miR-181a靶向抑制ATM表达促进急性髓系白血病细胞增殖

目的:研究microRNA181a(miR-181a)在人急性髓系白血病(AML)中的作用及其调控机制。方法:采用miR-181a小分子类似物转染人AML细胞系HL-60细胞,采用CCK-8计数法检测miR-181a对细胞增殖的影响。利用生物信息学方法结合文献分析预测miR-181a潜在的靶基因,通过双荧光报告实验在HL-60细胞内以及白血病患者体内多方面对靶基因进行验证。结果:miR-181a能显著促进人HL-60细胞恶性增殖(P<0.05);在线软件预测发现,抑癌基因ATM可能是白血病细胞miR-181a潜在的靶基因;双荧光报告实验结果表明,miR-181a能显著地抑制含3'-UTR的ATM报告基因活性,荧光素酶活性下降56.8%(P<0.01),而对含3'-UTR突变位点的ATM报告基因载体没有抑制作用。在HL-60细胞中过表达miR-181a,Western blot检测显示可以显著抑制内源性ATM的表达(P<0.01),而在白血病患者中miR-181a的表达增高,与ATM的表达呈负相关(r=-0.766)。结论:miR-181a通过抑制抑癌基因ATM表达以促进人AML细胞恶性增殖,从而在AML发病中起着类似"癌基因"的作用。

供受体血清白介素-2、肿瘤坏死因子-α水平与急性移植物抗宿主病的关系

目的探讨异基因造血干细胞移植供受体细胞因子IL-2、TNF-α水平与急性移植物抗宿主病(aGVHD)的关系。方法采用HLA部分相合或全相合同胞以及HLA相合非亲缘志愿者为供体,对22例白血病患者进行异基因造血干细胞移植,用ELISA方法检测供体和受体血清中IL-2、TNF-α水平,并比较移植后发生0-I度aGVHD组和II～IV度aGVHD组细胞因子水平有无差别。结果5例患者无aGVHD发生(0度),I度aGVHD10例,II～IV度aGVHD7例。发生II～IV度aGVHD组患者(n=7)在预处理后及移植后的血清IL-2、TNF-α水平均明显较0～I度aGVHD组患者(n=15)高(P均<0.05),预处理前两组IL-2、TNF-α水平无差别;供体动员后IL-2水平在II～IV度aGVHD组高于0～I度aGVHD组,TNF-α浓度两组无差别。结论白血病患者预处理后及移植后血清中IL-2、TNF-α水平及供体动员后IL-2水平可能与aGVHD发生及严重程度有关,可作为预测发生II～IV度aGVHD指标。

RITA对TP53突变人套细胞淋巴瘤细胞株的作用及调控机制研究

目的:研究RITA对TP53突变的人套细胞淋巴瘤细胞株Mino的作用及其调控机制。方法:体外培养Mino细胞,不同浓度(0-16μmol/L) RITA作用于Mino细胞24、48、72 h后,采用CCK-8法检测RITA对Mino细胞的增殖抑制作用;0-8μmol/L浓度RITA作用于Mino细胞48 h,采用Annexin V/PI流式细胞术检测RITA对Mino细胞的凋亡诱导作用,采用Western blot法检测蛋白BCL-2、Caspase-3、Cleaved Caspase-3、PARP、MDM2、P53的表达。结果:RITA能显著抑制TP53突变细胞株Mino增殖,经0.5、1、2、4、8、16μmol/L的RITA作用Mino细胞48 h后,细胞的增殖抑制率分别为(1.2±5.6)%、(14.9±4.9)%、(41.7±5.0)%、(61.8±2.4)%、(70.2±2.8)%和(70.8±2.4)%,随着RITA作用浓度的增加,抑制率也增加(r=0.767)。Mino细胞经4μmol/L的RITA作用24、48和72 h后的增殖抑制率分别为(25.2±3.8)%、(61.8±2.4)%和(87.0±0.7)%,随着RITA作用时间增加,抑制率亦增加(r=0.978)。细胞凋亡检测结果显示,Mino细胞经0、2、4、8μmol/L的RITA作用48 h后的凋亡率分别为(5.4±0.4)%、(15.3±0.6)%、(38.7±1.7)%和(50.8±1.1)%,随着RITA作用浓度增加,诱导Mino细胞凋亡的作用增强(r=0.961)。Western blot检测结果显示,随着RITA浓度的增加,BCL-2蛋白表达下降(r=0.932),出现PARP切割和Caspase-3激活,而MDM2、P53蛋白表达无变化。结论:P53小分子RITA对套细胞淋巴瘤TP53突变细胞株Mino有显著的增殖抑制和诱导凋亡的作用,其机制可能依赖于Caspase途径,而与P53通路无关。

血液肿瘤患者中血管性血友病因子、D二聚体、抗凝血酶检测的意义

目的探讨血液系统肿瘤患者血浆中血管性血友病因子(vWF)、D二聚体(D-D)、抗凝血酶(AT)水平变化及临床意义。方法以42例急慢性白血病、淋巴瘤、多发性骨髓瘤患者为观察对象,分初发组、缓解组、未缓解组、复发组,26例健康体检者为正常对照,测定血浆中vWF、D-D、AT水平。结果(1)初发血液肿瘤患者血浆中vWF、D-D水平明显高于正常对照组(P值均＜0．01)；缓解组vWF、D-D明显低于初发、对照组；复发患者vWF再次明显升高,与正常组和初发组比较差异有显著性(P＜0．01)；未缓解组vWF、D-D高于对照组和缓解组。(2)恶性肿瘤各组AT水平与对照组无明显差异(P＞0．05),但在疾病晚期AT明显降低(P＜0．01)。结论血液肿瘤患者存在不同程度的高凝状态,血浆vWF、D-D含量变化对病情和预后的评估有一定的参考价值,血浆AT水平降低是反映病情危重的指标。

前列腺素E_1脂微体和血透对异基因造血干细胞移植术后肝静脉闭塞症的防治

目的:评价前列腺素E1(PGE1)脂质微球体在异基因造血干细胞移植(allo-SCT)中对肝静脉闭塞症(hepaticveno-occlusivedisease,HVOD)的预防效果,及联合血液透析在治疗HVOD中的作用。方法:对8例行allo-SCT的患者,用PGE1脂微体(前列地尔)20μg/d预防HVOD,预处理方案为全身照射+环磷酰胺(TBI+CY)者从0天开始,含马利兰(Bu)方案者从口服Bu当天开始,用至移植后30d。发生HVOD时前列地尔用量增加1倍,加强对症支持治疗,并联合应用血液透析、丹参等措施,观察临床效果。结果:8例患者中1例发生HVOD且合并肾功能衰竭,经加大前列地尔用量,联合血液透析、丹参等治疗后痊愈。结论:在allo-SCT中PGE1脂微体有较好的预防HVOD的作用。发生HVOD尤其重症HVOD时联用PGE1脂微体等药物、血液透析,有较好的治疗效果。

硼替佐米对伊马替尼耐药细胞株K562的凋亡作用及机制

目的探讨硼替佐米对伊马替尼耐药细胞株K562(K562R)的诱导凋亡作用及机制。方法采用浓度梯增法建立耐伊马替尼K562细胞系。应用CCK-8法检测不同浓度硼替佐米分别作用K562和K562R细胞24 h、48 h后,对细胞的增殖抑制的效果。使用流式细胞术方法分别检测硼替佐米单独或联合伊马替尼作用于K562R细胞48 h后的细胞凋亡。应用Western blotting检测不同浓度硼替佐米作用K562R细胞48 h后,Mcl-1、Bcl-2、Bcr/Abl蛋白表达的异同。结果成功将对伊马替尼敏感的K562细胞诱导为K562R,耐药倍数为31.8;硼替佐米对K562及K562R细胞的增殖抑制呈浓度、时间依赖(P均<0.05);随着硼替佐米浓度增加,对K562R细胞的诱导凋亡作用增强,且硼替佐米与伊马替尼联合具有协同作用(P<0.05);硼替佐米可抑制K562R细胞Mcl-1,Bcr/Abl蛋白的表达,Bcl-2无变化。结论硼替佐米具有对K562R细胞的增殖抑制和诱导凋亡作用,其机制可能与下调K562R细胞Bcr/Abl和MCL-1的表达以及促进MCL-1发生切割有关。

抗原致敏树突状细胞诱导CTL杀伤K562细胞体外实验研究

目的研究体外负载K562细胞冻融抗原的树突状细胞(DC)诱导细胞毒性T淋巴细胞(CTL)的特异性杀伤作用。方法联合应用细胞因子从外周血单个核细胞(PBMC)诱导培养出DC,在体外负载K562细胞冻融抗原。采用乳酸脱氢酶释放法,对比K562冻融抗原致敏DC组、未致敏DC组、淋巴细胞组、前列腺癌PC3冻融抗原致敏DC组分别激活的CTL对K562细胞的杀伤作用。结果培养出具有典型特征的DC;在效靶比为10:1及20:1时,K562冻融抗原致敏DC组诱导的CTL对K562细胞的杀伤率分别为55.9%±22.0%、90.2%±24.8%,均高于其他3组(P<0.05)。结论K562细胞冻融抗原致敏DC可诱导激活CTL,具有明显杀伤K562细胞作用,并具有特异性。

多发性骨髓瘤22例误诊分析

分析误诊的２２例多发性骨髓瘤，其中误诊为腰扭伤，外伤性骨折腰肌劳损，脊柱肿瘤共７例，慢性肾炎３例，痛风１１例，贫血待查，缺血性贫血５例，胸膜炎，视力减退原因待查各１例，１例以乳房肿块为主要表现误诊为乳癌。ＭＭ病变主要在骨骼，血液，肾脏３个系统，由于瘤细胞浸润及发生淀粉样变部位的多样性，免疫球蛋白与量的不同，可以有反复感染，心脏，消化，神经系统等的异常表现；加之本病认识不足，缺乏系统全面考虑。

异基因造血干细胞移植术后HBsAg转阴5例

异基因骨髓/外周造血干细胞移植（Allo-BMT／PBSCT）后，受体经历了免疫功能极度抑制及免疫重建的过程，其体内携带的乙型肝炎病毒（HBV）的自然病程及相应的乙肝特异性免疫力随之发生变化。我们回顾了2002年8月至2007年5月行Allo-PBSCT的5例合并HBsAg、HBeAb、HBcAb阳性（俗称小三阳）的血液肿瘤患者HBsAg以及相应的肝功能变化，现报告如下。

WT1多肽致敏树突状细胞诱导杀伤K562细胞实验研究

目的研究来自健康人外周血单个核细胞的树突状细胞(DC)负载WT1多肽抗原,体外诱导产生特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)对K562细胞的杀伤作用。方法应用重组人粒-巨噬细胞集落刺激因子(rhGM-CSF)、重组人白细胞介素4(rhIL-4)、重组人肿瘤坏死因子α(TNF-α)等细胞因子,自外周血单个核细胞诱导扩增,培养出DC,使DC负载WT1多肽抗原。实验分3组,WT1多肽致敏DC为实验组A,未致敏DC为实验组B,单纯自体淋巴细胞未加DC激活为对照组C,观察CTL对K562细胞的杀伤作用。结果培养出具有典型特征的DC,体外能诱导强烈的同种异体混合淋巴细胞增殖反应。在效靶比为20∶1时,实验组A诱导的CTL对K562细胞的杀伤率为86.1%±26.8%;实验组B为47.1%±20.8%;对照组C为27.7%±15.3%(P<0.05)。结论WT1多肽抗原致敏DC能促使CD8阳性淋巴细胞扩增,并诱导激活特异性CTL,对K562靶细胞具有明显的杀伤作用。

尿胰蛋白酶原-2测定对急性胰腺炎的早期诊断价值

目的 探讨尿胰蛋白酶原 - 2测定在急腹症中筛选急性胰腺炎的价值。 方法 对 346例连续就诊的急腹症病人同时测定尿胰蛋白酶原 - 2及血、尿淀粉酶。 结果 41例急性胰腺炎中有 38例尿胰蛋白酶原 - 2阳性 ,敏感性为 92 .7% ,30 5例非胰腺炎的急腹症病人有 15例假阳性 ,特异性为 95 .1%。 5例重症急性胰腺炎中尿胰蛋白酶原 - 2全部阳性。 结论 尿胰蛋白酶原 - 2是急腹症病人筛选急性胰腺炎快而简便的方法 。

健康人外周血树突状细胞诱导培养及鉴定

【目的】从健康人外周血中分离出单个核细胞(PBMC),经体外诱导培养获取树突状细胞(DC)并鉴定其表型。【方法】应用 GM-CSF、IL-4、TNF-α等细胞因子自外周血单个核细胞诱导扩增,培养出 DC,动态观察细胞形态,流式细胞仪检测其表面标志,采用混合淋巴细胞培养法检测其刺激同种异体淋巴细胞增殖能力。【结果】经诱导培养出具有典型特征的 DC,高表达 CD86、CD80,DC 特征性标志 CD1a 平均为49.28%,在体外能诱导强烈的同种异体混合淋巴细胞增殖反应。【结论】该方法能可靠地诱导培养出 DC,为 DC 的进一步研究提供实验依据。

急性髓系白血病自体造血干细胞移植后的维持化疗

目的评价急性髓系白血病(AML)自体造血干细胞移植(AHSCT)后维持治疗的疗效。方法 AHSCT 治疗 AML 患者12例,除1例在移植后第20天复发、1例出现再生障碍性贫血外,余10例均在移植后接受标准方案化疗(M_3用维甲酸)。结果 12例患者 AHSCT 后平均生存时间1933(25～4936)d;其中8例患者生存至今,已持续完全缓解91(18～162)个月;5年无病生存率为57.9%。结论应用 AHSCT 结合移植后维持化疗,可以减少 AML 复发,延长无病生存期。

Apatinib抑制套细胞淋巴瘤细胞株增殖与凋亡实验研究

目的套细胞淋巴瘤(mantle cell lymphoma,MCL)的化疗效果欠佳,亟需开拓新的靶向治疗方式。本研究探讨新一代小分子血管内皮生长因子受体-2(vascular endothelial growth factor receptor-2,VEGFR2)酪氨酸激酶抑制剂阿帕替尼(Apatinib)对MCL细胞株增殖与凋亡的影响及机制。方法体外培养MCL细胞株Mino和Z138;CCK8法检测不同浓度下Apatinib对Mino和Z138细胞株的增殖抑制作用;AnnexinⅤ/PI双标记流式细胞术检测不同浓度Apatinib对Mino和Z138细胞株的诱导凋亡作用;蛋白质印迹法检测药物处理后ERK1/2通路相关蛋白ras、c-raf、pMEK和pERK1/2的表达的变化。结果 Aptinib对Mino和Z138细胞株均有明显的增殖抑制作用,呈浓度依赖性。Mino细胞经过Apatinib处理48h后,2.5μmol/L的抑制率为(5.72±2.43)%、5μmol/L的抑制率为(8.19±2.2)%、10μmol/L的抑制率为(17.70±4.01)%、20μmol/L的抑制率为(44.58±7.59)%、40μmol/L的抑制率为(85.12±2.67)%,IC50为(20.63±0.18)μmol/L,经多个独立样本非参数检验Kruskal-Wallis H分析表明,各处理组与对照组多重比较,差异均有统计学意义,H=22.016,P=0.001。Z138细胞组2.5μmol/L的抑制率为(7.19±1.71)%、5μmol/L的抑制率为(10.60±1.43)%、10μmol/L的抑制率为(20.24±5.93)%、20μmol/L的抑制率为(53.46±4.91)%、40μmol/L的抑制率为(87.07±1.41)%,IC50为(18.15±0.18)μmol/L,经多个独立样本非参数检验Kruskal-Wallis H分析表明,各处理组与对照组两两比较差异有统计学意义,H=16.460,P=0.006。细胞凋亡结果显示,Apatinib处理Mino细胞48h后,对照组凋亡率为(4.03±0.99)%、10μmol/L的凋亡率为(8.10±0.98)%、20μmol/L的凋亡率为(29.46±7.18)%、30μmol/L的凋亡率为(35.06±4.17)%、40μmol/L的凋亡率为(50.01±2.14)%。经Kruskal-Wallis H分析表明,处理组与对照组两两比较差异有统计学意义,H=13.033,P=0.011。Z138细胞对照组凋亡率为(5.45±1.82)%、10μmol/L的凋亡率为(10.58±2.74)%、20μmol/L的凋亡率为(16.51±0.81)%、30μmol/L的凋亡率为(23.07±3.14)%、40μmol/L的凋亡率为(34.48±6.40)%,经Kruskal-Wallis H分析,处理组与对照组两两比较,差异有统计学意义,H=13.500,P=0.009。蛋白质印迹法结果显示,Apatinib处理Mino细胞48h后,ERK1/2通路相关蛋白ras、c-raf、pMEK和ERK1/2表达均有下降。结论 Apatinib可以抑制MCL细胞株Mino和Z138的增殖并有效诱导其发生凋亡,呈浓度依赖性其机制可能是通过干扰ERK1/2通路实现的。