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转sFat1-基因猪生理生化指标与繁殖性能测定 被引量:5
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作者 华文君 刘西梅 +2 位作者 程妮 乔宪凤 郑新民 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2010年第32期18235-18236,共2页
[目的]评价转sFat1-基因猪的健康状况,为猪育种选择优良个体提供依据。[方法]测定21头阴性试验对照猪和20头转sFat-1基因阳性猪15项生理生化指标和繁殖性能。[结果]部分转sFat-1基因猪肝功能受到轻度损伤,繁殖能力也有轻度下降。[结论]... [目的]评价转sFat1-基因猪的健康状况,为猪育种选择优良个体提供依据。[方法]测定21头阴性试验对照猪和20头转sFat-1基因阳性猪15项生理生化指标和繁殖性能。[结果]部分转sFat-1基因猪肝功能受到轻度损伤,繁殖能力也有轻度下降。[结论]猪生理生化指标和繁殖性能测定能够成为转基因猪环境安全评价的有效方法之一。 展开更多
关键词 转基因猪 生理生化指标 繁殖性能
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sFat-1转基因猪的遗传特性及基因漂移研究 被引量:2
2
作者 华文君 刘西梅 +2 位作者 程妮 乔宪凤 郑新民 《江西农业学报》 CAS 2012年第5期127-129,共3页
采用PCR检测方法和Southern印迹杂交试验,研究了转sFat-1基因猪的遗传特性及基因漂移情况。结果表明:F1代转sFat-1基因猪能够将外源基因遗传到F2代,F2代仔猪的sFat-1基因阳性比例为32%。F1代及F2代转sFat-1基因猪均没有对同一生产场的... 采用PCR检测方法和Southern印迹杂交试验,研究了转sFat-1基因猪的遗传特性及基因漂移情况。结果表明:F1代转sFat-1基因猪能够将外源基因遗传到F2代,F2代仔猪的sFat-1基因阳性比例为32%。F1代及F2代转sFat-1基因猪均没有对同一生产场的猪群产生sFat-1基因漂移。 展开更多
关键词 sFat-1基因 转基因猪 遗传特性 基因漂移
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转Fat-1基因猪外源基因遗传稳定性分析 被引量:1
3
作者 华文君 郑新民 +3 位作者 华再东 毕延震 宋忠旭 任红艳 《河南农业科学》 CSCD 北大核心 2017年第11期144-147,共4页
测定转Fat-1基因猪外源基因遗传稳定性,为转基因猪育种选择优质新材料提供基础数据。采用PCR和Southern印迹杂交方法对转Fat-1基因传代生产仔猪进行检测,了解Fat-1基因在猪基因组中的整合情况,统计传代猪转基因阳性比率,与自然基因单等... 测定转Fat-1基因猪外源基因遗传稳定性,为转基因猪育种选择优质新材料提供基础数据。采用PCR和Southern印迹杂交方法对转Fat-1基因传代生产仔猪进行检测,了解Fat-1基因在猪基因组中的整合情况,统计传代猪转基因阳性比率,与自然基因单等位基因正常遗传比率进行差异显著性分析。结果显示,F2代传代仔猪Fat-1基因阳性比率为57.14%,F3代传代仔猪阳性比率为46.67%。F1代公猪外源Fat-1基因是1拷贝基因,传代配种母猪使用非转基因母猪,仔猪阳性比率与自然基因单等位基因正常遗传比率(50%)差异不显著。Fat-1基因在猪育种传代过程中遗传力没有下降,转Fat-1基因公猪能够稳定遗传生产后代猪。 展开更多
关键词 Fat—J基因 转基因猪 遗传稳定性 多聚不饱和脂肪酸
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转hFat-1基因猪外源基因整合分析及拷贝数测定 被引量:1
4
作者 华文君 华再东 +3 位作者 郑新民 毕延震 肖红卫 张立苹 《江西农业学报》 CAS 2014年第11期99-101,共3页
对转人源化Fat-1基因猪的15头传代仔猪进行PCR检测,发现有7头阳性猪,其断奶后成活5头仔猪。对这5头仔猪进行Southern印迹杂交试验,确认3头仔猪整合有hFat-1基因。采用荧光实时定量PCR法测定原代转hFat-1基因公猪及3头阳性仔猪外源基因... 对转人源化Fat-1基因猪的15头传代仔猪进行PCR检测,发现有7头阳性猪,其断奶后成活5头仔猪。对这5头仔猪进行Southern印迹杂交试验,确认3头仔猪整合有hFat-1基因。采用荧光实时定量PCR法测定原代转hFat-1基因公猪及3头阳性仔猪外源基因的拷贝数,分别是2、1、1、2个拷贝。转hFat-1基因猪能够将外源基因遗传到下代仔猪,但外源基因具有遗传不稳定的趋向。 展开更多
关键词 转hFat-1基因 整合 拷贝数
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Analysis of Hereditary Stability and Disease Susceptivity of sFat-1 Transgenic Pigs 被引量:1
5
作者 华文君 刘西梅 +2 位作者 程妮 郑新民 李莉 《Agricultural Science & Technology》 CAS 2013年第4期573-576,共4页
[Objective] This study aimed to investigate the hereditary stability of sFat-1 transgenic pigs and the differences in disease susceptivity between sFat-1 transgenic pigs and non-transgenic pigs. [Method] The integrati... [Objective] This study aimed to investigate the hereditary stability of sFat-1 transgenic pigs and the differences in disease susceptivity between sFat-1 transgenic pigs and non-transgenic pigs. [Method] The integration of sFat-1 gene in pigs was detected by PCR; the infection of transgenic pig to pseudorabies, leptospirosis, swine dysentery, brucellosis, Mycobacterium tuberculosis, rotavirus and mycoplasma hyopneumoniae was detected by using ELISA and PCR. [Result] The positive ratio of F3 generation sFat-1 transgenic pigs was 18.5%; the susceptivity of positive sFat- 1 transgenic and negative pigs to seven infectious diseases showed no significant difference. [Conclusion] Exogenous gene in sFat-1 transgenic pigs can not be stably inherited. The overall physical condition of positive transgenic and negative pigs was similar. 展开更多
关键词 sFat-1 Transgenic pigs Hereditary stability Susceptivity
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sFat-1转基因猪对主要传染性疾病易感性的观察 被引量:1
6
作者 华文君 刘西梅 +2 位作者 程妮 乔宪凤 郑新民 《福建农业学报》 CAS 2011年第2期180-183,共4页
转基因猪可能因为外源基因导入造成体质损伤,健康体质下降的转基因猪对常见疾病的感染比率有可能超过正常生产猪,不仅使猪生产性能下降,也加大对环境传播疾病。转基因猪对主要传染性疾病易感性的观察是转基因猪环境安全性评价的一项重... 转基因猪可能因为外源基因导入造成体质损伤,健康体质下降的转基因猪对常见疾病的感染比率有可能超过正常生产猪,不仅使猪生产性能下降,也加大对环境传播疾病。转基因猪对主要传染性疾病易感性的观察是转基因猪环境安全性评价的一项重要研究内容。本试验对21头阴性试验对照猪和20头转sFat-1基因猪9种主要传染性疾病的感染情况进行了检测,并对日常饲养疾病感染情况进行了统计。这9种疾病分别是:口蹄疫、猪瘟、蓝耳病、猪伪狂犬病、结核病、猪水泡病、布鲁氏杆菌病、非洲猪瘟、肠病毒性脑脊炎,检测使用ELISA检测试剂盒和核酸扩增检测试剂盒完成。在阴性猪中猪水泡病感染比率为5%,阳性猪感染比率为20%,sFat-1转基因猪对猪水泡病的易感性显著提高,另外8种疾病易感性没有明显差别。阴性成年猪的死亡率为8%,阳性成年猪的死亡率为37%,阳性猪死亡率明显提高。测试结果表明有一部分转sFat-1基因猪体质下降,这种情况与转sFat-1基因猪生理生化指标与繁殖性能测试结果相符合,sFat-1转基因猪对猪水泡病的易感性显著提高是部分转基因阳性猪肝功能受到轻度损伤造成的。 展开更多
关键词 转基因猪 ω-3脂肪酸去饱和酶 易感性
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转人DAF基因猪体内外源基因的整合鉴定 被引量:2
7
作者 华文君 陈付学 +1 位作者 魏庆信 樊俊华 《湖北农业科学》 1998年第2期56-58,共3页
衰变加速因子(DAF)是补体激活途径中的一个重要膜调节蛋白,转人DAF基因的猪可以作为人器官移植的供体。采用聚合酶链反应的方法,对87头经显微注射导入hDAFSC质粒片段或hDAFB质粒片段的产仔猪进行整合鉴定,获得... 衰变加速因子(DAF)是补体激活途径中的一个重要膜调节蛋白,转人DAF基因的猪可以作为人器官移植的供体。采用聚合酶链反应的方法,对87头经显微注射导入hDAFSC质粒片段或hDAFB质粒片段的产仔猪进行整合鉴定,获得转hDAF基因阳性猪18头。 展开更多
关键词 衰变加速因子 聚合酶链反应 整合
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用聚合酶链反应法鉴别猪的氟烷基因型 被引量:1
8
作者 华文君 黄朝学 +1 位作者 郑新民 魏庆信 《湖北农业科学》 1996年第6期62-64,共3页
猪应激综合症(PSS)是由常染色体(6p12q22)座位上的氟烷基因决定。采用聚合酶链反应(PCR)扩增一段含有突变位点的氟烷基因片段,经限制性内切酶酶切分析,鉴别出猪的3种氟烷基因型:阳性(nn),阴性(NN)和... 猪应激综合症(PSS)是由常染色体(6p12q22)座位上的氟烷基因决定。采用聚合酶链反应(PCR)扩增一段含有突变位点的氟烷基因片段,经限制性内切酶酶切分析,鉴别出猪的3种氟烷基因型:阳性(nn),阴性(NN)和杂合子(Nn) 展开更多
关键词 应激综合症 聚合酶链反应 氟烷基因型 猪病
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转fat-1基因动物模型和n-3 PUFAs功能作用机理研究进展 被引量:1
9
作者 华文君 华再东 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2019年第5期31-35,共5页
研究fat-1基因功能的作用机理对充分合理利用多不饱和脂肪酸(PUFAs)资源具有重要意义,建立转fat-1基因动物模型是了解fat-1基因功能、作用机理的重要方法。文章详细阐述了fat-1基因通过n-3 PUFAs而发挥的生理功能、转fat-1基因动物神经... 研究fat-1基因功能的作用机理对充分合理利用多不饱和脂肪酸(PUFAs)资源具有重要意义,建立转fat-1基因动物模型是了解fat-1基因功能、作用机理的重要方法。文章详细阐述了fat-1基因通过n-3 PUFAs而发挥的生理功能、转fat-1基因动物神经系统疾病模型、转fat-1基因动物肿瘤疾病模型、转fat-1基因炎症动物疾病模型及作用机理研究进展,并对转fat-1基因动物抗肥胖作用机理、转fat-1基因动物在优质家畜育种改良中的作用、利用转fat-1基因动物模型研究骨骼肌发育机理和糖尿病的治疗方法等方面的进展进行了总结,以期为合理利用PUFAs资源和优质家畜改良育种提供理论依据。 展开更多
关键词 fat-1基因 动物模型 n-3 PUFAS 作用机理 家畜育种 转基因 功能
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转基因猪的检测 被引量:2
10
作者 华文君 魏庆信 王翀 《湖北畜牧兽医》 1994年第1期6-7,共2页
本文采用地高辛标记及检测试剂盒(DigoxigeninduTP),以OMT片段为探针,对转基因猪的耳样或尾样进行三次dot杂交和Southern印迹杂交。共检测四批样品,数量分别为122,45,71,66,三次dot杂交结果阳性数分别为17,10,4,4,可疑阳性数分别为8,5,... 本文采用地高辛标记及检测试剂盒(DigoxigeninduTP),以OMT片段为探针,对转基因猪的耳样或尾样进行三次dot杂交和Southern印迹杂交。共检测四批样品,数量分别为122,45,71,66,三次dot杂交结果阳性数分别为17,10,4,4,可疑阳性数分别为8,5,3,2。多次重复实验表明该方法快速、简便、安全、经济,灵敏度和重复性也较高。 展开更多
关键词 转基因猪 检测 地高辛
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转绿色荧光蛋白标记基因猪整合检测的研究
11
作者 华文君 乔宪凤 +3 位作者 郑新民 王亚刚 李莉 肖红卫 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2008年第25期10796-10797,共2页
[目的]为转基因猪生产的整合效率、外源目的基因表达水平、目的基因在猪体内组织特异性表达分布等相关领域的进一步研究奠定基础。[方法]用显微注射法将GFP标记的转基因猪表达载体PM1导入湖北白猪和通湖猪1-细胞、2-细胞胚胎中,胚胎移... [目的]为转基因猪生产的整合效率、外源目的基因表达水平、目的基因在猪体内组织特异性表达分布等相关领域的进一步研究奠定基础。[方法]用显微注射法将GFP标记的转基因猪表达载体PM1导入湖北白猪和通湖猪1-细胞、2-细胞胚胎中,胚胎移植妊娠后生产仔猪,取耳或尾组织样提取基因组总DNA,用PCR法检测PM1在猪基因组中的整合情况。[结果]在所有生产的78头仔猪中,有6头猪用PCR检测为转PM1基因阳性猪,这6头猪在3次PCR扩增反应中都得到650 bp目的扩增片段。其他样品没有得到目的扩增片段的为阴性猪。[结论]载体PM1可以用于携带外源基因进行转基因猪生产。 展开更多
关键词 绿色荧光蛋白 转基因猪 整合
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TiB_2颗粒增强锌基合金中短、长疲劳裂纹扩展行为
12
作者 华文君 王执锐 张继荣 《材料工程》 EI CAS CSCD 北大核心 1996年第3期9-13,共5页
研究了TiB2颗粒增强锌基合金及其基体材料中由缺口起始的疲劳短、长裂纹的扩展行为。通过精抛光试样表面跟踪裂纹路径,在同一试样上采用降低施加负荷的方法,测定了短、长疲劳裂纹的扩展速率,并沿裂纹路径观察了增强粒子与裂纹尖... 研究了TiB2颗粒增强锌基合金及其基体材料中由缺口起始的疲劳短、长裂纹的扩展行为。通过精抛光试样表面跟踪裂纹路径,在同一试样上采用降低施加负荷的方法,测定了短、长疲劳裂纹的扩展速率,并沿裂纹路径观察了增强粒子与裂纹尖端的作用。研究结果表明:在该复合材料及基体材料中均存在小裂纹扩展延迟现象,此现象与缺口塑性有关,复合材料中还与粒子与裂纹尖端的作用有关,两种材料在相同的△K水平下,短、长疲劳裂纹具有不同的扩展速率,这起因于不同的裂纹闭合效应。当用有限应力强度因子代替名义应力强度因子后,两者趋于一致。 展开更多
关键词 锌基合金 疲劳裂纹扩展 二硼化钛 增强
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荧光蛋白标记表达H6亚型禽流感病毒血凝素基因
13
作者 华文君 乔宪凤 +2 位作者 刘西梅 郑新民 周荆荣 《湖北农业科学》 北大核心 2007年第4期513-516,共4页
研究构建了H6N2亚型AIV的核酸疫苗表达载体,以绿色荧光蛋白基因作为报告基因,构建了HA与报告基因的融合基因,并克隆于pAVX1表达载体,再经脂质体转染BHK细胞进行体外表达试验。构建的表达载体pAVX1-H6A-GFP酶切鉴定已克隆上融合基因;体... 研究构建了H6N2亚型AIV的核酸疫苗表达载体,以绿色荧光蛋白基因作为报告基因,构建了HA与报告基因的融合基因,并克隆于pAVX1表达载体,再经脂质体转染BHK细胞进行体外表达试验。构建的表达载体pAVX1-H6A-GFP酶切鉴定已克隆上融合基因;体外表达试验中,脂质体转染24 h后出现微弱荧光,48 h后见较强的荧光表达,从而成功实现了用荧光蛋白标记表达了H6亚型禽流感病毒血凝素基因。 展开更多
关键词 禽流感病毒 HA基因 表达
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禽流感诊断和预防研究进展 被引量:3
14
作者 华文君 《湖北畜牧兽医》 2001年第3期10-13,共4页
综述了近年来禽流感流行的特征、对养禽业的危害、对人类健康的影响 ,总结了禽流感诊断技术如单克隆抗体诊断技术、竞争性ELISA法、rNP -ELISA法、RT -PCR法、RFLP亚型分型法等的最新研究进展 ,分析了全病毒灭活禽流感佐剂疫苗预防禽流... 综述了近年来禽流感流行的特征、对养禽业的危害、对人类健康的影响 ,总结了禽流感诊断技术如单克隆抗体诊断技术、竞争性ELISA法、rNP -ELISA法、RT -PCR法、RFLP亚型分型法等的最新研究进展 ,分析了全病毒灭活禽流感佐剂疫苗预防禽流感的效果和缺点 ,概述了在禽流感基因工程亚单位疫苗、核酸疫苗等的实验研究突破和临床使用效果。 展开更多
关键词 禽流感 诊断 预防 禽流感病毒 危害 人类健康 疫苗
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核酸疫苗的应用及研究新进展 被引量:3
15
作者 华文君 《河南畜牧兽医》 2000年第10期9-10,共2页
核酸疫苗是一种发展迅速的新型疫苗。本文对核酸疫苗的产生、构成、特性、制备方法、免疫学机制和生物学特征进行概述,并对近年来二十余种核酸疫苗的研究、临床应用进 展进行了总结。
关键词 核酸疫苗 基因疫苗 DNA疫苗
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从人早期胚胎中克隆组织型纤溶酶原激活因子基因cDNA
16
作者 华文君 苟德明 《生物技术》 CAS CSCD 1999年第1期1-3,共3页
人在早期胚胎时tPA基因表达,但mRNA丰度很低。以17日龄人胚胎为材料,分离mRNA,以表达质粒pSPORT1为载体,建立cDNA文库,重组子达到1.6×106个,能包含极低表达基因的CDNA。从人血白细胞基因... 人在早期胚胎时tPA基因表达,但mRNA丰度很低。以17日龄人胚胎为材料,分离mRNA,以表达质粒pSPORT1为载体,建立cDNA文库,重组子达到1.6×106个,能包含极低表达基因的CDNA。从人血白细胞基因组中扩增出一条175bp的tPA外显子片段作探针,用地高辛标记进行菌落原位杂交,获得六个阳性菌落。提取阳性菌落质粒,经限制性内切酶Sal Ⅰ和EcoRⅠ酶切分析鉴定,得到3个tPAcDNA重组子。 展开更多
关键词 胚胎 TPA 克隆
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应用多重引物RT-PCR快速诊断禽流感亚型
17
作者 华文君 乔宪凤 郑新民 《家禽科学》 2007年第3期5-7,共3页
将本实验室分离保存、已经过PCR扩增、核酸测序鉴定的三种不同亚型禽流感病毒(AIVH5N1、H6N2、H9N2)分别接种鸡胚,收集尿囊液,分离提取AIV总RNA。参考H1 ̄H15亚型禽流感病毒的核蛋白(NP)基因序列以及H5、H6、H9亚型AIV血凝素(HA)基因序... 将本实验室分离保存、已经过PCR扩增、核酸测序鉴定的三种不同亚型禽流感病毒(AIVH5N1、H6N2、H9N2)分别接种鸡胚,收集尿囊液,分离提取AIV总RNA。参考H1 ̄H15亚型禽流感病毒的核蛋白(NP)基因序列以及H5、H6、H9亚型AIV血凝素(HA)基因序列,设计四对引物:NP1,NP2;H5P1,H5P2;H6P1,H6P2;H9P1,H9P2,混合为PCR扩增多重引物MP1,下游引物NP2、H5P2、H6P2,、H9P2混合为逆转录反应多重引物MP2。AIV总RNA在相同反应条件下经MP2逆转录,用MP1进行PCR扩增,AIVH5亚型材料得到205bp,563bp两条扩增带,AIVH6亚型材料得到205bp,233bp两条扩增带,AIVH9亚型材料得到205bp,690bp两条扩增带,都与实验设计相符合,阴性材料没有扩增带。该方法成功实现四对引物进行RT-PCR反应同时检测出AIV,准确诊断H5、H6、H9三种禽流感亚型,检测时间短,特异性强,能及时检测出AIV亚型。 展开更多
关键词 禽流感 RT—PCR 多重引物 诊断
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转基因猪安全评价技术研究进展
18
作者 华文君 《江西农业学报》 CAS 2009年第10期128-130,共3页
综述了转基因猪的研究现状、安全评价要求和安全评价技术方面取得的进展。
关键词 转基因 安全评价 研究进展
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杜洛克猪品系氟烷基因型的测定
19
作者 华文君 梅书棋 +1 位作者 徐子清 郑新民 《湖北畜牧兽医》 1998年第2期12-13,共2页
猪应激综合症由氟烷基因型决定,有三种基因型:阳性(nn)、阴性(NN)和杂合子(Nn),nn型产生应激综合症.采用聚合酶链反应(PCR)扩增一段含有突变位点的氟烷基因片段,用限制性内切酶酶切分析,测定杜洛克猪品系37头,有3头为杂合子,34头为阴性.
关键词 猪病 应激综合症 氟烷基因型 PCR扩增 酶切
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无压浸渗法制备B_4C/Al复合材料研究 被引量:34
20
作者 李青 华文君 +1 位作者 崔岩 张少卿 《材料工程》 EI CAS CSCD 北大核心 2003年第4期17-20,共4页
采用无压浸渗法,分别以纯铝、超硬铝LC4和铸造铝合金9Si-3Mg-1Zn为渗体和碳化硼陶瓷预制体进行复合,制备出有高陶瓷体分比的B-Al-C陶瓷-金属复合材料,弯曲强度350~600MPa,韧性5~9MPa·m-1/2,采用扫描电镜,X射线衍射仪和金相显微... 采用无压浸渗法,分别以纯铝、超硬铝LC4和铸造铝合金9Si-3Mg-1Zn为渗体和碳化硼陶瓷预制体进行复合,制备出有高陶瓷体分比的B-Al-C陶瓷-金属复合材料,弯曲强度350~600MPa,韧性5~9MPa·m-1/2,采用扫描电镜,X射线衍射仪和金相显微镜和透射电镜对材料的微观结构进行分析,分析结果表明材料界面复合良好,在碳化硼和铝的界面有薄的Al3BC反应层生成使碳化硼与铝紧密结合,在复合材料中碳化硼形成连续的骨架结构,金属相起到增韧、增强的作用。 展开更多
关键词 无压浸渗法 制备 B4C/Al复合材料 碳化硼颗粒 显微组织 铝基复合材料
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