肉鸡圆圈病毒3型和A型多杀性巴氏杆菌混合感染的检测与分析

为查明福建省龙岩市某鸡场肉鸡消瘦、呼吸困难、病死率升高原因,对发病鸡进行细菌分离鉴定、16S rDNA鉴定、荚膜分型检测、药物敏感试验等分析;以及进行病毒核酸PCR检测、遗传进化分析。结果显示,从病鸡中分离的细菌在血平板上形成圆形、微突起、表面光滑、奶油状的菌落;分离菌16S rDNA核苷酸序列与GenBank中公布的多杀性巴氏杆菌的同源性达到99.9%以上,菌株荚膜为A型;该菌对哌拉西林、头孢氨苄、庆大霉素等药物均表现为高度敏感;从病鸡中检测出圆圈病毒3型(GyV3)VP2基因,与GenBank(登录号MK089248)GyV3同源性最高(99.9%)。结果表明,该鸡场发生圆圈病毒3型和A型多杀性巴氏杆菌引起的混合感染病例。

一只流浪犬体表寄生蜱的种类鉴定及其携带病原体的检测与分析

【目的】鉴定一只来自浙江嘉兴的流浪犬体表寄生的蜱种类及其携带病原体情况,了解血红扇头蜱(Rhipicephalus sanguineus)的生活史及其携带的病原体对人和动物的危害,为后续防治相关疾病提供措施。【方法】分别采用光学显微镜观察和PCR方法对蜱进行形态学和分子种类鉴定;同时分别针对梨形虫目和巴贝斯虫属的18S rRNA、斑点热群立克次氏体ompA、埃立希体dsb和伯氏疏螺旋体5S~23S rRNA基因进行PCR扩增,检测蜱携带病原体情况。【结果】从该流浪犬体表采集的82只蜱均为血红扇头蜱,其中24只蜱携带泰勒虫属,阳性率为29.27%(24/82);4只携带Colpodella sp.,阳性率为4.88%(4/82);2只携带巴贝斯虫属,阳性率为2.44%(2/82);21只携带斑点热群立克次氏体,阳性率为25.61%(21/82);15只携带埃立希体,阳性率为18.29%(15/82);未发现有蜱携带伯氏疏螺旋体。在单只蜱中检出的病原体数量和种类都各不同,其中有24只蜱仅携带1种病原体;12只蜱同时携带2种病原体;6只蜱同时携带3种病原体;有40只蜱未携带所检病原体。【结论】该流浪犬体表寄生的蜱为血红扇头蜱,其携带了泰勒虫属、巴贝斯虫属、斑点热群立克次氏体、埃立希体多种病原体,可对人和动物造成较大的威胁,应加强对该地区蜱的防控,尤其是加强对流浪犬的管理。

国内部分动物园与花鸟市场鹦鹉热衣原体病原学检测

为了解国内动物园与花鸟市场鸟群中鹦鹉热衣原体(Chlamydia psittaci,Cps)的流行现状,通过构建TaqMan荧光定量PCR方法,对江苏省和北京市3处采样点采集的168份禽鸟粪便样本进行了检测,并基于OmpA基因对阳性样本进行了基因序列分析。结果显示:在江苏省1处花鸟市场检出31份Cps阳性,个体阳性率为41.3%(31/75),在其他2处动物园采样点未检出阳性;阳性样品来自虎皮鹦鹉(23份)、牡丹鹦鹉(5份)、玄凤鹦鹉(2份)和珍珠鸟(1份)。在阳性样本中,共扩增出18个OmpA基因片段,其中16份样本的基因序列相同,与另外2份阳性样本序列不在同一分支,但所有阳性样本均属于基因A型。结果表明,花鸟市场存在较高的Cps流行风险,感染源较为集中。结果提示,各地应着重加强花鸟市场Cps流行的防控,严格落实相关监管措施,加强检疫监管,从而降低Cps传播率并保障公共卫生安全。

植物精油对断乳仔猪生长性能及免疫功能的影响

试验通过在断乳仔猪饲料中加入不同浓度植物精油,研究不同浓度植物精油对断乳仔猪生长性能和免疫反应的影响。从猪群中挑选120头体重接近的健康断乳仔猪作为试验动物,采用随机分组的方法,将断乳仔猪随机分成4组,每组3个重复,每个重复10头断乳仔猪。Ⅰ组:空白组,饲喂基础日粮;Ⅱ组:在基础日粮中加入200 mg/kg植物精油;Ⅲ组:在基础日粮中加入400 mg/kg植物精油;Ⅳ组:在基础日粮中加入600 mg/kg植物精油。试验期21 d。结果表明:在生长方面,4个组的平均初重、平均日采食量和料重比进行比较时,无显著差异(P>0.05);与Ⅰ组相比,Ⅱ组、Ⅲ组、Ⅳ组的平均末重均超过Ⅰ组,但并未达到显著差异水平(P>0.05);Ⅱ组、Ⅲ组和Ⅳ组的平均日增重均显著高于I组(P<0.05),平均日增重分别提高了4.56%、5.67%、4.43%。在腹泻率方面,Ⅱ组、Ⅲ组和Ⅳ组的腹泻率均显著低于I组(P<0.05),分别降低了28.78%、28.36%、27.94%;Ⅱ组、Ⅲ组和Ⅳ组之间腹泻率差异不显著(P>0.05)。在免疫方面,4个组的血清IgA、IgM含量差异均不显著(P>0.05);Ⅱ组、Ⅲ组的IgG含量均显著高于I组(P<0.05),分别提高了16.17%、14.89%。由此可见,饲喂植物精油能够改善断乳仔猪的生长性能、有效降低断乳仔猪腹泻率,增强断乳仔猪机体体液免疫。

PCV2对体外培养仔猪脾细胞分泌细胞因子的动态影响

为进一步了解猪圆环病毒2型(PCV2)引起断奶仔猪多系统衰竭综合征的机理,选取5头35日龄PCV2血清抗体阴性的断奶仔猪,无菌取脾脏制成单个细胞悬液,体外培养,分PCV2感染组与对照组。分别在培养后0 h、6 h、12 h、24 h收获细胞培养上清,用猪特异性ELISA试剂盒测定上清中白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)和白细胞介素10(IL-10)的含量。结果显示:病毒组IL-1β和IL-6在不同时间点的含量变化均不显著(P>0.05),IL-1β在6 h、24 h略高于对照组,12 h则低于对照组;IL-6除在6 h高于对照组外,其余时间点均低于对照组;病毒组TNF-α和IL-10的含量在6 h、12 h、24 h均高于对照组,且TNF-α在6 h和24 h极显著升高(P<0.01),而IL-10在12 h显著高于对照组(P<0.05)。上述结果表明:PCV2能影响体外培养的仔猪脾细胞某些细胞因子的分泌,而且可能通过TNF-α的高表达促使机体产生全身炎症反应综合征甚至多系统衰竭,而通过IL-10的高表达促使机体产生免疫抑制。

犬β-防御素cBD103的原核表达和纯化

将犬β-防御素103(canineβ-defensin 103,cBD103)基因亚克隆至原核表达载体pET-32a(+),构建重组表达质粒pET-cBD103,转化大肠埃希菌BL21感受态细胞,IPTG诱导表达后,利用Ni-NTA亲和层析纯化该蛋白,并用肠激酶酶切融合蛋白,SDS-PAGE鉴定表达产物和纯化产物。结果表明,质粒pET-cBD103经PCR及双酶切鉴定证明构建正确,大肠埃希菌中成功表达出目的蛋白,蛋白大小约为24ku,以可溶性表达为主。经过纯化和酶切,得到大小8ku的cBD103,与预期大小一致。该研究在大肠埃希菌中表达了目的蛋白,为下一步大规模制备cBD103奠定了基础。

黏膜免疫:在动物疫病免疫防控中的重要地位和作用

黏膜是动物机体内表面积最大的一个组织,由呼吸道、消化道、泌尿生殖道、眼角膜、内耳以及多种外分泌腺的管道黏膜所构成.它是动物机体与内、外环境进行物质交换和信息交流的重要部位,同时也是多种病原微生物及其他抗原侵入机体的主要门户.报道指出：95%以上的传染病病原微生物的入侵门户是由黏膜入侵机体.

规模化猪场流行性腹泻防控案例分析

猪流行性腹泻是由猪流行性腹泻病毒(Porcine Epidemic Diarrhea Virus,PEDV)引起的急性、高度接触性传染病。其毒株的高度变异性给该病的防控带来了难度。福建某规模化养猪场发生腹泻疫情,通过胶体金检测确诊为猪流行性腹泻病毒感染。疫病初期通过返饲与疫苗肌肉注射等方式进行防控,疫情未得到有效控制。为快速控制疫情,结合猪流行性腹泻病毒的发病与排毒规律,从"降低排毒、激发黏膜免疫、构筑免疫屏障、切断传染源、加强饲养管理"等角度,提出"三打两喷+仔猪喷鼻"的疫情防控方案,方案执行1周,腹泻疫情得到有效控制,发病率由90%以上降低到8.60%。同时,该方案在四川地区24个规模猪场得到了有效的验证。

丁酸对大肠杆菌生长曲线的影响

本试验主要研究丁酸对大肠杆菌生长曲线的影响,并用醋酸进行对比试验,为丁酸代替饲用抗生素的研究提供一定的依据。采用牛津杯法检测丁酸、醋酸(0.125%~4%)对大肠杆菌的抑菌效果;并使用酶标仪测定细菌在LB肉汤(0.025%~0.1%)中0~24 h的OD600值,根据相应数值绘制大肠杆菌的生长曲线。在牛津杯法中,4%丁酸、醋酸抑菌效果最好,抑菌圈直径分别达22 mm、28 mm;浓度为0.5%时,抑菌圈直径仅为9 mm、10 mm;浓度为0.25%、0.125%时,没有出现明显的抑菌圈。酶标仪测OD值法中,丁酸、醋酸浓度为0.1%时,大肠杆菌经过24 h检测其OD_(600)值基本不变;浓度为0.075%的OD值在19 h才有轻微增长。丁酸和醋酸对大肠杆菌生长均有抑制作用,浓度越高对大肠杆菌的生长抑制作用越大。

猪流行性腹泻防控难点及注意事项

猪流行性腹泻（Procine Epidemic Diarrhea,PED）是由冠状病毒属猪流行性腹泻病毒（Procine Epidemic Diarrhea Virus,PEDV）引起的一种急性、高度接触性猪肠道传染病,临床上常引起以产房仔猪为主的猪只发病。仔猪感染PEDV后,出现以呕吐、脱水和水样腹泻为主要特征的临床症状。该病多发于冬春季节,不同猪场发病率存在较大差异,但病死率很高,给猪场生产带来极大危害。1 PED流行病学特征猪是PEDV的自然宿主,不同品种、年龄、性别的猪均易感。

我国PEDV毒株结构蛋白遗传变异情况分析

猪流行性腹泻是由猪流行性腹泻病毒引起的急性、高度接触性传染病。2010年前,我国主要以散发为主;2010年后,该病在我国全面暴发。大量的研究表明,PEDV毒株发生了变异。文章对PEDV的4个结构蛋白的变异情况进行了分析,对其变异方式和程度进行了阐述。在编码PEDV结构蛋白的基因中,S基因变异程度最大,变异主要发生在S1区域,变异方式涵盖插入、缺失和突变;M基因、E基因和N基因则相对保守,但也出现了一定程度的进化和变异的趋势,变异方式主要为突变。对于不断涌现的变异株,需要正确地、客观地认识毒株与疫苗效果之间的关系。

猪流行性腹泻防控难点及注意事项

猪流行性腹泻（Procine Epidemic Diarrhea,PED）是由冠状病毒属猪流行性腹泻病毒（Procine Epidemic Diarrhea Virus,PEDV）引起的一种急性、高度接触性猪肠道传染病,临床上常引起以产房仔猪为主的猪只发病。仔猪感染PEDV后,出现以呕吐、脱水和水样腹泻为主要特征的临床症状。该病多发于冬春季节,不同猪场发病率存在较大差异,但病死率很高,给猪场生产带来极大危害。

猪流行性腹泻病毒S基因全序列扩增方法的建立及应用

为解决现有猪流行性腹泻病毒(PEDV)S基因全序列获得方法存在的成功率低、操作繁琐的问题,针对NCBI中已知PEDV S基因上下游序列,筛选保守区域用于RT-PCR扩增引物的设计,并从特异性、灵敏性以及临床应用效果等方面对该方法进行了验证。结果显示,成功建立了一种可通过1对引物实现PEDV S基因全序列及其上下游部分片段体外扩增的RT-PCR方法,最适退火温度为52℃。该方法具有高度的特异性,仅可与PEDV的cDNA发生反应,不与猪其他常见病原的cDNA或DNA发生交叉反应;具有良好的灵敏性,检测限为4.44×10^(4)copies/μL;具有良好的普适性,10份PEDV临床阳性样品均可扩增出预期大小的目的片段,并成功实现了S全基因测序和遗传进化分析。该方法的建立简化了S基因全序列体外扩增的方法,提高了体外扩增的成功率。

猪圆环病毒体外高效增殖研究进展

猪圆环病毒相关疾病(porcine circovirus diseases,PCVDs)主要通过疫苗产品进行预防,病毒增殖水平与疫苗研发密切相关,随着新发病原PCV3和PCV4的出现和广泛流行,对于实现此类病毒体外高效增殖,已经成为开展相应病毒病原学、发病机制及其疫苗研究方面的瓶颈。鉴于4种猪圆环病毒(PCV)在基因组结构、复制机制等方面的相似性,现对其中已实现体外培养的PCV2,在促进其病毒增殖方面的方法和研究进展进行总结和概括,以期进一步提升现有PCV2增殖水平,并对实现PCV3或PCV4的体外培养提供助力,从而促进PCV疫苗的研发和相关病原学与发病机制的深入研究。

四川省部分猪场猪链球菌病免疫前后的病原及抗体调查

猪链球菌是重要的人兽共患病病原。本研究通过对四川省部分规模猪场猪链球菌灭活疫苗免疫前、一次免疫后及二次免疫后,分别对猪进行三次采样,检测猪扁桃体拭子中的病原和血清样本抗体水平。结果表明:与免疫前相比,二次免疫后60 d,猪链球菌带菌率由8.75%降到0,而抗体阳性率11.25%上升到100%。同时,部分未免疫猪群存在猪链球菌的隐性感染,猪链球菌病灭活疫苗免疫后,明显减少了猪群中猪链球菌的带菌率,整个猪群未发生猪链球菌病病例。免疫预防有效降低了猪群中猪链球菌带菌率和感染率,是防控猪链球菌病的重要措施之一。

嵌合口蹄疫病毒VP1抗原基因的重组脑心肌炎病毒的构建及鉴定

将口蹄疫病毒(FMDV)VP1全长、VP1 B细胞表位(135~160、198~213aa)和T细胞表位(20~40aa)组合为不同长度分别插入脑心肌炎病毒(EMCV),构建嵌合FMDV VP1重组EMCV。通过融合PCR及酶切的方法,将外源片段插入EMCV L蛋白第5、6位aa之间,得到重组质粒pWSK-EMCV-FMDV VP1、pWSK-EMCV-FMDV VP1(TB)和pWSK-EMCV-FMDV VP1(2TB),将其转染至BSR T7/5细胞拯救重组病毒EMCV/RvBD_(2)W-VP1、EMCV/RvBD_(2)W-VP1(TB)和EMCV/RvBD_(2)W-VP1(2TB),并在BHK-21细胞传代分析重组病毒的生物学特性。结果显示,PCR扩增得到1344 bp、909 bp和1155 bp的外源基因融合片段,表明成功构建了3种重组质粒;3株重组病毒EMCV/RvBD_(2)W-VP1、EMCV/RvBD_(2)W-VP1(TB)和EMCV/RvBD_(2)W-VP1(2TB)在BHK-21细胞传至F5代,病毒滴度分别为1×10^(7.85)TCID_(50)/mL、1×10^(8.06)TCID_(50)/mL、1×10^(7.76)TCID_(50)/mL;通过RT-PCR、IFA等方法对F5代重组病毒进行鉴定,显示重组病毒EMCV/RvBD_(2)W-VP1(TB)可以稳定遗传,且病毒复制水平与亲本病毒相一致,而其他2株重组病毒在传代过程中缺失。结果表明,本研究构建了3个重组EMCV质粒,转染细胞后携带FMDV VP1抗原表位的重组病毒稳定遗传,为后续以EMCV为骨架构建活载体疫苗奠定了理论基础。