人表皮因子受体-2在膀胱尿路上皮癌和上尿路上皮癌中表达的差异性分析

目的探索人表皮因子受体-2(HER-2)在膀胱尿路上皮癌(UBC)和上尿路上皮癌(UTUC)中表达的差异性,及其与这两种疾病复发及进展的相关性。方法回顾性分析2015年11月—2022年6月兰州大学第二医院泌尿外科收治的184例尿路上皮癌患者,按照肿瘤部位分为UBC组及UTUC组,比较两组中HER-2的阳性表达率,绘制生存曲线。比较两组患者的无复发生存期(RFS)及无进展生存期(PFS)。应用Cox比例风险模型分析HER-2阳性表达对UBC及UTUC患者复发及进展的影响。结果UBC患者HER-2阳性表达显著高于UTUC患者(49.6%vs.32.2%,P=0.027)。UTUC患者中,肾盂癌患者HER-2阳性表达相较于输尿管癌差异无统计学意义(30.6%vs.34.8%,P>0.05)。Cox多因素回归分析显示HER-2阳性表达影响UBC复发(P<0.001);HER-2阳性表达(P<0.001)、肿瘤直径≥3 cm(P<0.001)、分期≥T2(P=0.003)以及多发肿瘤灶(P=0.033)均可影响UBC进展;HER-2阳性表达对UTUC复发及进展的影响差异无统计学意义。结论UBC组患者HER-2的阳性表达显著高于UTUC,HER-2阳性表达可能提示UBC复发及进展的风险增加,而对UTUC的复发及进展则无明显影响。因此不建议以HER-2表达来独立预测UTUC的复发及进展风险。

基于CP基因的中国云南省烟草TMV群体遗传多样性分析

为探明云南烟草上烟草花叶病毒(tobacco mosaic virus,TMV)的群体遗传多样性特征,本研究使用TMV外壳蛋白(coat protein,CP)基因的特异性引物对采自云南各烟区的疑似烟草花叶病样品进行检测,通过克隆测序获得138个TMV CP基因序列,对其进行了一致性比对,及系统发育、错配分布、遗传变异、群体多样性等分析。变异分析显示,138条CP基因序列共有变异位点数122个,占总位点数的25.42%,变异类型只有核苷酸替换,核酸多样性为0.018,单倍型多样性为0.970;一致性比对结果显示,138条序列的核苷酸和氨基酸序列一致性均为96%~100%;重组分析未检测到重组信号;对来自云南烟草,NCBI上其他地区烟草及云南地区其他寄主的TMV分离物的CP基因进行系统发育分析,结果显示,所有TMV分离物在进化上可分为4个组,本试验获得的分离物分布在1、2、3组,其中只有来源昭通地区的分离物倾向于聚成簇,表明云南烟草TMV分离物的适应性进化受地理适应性所驱动,与寄主适应性基本无关;错配分布分析显示,云南烟草TMV群体呈多峰分布,表明该群体近期未经历群体扩张事件;群体间遗传分化分析结果表明,除昭通和曲靖烟草TMV群体与其他TMV群体之间很容易发生遗传漂变促使群体发生遗传分化外,其余大部分TMV群体之间的基因流都可以抵制遗传漂变。本研究首次报道了云南各烟区TMV分离物群体遗传变异情况,研究结果可为TMV的抗病育种和制定更为有效的防治策略提供重要参考。

烟草番茄斑萎病毒RT-LAMP检测体系的建立及优化

为快速检测烟草番茄斑萎病毒(tomato spotted wilt virus,TSWV),基于TSWV核外壳蛋白(nucleocapsid protein,NP)保守序列设计5组引物进行筛选,采用单一变量法对反应温度、时间及反应体系中dNTPs、Mg^(2+)、甜菜碱的含量和内外引物比等参数进行优化,建立烟草TSWV反转录环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,RT-LAMP)检测体系,并采用RT-PCR(revers transcription-polymerase chain reaction)检测方法进行平行比对试验,验证优化后RT-LAMP的特异性、灵敏性及实用性。结果表明,烟草TSWV RT-LAMP检测体系最佳引物组为TS-N-4,在25μL的反应体系中各组分最佳加入量为缓冲液2.5μL、100 mmol·L^(-1) MgSO40.5μL、10 mmol·L^(-1) dNTPs 0.5μL、10 mmol·L^(-1) FIP/BIP 1.5μL、10 mmol·L^(-1) F3/B30.5μL、10 mmol·L^(-1) LF/LB 1.5μL、5 mmol·L^(-1) Betaine 6μL、Bst 2.0 WarmStar DNA Polymerase(8000 U·mL-1)0.5μL、M-MLV酶(10000 U·mL^(-1))0.125μL、RNA(≥64.7 fg)1μL,DEPC H2O补至25μL;最佳反应温度和时间分别为58℃、60 min。优化后的RT-LAMP灵敏度是RT-PCR的1000倍,且田间样品检测结果与RT-PCR相符。建立的RT-LAMP方法特异性强、灵敏度高、操作简单,对于烟草TSWV的检测及监控有重要意义。

植物病原细菌Pseudomonas syringae pv.tomato基因组中的信号肽分析

应用SignaIP 3.0对植物病原细菌Pseudomonas syringae pv.tomato DC3000菌株基因组中的细菌染色体全部5 615个ORFs进行了分析,确定其中679个ORFs所编码蛋白质的N-端有信号肽序列,其中已经命名并有注释的有107个ORFs.信号肽的长度以19～31个氨基酸居多,其中最多的是23个氨基酸的信号肽.具有信号肽的ORFs编码蛋白的长度大多为101～400个氨基酸之间.同时,对组成信号肽的氨基酸种类作了系统的分析,发现组成信号肽的氨基酸中非极性氨基酸占48.54%,极性氨基酸占18.67%,带负电荷氨基酸占24.54%,带正电荷氨基酸仅占8.00%,出现最多的3种氨基酸依次为亮氨酸、丙氨酸和丝氨酸,最少的氨基酸是异亮氨酸,在切割位点-1端的氨基酸中83.21%均为丙氨酸,在切割位点后3位的氨基酸中最多的氨基酸也是丙氨酸.通过分析确定628个分泌类信号肽,36个信号肽具有RR-motif的保守区段,15个脂蛋白类信号肽,未发现Prepiln-like信号肽和Bacteriocin and Pheromone信号肽.

冻干重组人脑利钠肽对急性前壁心肌梗死患者直接经皮冠状动脉介入治疗术后局部心肌形变能力的影响

目的:探讨静脉应用冻干重组人脑利钠肽(rhB NP)对急性前壁心肌梗死患者直接经皮冠状动脉介入治疗(PCI)术后局部心肌形变能力的影响。方法:入选2013-06至2013-12收入我院住院患者35例,均为发病12 h内且接受直接PCI治疗的首发急性前壁心肌梗死患者。随机分为静脉应用rhB NP组(n=18)和对照组(n=17)。两组患者直接PCI术前分别给予rhB NP和硝酸甘油静脉泵入,共维持72 h。所有患者分别于急性心肌梗死术后即刻、第7天及第1个月时行超声心动图检查,比较两组患者超声心动图参数变化,观察并比较两组患者6个月内主要心脏不良事件(MACE)的发生情况。结果:两组患者基线资料差异无统计学意义(P>0.05)。与对照组比较,rhB NP组左心室射血分数(LVEF)及室壁运动积分(WMSI)术后即刻及术后第7天时差异无统计学意义(P<0.05);术后第1个月的LVEF显著高于对照组,WMSI显著低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。与对照组比较,rhB NP组术后第7天收缩期峰值应变率(SRs)显著升高,差异有统计学意义(P<0.05),而舒张早期峰值应变率(SRe)和收缩期峰值应变率(SRa)有升高趋势,但差异无统计学意义(P>0.05),rhB NP组术后第1个月SRs、SRe和SRa均显著升高,差异有统计学意义(P<0.05)。rhB NP组较对照组肌钙蛋白I(cT nI)峰值显著降低,差异有统计学意义[(50.9±16.88)ng/ml vs(63.24±18.60)ng/ml,P=0.036]。两组MACE比较差异无明显统计学意义(P>0.05)。结论:静脉应用rhB NP能够显著改善急性前壁心肌梗死患者直接PCI术后局部心肌形变能力,改善心肌的收缩、舒张功能。

防治烟草野火病的药剂筛选及应用研究

为较好地防治烟草野火病 ,选用 6种药剂对烟草野火病菌进行抑菌试验 ,筛选出 2种效果较好的药剂 ,即新植霉素和农用链霉素 .同时 ,通过对不同地区来源的烟草野火病菌的抑菌试验 。

辣椒CaWRKY39基因克隆及其酵母单杂交pGADT7载体构建

辣椒是我国重要的经济作物之一,但番茄斑萎病毒(TSWV)极易造成其巨大的生产损失,亟需有效的防治策略。前期研究发现,辣椒转录因子CaWRKY39在TSWV侵染下特异性高表达,推测其可能在辣椒抗TSWV中发挥重要作用。本研究从辣椒‘萧新19’叶片中克隆了CaWRKY39基因,并对其进行生物信息学分析,结果表明,CaWRKY39的CDS全长为1 035 bp,编码一个由344个氨基酸组成、相对分子量为38 570.53 Da、理论等电点为9.59的稳定疏水蛋白,该蛋白二级结构和三级结构主要由无规则卷曲构成,占比为60.76%。系统进化分析发现CaWRKY39蛋白与棉花GhWRKY39蛋白亲缘关系最近,表明两者功能可能具有相似性。为进一步验证CaWRKY39对相关抗性基因的靶向调控作用,采用RT-PCR技术扩增CaWRKY39基因CDS序列,利用NdeⅠ、EcoRⅠ双酶切,并通过无缝克隆的方法成功构建了酵母单杂交表达载体pGADT7-CaWRKY39。本研究结果可为深入研究CaWRKY39转录因子参与辣椒抗TSWV病毒的分子机理提供技术支持和参考。

布尼亚病毒科全基因组序列比对分析

布尼亚科病毒(Bunyaviridae)是一类医学和农业上的重要病毒。本文从NCBI数据库下载具有完整基因组序列的布尼亚科病毒的5个属20种病毒的序列,用生物学软件DNAman,DNAstar进行比对分析,发现布尼亚科病毒属中的植物病毒在核酸序列及蛋白结构上与动物病毒有很大差异:(1)只有植物病毒的M基因组能编码NSm运动蛋白;(2)植物病毒和动物病毒在核酸序列和蛋白质序列长度均有差异,表明该科病毒是进化速度较快的病毒;(3)植物病毒核酸序列的GC含量低于动物病毒;(4)通过SMART网络软件进行蛋白质拓扑结构分析发现植物病毒和动物病毒在糖蛋白GnGc的结构上存在显著差异;(5)植物病毒糖蛋白结构较为复杂,有较多的紊乱区域,除INSV外,其他病毒都具有N端信号肽。这将对以后分子生物学检测中引物的设计及病毒的鉴定等方面的研究起到积极的作用。

常压室温等离子体诱变粘红酵母筛选高产油脂菌株及发酵条件优化

以粘红酵母(Rhodotorula glutinis)为出发菌株,采用常压室温等离子体对其进行诱变。得到最佳诱变条件为120 W功率下处理60 s,致死率达90%。诱变后,采用苏丹黑B染色法筛选出1株高产油脂突变株LA1,与出发菌株相比较,其油脂产量、油脂含量分别较出发菌株提高了17.59%和46.08%。对LA1发酵培养条件进行优化,得到最佳条件为初始葡萄糖质量浓度70 g/L,氮源为(NH4)2SO4,C/N值53。在最佳发酵条件下,LA1的油脂产量、生物量、油脂含量及油脂得率较优化前分别提高了123.9%、56.6%、43.0%和43.5%,其油脂脂肪酸组成与植物油相近。

烟草青枯病的研究进展

烟草青枯病是一种世界普遍发生的重要病害 ,对该病病原、寄主范围、地理分布、环境与病害的流行以及综合防治进行了综述。

云南烟草上出现番茄斑萎病毒(Tospovirus)属病毒

2004-2007年间对云南省烤烟种植区进行调查，在云南省楚雄和文山2个地区，获得3份疑似Tospovirus属病毒的样本。通过Tospovirus组引物（Tospovirus Group Primer）进行RT-PCR扩增、克隆和测序，获得500nts核酸片段，通过NCBI BLAST网络数据库比对，确定这3份样品为Tospovirus属的病毒；通过DNAman软件比对分析所得到的核酸序列和已经公布的Tospovirus属病毒RNA L同位点序列，从得到的系统进化图可以看出，云南3个样品明显分为2簇，即YN-1和YN-2，分别与血清组I和Ⅵ的Tospovirus属病毒聚为一簇。

番茄斑萎病毒属ssRNA-M序列比对分析

番茄斑萎病毒属(Tospovirus)是布尼亚病毒科唯一的植物病毒属,在热带、亚热带以及温带地区引起许多作物和花卉严重病害的发生.该研究利用DNAstar、DNAman等软件对其RNA-M编码G1G2蛋白和NSm非结构蛋白的核酸和蛋白质序列进行分析,发现Tospovirus属病毒的G1G2蛋白和NSm非结构蛋白序列的长度和GC含量在不同病毒种间变异不大,同时得出序列比对图和一致性(Identity)的值、同源性(Homolog tree)的值和系统进化树(Phylogenetic tree)的值,并发现根据NSm蛋白质序列划分的2个相似性组与前人划分的血清组非常接近.

云南烟草野火病病原细菌(Pseudomonas syringae pv.tabaci)鉴定

对云南省各大烟区烟草叶片上引起褪绿晕圈的病原细菌从形态学、培养性状、生理生化反应、抗菌素反应、抗血清反应、遗传性状等方面进行了鉴定。结果表明 :该菌为烟草野火病菌 [Pseudomonassyringaepv .tabaciWolf&Foser (1917)Young ,Dye&Wilkie (1978) ]。

番茄斑萎病毒在烟草植株上症状学特征

通过2006年间在美国北卡罗来那州烟草主要生产区的田间调查,系统的描述了番茄斑萎病毒侵染烤烟后,在烤烟叶片上产生的叶片畸形、镶脉、叶脉坏死、坏死斑、同心环纹、叶面皱缩,且整株出现矮化异常生长;将番茄斑萎病毒采用人工摩擦接种到本生烟上,植株被系统侵染,并产生褪绿斑坏死斑、同心环纹、皱缩等症状,植株一般4～5周内死亡。通过比较两种寄主,发现番茄斑萎病毒侵染两种寄主均出现系统症状,症状相似,但也有不同。

应用计算机手段分析植物病原细菌Ralstonia solanacearum的蛋白质序列

应用SignalP 3.0,LipoP和TargetP对植物病原细菌Ralstonia solanacearum基因组中的3440个ORFs(openreading frames)进行了信号肽分析,同时系统分析了信号肽的类型及结构。结果表明,3440个ORFs中有462个ORFs所编码蛋白质具有N-端有信号肽序列,其中348个分泌类信号肽、100个信号肽具有RR-motif信号肽,14个脂蛋白类信号肽,未发现Prepilin-like信号肽和Bacteriocin and Pheromone信号肽。在这462个具有可切割信号肽的分泌蛋白中,有84.0%蛋白质为胞外分泌型(S型),13.2%为线粒体分泌型(M型),另外有2.8%为其它类型的分泌蛋白。通过LipoP分析该菌的全基因组预测具有4种类型蛋白质,其中其中SpI有425个,占12.3%;SpII有80个,占2.3%;CYT有2 541个,占73.9%;TMH有414个,占12.0%。比较了Ralstonia solanacearum和Pseudomonas syringaepv.tomato信号肽的长度及氨基酸的组成,发现这两种菌在这些方面存在这很大程度的相似性。本研究通过对Ralstonia solanacearum进行分泌蛋白和信号肽结构的分析,为将来功能基因组和分泌型外源蛋白的利用提供理论基础。

烟草野火病菌(Pseudomonas syringae pv.tabaci)诊断试剂盒的制备及应用

本研究通过筛选致病力强的烟草野火病菌株作为抗原 ,制备了烟草野火病菌特异性的抗血清 ,研制出SPA ELISA、间接 ELISA 2种诊断试剂盒 ,使检测真正作到了简便、快速、灵敏、准确。同时 ,应用这 2种诊断试剂盒对从田间及温室中采集的土壤、烟株根围、田间杂草、种子进行检测 ,明确了云南烟草野火病的初侵染源主要为种子和根围。

昆虫性别决定机制研究进展

阐述昆虫的性别决定机制是理解昆虫性别分化调控的理论基础,也为人类有效控制害虫开辟了新方向。昆虫性别决定机制存在复杂性和多样性,但主要是内因即性别决定基因级联互作调控的结果。本文对近年来基于性别决定基因级联互作的昆虫性别决定机制研究进行了综述,主要包括性别决定基因概况和重要性别决定相关基因的分子级联互作关系。目前发现昆虫重要性别决定相关基因主要集中在常染色体上,且部分基因之间存在紧密的级联互作,如Sxl,tra,dsx,csd和fem等。在这些基因中,tra/fem→dsx的调控模式在已报道的昆虫中存在共性,即tra和dsx相对较保守且tra通过性特异剪切来调控下游dsx的转录形式。目前大多数昆虫的性别决定机制还不清楚,但近年来模式昆虫性别决定机制取得了一定进展,对非模式昆虫的研究还处于起步阶段但却越来越受到重视。

云南烟草野火病菌遗传多样性分析

应用Rep -PCR分子指纹技术结合传统植物病理学分析了 5 1个采自云南各大烟区的烟草野火病菌 (Pseudomonassyringaepv.tabaci)以及其他不同致病变种、不同种、不同属的植物病原菌的群体遗传多样性。用REP ,ERIC ,BOX ,IS1112和IS 1113等 5组专化性的引物对以上菌系基因组DNA进行PCR扩增 ,并对扩增指纹图谱综合进行UPGMA聚类分析 ,在相似水平 0 .92时 ,可将云南烟草野火病菌分为 3个群 ,即YN 1,YN 2 ,YN 3。

烟草野火病的研究进展

烟草野火病是世界普遍发生的一种病害 ,本文对该病害的病原、病害流行、致病机制及综合防治进行了综述。

直播电商虚假宣传的法律规制

直播电商中的虚假宣传现象日益凸显和严峻。《反不正当竞争法》和《广告法》作为治理虚假宣传的主要法律规范,在对直播电商虚假宣传的法律规制中存在以下问题:从《反不正当竞争法》上,“引人误解”作为虚假宣传行为的认定标准,常被弱化或虚置。直播电商虚假宣传行为的几种类型化表现中,对商品或服务本身、直播流量数据的虚假宣传已有相应的法律规范,但我国目前没有对表明身份和立场“实质性关联”的强制披露要求,对包装、装潢、店铺名、域名等商业标识的混淆行为潜在着知识产权侵权风险,相关法律规制也面临着新的挑战;从《广告法》上,一是直播电商的法律属性存在争议,二是主播的身份认定及法律责任不明确。此外,《反不正当竞争法》与《广告法》存在着竞合与适用的问题。为完善对直播电商虚假宣传的法律规制,应在《反不正当竞争法》中突出“引人误解”标准的核心地位,建立“实质性关联”的强制披露制度,强化知识产权保护的主体责任;从《广告法》上,应细化直播电商的法律属性,明确“广告荐证人”的身份及法律责任。在实务中,也需要灵活适用《反不正当竞争法》和《广告法》的相关规则。