鸡传染性法氏囊病超强毒Gx及其致弱株基因组B节段的克隆和序列分析

用蛋白酶K法分离提取了鸡传染性法氏囊病病毒强毒株Gx及其致弱株Gt的病毒核酸dsRNA ,应用随机引物将RNA反转录成cDNA ,以此为模板用长距离一步法扩增出全长基因B节段 ,将其克隆入PMD18_T载体 ,进行了测序 ,并用DNAStar软件进行序列分析。测序结果表明 ,克隆的Gx株B节段全长为 2 82 7bp ,与超强毒参考株UK6 6 1的同源性为 88 2 % ,与强毒参考株Harbin_1株的同源性达 96 3% ;克隆的Gt株B节段全长为 2 82 7bp ,与弱毒参考株P2的同源性达 99 5 %。而Gx株与Gt株B节段的核苷酸的同源性只有 89 8% ;vvIBDV_Gx。

维药家独行菜子镇咳、抗炎及抑菌作用初探

目的研究维吾尔族传统药材家独行菜子水提物的镇咳、抗炎作用及其水提物、醇提物的抑菌作用。方法以不同溶剂分离家独行菜子各组份,并以氨水引咳法探讨其水提物的镇咳作用;同时以二甲苯致炎法探讨其水提物的抗炎作用;通过抑菌实验探讨其水提物、醇提物对大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、铜绿假单孢菌、金黄色葡萄球菌的抑菌作用。结果家独行菜子水提物组与生理盐水组相比,能明显延长咳嗽潜伏期、降低每分钟咳嗽次数,及抑制鼠耳肿胀作用(均P<0.05);且家独行菜子水提物、95%乙醇提物、甲醇提物对4种细菌均有明显的抑菌作用。结论家独行菜子水提物具有显著的镇咳、抗炎作用,水、醇提物均具有明显的抑菌作用。

南瓜及红甜菜多糖对小鼠免疫功能的影响

研究南瓜和红甜菜苷多糖对正常小鼠免疫功能调节作用的影响。利用超声提取法得到80%的乙醇粗提物,并绘制葡萄糖标准曲线,测定南瓜和红甜菜多糖含量分别为67.30%和85.82%。实验小鼠分为2组,将南瓜和红甜菜多糖配成(50 mg/kg.d),分别经胃灌注南瓜及红甜菜苷多糖,每天1次连续7 d,对照组小鼠用等量蒸馏水灌胃。于实验第8天进行小鼠体内免疫功能测试。结果表明:南瓜多糖和红甜菜多糖能提高小鼠免疫器官重量、巨噬细胞的吞噬功能及单核巨噬细胞对血流中碳粒的清除能力,红甜菜多糖的作用更加明显。南瓜多糖及红甜菜多糖具有免疫调节活性作用。

刺山柑中总黄酮对RA大鼠相关细胞因子影响的研究

目的:探讨刺山柑中总黄酮对佐剂性关节炎大鼠血清中IL-6、TNF-α及局部炎症组织PGE2含量的影响。方法:以X-5树脂分离得到的总黄酮为供试药品,用完全弗氏佐剂诱导大鼠关节炎模型,并以生理盐水作为对照,刺山柑总黄酮进行干预。采用足趾容积测量仪测定大鼠足趾肿胀程度;采用ELISA法测定大鼠血清中IL-6、TNF-α的含量,同时测定局部炎症组织PGE2含量。结果:刺山柑总黄酮各剂量组大鼠血清IL-6、TNF-α含量均显著低于模型组。结论:刺山柑总黄酮能降低大鼠足趾炎症组织中的PGE2含量。

正交设计优化大孔吸附树脂提取分离刺山柑中总黄酮的研究

以新疆吐鲁番野生刺山柑果实为原料,分别比较了不同乙醇浓度、料液比、超声时间对刺山柑总黄酮的提取率的影响,以正交试验进行筛选分析,选择最佳的提取条件;利用静态及动态吸附-洗脱试验筛选出提取效果较好的大孔树脂对刺山柑总黄酮进行分离。结果表明,在室温下以乙醇浓度为70%、超声时间为60 min、料液比1∶20时提取效果最佳。静态吸附-洗脱试验筛选出H103、X-5和AB-8树脂对总黄酮的分离效果较好,从动态分离黄酮的实验表明H103型大孔树脂分离效果最佳,总黄酮含量达到63.98%。

南瓜及刺山柑多糖对小鼠免疫功能的影响

【目的】研究南瓜和刺山柑多糖对正常小鼠免疫功能调节作用的影响。【方法】利用超声提取法得到80%的乙醇粗提物,并绘制葡萄糖标准曲线。实验小鼠分为2组,将南瓜和刺山柑多糖配成(50 mg/kg.d),分别经胃灌注南瓜及刺山柑多糖,每天1次连续7 d,对照组小鼠用等量蒸馏水代替。于实验第8 d进行小鼠体内免疫功能测试。【结果】南瓜和刺山柑多糖含量分别为67.30%和37.39%,南瓜多糖能提高小鼠免疫器官重量、巨噬细胞的吞噬功能,刺山柑多糖作用不明显。【结论】南瓜多糖具有免疫调节活性作用。

血浆TM、TAT、PIC、t-PAIC在脓毒症致DIC中的早期诊断价值

目的评估新凝血4项血栓调节蛋白(thrombomodulin,TM)、凝血酶抗凝血酶复合物(thrombin-Antithrombin complex,TAT)、纤溶酶抗纤溶酶复合物(plasminogen antifibrinolytic complex,PIC)、组织型纤溶酶原激活物纤溶酶原激活抑制复合物(tissue plasminogen activator plasminogen activator inhibitor complex,t-PAIC)对于脓毒症致DIC的早期诊断价值。方法选取2017年1月—2019年12月在同济大学附属东方医院急诊重症监护室和中心监护室确诊脓毒症患者80例,按照ISTH诊断标准将患者分为脓毒症DIC组28例和脓毒症非DIC组52例,同时设健康对照组40例。收集患者的一般临床资料,采集脓毒症患者第1、3、7天血液和健康组的血液,检测脓毒症患者和健康组血液样本中TM、TAT、PIC、t-PAIC的水平,绘制应用受试者工作特征曲线(ROC)、计算曲线下面积(AUC),同时应用Pearson相关性分析对TM、TAT、PIC、t-PAIC与SOFA评分(Sequential Organ Failure Assessment)和APACHEⅡ评分(Acute Physiology and Chronic Health Score SystemⅡ)进行分析,综合评估新凝血4项TM、TAT、PIC、t-PAIC在脓毒症DIC的早期诊断及预后评估价值。结果脓毒症DIC组的TM、PIC和t-PAIC在第1、3、7天的浓度均高于脓毒症非DIC组及健康对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。TM、PIC、t-PAIC联合检测的AUC分别为0.893、0.932、0.898,敏感度和特异度在第3天分别达到98%和97.2%。但是脓毒症DIC组的TM、TAT、PIC、t-PAIC均与SOFA评分及APACHEⅡ评分无明显相关性(P>0.05)。结论TM、PIC和t-PAIC的水平升高可以早期预测脓毒症患者DIC的发生,联合预测的价值优于单个检测,但不能对这部分患者病情的危重程度和预后进行评估。

沙棘多糖对D半乳糖致衰老小鼠的抗氧化作用

评价PBP(polysaccharide from Hippophae rhamnoides,PBP)对D-半乳糖致亚急性衰老模型小鼠的抗氧化作用。小鼠分为空白组、衰老模型组、阳性组(VE170 mg/kg)、PBP低(100 mg/kg)、中(200 mg/kg)、高(400 mg/kg)剂量组,连续灌胃30 d,测定其脏器指数、肝、脑组织及血清的SOD、GSH-Px活性及MDA含量;HE染色观察各组动物肝脏及脑组织细胞及结构变化。结果表明,与模型组相比,PBP高剂量及VE组小鼠体质量增长幅度最大,PBP高、中及VE组的脑、心脏及脾脏指数与模型组相比均显著提高(P<0.05,P<0.01);PBP高、中剂量组中肝、脑及血清中的GSH-Px均极显著高于模型组(P<0.01),PBP高剂量中肝、脑及血清中的SOD均极显著高于模型组(P<0.01),PBP高剂量及VE组中肝、脑及血清中的MDA均极显著低于模型组(P<0.01)。组织切片HE染色发现PBP对衰老导致小鼠肝、脑组织细胞及结构损伤具有保护作用。PBP对D-半乳糖致亚急性衰老模型小鼠的保护作用可能与其具有抗氧化作用有关。

鸡传染性法氏囊病超强毒Gx株感染性分子克隆的构建

本研究以鸡传染性法氏囊病超强毒Gx株(野毒株)基因组为模板,用蛋白酶K法提取病毒基因组核酸dsRNA,在cDNA克隆的5'端上游引入了T7启动子序列,采用Long-accurateRT-PCR(LA-PCR)一步法扩增并克隆了病毒基因组A节段与B节段全长cDNA。序列测定结果表明,基因组A节段全长共3267个核苷酸,包括5'及3'端的非编码区和两个部分重叠的开放阅读框,基因组B节段全长共2843个核苷酸,包括5'及3'端的非编码区和一个开放阅读框。将IBDV-Gx株的A节段全长基因组及B节段全长基因组分别克隆入pMD18-T载体,构建成pMD-A、pMD-B两个带有T7启动子的重组质粒。两个重组质粒线性化后,进行体外转录,然后共电转染于鸡胚成纤维细胞37℃培养72h并传代。收获的细胞传代培养物分别用RT-PCR、间接免疫荧光、蚀斑试验等方法进行鉴定,结果用RT-PCR扩增出了VP3及VP5基因片段,间接免疫荧光检测到了特异性的荧光抗体,蚀斑试验结果表明蚀斑形成单位为3×103PFU/mL。

四环素全抗原的合成及多克隆抗体的制备

利用Mannich反应合成四环素(Tc)与BSA(牛血清白蛋白)的完全抗原,由紫外光谱确定是否偶联成功;同理,制备四环素OVA抗原作为包被抗原,以制备的完全抗原TC-BSA免疫清洁级新西兰兔制备多克隆抗体,运用间接ELISA法测定血清抗体效价。试验结果表明,紫外光谱确定偶联成功,血清抗体效价为105,间接竞争法测定抗体50%抑制率(IC50)检测限为200ng/mL,最低检测限量可达到20ng/mL,特异性好。

刺山柑提取物对正常小鼠耳廓微循环的作用

研究刺山柑提取物(CSE)对小鼠耳廓微循环的影响,为改善微循环障碍性疾病提供实验依据。将正常小鼠50只随机分为5组(空白对照组,阳性对照组,CSE 1.25、2.5、5 mg/(10g·天)组。每天给药一次,连续灌胃7天。用WX-6微循环显微仪分别于末次给药后六个时间点即0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0 h于给药前耳廓相同部位测量耳廓微循环微动脉、微静脉血管口径及毛细血管开放的数目。与空白组比较,CSE低、中、高剂量组能明显增加耳廓微血管管径及毛细血管开放数目(P<0.05),增强作用与作用时间及剂量成正相关,以CSE高剂量更为显著。CSE对正常小鼠微循环具有改善作用。

浅析民族班“食品毒理学”课程教学改革与实践

食品毒理学课程是本科食品质量与安全专业中重要的一门必修专业课,属于现代毒理学的分支,与食品安全卫生有密切的关系,是食品质量与安全专业人才不可或缺的一门课程。对于食品质量与安全专业的少数民族学生来说,普遍反映其对该课程感兴趣但难度较大。因此,鉴于上述状况,重点针对民族班食品毒理学课程的教学方法及考核方式进行改革探索,力求为学生打造在线学习与线下课堂混合式教学的全新学习体验,从而提高民族班食品毒理学课程的教学质量。

核桃(Juglans regia L.)青皮提取物抗氧化及抑菌活性的研究

核桃青皮是核桃(Juglans regia L.)加工的副产物,因含有多种活性成分,可能是一种潜在的天然抗氧化剂和抑菌剂来源。本研究旨在研究核桃青皮提取物的抗氧化能力和抑菌活性,为开发新的饲用抗生素替代品提供参考。以蒸馏水及25%、50%、75%和100%的甲醇、乙醇,丙酮为溶剂分别提取8和12h获得核桃青皮提取物。通过测定提取物中的总酚和总黄酮含量,根据还原能力和2,2-二苯基-1-苦肼基(DPPH)自由基清除率评价其抗氧化能力;以大肠杆菌、枯草芽孢杆菌和金黄色葡萄球菌为受试菌,分别测定抑菌圈直径、最小抑菌浓度(MIC)及抑菌率评价其抑菌活性。结果表明,有机溶剂浓度显著影响提取物中的总酚和黄酮含量(P<0.01);除丙酮外,提取时间对提取物中总酚和黄酮含量均有显著的影响(P<0.05);在所有提取溶剂中,以25%乙醇提取8h获得的总酚和黄酮最高,分别达到25.35和12.63mg·g-1。有机溶剂浓度对提取物的还原能力具有显著的影响(P<0.01),而提取时间仅对丙酮提取物的还原能力具有显著影响(P<0.05),其中25%乙醇提取物的还原能力在各处理中最高,为0.366。有机溶剂浓度对提取物的DPPH自由基清除率具有显著的影响(P<0.01),而提取时间仅对甲醇提取物的自由基清除率有显著影响(P<0.01),其中75%丙酮提取物可清除88.81%的自由基,在各处理中最高。有机溶剂浓度对大肠杆菌、枯草芽孢杆菌和金黄色葡萄球菌的抑菌圈直径和最小抑菌浓度(MIC)均有显著的影响(P<0.01);从提取时间来看,除甲醇提取物对大肠杆菌以及丙酮提取物对枯草芽孢杆菌的抑菌圈直径无显著影响外(P>0.05),其他均有显著的差异(P<0.01);此外,提取时间显著影响对大肠杆菌的MIC(P<0.05),乙醇和丙酮提取物的金黄色葡萄球菌MIC以及丙酮提取物的枯草芽孢杆菌MIC有显著差异(P<0.05),其他提取物的MIC均不受提取时间的影响(P>0.05)。抑菌率测试结果表明核桃青皮25%乙醇提取物对枯草芽孢杆菌的抑菌活性强于对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的抑制。由此可见,所有核桃青皮提取物均具有一定的抗氧化及抑菌活性,尤其以25%乙醇8h提取物的作用最好。

红花黄色素与双亚酸的抗血栓作用

目的:研究红花黄色素及双亚酸单用和二者不同比例合并使用的抗血栓作用。方法:观察双亚酸、红花黄色素以及合并后低、中、高3个剂量组对小鼠血栓块的溶解率的影响。以酶联免疫吸附法检测大鼠血浆中血栓素B2(TXB2)、6酮前列腺素F1a(6-Ke-PGF1a)、前列腺素E2(PGE2)的含量。结果:各实验组均能增加小鼠血栓块的溶解率,降低TXB2、PGE2含量和增加6-Ke-PGF1a的含量,且红花黄色素与双亚酸合并后各剂量组的作用强于红花黄色素和双亚酸单用。结论:红花黄色素、双亚酸及合并后低、中、高3个剂量组均具有抗血栓作用,且合并后的作用高于其单独作用。

新疆石榴皮多酚提取工艺研究

以新疆石榴皮为原料,采用二次通用旋转回归组合设计对超声波辅助提取石榴皮多酚工艺进行研究。对提取溶剂种类、乙醇浓度、料液比、超声时间、超声波功率等影响多酚得率的因素进行试验。结果表明,其最佳提取工艺条件为乙醇浓度50%,料液比(m:V)1:25,超声时间30min,超声波功率360W。在此优化条件下,石榴皮多酚得率达到(21.22±0.06)%。

鸡传染性贫血重组抗原间接ELISA诊断方法的建立

本研究应用重组抗原,成功建立了检测鸡传染性贫血病毒血清抗体的间接ELISA诊断方法。确定了抗原最适包被浓度为5μg/mL,血清最适稀释度为1∶100,其作用时间为60 min,酶标抗体最适作用时间为60 min,S/P≥0.24为阳性,≤0.19为阴性,介于二者之间为可疑的判定标准。该抗原不与鸡其他疾病的10种阳性血清反应,具有良好的特异性;批内重复试验,变异系数小于10%,批间重复试验,变异系数小于15%,具有良很好的重复性;该方法可检出人工接毒后20 d的血清抗体,直到试验结束110 d时,仍能检出鸡血清阳性率为81%与全病毒包被抗原ELISA方法的检测结果符合率达92%以上,与进口诊断试剂盒的符合率为97%。本研究为现地免疫鸡群抗体检测和进行CIA流行病学调查提供了一种简便的血清学诊断方法。

新疆枸杞及枸杞三七复方有效成分的抗衰老作用

探讨新疆枸杞水浸液及其与三七浸提成分复方后的抗衰老作用。采用D-半乳糖皮下注射法建立衰老实验动物模型,以黄嘌呤氧化酶法测定对照组和给药后小鼠血清总超氧化物歧化酶(SOD)的活力并以硫代巴比妥酸(TBA)法测定小鼠血清丙二醛(MDA)的含量。同时进行了实验动物抗疲劳实验检测并观察了肾脏形态学变化。结果表明,新疆枸杞单味及其与三七复方给药后小鼠血清SOD,MDA及抗疲劳等指标均与衰老模型组不同(P<0.05或P<0.01)。给药组与衰老模型组小鼠肾小球形态大小、基底膜厚度、内皮细胞窗口分布均有显著差异,新疆枸杞与三七复方后抗衰老作用更为显著。

6种酚类化合物及胡桃醌的体外抑菌活性

核桃青皮提取物具有较好的抑菌作用,本试验以核桃青皮及叶片中含量较高的7种植物次生代谢物为研究对象,评价其抑菌活性,为解析核桃青皮提取物的抑菌活性及开发新的饲用抗生素替代品提供参考。以大肠杆菌、枯草芽孢杆菌和金黄色葡萄球菌为受试菌,将7种植物次生代谢物——绿原酸、鞣花酸、丁香酸、芦丁、单宁酸、对羟基苯甲酸和胡桃醌分别稀释至1.000 0、0.500 0、0.250 0、0.125 0和0.062 5 mg/m L,采用滤纸片扩散法,以培养24 h后抑菌圈直径大小反映植物次生代谢物的抑菌活性。结果显示:除大肠杆菌对羟基苯甲酸和单宁酸不敏感外,其他植物次生代谢物对3种受试菌均有不同程度的抑制作用。对大肠杆菌抑制作用的顺序为鞣花酸>胡桃醌>芦丁=丁香酸>绿原酸>对羟基苯甲酸=单宁酸;对枯草芽孢杆菌抑制作用的顺序为鞣花酸>绿原酸=对羟基苯甲酸>丁香酸>单宁酸>芦丁>胡桃醌;对金黄色葡萄球菌抑制作用的顺序为胡桃醌>丁香酸>芦丁>单宁酸>鞣花酸>对羟基苯甲酸>绿原酸。由此得出,绿原酸、鞣花酸、丁香酸、芦丁、单宁酸、对羟基苯甲酸和胡桃醌对大肠杆菌、枯草芽孢杆菌和金黄色葡萄球菌具有不同程度的抑制作用,其中鞣花酸对大肠杆菌和枯草芽孢杆菌有较强的抑制作用,胡桃醌对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌具有较强的抑制作用。

HPLC法测定新疆巴旦杏中苦杏仁苷的含量

为了建立新疆巴旦杏中苦杏仁苷的HPLC定量测定方法,采用乙醇回流提取法提取苦杏仁苷,以ZirchromC18色谱柱（250 mm×4.6 mm,10μm）为固定相,甲醇∶水∶冰醋酸（20∶80∶0.05）为流动相,流速为1.0mL/min,检测波长为210 nm,柱温为35℃。测定结果显示,苦杏仁苷在20.0-70.0μg/mL成良好的线性关系,r=0.999 9,日内、日间RSD均为0.59%（n=5）,平均回收率99.6%（n=6）。研究表明,该方法灵敏度高,结果准确,重现性好,方法简便可行,适用于新疆巴旦杏中苦杏仁苷的含量测定,并为其质量控制提供理论依据。

甜菜红素恢复HeLa、HepG2和A549细胞线粒体形态完整和促进细胞核坏死的作用

目的研究甜菜红素对人宫颈上皮癌HeLa细胞、人肝癌HepG2细胞和人肺腺癌A549细胞线粒体和细胞核等超微结构的影响。方法分别将0、62.5和500 ppm甜菜红素加入HeLa、HepG2和A549细胞培养36 h,在8 000~30 000倍透射电子显微镜下,观察细胞核、线粒体等细胞超微结构,并计算线粒体数量和截表面积。结果 HeLa、HepG2和A549肿瘤细胞核具备肿瘤细胞的特征,并且线粒体肿胀、脊膜结构消失。加入62.5 ppm甜菜红素时,HeLa、HepG2和A549细胞的线粒体计数分别增加10.9%、25.0%和12.6%,截表面积较0 ppm浓度组分别减小38.9%、70.1%和65.3%;加入500 ppm甜菜红素时,HeLa、HepG2和A549细胞的线粒体计数分别增加15.2%、79.7%和40.0%,截表面积较0 ppm浓度组分别减小67.8%、77.6%和81.9%;并且线粒体内膜结构趋于完整。加入500 ppm甜菜红素时,以上三种细胞均出现核分裂、固缩和溶解的坏死相。加入甜菜红素时,HeLa和A549细胞出现凋亡小体,HepG2和A549细胞出现自噬体。结论甜菜红素可促进肿瘤细胞线粒体形态结构恢复,引起细胞核坏死和细胞死亡。