乙型肝炎肝细胞内HBcAg表达模式与肝组织炎症及血清学指标的关系

目的探讨乙型肝炎患者肝细胞内乙型肝炎核心抗原(hepatitis B core antigen,HBcAg)表达模式与肝组织炎症分级、血清乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)DNA含量以及ALT、AST酶活性的关系。方法收集乙型肝炎肝穿刺石蜡包埋组织标本89例,切片后分别行HE染色及免疫组化PV 6000法染色,并在光镜下观察、判定肝组织炎症分级和肝细胞内HBcAg的表达模式,同期应用荧光定量PCR法和速率法测定各患者的血清HBV DNA含量和ALT、AST酶活性。结果 (1)HBcAg浆型及浆型优势表达组的肝组织炎症程度高于核型及核型优势表达组(H=19.884,P=0.0002);(2)89例乙型肝炎患者血清HBV DNA含量平均值依次为:肝细胞内HBcAg核型表达组为(16.63±3.39)IU/ml、核型优势表达组为(14.92±3.85)IU/ml、浆型优势表达组为(12.14±3.20)IU/ml和浆型组为(10.91±3.64)IU/ml,其中浆型、浆型优势表达组分别与核型、核型优势表达组相比,差异有统计学意义(F=12.66,P=0.000 1);(3)肝细胞内HBcAg浆型或浆型优势表达组的血清ALT、AST酶活性高于核型或核型优势表达组(ALT:F=8.73,P=0.000 1;AST:F=4.26,P=0.007 4)。结论肝细胞内HBcAg呈浆型或浆型优势表达的乙型肝炎患者,其肝组织炎症分级和血清ALT、AST酶活性均较高,但血清HBV DNA含量较低。

结核患者检测T淋巴细胞亚群的意义

目的通过检测肺结核(TB)患者外周血淋巴细胞亚群的比例变化,来探讨其在结核病发展中的意义。方法用流式细胞仪分别检测原发型肺结核患者组(92例)、正常对照组(54例)的外周血淋巴细胞表面标记:CD3、CD4、CD8。结果肺结核病患者血清中CD8水平明显增高,CD3、CD4、CD4/CD8明显降低,与对照组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。结论淋巴细胞亚群在结核病患者外周血中分布失衡,可能与疾病的发展相关。

DC-SIGN和DC-SIGNR外显子4在中国结核患者中的遗传多态性

目的探讨DC-SIGN和DC-SIGNR外显子4在中国结核患者中是否存在遗传易感性。方法采用PCR结合DNA测序对227例结核患者和520例健康人群的DC-SIGN和DC-SIGNR外显子4重复序列多态性进行基因分型和测序分析。结果 DC-SIGN外显子4基因型与等位基因频率在结核患者和健康人群间差异无统计学意义(P>0.05);DC-SIGNR外显子4等位基因的频率差异也无计学意义(P>0.05);但6/6基因型分布频率在结核患者和健康人群间的差异有统计学意义(P<0.05)。结论 DC-SIGN外显子4遗传多态性与结核感染易感性无明显相关;6/6基因型DC-SIGNR外显子4在结核患者中的分布频率较高,可能与结核感染的易感性相关,值得进一步研究。

不同基因型HCV感染患者重叠HBV或HIV感染的病毒学特征

目的评估重叠乙型肝炎病毒(HBV)或人类免疫缺陷病毒(HIV)感染的丙型肝炎患者丙型肝炎病毒(RNA)病毒载量与单纯丙型肝炎患者的差异.方法选取2017至2020年间本院1292例行丙肝基因分型的慢性丙肝患者,以其中行HCV RNA及HBV和HIV检测的397例丙型肝炎患者为研究对象,应用罗氏Cobas TaqMan试剂,对HCV RNA进行测定,并用PCR-荧光探针法检测HCV基因分型.结果HCV基因型中1b型比例最高,3a型比例最低.HCV重叠HBV或HIV感染率分别为9.1%与6.3%,6a型重叠HBV感染发生率最高,3a型重叠HIV感染发生率最高.2a型未见重叠HBV或HIV感染病例.1b型未重叠HBV感染患者HCV RNA滴度显著高于重叠HBV感染患者(P<0.05).在1b型、6a型及3a型,未重叠HIV感染患者与重叠HIV感染患者,其HCV RNA的滴度差异无统计学意义(P>0.05).结论重叠HBV感染的1b型患者HCV RNA滴度会降低;重叠HIV感染的患者,HCV RNA滴度无变化.

慢性乙型肝炎患者肝组织中HBV抗原表达特征及其临床意义

目的 探讨慢性乙型病毒性肝炎肝活检组织中检测乙肝表面抗原（HBsAg）和乙肝核心抗原（HBcAg）表达强度及表达方式的必要性。方法 采用EnVision免疫组织化学法检测196例慢性乙型肝炎患者肝穿组织中HBsAg和HBcAg的表达水平，并用荧光定量PCR检测其血清中的HBV DNA的含量。对肝组织进行炎症活动度分级和纤维化分期。结果 肝组织中的HBsAg表达强度和表达方式与炎症分级、纤维化分期和血清乙肝病毒载量均无相关性（P〉0．05）。HBcAg表达强度与炎症分级无相关性（r=-0．02，P〉0．05）；与纤维化分期呈负相关（r=-0．28，P〈0．01）；与血清乙肝病毒载量呈正相关（r=0．53，P〈0．01）。HBcAg表达方式与炎症分级为负相关（r=-0．27，P〈0．01），其中浆型组炎症活动度分级高于核型组和混合型组（P〈0．01），混合型组高于核型组（P〈0．01）。HBcAg表达方式与纤维化分期亦呈较弱的负相关（r=-0．23，P〈0．01）。其中浆型组纤维化分期高于核型组和混合型组（P〈0．05）。HBcAg表达方式与血清乙肝病毒载量呈正相关（r=0．22，P〈0．01）。结论 区分肝组织中的HBsAg表达强度和表达方式无益于了解慢性乙型肝炎患者肝损害的程度，而检测肝组织中的HBcAg则有助于临床抗病毒治疗。

三种HBV荧光定量PCR检测试剂的比较及结果分析

目的 评估3种HBV DNA荧光定量PCR检测试剂的临床应用性能.方法 通过平行检测1001例临床血清样本及梯度稀释的阳性样本,从定量线性范围、准确性、灵敏度、特异性等方面,比较分析A试剂（磁珠分离法）、B试剂（免核酸提取的＂一步法＂）与目前国内临床广泛应用的优质试剂C的相关性和差异,并与免疫学结果进行比较.结果 767例均有数值的标本中,三种试剂均值差异无统计学意义.但在低病毒载量组中,结果相差较大,A试剂灵敏度最高,B试剂次之,C试剂排后.结论 采用了＂一步法＂免核酸提取的B试剂,核酸得率高,具有较宽的检测范围和定量准确性,操作极其简单,不失为一种上佳的选择.

NAT2基因多态性与抗结核药物性肝炎的相关性

目前造成肝损害最常见的一线抗结核药物是异烟肼,其主要通过N-乙酰化酶代谢,后者由NAT2（N-acetylteansferase 2）基因编码.

基因芯片高通量检测乙型肝炎病毒拉米夫定耐药株及对其突变热点的分析

目的 通过大规模、多位点检测深圳地区拉米夫定耐药株,进一步了解拉米夫定耐药突变的各种分布状况。 方法 用基因芯片法对552份乙型肝炎患者血清进行检测,得出192份拉米夫定耐药突变标本,再对192份耐药标本检测结果进行分析。 结果 192份耐药标本中,191份YMDD突变,124份528位点突变,9份555位点突变。YMDD突变中88％为:YVDD、528位点同时突变;YIDD单独突变;YIDD、528位点同时突变。YMDD突变密码子91％为:GTG、ATT;9％为:ATA、ATC。 结论 552位点(YMDD)突变为核心突变,528、555位点的突变为协同突变。YVDD突变总是与528位点同时出现;YIDD突变则表现为多样化。YMDD突变密码子约有9％为少见密码子ATA、ATC,这可能是传统聚合酶链反应法检测YMDD突变阳性率较低的原因。

用实时荧光定量PCR检测NAT2基因型及其意义

目的探讨深圳地区汉族人中NAT2基因分布特征，为开展NAT2基因与肿瘤相关性研究和药物代谢性疾病诊治提供依据。方法将DNA浓度为40ng／μl的标本进行1×10^0、1×10^1×10^2、1×10^3、1×104倍比梯度稀释，以验证实时荧光定量PCR检测NAT2基因的灵敏度。采用实时荧光定量PCR结合TaqMan探针技术检测554名深圳汉族健康人NAT2基因282、341、481、590和857突变位点，并进行基因分型。同时用直接测序法对47名健康人标本进行平行检测，以验证和评价荧光定量PCR检测NAT2基因的敏感度、特异度和准确性。结果经倍比梯度稀释试验验证实时荧光定量PCR检测NAT2基因的灵敏度可精确至10^-4ng/μl。采用实时荧光定量PCR从554名深圳汉族人中检出NAT2^＊4、＊5、＊6、＊7、＊11等位基因频率分别为64．6％（358／554）、6．3％（35／554）、25．3％（140／554）、30．0％（166／554）、0．6％（3／554）。主要基因型NAT2＊4／＊6、＊6／＊7、＊13／＊13或＊12／＊12或＊4／＊4、＊4／＊7、＊7／＊13、＊12、＊6／＊13（＊12）频率依次为12．3％（68／554）、8．3％（46／554）、7．6％（42／554）、40．5％（224／554）、8．1％（45／554）、7．2％（40／554）、5．6％（31／554），7种基因型约占总基因型的89．6％（496／554）。深圳地区汉族人中NAT2基因主要等位基因为＊4、＊6、＊7、＊13，表型以快乙酰化型和中间型为主，分别占40．5％（224／554）、46．7％（259／554），慢乙酰化型仅占12．8％（71／554）。用荧光定量PCR和直接测序法平行检测47名健康人NAT2基因，与直接测序法比较，检测282、341、481、590、857位点的敏感度分别为88．2％（30／34）、87．5％（7／8）、80．0％（4／5）、100．0％（22／22）、93．8％（15／16），特异度分别为100．0％（13／13）、94．9％（37／39）、100．0％（42／42）、96．0％（24／25）、96．8％（30／31），准确性分别为91．5％（43／47）、93．6％（44／47）、97．6％（46／47）、97．9％（46／47）、95．7％（45／47）。结论实时荧光定量PCR检测NAT2基因的灵敏度、敏感度、特异度高，适用于临床及科学研究，深圳地区汉族人主要NAT2等位基因是＊4、＊6、＊7，最常见慢乙酰化表型为＊6／＊7，这为与NAT2基因相关的代谢性疾病及肿瘤研究提供了数据。

基因芯片技术检测HBV DNA及拉米夫定耐药株的应用研究

目的 :研究基因芯片技术检测 HBV DNA及拉米夫定耐药株在临床应用中的特异性、实用性。方法 :利用基因芯片法、双脱氧测序法分别对 4 3例服用拉米夫定且 HBV DNA仍为阳性的乙型肝炎 (乙肝 )患者及 10例非乙肝患者的血清进行 HBV DNA和 P区 5 2 8、5 5 2、5 5 5突变位点检测、对比。结果 :两种方法检测 HBV DNA10 0 %相符 ;检测拉米夫定耐药突变株 12 4个位点结果相符 ,5个位点结果不相符 (P >0 .0 5 ) ,提示两种方法检测HBV DNA及 P区 5 2 8、5 5 2、5 5 5突变位点阳性率相等。结论 :利用基因芯片技术检测 HBV DNA及拉米夫定耐药株 ,其特异性可与 DNA测序媲美 ,在混合株检测方面比 DNA测序有更大的优势。其方法简便 ,能大量地对临床标本进行检测 ,可作为临床常规检测手段。

HBV对肝内TGF-β1蛋白表达和人肝星状细胞系LX-2活性的影响

目的探讨HBV对肝内TGF-β1蛋白表达及人肝星状细胞系LX-2细胞活性的影响。方法运用免疫组织化学方法检测对照组(HBV阴性)和慢性乙型肝炎组肝组织内TGF-β1的表达;采用细胞培养、Western blot、MTT和Transwell实验体外观察HBV对LX-2细胞形态及活性的影响。结果慢性乙型肝炎组肝组织内TGF-β1的表达水平显著高于对照组(t=4.2268、P=0.000);在慢性乙型肝炎组,TGF-β1在肝纤维化处于S1～S2期的肝组织内表达较高,与肝纤维化S3～S4期肝组织内的表达比较差异具有显著性(t=6.9107、P=0.000)。HBV可引起LX-2细胞的形态学改变,并增加其增殖和运动迁移能力。结论 HBV主要在慢性乙型肝炎肝纤维化形成的早期阶段发挥作用。HBV感染可引起肝组织内TGF-β1蛋白表达增加和人肝星状细胞系LX-2的形态改变和活性增强。

HBVDNA定量与HBVM及病理关系的探讨

目的 :探讨血清HBVDNA水平与HBV标志物 (HBVM )表现模式、肝功能状态、肝脏病理的关系。方法 :对 467例乙肝肝炎病毒单纯感染的患者进行HBVDNA定量检测 ,同时检测其他乙型肝炎病原学标志物及肝功能 ,并对其中 80例患者进行肝穿刺病理检查。结果 :血清HBVDNA水平与HBVM表现模式有关 ,HBsAg与HbeAg的存在影响HBVDNA水平变化。血清谷丙转氨酶水平与HBVDNA水平无明显相关。 80例患者HBVDNA定量与肝脏病理学分析 ,HBVDNA定量与肝组织炎症及纤维化无明显相关。结论 :HBVDNA定量检测特异性强 ,灵敏度高 ,与HbeAg阳性有明显相关 ,是乙型肝炎诊断和观察抗病毒治疗的一项可靠的判断指标。

树突状细胞表面特异性非整联蛋白同源物基因多态性与丙型肝炎病毒感染的相关性

目的研究丙型肝炎患者树突状细胞表面特异性非整联蛋白同源物（DC—SIGNR）外显子4基因颈区重复序列的遗传多态性分布，探讨DC-SIGNR基因多态性与HCV病毒基因分型及HCV载量的关系。方法采用PCR结合DNA测序对268例丙型肝炎患者DC-SIGNR重复序列多态性进行基因分型和测序分析；同时检测患者的HCV病毒载量及HCV病毒基因分型。组间两两比较用LSD法。结果DC—SIGNR基因型或等位基因与HCV基因分型的相关性不显著。HCV载量携带7等位基因的患者为（4．6722±1．9766）log10拷贝／ml，携带9等位基因的患者为（5．3073±1．6795）log10拷贝／ml，P=0．036，两组差异有统计学意义。7／7基因型的患者HCV载量水平为（4．5974±2．0067）log10拷贝／ml，9／7基因型的患者组为（5．2771±1．8587）log10拷贝／ml，P=0．025，两组差异有统计学意义。提示HCV更易与携带较长DC—SINGR等位基因的患者结合。结论DC—SIGNR遗传多态性可能与HCV在个体内的复制有关，但与HCV基因分型不相关。

HBV拉米夫定耐药株及BCP、Pre—C突变株芯片检测方法的应用研究

目的构建针对HBV拉米夫定耐药株及c区启动子（basal core promoter，BCP）、前C区（Pre-C）突变株，多位点突变的基因芯片检测方法。并与DNA测序法比较，以了解该芯片的灵敏度、特异性、稳定性等性能并初步应用于临床实践。方法该基因芯片能对HBVDNA及P区（DNA多聚酶区）：180、204、207三个拉米夫定耐药突变位点；C区启动子（basal core promoter，BCP）及前C区（Pre—c）：nt1896、nt1899、nt1862、nt1764、nt17625个突变热点，共8个HBV突变位点进行检测，并用测序法对该基因芯片进行验证。结果①检测HBVDNA方面，两种方法检测结果100％相符。②检测突变位点方面：总体统计32份阳性血清共有256（32×8）个突变位点。两种方法检测结果有251个突变位点完全相符；5个突变位点不完全相符，基因芯片法检测为混合型，测序法检测为野生型或突变型之一。结论结果提示该基因芯片和DNA测序法检测结果阳性率无差异，特异性与DNA测序法相当，检测混合株有更大优势。

AFP、AFP-L3和PIVKA-Ⅱ在肝细胞癌临床评估中的应用价值

目的探讨甲胎蛋白(AFP)、甲胎蛋白异质体(AFP-L3)和异常凝血酶原(PIVKA-Ⅱ)在肝细胞癌(HCC)诊断中的应用价值。方法纳入2018年8月至2019年2月在深圳市第三人民医院确诊的330例肝病患者,其中包括110例慢性乙肝患者、110例肝硬化患者和110例肝细胞癌患者,采集患者血清,应用化学发光微粒子免疫检测法测定AFP和PIVKA-Ⅱ水平;用亲和吸附离心柱法分离血清AFP-L3,再用化学发光微粒子免疫检测法测定AFP-L3水平。结果肝细胞癌组患者AFP、AFP-L3及PIVKA-Ⅱ表达水平显著高于慢性乙肝组(P<0.0001)和肝硬化组(P<0.0001)。单独诊断HCC时,ROC分析显示,AFP、AFP-L3和PIVKA-Ⅱ的AUC分别为0.913(0.871~0.946)、0.881(0.834~0.928)、0.850(0.796~0.905),AFP诊断性能最佳。当AFP临界值为11.81 ng/mL时,诊断肝癌的灵敏度为88.18%,特异性为80.91%;当AFP-L3比值临界值为1.215 ng/mL时,灵敏度为84.55%,特异性为89.09%;当PIVKA-Ⅱ临界值为51.81 mAU/mL时,灵敏度为73.64%,特异性为94.55%。联合检测诊断HCC时,联合指标检测同时阳性的特异性比单指标检测肝癌的特异性提高,联合检测任一阳性时的灵敏度比单指标检测肝癌的灵敏度提高。大部分组合间的AUC增加至0.95以上。结论PIVKA-II、AFP-L3、AFP是诊断HCC的有效生物标志物。与单独分子检测诊断HCC相比,其组合大部分可以提高诊断性能。