脂蛋白脂酶基因多态性与老年人群血脂关系的研究

目的 :探讨脂蛋白脂酶 (lipoproteinlipase,LPL)基因中常见多态性位点HindⅢ基因多态性与老年人群血脂水平的关系。方法 :应用多聚酶链反应方法和限制性片段长度多态性技术 ,确定2 3 3例老年人的HindⅢ -LPL基因型 ,并测定血脂 ,计算BMI、WHR等。结果 :在老年人群中 ,H+H+ -LPL基因型的TG、VLDL -c、Lc/Hc、TC/Hc显著高于H+ H-基因型 ;H+ H+ 基因型的apoAI、apoAI/B、HDL -c显著低于H+ H-基因型。结论 :LPL

12周跑台训练对非酒精性脂肪肝小鼠肝脏肝细胞癌下调的线粒体转运蛋白表达的改变及其对线粒体功能的影响

目的:研究12周跑台训练后非酒精性脂肪肝(NAFLD)小鼠肝脏肝细胞癌下调的线粒体转运蛋白(HDMCP)的变化及其对肝脏线粒体功能的影响。方法:雄性8周龄ApoE-/-小鼠48只,随机分为4组,对照组(C,n=12),14周西方膳食组(模型组,M,n=12),继续西方膳食+12周跑台运动组(ME,n=12);西方膳食26周组(MM,n=12)。跑台训练12周,坡度为0°,跑速13m/min,60min/次,每周5次。测定肝脏HDMCPmRNA的表达,线粒体活性氧及H2O2生成,线粒体ATP合成活力,肝脏ATP含量,线粒体态3呼吸、态4呼吸及呼吸控制比(RCR)。结果:耐力训练组(0.53±0.09)肝脏HDMCPmRNA表达显著低于C组(0.72±0.10)、M组(1.24±0.16)、MM组(1.32±0.17);耐力训练组肝脏线粒体ATP合成活力(11.23±2.53)及肝脏组织ATP含量(10.57±2.12)均显著高于MM组(7.36±1.22,8.32±1.41);耐力训练组肝脏线粒体ROS(42.51±4.12)及H2O2生成(18.33±3.10)均显著低于MM组(68.94±5.99,24.31±3.56);耐力训练组线粒体态3呼吸(12.21±1.32)与RCR(2.78±0.89)均显著高于MM组(10.76±1.11,1.75±0.69),而态4呼吸(4.40±1.32)显著低于MM组(6.14±1.45)。结论:12周跑台训练可以显著降低肝脏HDMCP表达,可能进而减少线粒体质子漏,增强线粒体ATP合成,改善线粒体功能。

ApoE基因多态性和运动与脂质代谢及冠心病的研究进展

ApoE在血浆脂质代谢中有重要作用,三种主要异构体E2、E3、E4,有三个常见的等位基因编码。与ε3等位基因相比,ε2等位基因与较低的血浆TC、LDL-c,ε4等位基因与较高的血浆TC、LDL-c相关。ε4等位基因是冠心病的遗传易患因子,而ε2是冠心病的遗传保护因子,但目前又出现了一些争议。纵向和横向的研究普遍显示:长期耐力训练后,ApoE2、ApoE3人群血脂的改善大于ApoE4人群。上述结论提示我们在不久的将来,依据ApoE基因型制定个体改善血浆脂蛋白和冠心病风险的特异性运动处方将成为可能。

耐力训练对非酒精性脂肪肝小鼠肝脏氧自由基代谢的影响

目的探讨耐力训练对非酒精性脂肪肝肝脏抗氧化系统及活性氧生成的影响。方法雄性8周龄ApoE基因敲除小鼠24只,西方膳食14周后,随机分为2组,非酒精性脂肪肝模型组(H,n=12,14周),跑台运动组(E,n=12,14+12周)。跑台运动12周,坡度为0°,跑速13m/min,60min/time,每周5次。在造模与训练结束后,测定顺乌头酸酶、总SOD、MnSOD、CuZnSOD和GPx酶的活性;MDA、谷光甘肽(GSH)和羟自由基(OH.-的含量;Mn-SOD、谷光甘肽过氧化物酶(GPx)和NF-κB mRNA的表达,光镜观察脂肪肝病变程度。结果耐力训练显著提高总SOD、MnSOD、CuZnSOD、顺乌头酸酶和GPX酶的活性和肝脏GSH含量;显著降低CAT的活性及肝脏OH.-和MDA的含量;显著上调MnSOD和NF-κB mRNA表达,GPx mRNA未见显著性改变。结论耐力训练可以有效提高非酒精性脂肪肝肝脏抗氧化系统的能力,减少活性氧生成,从而达到改善非酒精性脂肪肝的效果。

超重男性老年人肥胖相关基因(FTO)rs9939609基因变异与运动减肥敏感性的关系

目的研究有氧运动对肥胖相关基因(FTOrs)9939609基因变异与运动减肥敏感性的相关性。方法以超重204例男性老年人为受试对象,测定他们FTOrs9939609基因变异,从中选取20例基因型为TT型和20例TA+AA型(其中AA型4例,TA型16例)受试者参与18 w健步走训练,分别测定体重、体重指数(BMI)、腰围、臀围、腰臀比(WHR)、体脂百分比、脂肪重量和肌肉重量。结果无论是运动前还是运动后,TA+AA基因型受试者腰围、WHR、体脂百分比和脂肪重量显著高于TT基因型受试者,而肌肉重量TT基因型显著高于TA+AA基因型,体重、BMI和臀围未见显著差异(P>0.05);在同基因型中,有氧运动显著降低体重、BMI、腰围、WHR、体脂百分比和脂肪重量,而臀围和肌肉重量未见显著差异(P>0.05);运动前后TA+AA基因型BMI、腰围、WHR、体脂百分比和脂肪重量之间的差值均显著高于TT基因型运动前后的差值,而体重、臀围和肌肉重量前后差值未见显著差异(P>0.05)。结论健步走对TT和TA+AA两种基因型超重男性老年人在改善身体成分方面均具有明显效果,但是对含有A等位基因的个体效果更加显著。

食品和动物性饲料中沙门氏菌PCR检测方法的建立

为建立食品及动物性饲料沙门氏菌的PCR快速检验方法,设计出一对特异性引物,分别对鸡白痢沙门氏菌、鼠伤寒沙门氏菌、猪霍乱沙门氏菌以及多种非沙门氏菌的肠道病原菌进行了PCR扩增。结果,沙门氏菌出现300 bp的条带,其他非沙门氏菌无条带,证明该对引物特异性良好。利用人为污染沙门氏菌的方法,对鱼罐头、蛋制品、鱼粉、肉骨粉进行不同程度地沙门氏菌人为污染,对样品进行适当处理后进行PCR检测。结果,鱼罐头、鱼粉、蛋制品、肉骨粉均能达到理想检测效果,敏感性为10～100 CFU/50 L。利用该方法对商品鱼罐头、蛋制品、鱼粉、肉骨粉进行检测,具有检测速度快、特异性强、敏感性高等优点。

沙门氏菌入侵因子基因保守序列的克隆与分析

分别提取鸡白痢沙门氏菌、鼠伤寒沙门氏菌、猪霍乱沙门氏菌染色体DNA,用设计的专一性引物扩增沙门氏菌入侵因子基因保守序列,PCR产物经凝胶回收纯化,克隆于TE载体,在含X-gal、IPTG的Amp LB平板筛选阳性克隆,提取质粒进行酶切鉴定,对目的片段进行测序。结果表明,扩增出的序列与GenBank中发表的基因序列一致。通过Blast比对,发现从3种沙门氏菌菌株克隆出的片段所编码的氨基酸序列中,鼠伤寒沙门氏菌和猪霍乱沙门氏菌相同,鸡白痢沙门氏菌与前两种相差1个氨基酸。

耐力训练下调的HDMCP表达对非酒精性脂肪肝线粒体活性氧生成的影响

目的:研究耐力训练对非酒精性脂肪肝HDMCP表达的影响及与活性氧生成的关系。方法:以西方膳食诱导的脂肪肝小鼠为模型,跑台运动为训练手段,测定肝脏HDMCP及MnSOD表达,顺乌头酸酶和MnSOD活性,MDA、OH·-含量的变化。结果:非酒精性脂肪肝小鼠模型组肝脏MnSOD与HDMCP表达显著升高,顺乌头酸酶活性显著下降,MnSOD活性显著升高,MDA和OH·-含量显著升高;耐力训练后MnSOD表达进一步升高,而HDMCP表达显著降低,顺乌头酸酶活性得到明显恢复,MDA和OH·-含量显著降低,MnSOD活性进一步升高。结论:HDMCP在非酒精性脂肪肝发病过程中可能作为一种应激蛋白,调控线粒体活性的生成,但其调控作用不能够完全代替抗氧化系统的作用,只是起辅助作用,抗氧化系统才是真正的抗氧化主体;耐力训练后,抗氧化系统能力进一步增强,HDMCP表达降低,从而提高线粒体偶联程度,增强线粒体ATP合成能力。

脂蛋白脂酶(LPL)HindⅢ基因多态性与血脂和冠心病及运动关系的研究进展

脂蛋白脂酶(LPL)基因多态性与血脂及冠心病关系密切,因此目前对脂蛋白脂酶基因多态性研究相对较多,但主要集中在HindⅢ酶切位点。脂蛋白脂酶基因HindⅢ酶切位点多态性可产生3种基因型H+H+、H+H-、H-H-,不同基因型与血脂成分及冠心病关系密切程度各异,另外,运动对不同基因型个体血脂影响不同。就脂蛋白脂酶HindⅢ酶切位点多态性与血脂和冠心病及运动关系作一综述。

结核分枝杆菌DNA的快速提取试验

在革兰氏阴性杆菌DNA快速提取方法的基础上,结合结核分枝杆菌特点,对结核分枝杆菌DNA的快速提取进行了试验研究,初步建立了一种结核分枝杆菌DNA的快速提取方法。该方法为结核分枝杆菌病分子生物学快速诊断及其基因的克隆提供了技术支持。

MSL抗菌肽对绿脓杆菌和金黄色葡萄球菌细胞膜的损伤作用研究

通过MSL抗菌肽(MSL)对细菌细胞膜的损伤作用研究,确定该抗菌肽的作用靶点。在1×108个/m L的绿脓杆菌和金黄色葡萄球菌悬液中,分别加入MSL至终浓度为1×MIC,37℃保温孵育,分别于0min、10min、20min、30min、40min、50min、60min、120min、180min、240min离心收集上清液,检测各时间点蛋白浓度,分析蛋白浓度变化规律;分别在对数生长期的金黄色葡萄球菌和绿脓杆菌悬液中加入MSL至终浓度为1×MIC,37℃保温孵育60min后,利用透射电镜观察分析细菌结构的变化。结果,MSL与2种细菌接触后均可引发胞液外流;透射电镜观察发现,MSL可造成绿脓杆菌和金黄色葡萄球菌细胞膜破损,胞浆内电子密度降低,染色质聚集,严重者细胞崩解结构不清,说明MSL对G+和G-细菌细胞膜均可造成损伤,证明细菌细胞膜是MSL作用的靶点之一。

腐蹄病C型节瘤拟杆菌纤毛蛋白基因工程疫苗对绵羊的免疫试验

将转化C型节瘤拟杆菌纤毛蛋白基因表达质粒的工程菌PAK/2pfsC在含羧苄青霉素的营养肉汤中表达,用MgCl2法在培养物上清中提取表达产物(纤毛蛋白)。将表达的纤毛蛋白用弗氏完全佐剂乳化,制成疫苗,疫苗免疫4只健康绵羊,定期采血,用对流免疫电泳和K凝集试验检测实验绵羊的体液免疫应答及抗体水平。结果发现,免疫后5d即可产生相应抗体,21d后抗体效价达到1∶4000以上。试验表明,腐蹄病C型节瘤拟杆菌纤毛蛋白基因工程疫苗对绵羊具有较好的免疫应答和免疫保护性。

CFNCpG对BVDV1灭活抗原的免疫佐剂效应研究

分别用CFNCpG、弗氏完全佐剂、氢氧化铝胶与BVDV1灭活抗原配制成疫苗免疫家兔,于免疫后每间隔7d检测中和抗体变化,来探讨CFNCpG对BVDV1灭活抗原的佐剂效应。试验结果表明,CFNCpG单独作为佐剂应用7d可使抗体滴度达到4.4(log_2SN_(50)),14d可达到7.0以上;与氢氧化铝胶联合可使抗体滴度在21d达到7.0以上,其佐剂水平与弗氏完全佐剂相当。有望进—步研制成为BVDV1灭活疫苗佐剂成分。

CpG基序对坏死梭杆菌免疫原的免疫佐剂效应实验研究

分别用坏死梭杆菌来源CpG、弗氏完全佐剂、氢氧化铝佐剂与坏死梭杆菌免疫原配制的抗原免疫小白鼠,通过检测坏死梭杆菌免疫原抗体变化,来探讨CpG对坏死梭杆菌免疫原的佐剂效应。试验结果表明,坏死梭杆菌来源CpG有较好的免疫佐剂效应,可望进一步研制成为坏死梭杆菌疫苗佐剂成分。

山东省“全民健身”宣讲内容评价指标体系构建

为评估山东省"全民健身"宣讲活动宣讲内容的科学性和有效性,运用文献资料法和德尔菲法等,全面分析山东省"全民健身"宣讲模式宣讲内容,构建全民健身宣讲内容的评价指标体系。该体系包括1个一级指标、10个二级指标和65个三级指标的全民健身宣讲内容评价指标,并且通过层次分析法确定了一级指标和二级指标的权重系数,基本确定了全民健身宣讲的内容体系。

登山运动与平原跑对青少年运动员心脏Hs-cTnT释放水平差异及与心脏功能的关系

为将高敏心肌肌钙蛋白(Hs-cTnT)用于训练监控提供实验依据,研究了青少年运动员登山运动与平原跑Hs-cTnT释放水平的差异以及与安静状态下心脏结构与功能的关系.以青少年中长跑运动员为受试对象,以登山和平原跑为运动手段,测试运动前、运动后即刻、运动后4h、24h和48h血清Hs-cTnT水平以及超声心动测定心脏功能指标.结果发现,登山及平原跑后血清Hs-cTnT表现出相同的变化规律:运动后即刻开始升高,运动后4h达到峰值,运动后24h下降,运动后48h恢复到正常水平.与登山组比较,血清Hs-cTnT在平原跑后即刻、运动后4h和运动后24h均显著低于登山对应时间点.登山和平原跑在运动前和运动后4h其血清Hs-cTnT的水平均与心脏射血分数呈显著负相关;登山与平原跑前血清Hs-cTnT水平均各自与运动后4h血清Hs-cTnT水平呈显著性正相关.一次大强度长时间登山运动比一次平原跑心脏释放更多的Hs-cTnT,运动后血清Hs-cTnT水平升高与安静状态下心脏射血分数以及与安静状态下Hs-cTnT水平有关.

CpG-DNA免疫佐剂作用研究进展

CpG-DNA是一些具有免疫激活功能的以未甲基化的CpG基序(CpGmotif)为核心的DNA序列,它包括含CpG基序的人工合成的寡聚脱氧核苷酸(oligodeoxynucleotides,ODN)和自然界中细菌、病毒、无脊椎动物等低等生物的基因组DNA。随着对CpG基序的DNA和寡核苷酸免疫学特性的深入了解,人们对CpG特征结构在DNA免疫学中的重要作用有了逐步的认识,并在DNA疫苗、肿瘤免疫、病毒免疫等方面进行了临床应用。本文就CpG的特征结构、免疫活性、佐剂效应以及应用前景作一简要介绍。

腐蹄病节瘤拟杆菌纤毛蛋白与绵羊IL-2融合基因的分泌型表达

用改进的 Mg Cl2 法制备宿主菌株PAK/ 2 pfs感受态细胞 ;由 JM10 5工程菌中提取纤毛蛋白与绵羊白细胞介素 2 ( Pilin-IL-2 )融合基因表达载体 ,转化宿主细胞 PAK/ 2 pfs,筛选出具有 Pilin-IL-2融合基因表达载体的阳性克隆菌株 ;在营养肉汤中进行 Pilin-IL-2融合基因的表达。培养 16～ 18h后 ,离心 ,向上清液中加入饱和 ( NH4) 2 SO4提取 Pilin-IL-2融合基因表达蛋白。用羊抗兔 E型节瘤拟杆菌抗血清与提取的融合蛋白进行对流免疫电泳 。

腐蹄病节瘤拟杆菌纤毛蛋白与绵羊白细胞介素-2融合基因在PAK/2pfs细胞中的表达与鉴定

将前期工作中筛选出的含有腐蹄病节瘤拟杆菌纤毛蛋白与绵羊白细胞介素-2(Pilin-IL-2)融合基因表达载体的PAK/2pfs工程菌[1]接种于营养肉汤,40℃培养16～18h,离心,向上清液中加入饱和(NH4)2SO4提取Pilin-IL-2融合基因表达蛋白。用羊抗兔E型节瘤拟杆菌抗血清与提取的融合蛋白进行对流免疫电泳,证明该融合蛋白具有特异性,且有较高的表达量。经SDS-PAGE电泳和Westernblot确证其为Pilin-IL-2融合蛋白。

重组绵羊白细胞介素2基因的分泌性表达及表达产物的提取

将构建的绵羊白细胞介素2基因表达菌株(PMPOIL2)接种在营养肉汤培养基上,培养20h,分别收集菌体及上清液。菌体超声裂解;上清液中的蛋白质分别用MgCl2、(NH4)2SO4、NaCl沉积。用抗Pilin-IL2血清检测菌体裂解物及上清沉淀物,结果上清沉淀物中有凝集抗原,而菌体中没有,并且(NH4)2SO4沉积的效果最好。