核酸序列,可以显示差异表达基因等特点,已广泛应用于病原微生物的分型鉴定、物种亲源关系分析、遗传育种研究和特异表达基因的克隆与鉴定等方面。

转化生长因子β的生物学特性、功能及其临床应用前景

转化生长因子 β是一种高度多效性、多功能性的生长与分化因子 ,它广泛地调节机体的生长、发育、炎症、修复和免疫等许多生理和病理过程 。

应用生物素标记的DNA探针通过菌落杂交试验检测沙门氏菌

本实验应用Bio-11-dUTP标记的两个沙门氏菌属特异性核酸探针(Bio-8-0kb探针和Bio-3.4kb探针)成功地通过菌落杂交试验检测了60个血清型中的100株沙门氏菌。生长在硝酸纤维素滤膜上的菌落,经过溶菌酶,蛋白酶K、RNase及苯酚-氯仿严格的处理程序处理后,可以有效地消除内源性生物素、糖蛋白及生物素类似物等易与链亲和素结合产生非特异性反应的物质,从而获得了特异的杂交结果。此试验有利于使沙门氏菌核酸探针检测技术在基层得到推广应用。

产肠毒素性大肠杆菌毒力相关质粒研究进展

产肠毒素性大肠杆菌(ETEC)的许多致病因子是由质粒作编码,因此,人们对其毒力相关质粒的研究非常重视。这里就有关方面研究进展做一简要综述。 ETEC毒力相关质粒可以分为三类,即R质粒、产肠毒素质粒和粘附因子。 一、R质粒:R质粒即抗性(Resistance)质粒,包括抗药性质粒和抗某些金属的质粒。这类质粒大小不等,可以从几个Kb到几十个Kb,质粒拷贝数也不同,有的是严紧型,有的为松驰型。 多数R因子由两个部分组成,一部分为抗菌素的抗性基因,这使宿主菌产生对抗生素抗性,同时也是人工构建的基因工程载体的理想筛选标记;

幽门螺杆菌vacA基因的克隆和序列分析

空泡毒素是幽门螺杆菌产生的已知的唯一蛋白毒素,该毒素与感染者胃肠上皮损伤和溃疡形成密切相关,同时也是幽门螺杆菌免疫预防和免疫治疗的重要候选组分。从幽门螺杆菌NCTC11637染色体DNA中经PCR方法获得了2.9kb的该基因成熟肽全长序列,将该基因克隆至载体pET22b+,经PCR扩增和酶切鉴定后序列分析表明,该基因与已知序列完全一致。

肉奶食品中金黄色葡萄球菌的检验

本实验采用国标规定的常规检验法对从长春市采集的62份肉样,152份奶样共214份食品样品进行了金黄色葡萄球菌的检验,结果有26份呈现阳性,阳性率为12.15％。同时,对这些样品进行了溶血试验与DNase试验,分别有35份和59份呈现阳性。

细胞凋亡及其生理与病理学意义

本文就细胞凋亡的形态变化特征与细胞坏死的区别、细胞凋亡过程中的生化活动变化、基因调节机制、信号传递途径、凋亡细胞的吞噬识别及其生理与病理学意义作一综述。

葡萄球菌肠毒素检测方法的研究进展

葡萄球菌肠毒素引起的食物中毒,几乎是一个世界性的公共卫生问题,在各国各地均有发生,且常占细菌性食物中毒的第一、二位,因此对其检测方法的研究也很多,现简要归纳如下。1 生物学试验 生物学试验是较早采用的一种SE检测方法,但只有很少数动物对肠毒素的反应类似于人。

幽门螺杆菌感染的疫苗防治与展望

幽门螺杆菌感染作为慢性胃炎、消化性溃疡的最主要病因已经得到了国际医学界的认可 ,且已有足够证据表明该菌感染对人类具有致癌力。该菌在全球范围的高感染率和明确的致病特征促使人们优先考虑依靠发展疫苗来进行其疾病防治。本文介绍了幽门螺杆菌感染的简要概况 ,幽门螺杆菌感染的疫苗防治及其相关的动物模型、免疫佐剂等问题 ,并对今后疫苗发展过程中应注意考虑的问题与发展前景进行了简要的展望。

定量分析的体外基因扩增法

定量分析的体外基因扩增法解放军农牧大学刘纯杰综述军事医学科学院生物工程研究所张兆山审校ＰＣＲ技术自１９８５年建立以来，在短短的几年里得到了迅速的发展和广泛的应用，被誉为分子生物发展史上的一个重要里程碑。笔者曾就ＰＣＲ技术的新发展及ＰＣＲ在基因重组与突...

抗bFGF鼠单克隆抗体轻链可变区基因的克隆及序列分析

我们采用基因工程抗体制备技术，从分泌抗人 ｂ Ｆ Ｇ Ｆ单抗的鼠杂交瘤细胞成功地克隆了其轻链可变区基因，并对其进行了序列测定及抗体基因结构分析。这为构建 ｂ Ｆ Ｇ Ｆ单链抗体，防止 ｂ Ｆ Ｇ Ｆ引起的副作用及进行体内定位诊断等研究打下了基础。

幽门螺杆菌尿素酶B亚单位和热休克蛋白A亚单位的融合表达

目的将幽门螺杆菌尿素酶B亚单位基因和热休克蛋白A亚单位基因融合,并实现其在大肠杆菌中的表达,为构建该菌的基因工程二价苗打下基础.方法通过交叠延伸拼接PCR法将幽门螺杆菌ureB基因和hspA基因通过(Gly4Ser)3linker连接起来,经NcoⅠ和NotⅠ双酶切后定向克隆入表达载体pET22b+的pelB前导序列下游,经测序鉴定后转化大肠杆菌BL31(DE3),用1PTG诱导表达.结果幽门螺杆菌的尿素酶B亚单位基因和热休克蛋白A亚单位基因通过linker获得了融合,序列分析表明,此融合基因序列拼接正确,且是通读的.含有该融合基因表达载体的表达菌株BL31(pET-BA)在30℃经IPTG诱导表达4h后,用10%SDS-PAGE电泳分析表明,在细菌周质表达有约与预期融合基因表达蛋白大小一致的外源蛋白质表达带.结论幽门螺杆菌ureB与hspA成功地实现了在大肠杆菌中的融合表达,为进一步评价其对Hp的免疫保护效果和构建Hp二价基因工程苗打下了基础.

应用通用引物PCR法检测葡萄球菌A、D和E型肠毒素基因

本实验采用20bp通用引物P3和P4的PCR方法对产A、D和E肠毒素的葡萄球菌进行了检测。结果表明,产SEE菌株能产生666bp的特异扩增片段,产SEA菌株产生666bp和约400bp两条扩增带,产SED菌株产生400bp片段;SEE菌株的扩增产物经EcoRV酶切能产生251和415bp两个片段。扩增敏感性实验表明,该方法可检出10~6个细菌。

沙门氏菌属特异性核酸探针的研制及应用试验

首先提取鼠伤寒沙门氏菌菌株23566的染色体DNA,并用限制酶BamHI或HindⅢ进行酶切消化,将酶切片段连接到质粒载体pBR325的相应位点中,然后转化大肠杆菌宿主细胞HB101,我们通过这种随机克隆的方法建立了鼠伤寒沙门氏菌染色体的部分基因文库。其次,经广泛的杂交试验表明,重组质粒pLS2和pLS3中的插入片段(大小分别为8.0kb和3.4kb)

应用通用引物PCR技术检测食品标本中产肠毒素性葡萄球菌

本实验采用笔者建立的通用引物ＰＣＲ扩增法检验了肉、奶等食品样品２１４份，检出３份阳性，其中１份产生ＳＥＢ，另２份产生ＳＥ或ＳＥＤ；在三株产肠毒素葡萄球菌中，有一株为血浆凝固酶阴性菌株。食品标本敏感性试验表明，该法可检出肉、奶食品中１０＾１个细菌。整个检测结果可在１￣１．５天内完成。

应用通用引物PCR法对葡萄球菌B、C1、C2、C3型肠毒素基因的鉴定与分型研究

本实验采用通用引物P1、P2聚合酶链反应(PCR)法对产肠毒素葡萄球菌的entB、entC1、entC2、entC3基因进行了扩增,结果表明,含有这四种肠毒素基因的葡萄球菌都可以产生595bp的特异性扩增片段,其余菌扩增均为阴性;扩增产物分别用在产物内部只有单一识别位点的限制酶HinfⅠ、BclⅠ、MboⅡ和MboⅡ酶切后产生大小不同的片段,因而可以达到酶切分型的目的。经敏感性试验表明,该方法可以检出10~0个细菌。