刘长龙

刘长龙，1979年生，辽宁开原人。中国书协会员、铁岭市银州区书协副主席。书法作品获第四届中国书法兰亭奖佳作奖二等奖、全国第三届行草书展优秀奖等；入展全国第十届书法篆刻作品展、全国第六届楹联书法作品展、全国第三届青年书法篆刻作品展等。

第七届中国书法兰亭奖铜奖(创作)·刘长龙

颁奖词老米手段,并参颜行。醉心"二王",久久为功。废纸三千,强学博闻。恣媚俊逸,落笔如风。刘长龙发心攻书,以苦为乐,专心致志立足行草,其创作不激不厉、标榜中庸,技法精熟,讲求线条的张力和质感,振迅天真、自具风华。从他身上可以看到辽宁书坛长期致力经典、提倡临帖的成果。

表达猪源GM-CSF重组PRRSV疫苗对同源高致病性毒株的免疫保护效力评价

为研究表达猪源粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)的重组猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)在动物体内的免疫调节特性及对其的保护效力评价,本研究将15头30日龄仔猪随机分成4组,空白对照组(DMEM)4头、疫苗对照组(HuN4-F112株)4头、疫苗组(rPRRSV-GM-CSF株)3头和攻毒对照组(DMEM^(+)HuN4株)4头。疫苗对照组肌注免疫HuN4-F112株10^(5) TCID_(50)/头、疫苗组肌注免疫rPRRSV-GM-CSF株10^(5) TCID_(50)/头,实验空白组和攻毒对照组肌注DMEM 2 mL/头,免疫后28 d,疫苗组、疫苗对照组和攻毒对照组肌注HuN4株(10_(5) TCID_(50)/头)。攻毒后的试验结果表明,免疫rPRRSV-GM-CSF重组病毒组和疫苗株HuN4-F112组获得完全保护,阴性对照组全部死亡;通过IDEXX试剂盒检测仔猪血清中PRRSV抗体水平可知,在免疫14 d后,疫苗组抗体水平显著高于疫苗对照组(P<0.05);由流式细胞术分析体内免疫细胞亚群比例可知,疫苗组同疫苗对照组相比,疫苗组的重组疫苗株能够引起免疫记忆细胞亚群CD4^(+)CD8^(+)T在免疫后28 d显著升高,以及引发攻毒后其抗原递呈细胞显著增多,进而促进CD4-CD8^(+)T的增殖以发挥抗病毒免疫应答。本研究筛选出了一株具有改善HuN4-F112弱毒疫苗株免疫效果的重组病毒rPRRSV-GM-CSF,为进一步研发广谱通用的新型疫苗奠定基础。

猪圆环病毒2型Cap蛋白的原核表达及间接ELISA抗体检测方法的初步建立

Cap蛋白作为猪圆环病毒2型(PCV2)的主要结构蛋白,构成病毒的核衣壳,是PCV2的主要免疫保护性抗原,在PCV2血清学诊断中具有重要意义。本研究根据PCV2的ORF2基因序列设计特异性引物,通过PCR方法扩增得到去核定位信号肽的ORF2基因,并通过同源重组将其克隆至原核表达载体pCold-Ⅰ中,经测序鉴定成功获得重组质粒pCold-Ⅰ-Cap。将重组质粒转化至感受态细胞BL21中进行表达,通过考马斯亮蓝染色以及免疫印迹试验检测Cap蛋白的表达,同时将纯化后的重组蛋白通过优化反应条件建立检测PCV2血清抗体的间接ELISA方法。结果表明:重组去核定位信号肽Cap蛋白可溶性表达且可以与PCV2阳性血清特异性结合,通过探索不同蛋白包被浓度以及不同一抗孵育浓度初步建立了间接ELISA检测方法,进而为PCV2抗体的有效监测奠定基础。

伪狂犬病病毒经典疫苗株Bartha-K61对家兔的致病性研究

已有研究表明伪狂犬经典疫苗株Bartha-K61对小鼠具有较强的致死性,为了研究伪狂犬疫苗株Bartha-K61对兔的致病性,本研究以10^(3)TCID_(50)的剂量接种5只成年家兔,家兔于接种后第3 d出现死亡,并陆续在5 d内全部死亡。对病死兔进行解剖后发现大脑血管扩张及出血,心脏出现坏死以及肺部气肿、出血、坏死等典型的伪狂犬病病理变化。病理切片也显示心脏血管扩张,血管周围轻度水肿,脑部胶质细胞增生,细胞数量增多,其他各脏器也都有不同程度的病理变化。通过荧光定量PCR的方法对病死兔各组织的病毒载量进行了测定。结果表明,病死兔的各组织脏器均检测出高水平的病毒DNA,均显著高于对照组。为了进一步研究伪狂犬疫苗株Bartha-K61对家兔的致病性,本研究测定了Bartha-K61对家兔的半死致死量,结果表明:Bartha-K61对家兔的半数致死量为10^(0.3)TCID_(50),以1×TCID_(50)的剂量接种成年家兔后,仍可引起20%的家兔致死,由此可见Bartha-K61对家兔的致死性要显著强于小鼠。因此在使用Bartha-K61过程中应针对不同物种注意生物安全控制。

猪流行性腹泻病毒PEDV SD株的分离及体外3D肠道类器官感染模型建立

猪流行性腹泻病毒(PEDV)是一种主要感染仔猪小肠的肠道冠状病毒。本研究旨在建立一种用于PEDV体外研究的仔猪小肠类器官模型。首先从PEDV发病猪场的临床仔猪腹泻样品中分离PEDV并进行全基因组测序,结果显示成功分离1株PEDV,命名为PEDV SD株。另外采用肠道类器官的培养技术,从10日龄健康仔猪小肠中分离小肠隐窝组织,经过体外培养7 d左右分化成具有肠道隐窝结构的猪小肠类器官,并能进行连续传代。然后将分离的PEDV SD株感染传代培养的猪小肠道类器官,通过间接免疫荧光试验显示PEDV可以很好地感染猪小肠道类器官,表明成功建立了PEDV感染肠道类器官的模型。猪小肠类器官感染模型可以在体外很好地重现PEDV感染肠道细胞的复杂结构的过程,为深入研究PEDV的致病机制提供一种新的可再生的体外研究模型。

非洲猪瘟病毒F334L基因编码蛋白的原核表达及多克隆抗体制备

本研究通过将非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)的一种非结构蛋白编码基因F334L克隆至原核表达载体pCold-Ⅰ,完成重组表达质粒pCold-Ⅰ-ASFV-F334L的构建。将pCold-Ⅰ-ASFV-F334L转化受体菌感受态细胞,经1 mmol/L的IPTG诱导原核表达。SDS-PAGE和Western blot试验检测结果表明,F334L基因得到了良好的表达,将所得的F334L基因编码蛋白纯化后免疫小鼠,获得含多克隆抗体的血清。利用该抗体检测实验室构建并拯救的表达ASFV F334L基因编码蛋白的重组猪繁殖与呼吸综合征病毒rPRRSV-F334L,试验结果显示该多克隆抗体具有良好的反应原性和特异性,证明了ASFV F334L基因可在PRRSV活载体中稳定表达,为ASFV活载体疫苗的研发提供了材料。

基于相关性分析的硬件木马检测方法

为提高硬件木马检测的准确率,提出一种基于相关性分析的检测方法。在完成木马功耗建模的基础上,提出并分析利用经典相关系数进行木马检测的可行性以及存在的缺点,根据木马检测的特点,优化检测系数,给出利用区间重叠比作为木马判定依据的检测方法。实验结果表明,与采用经典相关系数的方法相比,该方法在降低约6%检测准确率的前提下,能使鲁棒性提高1倍以上。

猪繁殖与呼吸综合征病毒TaqMan荧光定量RT-PCR方法的建立与应用

为快速检测猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV),本研究针对PRRSV的N蛋白基因保守序列,设计特异性引物和TaqMan探针,以体外转录的RNA作为标准品,设计并优化了检测PRRSV的TaqMan荧光定量PCR方法。应用该方法检测其它主要猪病病原,结果均呈阴性;针对PRRSV阳性RNA的检测灵敏度可以达到10拷贝,比常规PCR灵敏10倍～100倍;结果表明,本实验建立的PRRSV TaqMan荧光定量PCR方法具有良好的特异性、敏感性和重复性。应用建立的方法测定攻毒猪血清中病毒的含量,免疫攻毒组和非免疫攻毒组在第7 d血清中病毒的载量差异不显著,而在第14 d差异显著,免疫攻毒组猪血清中病毒载量明显低于未免疫组。

油气田刺激响应性材料应用现状及前景展望

油田化学品在钻井完井、压裂酸化、调剖堵水、乳化降黏、油水分离等环节发挥关键作用,但低渗透、高温、高盐、极端pH及使用过程中温度、pH变化等苛刻油气藏环境,给应用于油田化学品的聚合物和表面活性剂的研发带来了严峻的挑战。引入磺酸基等抗温抗盐基团或增大驱油剂相对分子质量等传统方式已难以满足油田需求。该文介绍了温度敏感聚合物、pH敏感聚合物、磁响应聚合物、CO_(2)敏感聚合物及表面活性剂、盐度敏感聚合物响应环境变化的刺激响应原理和性能;综述了5种刺激响应性材料在钻井完井、提高采收率、乳化破乳、压裂酸化、调剖堵水、油水分离等方向的应用,展望了刺激响应性材料在油气开采中的发展前景。

杨树芽提取物清除DPPH自由基的作用

目的对杨树芽进行初步提取分离,测定其总黄酮含量和抗氧化活性。方法通过超声辅助提取杨树芽中有效成分,以抗坏血酸、生育酚和芦丁为对照品,采用DPPH法测定其自由基清除作用。结果超声辅助提取的杨树芽提取物中总黄酮含量为14.4%,浓度为0.05 g.L-1时,清除自由基能力大于芦丁和生育酚,浓度提高后略低于生育酚,高于芦丁,且清除能力随浓度提高而提高。结论杨树芽提取物中总黄酮含量较高,并有较强的抗氧化活性。

油气井酸化过程中铁离子的沉淀及其预防

油气井酸化过程中往往出现铁离子沉淀问题,所产生的沉淀物会聚集于井眼并使井眼周围的渗透率降低,从而导致产量下降,通常在酸液中加入铁离子稳定剂以防沉淀物的生成。常用的铁离子稳定剂分为螯合剂和还原剂两类。

响应面法优化十味盆安颗粒虎杖醋延胡索的提取工艺研究

目的:优选十味盆安颗粒虎杖、醋延胡索的最佳提取工艺。方法:在单因素考察的基础上,选择乙醇浓度、提取时间、提取次数三个主要因素,以提取液中虎杖苷、延胡索乙素提取率及干膏得率的综合评分为响应值,采用响应面试验优选虎杖、醋延胡索的提取工艺,并对最佳工艺进行工艺验证。结果:最佳提取工艺为10倍量59%乙醇加热回流提取2次,每次95 min,经三批工艺验证,虎杖苷、延胡索乙素平均提取率分别为87.80%、94.11%,干膏的平均得膏率为15.00%,综合评分为94.71,RSD=0.49%。结论:该工艺采用响应面法优化后,稳定可行,有效成分转移率高,适合产业化生产。

提取溶剂酸度对血竭及玉红生肌凝胶中血竭素含量的影响

目的:考察不同提取溶剂酸度对玉红生肌凝胶及血竭中血竭素含量的影响,建立玉红生肌凝胶中血竭素含量的测定方法。方法:取血竭及玉红生肌凝胶,分别经3%、6%、9%、12%、15%磷酸甲醇超声提取,HPLC测定血竭素的含量。结果:随提取溶剂酸度的升高,血竭及玉红生肌凝胶中血竭素含量逐渐升高,12%磷酸甲醇提取时血竭素含量均已达到最高值,凝胶中血竭投药量接近真实投药量。结论:血竭及玉红生肌凝胶中血竭素含量测定时应以12%磷酸甲醇提取。

当代中美核心价值观教育比较之启示

当代美国核心价值观教育的特点是:课程设置分散、隐蔽,注重合力;突出学生的主体性地位;渗透为主,注重实践,以多样化的手段引导学生;精挑细选,严格教师队伍。这给我们以深刻的启示,即继续巩固思想政治理论课地位,多学科配合以形成合力;注重尊重受教育者的主体性地位,切勿矫枉过正;注重环境建设,优化教育手段,强化教育效果;建设一支高素质的教师队伍。

高校学生管理应尊重学生的主体性

学生管理是高校实现自己培养目标的一种重要手段和不可替代的力量。条件相同的学校，由于学生管理水平的差异，带来的教育效果是截然不同的。正如好的经济管理能带来理想的经济效益一样，有效的学生管理也同样能带来明显的人才效益。本文就现有学生管理所存在的弊端，阐明适应素质教育要求的学生管理模式必须尊重学生的主体性。

用于DNA转染的PRRSV全长感染性cDNA克隆改建及应用

[目的]利用核酶自我剪切功能使PRRSV的基因组获得1个精确的基因组3′末端,提高全长感染性cDNA克隆的病毒拯救效率。[方法]用3步PCR方法将获得含有丁型肝炎病毒核酶序列的片段并将其克隆到PRRSV全长cDNA克隆pAPRRS的poly(A)下游,再通过酶切,连接将牛生长激素多聚腺甘酸转录终止序列插入到核酶序列后,构建成全长感染性cDNA克隆pAPRRS-HB,新构建的克隆转染MARC-145细胞,72h后用间接免疫荧光检测病毒N蛋白和非结构蛋白2(nsp2)的表达,并检测细胞上清中病毒的滴度。[结果]成功构建了含有核酶序列的PRRSV基因组全长感染性cDNA克隆pAPRRS-HB。新构建的全长感染性cDNA克隆能够较好地拯救出病毒,拯救效率比pAPRRS提高10倍左右。[结论]该结果为研究PRRSV基因结构与功能奠定了基础。

论批判性思维的基本特征

批判性思维是一种理性性思维,是一种自主性思维,是一种创新性思维。没有批判性思维就没有科学创造。批判性思维不仅表征着科学精神,而且表征着科学研究主体的创造力。研究和探讨批判性思维的基本特征,对于培养和造就适应创新时代要求的,具有批判性思维的创新人才具有十分重要的意义。