抗无乳链球菌天然产物的筛选

基于MedChemExpress天然产物库筛选对无乳链球菌有抗菌效果的天然产物,采用成药性预测工具Swisse-ADME分析其成药性,并测定抗菌天然产物对人源、奶牛源、鱼源等不同来源菌株的最小抑菌浓度、最小杀菌浓度和最小生物被膜清除浓度。结果表明:从2443个天然产物中共鉴定出104个对无乳链球菌有显著抗菌效果的天然产物,其中15个成药性前景较好的天然产物,其最小抑菌浓度介于4~256μg·mL^(-1)之间,藤黄酸、血根碱、白屈菜红碱、冬凌草甲素和积雪草酸等5个天然产物对无乳链球菌的最小杀菌浓度介于4~64μg·mL^(-1)之间,最小生物被膜清除浓度介于32~128μg·mL^(-1)之间,具有开发成新型无乳链球菌抗菌药物的潜力。

产气荚膜梭菌噬菌体及乳酸杆菌联用改善肉鸡生长性能和调节肠道菌群功能研究

【目的】明确产气荚膜梭菌噬菌体及乳酸杆菌联用对肉鸡的生产性能、肠道形态结构及微生物多样性的影响,为禽健康养殖中产气荚膜梭菌的感染提供关键防控技术。【方法】选取240只1日龄青脚麻鸡,随机分为4组:HN02噬菌体组、乳酸杆菌组、HN02噬菌体+乳酸杆菌联用组及空白对照组,每组6个重复,每个重复10只鸡,试验期14 d,期间连续每天饮用噬菌体和/或乳酸杆菌。统计平均日采食量(ADFI)、平均日增重(ADG)及料重比(F/G),计算脏器系数。取盲肠内容物测定产气荚膜梭菌数量,并对16S rRNA基因进行扩增,分析肠道微生物群落结构和多样性。【结果】与空白对照组相比,HN02噬菌体+乳酸杆菌联用能显著提高雏鸡平均日增重及绒毛高度/隐窝深度(P<0.05),显著降低雏鸡料重比和空肠、回肠隐窝深度(P<0.05),且处理14 d的抑菌效果最佳,产气荚膜梭菌的数量减少1.17 lg CFU/mL。微生物多样性显示,HN02噬菌体+乳酸杆菌联用饮水后雏鸡盲肠内容物菌群中变形菌门、厚壁菌门、放线菌门及拟杆菌门相对丰度较高,属水平中乳杆菌属相对丰度较高,与空白对照组相比,HN02噬菌体+乳酸杆菌联用连续饮用14 d后葡萄球菌属相对丰度较低。【结论】产气荚膜梭菌噬菌体和乳酸杆菌联用能够改善肉鸡的生长性能及肠道发育,维持肠道微生物群落的多样性,在养禽业的产气荚膜梭菌感染的预防中有巨大应用潜力。

不同畜禽来源产气荚膜梭菌的耐药性分析

鉴定来源于畜禽养殖中的产气荚膜梭菌(Cp)的毒力型,分析其耐药特性及耐药基因携带情况,为Cp引起的疾病防控及公共卫生提供参考依据。采集来自于畜禽养殖场中的样品,分离并鉴定Cp。利用微量肉汤稀释法分析鸡、羊、牛分离株对10种抗生素的敏感特性,PCR鉴定毒力型及耐药基因。经鉴定,52株三种不同来源分离株经鉴定属于A型,耐药分析表明不同来源的Cp对10种抗生素均呈现不同程度的耐药特性,其中对克林霉素(42.31%)和四环素(40.38%)的耐药率较高,对青霉素、氯霉素、氨苄西林、甲硝唑、万古霉素、美罗培南、莫西沙星、头孢曲松耐药率为11.54%~25.00%。鸡源分离株对四环素(12/29,41.38%)耐药率最高,而羊源和牛源的分离株分别对克林霉素表现出高耐药率62.50%(5/8)、73.33%(11/15)。耐药基因分析表明四环素类tet A为主要耐药基因。本研究明确了不同来源(鸡、羊、牛)Cp毒力型,其耐药严重且普遍携带四环素类耐药基因,从而表明Cp耐药性对畜禽养殖场造成重要威胁,同时对Cp引起的疾病有效防治提供参考依据。

单核细胞增生李斯特氏菌内化素InlJ对噬菌体敏感性及生物被膜形成的影响

为深入探索单核细胞增生李斯特氏菌(Listeria monocytogenes,Lm)inlJ基因在噬菌体敏感性和生物被膜中的作用及功能,本研究通过同源重组构建inlJ基因缺失株Lm NJ05-ΔinlJ,鉴定其生长、黏附及侵袭特性,解析其对噬菌体敏感性和生物被膜形成中的作用机制。结果表明:与野生型Lm NJ05相比,构建的缺失株Lm NJ05-ΔinlJ对RAW264.7细胞的黏附率和侵袭率分别为20.05%和4.42%,黏附和侵袭能力显著减弱;Lm NJ05-ΔinlJ对李斯特菌噬菌体vB-LmoM-NJ05的成斑率提高至2.72倍;体外裂解分析表明噬菌体vB-LmoM-NJ05对缺失株Lm NJ05-ΔinlJ裂解效果更强;噬菌体效价分别在105PFU/mL和108PFU/mL能够完全抑制和清除Lm NJ05-ΔinlJ生物被膜;生物被膜形成相关基因的转录分析表明,噬菌体作用缺失株Lm NJ05-ΔinlJ后,degU、agrA、agrD、luxS、yneA、recA和hpt基因的转录均下调(表达水平趋向于0)。由此可见,inlJ基因的缺失能够增强Lm对噬菌体敏感性,下调Lm对细胞侵袭力和生物被膜形成能力。因此,内化素基因inlJ不仅具有调控Lm自身的作用,还能够调节其对噬菌体的相互作用,为噬菌体的生物防控技术开发和应用奠定基础。

噬菌体和枯草芽孢杆菌联用对蛋鸡生产性能、蛋品质、卵巢及输卵管的影响

试验旨在研究产气荚膜梭菌噬菌体、沙门氏菌噬菌体及枯草芽孢杆菌联用对蛋鸡生产性能、蛋品质、卵巢及输卵管的影响。试验选取126只260日龄海兰褐蛋鸡,随机分成6组,每组3个重复,每个重复7只。对照组饮用清水,SD72噬菌体组、SD72噬菌体+枯草芽孢杆菌组、JDF1-6噬菌体组、SD72/JDF1-6噬菌体+枯草芽孢杆菌组和SD72噬菌体+抗生素组(0.0075%金霉素、0.0004%杆菌肽),分别在不同饮水器中按体积比为1∶100在饮水中添加1010PFU/mL噬菌体原液、1010PFU/mL枯草芽孢杆菌及抗生素,试验期42d,记录采食量、平均日增重、产蛋量,分析蛋品质、卵巢及输卵管组织变化。结果显示:与对照组相比,饮水1~42d后SD72噬菌体组、SD72噬菌体+枯草芽孢杆菌组、SD72/JDF1-6噬菌体+枯草芽孢杆菌组蛋鸡产蛋率显著提高(P<0.05),料蛋比显著降低(P<0.05);饮水29~42 d后,SD72噬菌体组、SD72噬菌体+枯草芽孢杆菌组、SD72/JDF1-6噬菌体+枯草芽孢杆菌组蛋壳重、哈氏单位显著提高(P<0.05);42d饲喂周期中各组蛋鸡的卵巢和输卵管形态均无异常,卵泡发育正常,未见减少和闭锁,输卵管膨大部无炎性反应。结果表明,产气荚膜梭菌噬菌体、沙门氏菌噬菌体和枯草芽孢杆菌联用42d能提高蛋鸡生产性能、蛋品质,对卵巢和输卵管发育无副作用。

沙门氏菌裂解性噬菌体的分离鉴定及其生物学特性

从家禽屠宰场污水中,以肠炎沙门氏菌ATCC13076和禽沙门氏菌CVCC2184为宿主菌,分离到两株裂解性沙门氏菌噬菌体,分别命名为v B_Sen M-PA13076(简称PA13076)和v B_Sen M-PC2184(简称PC2184)。同时对这两株噬菌体进行了噬菌斑、噬菌谱系(含耐药菌)、形态学(透射电镜)、遗传物质、酸碱及热稳定性、最佳感染复数、一步生长曲线等生物学特性研究。结果表明:两株噬菌体的裂解空斑均透亮清晰;除对本身宿主菌产生强裂解作用,还裂解其他沙门氏菌,为宽噬菌谱,其中PA13076能强裂解一株耐氨苄青霉素ATCC13076转化菌株(A+13076),PC2184则能裂解另一株耐氨苄青霉素CVCC2184转化菌株(A+2184);电镜观察这两株噬菌体均为肌尾病毒科;遗传物质为ds DNA;p H值和温度耐受能力较好;PA13076、PC2184最佳感染复数分别为0.01、10,潜伏期分别为20、30 min,爆发期分别为70、60 min,平均爆发量分别为21、23。

宽噬菌谱肠炎沙门氏菌噬菌体的生物学特性

以肠炎沙门氏菌为宿主菌,对从鸡场粪尿污水中分离到的肠炎沙门氏菌噬菌体PSA-6a进行生物学特性鉴定。利用双层平板法分离裂解性噬菌体,并采用噬菌斑形态观察、透射电镜分析、噬菌谱测定、最佳感染复数和一步生长曲线等试验对分离到的噬菌体进行生物学特性鉴定。结果表明该噬菌体在宿主菌ATCC 13076平板上形成的噬菌斑为透亮的空斑,直径为0.5～1.0 mm,边缘清晰,无晕环;它具有宽噬菌谱的特性,不仅可强裂解宿主菌ATCC 13076,还可裂解其他4株沙门氏菌和1株大肠杆菌K88;透射电镜观察显示此噬菌体头部呈圆形,直径约81 nm,有一长尾,尾长约200 nm;一步生长曲线显示PSA-6a潜伏期为60 min,爆发期为50 min,裂解量为22;最佳感染复数为1。

鸡血清中三聚氰胺高效液相色谱检测方法的建立

以鸡血清为研究对象,考察了不同洗涤液和洗脱液浓度对三聚氰胺提取效率的影响。建立了鸡血清中三聚氰胺残留的简便高效液相色谱法,该方法采用NH2柱作为色谱分析柱,95%乙腈水溶液为流动相,样品经阳离子交换固相萃取柱净化、富集后,在紫外检测器214 nm处用高效液相色谱仪测定,保留时间在14～15 min。三聚氰胺浓度在0.05～5.0μg/ml范围内,相关系数(r)为0.999 9;在空白鸡血清样品中添加0.1μg/ml、1.0μg/ml和5.0μg/ml浓度的回收率为78.05%～88.69%,相对标准偏差(RSD)为1.15%～8.33%;样品检测定量限为0.1μg/ml。

噬菌体cocktail JS-SP1对沙门菌流行菌株混合感染的裂菌动力学及灭菌效果研究

目的研究沙门菌噬菌体cocktail JS-SP1对沙门菌流行菌株混合感染的裂菌动力学及灭菌效果。方法从50份污水及粪样样品中分离获得6株高裂菌活性的沙门菌噬菌体,将其按等比例混合制成沙门菌噬菌体cocktail JS-SP1,通过测定A600分析其对6株沙门菌流行菌株混合菌液的裂菌动力学,并且对0、4和10h这3个时间点的活细菌计数,分析JS-SP1的灭菌效果。结果与混合细菌组、单株噬菌体处理组相比,JS-SP1处理组可以有效而且快速降低混合液的A600值。与其他处理组相比,4h时,JSSP1处理组细菌数下降极显著(P<0.01);10h时,降到10CFU以下(P<0.01)。结论噬菌体cocktail JS-SP1对混合细菌感染具有快速彻底的灭菌能力,其有可能成为一种有效控制沙门菌污染的潜在治疗手段和产品。

沙门氏菌噬菌体在动物和食品中的生物防控研究进展

随着沙门氏菌耐药性持续发展、耐药菌不断出现以及食物中毒事件频发,噬菌体已成为一种新型防控耐药性沙门氏菌的生物杀菌剂。噬菌体的作用机制与抗生素完全不同,在控制耐药性沙门氏菌感染与污染方面具有良好的应用前景,尤其在治疗超级耐药沙门氏菌方面有着极大的优势,但是由于沙门氏菌血清型众多,需要开展针对不同血清型的沙门氏菌特异性噬菌体的分离和鉴定,这样的噬菌体疗法更具有针对性,从而成功应对新出现的沙门氏菌。本文综述了沙门氏菌危害、沙门氏菌噬菌体及商用沙门氏菌噬菌体制剂的研究进展、沙门氏菌噬菌体生物防治的研究进展和最新发现,重点介绍沙门氏菌噬菌体在食品工业中的应用,为噬菌体作为抗菌剂防控沙门氏菌提供借鉴和参考。

微生物法测定抗菌素残留灵敏度的影响因素概述

微生物法检测兽药残留的原理是利用了动物组织液中残留的抗菌药物可以抑制或杀死微生物,从而在药液周围形成肉眼可见的抑菌圈。本文综述了影响微生物法测定抗菌素残留灵敏度的主要因素,包括工作菌种的选择,菌液浓度的确定,载药量的工具,培养基的成分、厚度、pH,方法制定过程中空白组织样的选择,并阐述了几种主要微生物方法的应用。

两种防霉剂抑制黄曲霉菌及禾谷镰刀菌的生长和饲料防霉效果研究

研究的主要目的是评估并比较丙酸钙复合型和高效复合型防霉剂抑制黄曲霉菌及禾谷镰刀菌的生长和饲料防霉效果。研究采用体外抑菌(禾谷镰刀菌F.0705和黄曲霉菌)试验和饲料破坏性试验两种方法进行。结果表明:两种防霉剂对禾谷镰刀菌(F.0705)和黄曲霉菌均有抑制作用,而且,随着防霉剂浓度的增大,其抑菌效果增强;从饲料破坏性试验来看:在第9 d和13 d采样时,两种防霉剂处理过的饲料霉菌总数极显著低于空白对照组(P<0.01),而且添加的防霉剂浓度越大,饲料中霉菌总数越少。总体来看,高效复合型防霉剂的抑制效果优于丙酸钙复合型。

乳腺发育和乳腺疾病中细胞凋亡基因的表达规律及其调控

阐述了细胞凋亡的形态变化、细胞凋亡的途径以及细胞凋亡在乳腺发育过程和乳腺疾病的发生及防御中的表达。研究乳腺细胞凋亡的基本规律和基因调控过程,能更好的了解乳腺发育过程,并用相关基因作为诊断乳腺疾病的指标。

多种噬菌体单独及混合使用的喷雾灭菌研究

以大肠杆菌噬菌体EK99-C为例分析噬菌体EK99-C在空间的喷雾灭菌效率,5mL、1×104CFU/mL的大肠杆菌K99进行人工喷洒污染,5min后喷洒1×109PFU/mL的噬菌体5mL,并且在喷洒后0.5、1、2h分别检测残存的大肠杆菌K99数量。然后,以与大肠杆菌噬菌体喷雾灭菌实验中所用的相同剂量的细菌和噬菌体数量对其他5株食源性致病菌(其中涉及大肠杆菌、沙门氏菌、志贺氏菌和李斯特菌)的噬菌体进行喷雾灭菌实验,并只在喷洒后2h检测残存的细菌数量。结果表明:喷洒噬菌体EK99-C后,在0.5、1、2h时平板上的残存的细菌数均接近于0CFU,其中2h时噬菌体EK99-C灭菌更彻底;噬菌体单独作用组和按体积比等比例混合作用组,均能有效杀灭宿主菌,其中,噬菌体PSA-116喷雾灭菌效果最好,能杀灭100%的宿主菌,噬菌体EK88-4、EK99-C和FWLLm3的杀灭效率约为99%左右。而噬菌体SS-92和PSA-6以喷雾灭菌的方式可杀灭约80%的宿主菌。6种噬菌体按体积比等比例混合作用后2h时的细菌残存个数少于18.50CFU,杀菌效率大于98.7%。

甜菜碱与脂肪代谢

甜菜碱作为一种新型饲料添加剂,具有提供甲基,促进脂肪代谢的作用,可降低或重新分配体内脂肪。甜菜碱可以广泛用于猪、鸡、以及水产动物饲料中,可以降低许多家畜肝脏脂肪合成速度,具有明显的抗脂肪肝效应。所以,甜菜碱对动物具有保健和预防疾病的功能。本文就甜菜碱调节脂肪代谢的作用机理、抗脂肪肝效应及在实际应用效果作一综述。

乳腺炎病原菌的致病机理与防治的研究进展

奶牛乳房炎是一种主要由细菌引起的疾病,给世界各国奶牛业造成了巨大的经济损失。但是,人们对奶牛乳腺炎的病原菌发病机理还不是十分了解。文章就乳腺炎病原菌的发病机制及防治的基础研究进展进行了综述。

HPLC法同时测定鸡排泄物中环丙氨嗪和三聚氰胺残留

建立了鸡排泄物中环丙氨嗪和三聚氰胺残留的简便高效液相色谱法。该方法采用NH2柱作为色谱分析柱,V(乙腈):V(水)=97:3溶液为流动相。样品经阳离子交换固相萃取柱净化、富集后,在紫外检测器214 nm处用高效液相色谱仪测定,保留时间分别为10～11 min和18～19 min。环丙氨嗪和三聚氰胺质量浓度在0.1～5.0μg/mL范围内,决定系数分别为0.999 9和0.999 5。在空白样品中添加环丙氨嗪和三聚氰胺质量比为0.5 mg/kg、1 0 mg/kg和2.0 mg/kg时,环丙氨嗪和三聚氰胺的回收率分别为77.52%～87.56%和68.95%～87.60%,相对标准偏差(RSD)均在5.54%～10.29%。环丙氨嗪的检测限为0.1 mg/kg,三聚氰胺的检测限为0.1 mg/kg。以鸡排泄物为研究对象,考察了不同提取液对环丙氨嗪和三聚氰胺提取效率及净化效果的影响,符合兽药残留分析的要求。

拭子法筛选抗菌药物敏感菌种和最适培养基

以抑菌圈直径大小和最低检测限为衡量标准，筛选敏感菌种和最适培养基，为饲料与食品中抗菌药物残留的高通量快速检测提供参考。试验以枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）CMCC63501、巨大芽孢杆菌（Bacillus megaterium）ACCC10245和藤黄微球菌（Micrococcus luteus）CMCC（B）28001为测试菌，采用MH琼脂、培养基Ⅰ、抗生素检定用培养基（AM-5）为检测用培养基。结果表明，以枯草芽孢杆菌CMCC63501和MH琼脂为组合搭配时，除了氟苯尼考（2．0μg／ml）和泰乐菌素（0．4μg／ml）外，环丙沙星、恩诺沙星、红霉素和金霉素在磷酸盐缓冲液中的最低检测限均低于中国规定的最高检测限量（MRL）。环丙沙星、恩诺沙星和红霉素在磷酸盐缓冲液中的线性范围为0．05～0．80μg／ml、金霉素为0．075～2．00μg／ml时，相关系数分别达到0．9967、0．9936、0．9947、0．9953。结果提示，对环丙沙星、思诺沙星、红霉素、金霉素4种抗菌药物的最敏感菌种是枯草芽孢杆菌CMCC63501，最适培养基为MH琼脂。对氟苯尼考和泰乐菌素的检测限未达到国家规定的MRL，CMCC63501和MH培养基组合尚待进一步研究完善。

粪源抗生素金霉素和喹乙醇在养殖水体中的残留及对锦鲤的生态毒理效应研究

用含不同剂量金霉素和喹乙醇的猪粪饲喂锦鲤,分别测定摄食10、20和30d时肌肉组织中抗生素含量、体表和消化道微生物数量,试验结束时对肝脏中超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性和脂质过氧化物丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量进行了测定。结果表明,猪粪中金霉素和喹乙醇在养殖水体中溶出存在较大差异,从试验第1d到结束养殖水体中喹乙醇浓度Ⅲ和Ⅳ组分别为0.05～0.32mg·kg-1和0.12～0.70mg·kg-1,锦鲤肌肉组织中喹乙醇浓度Ⅲ和Ⅳ组在试验的10、20和30d分别为1.87、5.25、3.83mg·kg-1和2.96、4.33、4.23mg·kg-1。没有在水环境和锦鲤体内检测到金霉素。锦鲤体表和消化道微生物随着加样次数增加,数量也急剧上升。猪粪中的成分能显著降低SOD酶活性,增加MDA含量,而加入金霉素和喹乙醇也未能使锦鲤肝脏SOD活性和MDA含量恢复到机体正常水平。

大肠杆菌K88噬菌体的分离鉴定及其生物学特性

分离鉴定裂解性产肠毒素性大肠杆菌(ETEC)K88噬菌体,并研究其生物学特性及裂菌效力。用双层平板法从猪场污水中分离噬菌体,通过透射电镜和酶切基因组对获得的噬菌体进行鉴定;同时测定了噬菌体最佳感染复数、一步生长曲线、酸碱稳定性、热稳定性等噬菌体的生物学特性及其体外裂菌效力。结果表明分离获得了一株产肠毒素性大肠杆菌K88强裂解性噬菌体,命名为PK88-4;其噬菌斑清晰透亮,周围无晕环;电镜显示:其头部呈正多面体对称,有可伸缩性尾部;核酸类型为双链DNA(基因组大小约60 kb);该噬菌体能耐受60℃左右高温、在pH值为5～10内效价稳定;最佳感染复数为0.01;潜伏期为10 min,暴发期为40 min,裂解量为40;在5 h内对培养液中的大肠杆菌杀灭率将近100%。PK88-4是一株强裂解性肌尾科大肠杆菌K88噬菌体,具有裂解周期短、杀菌能力强等特点,为畜牧业防治产肠毒素性大肠杆菌K88感染提供了新的思路。